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Submitted on 5 Jun 2020
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Caractérisation des cellules musculaires par
microspectroscopie et imagerie de fluorescence UV en rayonnement synchrotron
Thierry Astruc
To cite this version:
Thierry Astruc. Caractérisation des cellules musculaires par microspectroscopie et imagerie de fluo- rescence UV en rayonnement synchrotron. Métaséminaire CEPIA, Mar 2017, Massy, France. 6 p.
�hal-01607728�
ACTION 1
Caractériser des matières aux différentes échelles et aux différents stades de transformation
SESSSION 1. Caractérisation à différents niveaux d'échelle et dans différentes matrices
Thierry Astruc, Unité Qualité des Produits Animaux
Métaséminaire département CEPIA, 14/03/2017
Thierry.Astruc@inra.fr
Caractérisation des cellules musculaires par microspectrocopie et imagerie de fluorescence
UV en rayonnement synchrotron
.02
Contexte
Composition du muscle
Méthodes histologiques lourdes et onéreuses, sensibilité dépendante de l’espèce, degré de qualification élevé
IIX
IIA IIB
Métabolisme oxydatif Respiration Cellulaire Bcp mitochondries
Métabolisme glycolytique Fermentation lactique Peu de mitochondries
I II
Contraction rapide Contraction lente
II
.03
Objectifs
1 µm
Glycolytique
Oxydatif
Discrimination des fibres sur le type métabolique en « label free » ?
0.5 µm
Krebs NADH NADH
NADH
Le NADH est autofluorescent
-0.05 -0.03 -0.01 0.01 0.03 0.05
-0.06 -0.04 -0.02 0.00 0.02 0.04 0.06 0.08
PC1 PC2
I IIA
Var PC1 : 73% ; PC2: 21%
Fluorescence intensity (a. u.)
302 410
332
Spectre d’émission de Fluorescence
Muscle EDL Muscle Soleus
Discriminantes (PC2) 346 et 302 nm
Outils, Méthodes, Résultats (1)
Avantage: préparation de l’échantillon simplifiée Inconvénient: Disponibilité des équipements durée d’acquisition
Exc 275 nm
Chagnot et al. 2015, Analyst, 140, 4189–4196 ; Chagnot et al. 2015. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 63(19), 4782-4789.
Var PC1 : 95 % ; PC2: 2% -0.07 -0.05 -0.03 -0.01 0.01 0.03 0.05 0.07
-0.4 -0.3 -0.2 -0.1 0 0.1 0.2 0.3
PC1 PC2
I IIA IIX IIX-IIB IIB
Discriminantes (PC1) 325 et 410 nm
A partir des longueurs d’ondes discriminantes,
acquérir des images en microscopie de fluorescence
Difficultés: objectifs optiques INRA/SOLEIL différents, orientation des coupes variable, décalage des mosaïques, faible variation de contraste en fonction des types cellulaires !
Collaboration ISIMA (Institut supérieur d'informatique, de modélisation et de leurs applications)
tutorat de projet Ingénieur 3emeannée
Perspectives d’évolution
Traitement de la série d’images, validation de l’hypothèse de départ, compréhension des phénomènes Association d’excitation UV/visible
Excitation 275nm émission : 420-480
Outils, Méthodes, Résultats (2)
I IIB IIX IIA
Merci de votre attention
QuaPA
