Concentrations du À9-THC dans les cultures
de Cannabis sativa L. du nord du Maroc
A9 -THC concentrations in Cannabis sativa L.
cultivated in Northern Morocco
Hamid STAMBOULP, Aziz EL BOURI, My Ahmed BELLEV1AM, Taoufik BOUAYOUN, Naima EL KARNI
Laboratoire deRecherches etd'AnalysesTechniques etScientifiques, Gendarmerie Royale,Rabat-Instituts BP 6597 - CP 10100
RABAT
-MAROC
*
Auteuràquiadresserlacorrespondance: PrHamidSTAMBOULI,
Laboratoire deRecherches etd'Analyses Techniques etScientifiques, Gendarmerie Royale, Rabat-Instituts- BP 6597 - CP 10100RABAT
-MAROC
Tel : +212 37 64 23 51 -Fax : +21237 6425 04-janvier
2005; accepté aprèsmodifications le 10mai2005)RESUME
La présente étude concerne la détermination du taux de tetrahydrocannabinol des cultures de cannabis dans trois régions du nord du Maroc :
Al
Hoceima, Chefcliaouen et Larache, àpartir
de plantes vertes en croissance, sèches arrivées àmaturitéetréduitesenpoudre. L'analyse quanti¬tative conduite en chromatographie gazeuse couplée à la spectrométrie de masse, surles extraits organiques de245 échantillonsissusde30 parcelles, apermisla détermination des teneurs moyennes en A9-THC dans la plante verte (0,5 %), sèche (2,1 %) et danslapoudre (8,3 %). Enoutre, cesrésultatsdémontrentque lesrégionsdeculture tradition¬
nelleAl Hoceimaet Chefcliaouenproduisentdu cannabis à plusforteteneuren.A9-THCcomparativement à larégionde Larache, appelée zoned'extension où lecannabisaétémis encultureplusrécemment.
Par ailleurs, cette étudeaétabli que lesplants mâles, sou¬
vent considérésdéficientsenA9-THC, renfermentdesteneurs de même ordre que celles enregistrées pour les plants femelles aussi bien danslesfeuillesquedansles sommités.
MOTS-CLÉS
CannabissativaL, A9-tetrahydrocannabinol, CG/SM, dosage.
SUMMARY
This study proposes GC/MSdetermination
of
A9-THC level inplantmaterialgrowninNorthern Morocco:Al
Hoceima, Chefcliaouen and Larache. 245 samples ofgrowing plant, raw andpowder sampledfrom 30 parcels were analysed.Theaverage A9-THCconcentrations are evaluated
for
gro¬wing plant (0.5 %), raw (2.1 %) and powder samples (8.3%). Furthermore, theseresultsdemonstratethatcanna¬
bis production comingfrom traditional cultivation areaAl Hoceima and Chefcliaouen, ismoreconcentratedinA9-THC thanLarachewhichisa recentcultivationarea.
Otherwise, this study showed that the male plants, often considereddeficient in A9-THC, contain approximately the sameconcentrations presentinthefemaleplants.
KEY-WORDS
Cannabis sativa, A9-tetrahydrocannabinol, GC/MS.
79
Concentrations du À9-THC dans les cultures
de Cannabis sativa L. du nord du Maroc
A9 -THC concentrations in Cannabis sativa L.
cultivated in Northern Morocco
Hamid STAMBOULP, Aziz EL BOURI, My Ahmed BELLEV1AM, Taoufik BOUAYOUN, Naima EL KARNI
Laboratoire deRecherches etd'AnalysesTechniques etScientifiques, Gendarmerie Royale,Rabat-Instituts BP 6597 - CP 10100
RABAT
-MAROC
*
Auteuràquiadresserlacorrespondance: PrHamidSTAMBOULI,
Laboratoire deRecherches etd'Analyses Techniques etScientifiques, Gendarmerie Royale, Rabat-Instituts- BP 6597 - CP 10100RABAT
-MAROC
Tel : +212 37 64 23 51 -Fax : +21237 6425 04-janvier
2005; accepté aprèsmodifications le 10mai2005)RESUME
La présente étude concerne la détermination du taux de tetrahydrocannabinol des cultures de cannabis dans trois régions du nord du Maroc :
Al
Hoceima, Chefcliaouen et Larache, àpartir
de plantes vertes en croissance, sèches arrivées àmaturitéetréduitesenpoudre. L'analyse quanti¬tative conduite en chromatographie gazeuse couplée à la spectrométrie de masse, surles extraits organiques de245 échantillonsissusde30 parcelles, apermisla détermination des teneurs moyennes en A9-THC dans la plante verte (0,5 %), sèche (2,1 %) et danslapoudre (8,3 %). Enoutre, cesrésultatsdémontrentque lesrégionsdeculture tradition¬
nelleAl Hoceimaet Chefcliaouenproduisentdu cannabis à plusforteteneuren.A9-THCcomparativement à larégionde Larache, appelée zoned'extension où lecannabisaétémis encultureplusrécemment.
Par ailleurs, cette étudeaétabli que lesplants mâles, sou¬
vent considérésdéficientsenA9-THC, renfermentdesteneurs de même ordre que celles enregistrées pour les plants femelles aussi bien danslesfeuillesquedansles sommités.
MOTS-CLÉS
CannabissativaL, A9-tetrahydrocannabinol, CG/SM, dosage.
SUMMARY
This study proposes GC/MSdetermination
of
A9-THC level inplantmaterialgrowninNorthern Morocco:Al
Hoceima, Chefcliaouen and Larache. 245 samples ofgrowing plant, raw andpowder sampledfrom 30 parcels were analysed.Theaverage A9-THCconcentrations are evaluated
for
gro¬wing plant (0.5 %), raw (2.1 %) and powder samples (8.3%). Furthermore, theseresultsdemonstratethatcanna¬
bis production comingfrom traditional cultivation areaAl Hoceima and Chefcliaouen, ismoreconcentratedinA9-THC thanLarachewhichisa recentcultivationarea.
Otherwise, this study showed that the male plants, often considereddeficient in A9-THC, contain approximately the sameconcentrations presentinthefemaleplants.
KEY-WORDS
Cannabis sativa, A9-tetrahydrocannabinol, GC/MS.
79
Introduction
La culture du cannabis est concentrée au Nord du Maroc ;troisrégions représententàellesseulesplusde 75 % delaproduction(1, 2).
Il
s'agitdesprovincesde Chefchaouen (50 %),Al
Hoceima (17 %) et Larache (9 %).Lesdeuxpremières sont considéréescommedes zones de culture traditionnelle du cannabis(kif),
alors que larégion de Laracheest une zone d'extension où cettecultureestplus récente.Laprésenteétude
s'inscrit
dansle cadre d'uneenquête menée en 2004, conjointement par l'Agence pour la Promotion et le DéveloppementEconomiqueetSocialdes Préfectures et Provinces du Nord du Royaume (APDN)etleLaboratoiredeRecherchesetd'Analyses Techniques et Scientifiques de laGendarmerie Royale (LARATES). Elle vise la détermination du taux du principe psychoactif le A9-tetrahydrocannabinol (À9- THC) danslesdifférentes productions ducannabiscul¬
tivé dans les régions de Larache, Chefchaouen et
Al
Hoceima.Une série de 245 échantillons defeuilles et d'inflores
cences, a été analysée par chromatographie gazeuse coupléeàlaspectrométriedemasseen vuededétermi¬
ner le taux du principe psychoactif A9-THC, présent dansla planteencroissance(plante verte),danslaplan¬
te sèchearrivéeàmaturitéetaprèssatransformationen poudre(séchage, battage ettamisage) où sontcompta¬
biliséslesapportsdessommités florales etdesfeuilles.
Matériel et Méthode
Échantillonnage
La collectedes échantillons aété effectuée sur 30 par¬
celles de terrain réparties dans les trois provinces : Chefchaouen (13 parcelles),
Al
Hoceima(8parcelles) et Larache (9 parcelles).Elleaconcerné 180prélèvements deplantes fraîches mâles etfemelles (inflorescences et feuilles), 52 prélèvements de plantes sèches femelles (inflorescences et feuilles) et 13 prélèvements de poudres (tableau I). L'ensemencementde ces parcelles s'est opéré à des dates différentes, s'étalant sur une longuepériodeallant du moisdefévrieràmai 2004.»-*tr1->
* *
-
Région Larache
4
*_,
i i
5*:
Région Chefchaouen
-t
11
"r"
Legend Maintffies
aiêfi"
:
-''""V y
K£".. i:.
"''B8fi»r
Aljoria.-
r r
-.
^:r':..
'Figure1 :Situation géographique destrois régionsAlHoceima, Chefchaouen, Larache représentant75 % de la productionde cannabis duMaroc.
Introduction
La culture du cannabis est concentrée au Nord du Maroc ;troisrégions représententàellesseulesplusde 75 % delaproduction(1, 2).
Il
s'agitdesprovincesde Chefchaouen (50 %),Al
Hoceima (17 %) et Larache (9 %).Lesdeuxpremières sont considéréescommedes zones de culture traditionnelle du cannabis(kif),
alors que larégion de Laracheest une zone d'extension où cettecultureestplus récente.Laprésenteétude
s'inscrit
dansle cadre d'uneenquête menée en 2004, conjointement par l'Agence pour la Promotion et le DéveloppementEconomiqueetSocialdes Préfectures et Provinces du Nord du Royaume (APDN)etleLaboratoiredeRecherchesetd'Analyses Techniques et Scientifiques de laGendarmerie Royale (LARATES). Elle vise la détermination du taux du principe psychoactif le A9-tetrahydrocannabinol (À9- THC) danslesdifférentes productions ducannabiscul¬
tivé dans les régions de Larache, Chefchaouen et
Al
Hoceima.Une série de 245 échantillons defeuilles et d'inflores
cences, a été analysée par chromatographie gazeuse coupléeàlaspectrométriedemasseen vuededétermi¬
ner le taux du principe psychoactif A9-THC, présent dansla planteencroissance(plante verte),danslaplan¬
te sèchearrivéeàmaturitéetaprèssatransformationen poudre(séchage, battage ettamisage) où sontcompta¬
biliséslesapportsdessommités florales etdesfeuilles.
Matériel et Méthode
Échantillonnage
La collectedes échantillons aété effectuée sur 30 par¬
celles de terrain réparties dans les trois provinces : Chefchaouen (13 parcelles),
Al
Hoceima(8parcelles) et Larache (9 parcelles).Elleaconcerné 180prélèvements deplantes fraîches mâles etfemelles (inflorescences et feuilles), 52 prélèvements de plantes sèches femelles (inflorescences et feuilles) et 13 prélèvements de poudres (tableau I). L'ensemencementde ces parcelles s'est opéré à des dates différentes, s'étalant sur une longuepériodeallant du moisdefévrieràmai 2004.»-*tr1->
* *
-
Région Larache
4
*_,
i i
5*:
Région Chefchaouen
-t
11
"r"
Legend Maintffies
aiêfi"
:
-''""V y
K£".. i:.
"''B8fi»r
Aljoria.-
r r
-.
^:r':..
'Figure1 :Situation géographique destrois régionsAlHoceima, Chefchaouen, Larache représentant75 % de la productionde cannabis duMaroc.
Tableau
I
:Récapitulatifdesprélèvements opéréssurlesculturesdecannabisdurantlasaison2004.Chefchaouen
Al
Hoceima Larache TotalDatedeprélèveniértt
PïanteTerte: ../
NfrParcelles
13 8 9 30
:: Mâles*
13 8 9 30
Femelles*
26 16 18 60 21
juillet
2004Plantesëçhe NbPareeJles
10 8 8 26
Femelles*
10 8 8 26 10septembre2004
Poudre NbParcelles
5 8 0 13
NbÉchan.
5 8 0 13 10septembre2004
*Pourchaqueplant deux typesdeprélèvementssontréalisés:inflorescencesetfeuilles.
Produits chimiques
Lessolvantsorganiqueschloroformeetmethanolutilisés danslesextractions sontdequalitéanalytique etfournis parFisherScientifiqueetJ.TBaker.Les étalonsA9-THC etnonadécaneproviennentdechezLipomedetFluka.
Extraction
Planteverte :Deuxtypesdeprélèvementsdistinctssont effectués : sommités florales et feuilles provenant des extrémités inférieureetsupérieure dupied. Leséchan¬
tillons
enveloppés dans un papier aluminium, sont trempésdansl'azote liquide, pourfaciliter
leurpulvéri¬sation, puis écrasés. Une prise d'essai de 100 mg est macéréedans 3
mL
d'une solution méthanol/chlorofor- me 9/1contenant 0,05g/L
denonadécane(étaloninter¬ne).L'extractionestconduiteparsonicationpendant 30 minutes.
La
solutionestensuiteséchéesurMgS04, fil¬tréeet 1
pL
est injecté enCG/SM.Plante sèche : Desfeuilles sèches et des sommitésflo¬
rales sont prélevées séparément dès bouquets et broyées. Uneprised'essaide 15 mgdechaquepoudre, est macérée dans 3
mL
d'une solution méthanol/chlo- roforme 9/1, contenant 0,05g/L
de nonadécane. La solutionestensuite placéedansunbac àultrasonspen¬dant 30 minutes, séchéesurMgS04, filtréeet 1 pLest analyséen CG/SM
Poudre : Après homogénéisation, uneprise d'essai de 10 mg de poudre est extraitepar 6
mL
d'une solution méthanol/chloroforme9/1,contenant 0,05g/L
de nona¬décane. L'extraction est conduite par sonication pen¬
dant 30 minutes.
La
solution est ensuite séchée sur MgS04, filtréeet 1pL
estanalyséenCG/SM.Etalonnage interne
Le taux de A9-THC présentdans laplante etla poudre de cannabis, est évalué par la mémode d'étalonnage interne.
La
courbed'étalonnageestétablieparinjection en CG/SM de 1pL
de sept solutions standards de A9- THCdeconcentrations comprises entre 0,65.103g/L
et 0,91 g/L, renfermant la même teneur de 0,05g/L
en nonadécane.La
linéarité de cette courbe (figure 2) est obtenueavecuncoefficientde corrélationde0,996.ffl c o o co z/A
OI H
re
<
16, 14 12 1(1
8-
fi-
4 2- 0
(
Y =14,695X+0,0056 R2=0,996
\s^
) 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7
Concentration enAH-THC (gfl_}
0,8 0,9 i 1
Figure2: Courbed'étalonnage dudosage duA9-THC.
Instrumentation
Les analyses sont réalisées enchromatographiegazeu¬
se couplée à la spectrométrie de masse (CG/SM) L'instrumentemployéest un GC VarianCP-3800cou¬
plé à un spectromètre de masse Saturn 2200 MS/MS, équipé
d'un
échantillonneur automatique CTC Analytics Combipal etd'un
injecteur PTV 1079. La séparation est effectuée sur une colonne capillaire de type5% méthyl-phényl siloxane HP-5 (25mx0.2mm x 0.11 pm) avecl'hélium
comme gaz vecteur.Un programme de température du
four
de22 minutes estpréconisé : 60° Cpendant 2min, puis rampede 15°C /min, enfin 280° C pendant 5 min.
L'injecteur
fonc¬tionnantenmodesans division (splitless),estchaufféà 270° C. L'acquisition en spectrométrie de masse est réalisée en mode impact électronique -70 eV couvrant une gammedemasseallantde 35à500 uma. Lestem¬
pératuresdela trappe etdelalignedetransfertsontres¬
pectivementde 180° C et280° C.
Résultats et discussion
L'analyseenCG/SMdes extraits organiquesdesplants de cannabis rend compte de
l'état
du composé stable thermiquement A9-THC et présente l'avantage de TableauI
:Récapitulatifdesprélèvements opéréssurlesculturesdecannabisdurantlasaison2004.Chefchaouen
Al
Hoceima Larache TotalDatedeprélèveniértt
PïanteTerte: ../
NfrParcelles
13 8 9 30
:: Mâles*
13 8 9 30
Femelles*
26 16 18 60 21
juillet
2004Plantesëçhe NbPareeJles
10 8 8 26
Femelles*
10 8 8 26 10septembre2004
Poudre NbParcelles
5 8 0 13
NbÉchan.
5 8 0 13 10septembre2004
*Pourchaqueplant deux typesdeprélèvementssontréalisés:inflorescencesetfeuilles.
Produits chimiques
Lessolvantsorganiqueschloroformeetmethanolutilisés danslesextractions sontdequalitéanalytique etfournis parFisherScientifiqueetJ.TBaker.Les étalonsA9-THC etnonadécaneproviennentdechezLipomedetFluka.
Extraction
Planteverte :Deuxtypesdeprélèvementsdistinctssont effectués : sommités florales et feuilles provenant des extrémités inférieureetsupérieure dupied. Leséchan¬
tillons
enveloppés dans un papier aluminium, sont trempésdansl'azote liquide, pourfaciliter
leurpulvéri¬sation, puis écrasés. Une prise d'essai de 100 mg est macéréedans 3
mL
d'une solution méthanol/chlorofor- me 9/1contenant 0,05g/L
denonadécane(étaloninter¬ne).L'extractionestconduiteparsonicationpendant 30 minutes.
La
solutionestensuiteséchéesurMgS04, fil¬tréeet 1
pL
est injecté enCG/SM.Plante sèche : Desfeuilles sèches et des sommitésflo¬
rales sont prélevées séparément dès bouquets et broyées. Uneprised'essaide 15 mgdechaquepoudre, est macérée dans 3
mL
d'une solution méthanol/chlo- roforme 9/1, contenant 0,05g/L
de nonadécane. La solutionestensuite placéedansunbac àultrasonspen¬dant 30 minutes, séchéesurMgS04, filtréeet 1 pLest analyséen CG/SM
Poudre : Après homogénéisation, uneprise d'essai de 10 mg de poudre est extraitepar 6
mL
d'une solution méthanol/chloroforme9/1,contenant 0,05g/L
de nona¬décane. L'extraction est conduite par sonication pen¬
dant 30 minutes.
La
solution est ensuite séchée sur MgS04, filtréeet 1pL
estanalyséenCG/SM.Etalonnage interne
Le taux de A9-THC présentdans laplante etla poudre de cannabis, est évalué par la mémode d'étalonnage interne.
La
courbed'étalonnageestétablieparinjection en CG/SM de 1pL
de sept solutions standards de A9- THCdeconcentrations comprises entre 0,65.103g/L
et 0,91 g/L, renfermant la même teneur de 0,05g/L
en nonadécane.La
linéarité de cette courbe (figure 2) est obtenueavecuncoefficientde corrélationde0,996.ffl c o o co z/A
OI H
re
<
16, 14 12 1(1
8-
fi-
4 2- 0
(
Y =14,695X+0,0056 R2=0,996
\s^
) 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7
Concentration enAH-THC (gfl_}
0,8 0,9 i 1
Figure2: Courbed'étalonnage dudosage duA9-THC.
Instrumentation
Les analyses sont réalisées enchromatographiegazeu¬
se couplée à la spectrométrie de masse (CG/SM) L'instrumentemployéest un GC VarianCP-3800cou¬
plé à un spectromètre de masse Saturn 2200 MS/MS, équipé
d'un
échantillonneur automatique CTC Analytics Combipal etd'un
injecteur PTV 1079. La séparation est effectuée sur une colonne capillaire de type5% méthyl-phényl siloxane HP-5 (25mx0.2mm x 0.11 pm) avecl'hélium
comme gaz vecteur.Un programme de température du
four
de22 minutes estpréconisé : 60° Cpendant 2min, puis rampede 15°C /min, enfin 280° C pendant 5 min.
L'injecteur
fonc¬tionnantenmodesans division (splitless),estchaufféà 270° C. L'acquisition en spectrométrie de masse est réalisée en mode impact électronique -70 eV couvrant une gammedemasseallantde 35à500 uma. Lestem¬
pératuresdela trappe etdelalignedetransfertsontres¬
pectivementde 180° C et280° C.
Résultats et discussion
L'analyseenCG/SMdes extraits organiquesdesplants de cannabis rend compte de
l'état
du composé stable thermiquement A9-THC et présente l'avantage decomptabiliser laformeacidecorrespondante (figure 3) qui sedécarboxyle sous
l'effet
de lachaleur(injecteur et four). Le A9-THC est identifié par son spectre de masse autemps de rétention 14,92min (figure4). Son taux dans les trois types d'échantillonsplante fraîche, sèche et en poudre, est déterminé en reportant le rap¬port(aire du pic chromatographique A9-THC
/
aire du standard interne) surlacourbe d'étalonnagepréalable¬mentétablie.
p9-TelrahydrocannabinHÎ Synonymes:p1-THCLp'-THC (->trans-p*-Tctrahvdrocann:rtimoi
Cs,HA-3t4.S'
AcideTûtrahydrocnanabiiioKciuc Syncumnc:p-'11ICA C.,Ha-358
Figure3: Structures chimiques duprincipeactifducanna¬
bissativa A9-THCet de sonacideA9-THCA.
NONADECANE
TETRAHYDROCANNABINOL
CA NABIDIOL (CBD)
105%
75%
50*
25%
50 10G 150 230 250 S00
CANNABINOL (CBN)
10 15 20 minutes
Figure 4 : Profil chromatographique CG/SM de l'extrait organiquedela.plantecannabisavecle spectre de masse de sonprincipeactifA9-THC.
Taux de À9-THC dans les plantes vertes
Plantsfemelles
LesconcentrationsenA9-THCdans lesfeuillesfraîches et sommités fleuriesdes plantes, en cours decroissan¬
ce, présentent des teneurs variables d'une région à
l'autre (tableau
II).
Les teneurs moyennes sont del'ordre
de 0,4 % pour les feuilles et de 0,6 % pourles sommitésfleuries.Plus globalement, la lecture des pourcentages moyens obtenus pour la plante verte femelle (sommités et feuilles), montreque lesteneurs enA9-THC varientde 0,1 à 0,8 % dans larégion de Chefchaouen, de 0,2 à 1,5 %pour
Al
Hoceimaetde0,2à0,8 %pourLarache.Le calcul des teneurs moyennes en A9-THC, rend compte de valeurs voisines ppur les régions de Chefchaouen et Larache se situant autour de 0,4 %.
Cettevaleurestlégèrementplusélevéepour
Al
Hoceima oùelle aétéévaluéeà 0,6 %.La
teneur moyennegéné¬raleen A9-THCdanslestrois régionsestde0,5 %.
Il
est important de souligner que cette comparaison de plantes encore en croissance ne revêt qu'un caractèreindicatif
dufait
que les dates de semis diffèrent d'une parcelleàl'autre.Parailleurs,les analysesontdémontré que deux plants femelles d'une même parcelle distants de 10mètres, neprésententpasrigoureusementlamême teneurenA9-THC aussibien auniveaudes feuilles que dans les inflorescences. C'est pourquoi,il
a été retenu dans laprésente étude laconcentration moyenneen A9- THCdesfeuillesetdessommitésflorales,issuesdedeux plantsfemellesanalysés séparément.Plants mâles
Dans lecas desplants mâles, et contrairementà
l'idée
répandue selon laquelle, ces derniers ne sécréteraient pas deprincipeactif
A9-THC, laprésente étude aper¬mis dedémontrerque lespieds mâles contenaientéga¬
lement du A9-THC au niveau desfeuilles et sommités (3). La teneur moyenne générale en A9-THC dans les plantes mâles decannabis aété estimée à0,4 % et les teneurs moyennes (sommités et feuilles) dans les trois régions Chefchaouen,
Al
HoceimaetLarache sontsen¬siblement équivalentes (tableau
III).
Toutefois,cesteneursquirestent trèssignificativessont légèrement inférieures à celles déterminées dans les pieds femelles. Ce résultat s'explique par un cycle végétatifplus long du plant mâle comparativement au plant femelle. En outre,
l'élimination
des pieds mâles par les agriculteurs réalisée dans le butd'éviter
la fécondation des plantes femelles, favoriserait ainsi la formation d'une variété équivalente à la sinsemillia, plus riche en A9-THC. La figure5 représente lavaria¬tion des teneurs moyennes en A9-THC des plantes vertes de cannabis mâles et femelles dans les 30 par¬
celles étudiées.
Taux de A9-THC dans les plantes sèches
Les plantes sèches arrivées à maturité, au niveau des feuilles sèches et des inflorescences, présentent des teneurs en A9-THC sensiblement différentes d'une région àl'autre (tableau
IV).
Les cultures de cannabis de la régionAl
Hoceima, se caractérisent par les teneurs lesplus élevées enA9-THC.Une comparaison entre les teneurs en A9-THC des inflorescences etdesfeuilles
fait
ressortircommeatten¬dudanslepremiercas,defortes concentrations dupro¬
duit (variation d'un facteurde2à3).
comptabiliser laformeacidecorrespondante (figure 3) qui sedécarboxyle sous
l'effet
de lachaleur(injecteur et four). Le A9-THC est identifié par son spectre de masse autemps de rétention 14,92min (figure4). Son taux dans les trois types d'échantillonsplante fraîche, sèche et en poudre, est déterminé en reportant le rap¬port(aire du pic chromatographique A9-THC
/
aire du standard interne) surlacourbe d'étalonnagepréalable¬mentétablie.
p9-TelrahydrocannabinHÎ Synonymes:p1-THCLp'-THC (->trans-p*-Tctrahvdrocann:rtimoi
Cs,HA-3t4.S'
AcideTûtrahydrocnanabiiioKciuc Syncumnc:p-'11ICA C.,Ha-358
Figure3: Structures chimiques duprincipeactifducanna¬
bissativa A9-THCet de sonacideA9-THCA.
NONADECANE
TETRAHYDROCANNABINOL
CA NABIDIOL (CBD)
105%
75%
50*
25%
50 10G 150 230 250 S00
CANNABINOL (CBN)
10 15 20 minutes
Figure 4 : Profil chromatographique CG/SM de l'extrait organiquedela.plantecannabisavecle spectre de masse de sonprincipeactifA9-THC.
Taux de À9-THC dans les plantes vertes
Plantsfemelles
LesconcentrationsenA9-THCdans lesfeuillesfraîches et sommités fleuriesdes plantes, en cours decroissan¬
ce, présentent des teneurs variables d'une région à
l'autre (tableau
II).
Les teneurs moyennes sont del'ordre
de 0,4 % pour les feuilles et de 0,6 % pourles sommitésfleuries.Plus globalement, la lecture des pourcentages moyens obtenus pour la plante verte femelle (sommités et feuilles), montreque lesteneurs enA9-THC varientde 0,1 à 0,8 % dans larégion de Chefchaouen, de 0,2 à 1,5 %pour
Al
Hoceimaetde0,2à0,8 %pourLarache.Le calcul des teneurs moyennes en A9-THC, rend compte de valeurs voisines ppur les régions de Chefchaouen et Larache se situant autour de 0,4 %.
Cettevaleurestlégèrementplusélevéepour
Al
Hoceima oùelle aétéévaluéeà 0,6 %.La
teneur moyennegéné¬raleen A9-THCdanslestrois régionsestde0,5 %.
Il
est important de souligner que cette comparaison de plantes encore en croissance ne revêt qu'un caractèreindicatif
dufait
que les dates de semis diffèrent d'une parcelleàl'autre.Parailleurs,les analysesontdémontré que deux plants femelles d'une même parcelle distants de 10mètres, neprésententpasrigoureusementlamême teneurenA9-THC aussibien auniveaudes feuilles que dans les inflorescences. C'est pourquoi,il
a été retenu dans laprésente étude laconcentration moyenneen A9- THCdesfeuillesetdessommitésflorales,issuesdedeux plantsfemellesanalysés séparément.Plants mâles
Dans lecas desplants mâles, et contrairementà
l'idée
répandue selon laquelle, ces derniers ne sécréteraient pas deprincipeactif
A9-THC, laprésente étude aper¬mis dedémontrerque lespieds mâles contenaientéga¬
lement du A9-THC au niveau desfeuilles et sommités (3). La teneur moyenne générale en A9-THC dans les plantes mâles decannabis aété estimée à0,4 % et les teneurs moyennes (sommités et feuilles) dans les trois régions Chefchaouen,
Al
HoceimaetLarache sontsen¬siblement équivalentes (tableau
III).
Toutefois,cesteneursquirestent trèssignificativessont légèrement inférieures à celles déterminées dans les pieds femelles. Ce résultat s'explique par un cycle végétatifplus long du plant mâle comparativement au plant femelle. En outre,
l'élimination
des pieds mâles par les agriculteurs réalisée dans le butd'éviter
la fécondation des plantes femelles, favoriserait ainsi la formation d'une variété équivalente à la sinsemillia, plus riche en A9-THC. La figure5 représente lavaria¬tion des teneurs moyennes en A9-THC des plantes vertes de cannabis mâles et femelles dans les 30 par¬
celles étudiées.
Taux de A9-THC dans les plantes sèches
Les plantes sèches arrivées à maturité, au niveau des feuilles sèches et des inflorescences, présentent des teneurs en A9-THC sensiblement différentes d'une région àl'autre (tableau
IV).
Les cultures de cannabis de la régionAl
Hoceima, se caractérisent par les teneurs lesplus élevées enA9-THC.Une comparaison entre les teneurs en A9-THC des inflorescences etdesfeuilles
fait
ressortircommeatten¬dudanslepremiercas,defortes concentrations dupro¬
duit (variation d'un facteurde2à3).
TableauII :TeneursenA9-',
Chefchaouen
AIHôceiïnâ Larache
THC danslesplantsfemellesencroissance.
Feuilles '..,.-..
:-';,;;,%^^-THC/;/;:
0,1 à0,7 0,1 à 1,1 0,1 à 1,0 Moyenne générale
%moyenAVTHÇ 0,3
0,4 0,4 0,4
Sommités
%A9-THC 0,1 à 1,1 0,1 à2,2 0,1 à 1,0 Moyenne générale
% moyen A9-THC 0,6
0,7 0,4 0,6
Tableau III : Teneurs en A9-THCdans lesplants mâles en croissance.
Çhèîçhàoùeii
Al
Hoceima Larache^^%A'-THC^'-';'
0,1 à0,8 0,1 à0,8 0,1 à 1,4
:Moyennegénérale
'.-% inoyén^-TTffÇ
0,3 0,4 0,4 0,4
TableauTV: Teneurs enA9-
Chefchaouen .
Al
HoçelmaJLarache
THCdanslesplantsfemellessèches.
Feuilles
%
A'-THC
0,6à2,1 0,6à2,6 0,2à 1,3 Moyenne générale%moyen A9-THC 1,3
1,7 0,6 1,2
Sommités
%A9-THC 1,0 à7,5 1,0 à7,1 1,2 à2,3 Moyenne générale
%moyen A9-THC 2,9
4,1 1,8 3
o
c 05
1,8
1,6
1,4
1,2
1
0,8 0,6- 0,4 0,2 0
Chefchaouen
femelle: 0,4% Teneur moyenne
mêle: 0,3%
Al Hoceima -femelle: 0,6%
-mâle: 0,4% D%moyenTHCfemelle
%moyenTHC mâle
i
n
,,_,,-,,-,,, ,,-,,_ ji.l
n
i
Larache
femelle: 0,4% mêle: 0,4%
i
II I If I II I
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 N°deparcelle
Figure 5 : VariationdesteneursenA9-THCdesplantsdecannabisencroissance mâlesetfemelles.
TableauII :TeneursenA9-',
Chefchaouen
AIHôceiïnâ Larache
THC danslesplantsfemellesencroissance.
Feuilles '..,.-..
:-';,;;,%^^-THC/;/;:
0,1 à0,7 0,1 à 1,1 0,1 à 1,0 Moyenne générale
%moyenAVTHÇ 0,3
0,4 0,4 0,4
Sommités
%A9-THC 0,1 à 1,1 0,1 à2,2 0,1 à 1,0 Moyenne générale
% moyen A9-THC 0,6
0,7 0,4 0,6
Tableau III : Teneurs en A9-THCdans lesplants mâles en croissance.
Çhèîçhàoùeii
Al
Hoceima Larache^^%A'-THC^'-';'
0,1 à0,8 0,1 à0,8 0,1 à 1,4
:Moyennegénérale
'.-% inoyén^-TTffÇ
0,3 0,4 0,4 0,4
TableauTV: Teneurs enA9-
Chefchaouen .
Al
HoçelmaJLarache
THCdanslesplantsfemellessèches.
Feuilles
%
A'-THC
0,6à2,1 0,6à2,6 0,2à 1,3 Moyenne générale%moyen A9-THC 1,3
1,7 0,6 1,2
Sommités
%A9-THC 1,0 à7,5 1,0 à7,1 1,2 à2,3 Moyenne générale
%moyen A9-THC 2,9
4,1 1,8 3
o
c 05
1,8
1,6
1,4
1,2
1
0,8 0,6- 0,4 0,2 0
Chefchaouen
femelle: 0,4% Teneur moyenne
mêle: 0,3%
Al Hoceima -femelle: 0,6%
-mâle: 0,4% D%moyenTHCfemelle
%moyenTHC mâle
i
n
,,_,,-,,-,,, ,,-,,_ ji.l
n
i
Larache
femelle: 0,4% mêle: 0,4%
i
II I If I II I
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 N°deparcelle
Figure 5 : VariationdesteneursenA9-THCdesplantsdecannabisencroissance mâlesetfemelles.
AnnalesdeToxicologie Analytique, vol.
XVII,
n°2,2005D'une manière plus générale, les taux moyens en A9-
THCdans lesplantessèches(inflorescences etfeuilles) analysées,varientdans
l'intervalle
[0,7 %-4,8%] et la majorité de ces plantes renferment des teneurs en A9-THC supérieures à 0,2 % obéissant ainsi, aux normes de classification en tant que variété cannabis type drogue (4).
La régiondeLarachesesingularise par le
fait
quetrois de ses parcelles produisentducannabis àfaible teneur en A9-THC (< 1 %), et celle deAl
Hoceima par des concentrations relativementfortes enregistrées (>3 %) dans quatre parcelles. La production de cannabis dans la région de Chefchaouen, se caractérise quant à elle par des teneurs intermédiaires situées entre 1 et 3 %.Une seuleparcelledeChefchaouen présente uneteneur assezélevée (4,8%).
La figure 6 représente l'évolution de ces teneurs dans les trois régions étudiées Chefchaouen,
Al
Hoceimaet Larache;il
enressort une nettedistinctionentreles pro¬ductions de cannabis de ces régions. Le calcul des teneursmoyennesenA9-THC parrégion permetd'avan¬
cer un classement où arrive d'abord les régions où la pratiquede la culturedecannabis esttrès ancienne
(Al
HoceimaetChefchaouen)avecdestauxdeA9-THCres¬pectivementde 2,9 % etde 2,1 %, suiviesde larégion d'extensionrécente(Larache) avec untauxmoindre de 1,2 %. Lateneurmoyenne généraleest de 2,1 %.
Les variationsenregistrées entrerégions,
n'ont
pu être corréléesni
aux facteurs bioclimatiques (altitude, plu¬viométrie, température...)
ni
aux conditions de culture (usage d'engrais, pesticides...). De même, l'étude du facteur irrigation sur ces cultures, a démontré une variation très aléatoire du rendement en A9-THC. En effet,il
s'est avéré que la teneur moyenne en A9-THC dans les feuilles sèches et sommités dans les trois régions étudiées varie defaçon contradictoire enfonc¬tion de
l'irrigation.
Cette teneur est plus importante dans les zones non irriguées par rapport à celles irri¬guées dans les régions
Al
HoceimaetLarache où elle4.00%
3.00%
2,00%
1,00%
0,00%
;.t"ï
2,1Va
Ifi'.i
Chefchaouen (n-I0)
^
«
"c
Inl
3.7%
2,y-/.-
2.1^
Al Hoceima (n-S)
-Mo>auic
1,5Si
asD*
Larache (n-S)
2.1V.
i/ir.
Taux moyen (,,-îfi)
passe respectivement de 2.7 % à 3.3 % et de 1.1 % à 1.4 %. En revanche, dans la région de Chefchaouen, cette valeur moyennene suitpas le même sens d'évo¬
lution puisqu'elle est plus élevée dans les zones irri¬
guées (2,5 %) quecelles nonirriguées (1,9 %).
Pour établir une meilleure corrélation entre le facteur irrigation ettauxmoyen de A9-TfiC,l'étude
d'un
plus grand nombre d'échantillons serait nécessaire, devant couvrir l'ensemble des régions étudiées et inclure d'autres paramètres tels périodes de semis, étages bio¬climatiques, utilisation de produits phytosanitaires et engraismaisaussi legénotype desgrainesde semence.
Taux de A9-THC dans les poudres
Influence
duséchagesur la
détermination dutaux
du A9-THCdans lespoudresdecannabisLe séchage des échantillons decannabis avant dosage du A9-THC est citépar plusieurs références bibliogra¬
phiques (5, 6 et 7). L'opération qui consiste en un chauffage àunetempératureinférieure à70°C
jusqu'à
poids constant, vise la déshydratation complète des produits pourunemeilleurejustesse dans les dosages.L'influencede ce séchagesurla précisiondu calculde laconcentration duA9-THCaétévérifiée: deuxéchan¬
tillonsdepoudred'unemasse
initiale
de2.5 gsontpor¬tés àunetempérature de 70° C pendant7heuresetun suividelapertedemasse enfonctiondu temps estréa¬
lisé toutes les 90minutes (figureci-après).
La
perte de masseest de4 % après3heuresde séchageetsestabi¬lise autourdecettevaleurpendantles4 heuresquisui¬
vent.
La
répercussiondecedéficit massiquesurlecal¬cul des teneurs en A9-THC aété ensuite évaluée. Les essais ont consisté à déterminer la teneur en A9-THC dans la poudre avant et après séchage (7 heures à 70 °C). Les résultats de quelques essais sont reportés surla figure 7.
Il
enressort que leséchageaffecte très peu la teneur en A9-THC dans les poudres analysées.Ceci serait probablement dû au
fait
que lapoudre est fraîchement préparée et ne contient qu'un très faible tauxd'humidité nedépassantguère4 %.12 10
o
S 6
I
2-IdAvant éluvage Après étuvage
M
2 3N°Echantillon
Figure 6 : Variation des teneurs en A9-THC des plantes
sèchesdecannabis. Figure7 :Influence duséchagesurladétermination du taux deTHCdanslapoudredecannabis.
AnnalesdeToxicologie Analytique, vol.
XVII,
n°2,2005D'une manière plus générale, les taux moyens en A9-
THCdans lesplantessèches(inflorescences etfeuilles) analysées,varientdans
l'intervalle
[0,7 %-4,8%] et la majorité de ces plantes renferment des teneurs en A9-THC supérieures à 0,2 % obéissant ainsi, aux normes de classification en tant que variété cannabis type drogue (4).
La régiondeLarachesesingularise par le
fait
quetrois de ses parcelles produisentducannabis àfaible teneur en A9-THC (< 1 %), et celle deAl
Hoceima par des concentrations relativementfortes enregistrées (>3 %) dans quatre parcelles. La production de cannabis dans la région de Chefchaouen, se caractérise quant à elle par des teneurs intermédiaires situées entre 1 et 3 %.Une seuleparcelledeChefchaouen présente uneteneur assezélevée (4,8%).
La figure 6 représente l'évolution de ces teneurs dans les trois régions étudiées Chefchaouen,
Al
Hoceimaet Larache;il
enressort une nettedistinctionentreles pro¬ductions de cannabis de ces régions. Le calcul des teneursmoyennesenA9-THC parrégion permetd'avan¬
cer un classement où arrive d'abord les régions où la pratiquede la culturedecannabis esttrès ancienne
(Al
HoceimaetChefchaouen)avecdestauxdeA9-THCres¬pectivementde 2,9 % etde 2,1 %, suiviesde larégion d'extensionrécente(Larache) avec untauxmoindre de 1,2 %. Lateneurmoyenne généraleest de 2,1 %.
Les variationsenregistrées entrerégions,
n'ont
pu être corréléesni
aux facteurs bioclimatiques (altitude, plu¬viométrie, température...)
ni
aux conditions de culture (usage d'engrais, pesticides...). De même, l'étude du facteur irrigation sur ces cultures, a démontré une variation très aléatoire du rendement en A9-THC. En effet,il
s'est avéré que la teneur moyenne en A9-THC dans les feuilles sèches et sommités dans les trois régions étudiées varie defaçon contradictoire enfonc¬tion de
l'irrigation.
Cette teneur est plus importante dans les zones non irriguées par rapport à celles irri¬guées dans les régions
Al
HoceimaetLarache où elle4.00%
3.00%
2,00%
1,00%
0,00%
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2,1Va
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Chefchaouen (n-I0)
^
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3.7%
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Al Hoceima (n-S)
-Mo>auic
1,5Si
asD*
Larache (n-S)
2.1V.
i/ir.
Taux moyen (,,-îfi)
passe respectivement de 2.7 % à 3.3 % et de 1.1 % à 1.4 %. En revanche, dans la région de Chefchaouen, cette valeur moyennene suitpas le même sens d'évo¬
lution puisqu'elle est plus élevée dans les zones irri¬
guées (2,5 %) quecelles nonirriguées (1,9 %).
Pour établir une meilleure corrélation entre le facteur irrigation ettauxmoyen de A9-TfiC,l'étude
d'un
plus grand nombre d'échantillons serait nécessaire, devant couvrir l'ensemble des régions étudiées et inclure d'autres paramètres tels périodes de semis, étages bio¬climatiques, utilisation de produits phytosanitaires et engraismaisaussi legénotype desgrainesde semence.
Taux de A9-THC dans les poudres
Influence
duséchagesur la
détermination dutaux
du A9-THCdans lespoudresdecannabisLe séchage des échantillons decannabis avant dosage du A9-THC est citépar plusieurs références bibliogra¬
phiques (5, 6 et 7). L'opération qui consiste en un chauffage àunetempératureinférieure à70°C
jusqu'à
poids constant, vise la déshydratation complète des produits pourunemeilleurejustesse dans les dosages.L'influencede ce séchagesurla précisiondu calculde laconcentration duA9-THCaétévérifiée: deuxéchan¬
tillonsdepoudred'unemasse
initiale
de2.5 gsontpor¬tés àunetempérature de 70° C pendant7heuresetun suividelapertedemasse enfonctiondu temps estréa¬
lisé toutes les 90minutes (figureci-après).
La
perte de masseest de4 % après3heuresde séchageetsestabi¬lise autourdecettevaleurpendantles4 heuresquisui¬
vent.
La
répercussiondecedéficit massiquesurlecal¬cul des teneurs en A9-THC aété ensuite évaluée. Les essais ont consisté à déterminer la teneur en A9-THC dans la poudre avant et après séchage (7 heures à 70 °C). Les résultats de quelques essais sont reportés surla figure 7.
Il
enressort que leséchageaffecte très peu la teneur en A9-THC dans les poudres analysées.Ceci serait probablement dû au
fait
que lapoudre est fraîchement préparée et ne contient qu'un très faible tauxd'humidité nedépassantguère4 %.12 10
o
S 6
I
2-IdAvant éluvage Après étuvage
M
2 3N°Echantillon
Figure 6 : Variation des teneurs en A9-THC des plantes
sèchesdecannabis. Figure7 :Influence duséchagesurladétermination du taux deTHCdanslapoudredecannabis.
Détermination
dutaux
de A9-THCdans lespoudres decannabisLeséchantillons depoudreétudiés, proviennentexclu¬
sivement des deux régions de
Al
Hoceima et de Chefchaouen, où la transformation des plantes sèches en poudre est une pratique ancienne. Les taux de A9- THCdans les poudresdecannabis analyséesse situent entre 5,5 %et 11,3 %,avecunemoyenne généraleéva¬luéeà8,3 %.Lespoudresprovenantdesparcellesdela régionde
Al
Hoceima,caractériséespar un taux moyen en A9-THC de 8,5 %, sont légèrement plus riches que celles dela régionChefchaouen dontle taux moyenen A9-THC estde8 % (tableauV). La
figure8fait
ressor¬tir
lesvariations decetaux dans lespoudresprovenant des deuxrégions étudiées.Par ailleurs, comparativement au cannabis à
l'état
de plante fraîche oùlamoyenne enA9-THC a étéestimée à 0,5 % et àl'état
de plante sèche où les teneurs moyennesenA9-THContété évaluéesà2,1 %,latrans¬formation de la plante en poudre s'accompagne donc
d'un fort
enrichissement en principeactif
A9-THC (8,3 %).Il
résulterait del'apport
substantiel des inflo¬rescencesetrésinesécrétéeparlaplante.L'histogramme dela figure9, illustrecetteévolution pourlestreizepar¬
celles ayantfournilestroistypesd'échantillonsde plan¬
te decannabisencroissance, sècheetenpoudre.
TableauV: Teneurs enA9-THCdans lespoudresde canna¬
bis.
Chefchaouen
Al
Hoceima%A'-THC
5,5à 11,3 5,8à 11,0 Moyennegénérale
%moyenA'-THC
8,0 8,5 8,3
12,0%
10,0%
8,0%
6,0%
4,0%
2,0%
0,0%
10,1%
8%
5,9%
Chefchaouen (n=5)
e deconfiance Interva
10,1%
y 8,5%=Moyenne ,0.
7% 7,1%
Al Hoceima Taux moyen
(n=8) (n-13)
Figure8:VariationdutauxdeA9-THCausein delapoudre de cannabis cultivé dans les régions Chefchaouen et
Al
Hoceina.
OX 1-
1
3)
<
0s*
12
10
8
6
4
2
0
1 2
LJ Plantefraîche
H
PlantesècheH
PoudreChefcliaouen
5 8 9
-Teneurmoyenne=0,5 % -Teneur moyenne=2,1 % -Teneur moyenne=8,3 %
AlHoceima
14 15 16 17 18 19
N°Parcelle
20 21
Figure9: ÉvolutiondutauxdeA9-THCdans lesplantesencroissance, sèches et enpoudre, desculturesdecannabis dunord duMaroc.
Détermination
dutaux
de A9-THCdans lespoudres decannabisLeséchantillons depoudreétudiés, proviennentexclu¬
sivement des deux régions de
Al
Hoceima et de Chefchaouen, où la transformation des plantes sèches en poudre est une pratique ancienne. Les taux de A9- THCdans les poudresdecannabis analyséesse situent entre 5,5 %et 11,3 %,avecunemoyenne généraleéva¬luéeà8,3 %.Lespoudresprovenantdesparcellesdela régionde
Al
Hoceima,caractériséespar un taux moyen en A9-THC de 8,5 %, sont légèrement plus riches que celles dela régionChefchaouen dontle taux moyenen A9-THC estde8 % (tableauV). La
figure8fait
ressor¬tir
lesvariations decetaux dans lespoudresprovenant des deuxrégions étudiées.Par ailleurs, comparativement au cannabis à
l'état
de plante fraîche oùlamoyenne enA9-THC a étéestimée à 0,5 % et àl'état
de plante sèche où les teneurs moyennesenA9-THContété évaluéesà2,1 %,latrans¬formation de la plante en poudre s'accompagne donc
d'un fort
enrichissement en principeactif
A9-THC (8,3 %).Il
résulterait del'apport
substantiel des inflo¬rescencesetrésinesécrétéeparlaplante.L'histogramme dela figure9, illustrecetteévolution pourlestreizepar¬
celles ayantfournilestroistypesd'échantillonsde plan¬
te decannabisencroissance, sècheetenpoudre.
TableauV: Teneurs enA9-THCdans lespoudresde canna¬
bis.
Chefchaouen
Al
Hoceima%A'-THC
5,5à 11,3 5,8à 11,0 Moyennegénérale
%moyenA'-THC
8,0 8,5 8,3
12,0%
10,0%
8,0%
6,0%
4,0%
2,0%
0,0%
10,1%
8%
5,9%
Chefchaouen (n=5)
e deconfiance Interva
10,1%
y 8,5%=Moyenne ,0.
7% 7,1%
Al Hoceima Taux moyen
(n=8) (n-13)
Figure8:VariationdutauxdeA9-THCausein delapoudre de cannabis cultivé dans les régions Chefchaouen et
Al
Hoceina.
OX 1-
1
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<
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12
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1 2
LJ Plantefraîche
H
PlantesècheH
PoudreChefcliaouen
5 8 9
-Teneurmoyenne=0,5 % -Teneur moyenne=2,1 % -Teneur moyenne=8,3 %
AlHoceima
14 15 16 17 18 19
N°Parcelle
20 21
Figure9: ÉvolutiondutauxdeA9-THCdans lesplantesencroissance, sèches et enpoudre, desculturesdecannabis dunord duMaroc.