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&,?,9,*o' -414q
(....,: teytt{tsl
#;# Mohammed seddikBen yahia - Jijel -
Facult6 des Sciences Exactes et Informatique
D6Partement de Chimie
M6moire
En vue de l'obtention du dipldme de Master en Chimie OPtion : Chimie Pharmaceutique
THEME:
ffi pouvoir antioxydant des m6tabolites secondaires
d' Asteriscus matitimtn'
Pr6sent6 Par :
Bouamli Kaouther & Lemotmti Faitouz
G11 if*-r
Sontenu le 0910712019 Pr6sidente:
Examinateur : Rapporteur:
devant le jurY :
IVf" H. BOUNAR
M Abd.H. Boudjerda
M." K.BOIJDEBAZ
MCB Univ. De Jijel MAA Univ. De Jijel MCB Univ. De Jijel
Ann6e universitaire : 2018-2019
Nous tenons tnft {'a6ord d remercier Dieu fe tntt yuksant et mkdricorffieux, quinuu6 a donrtd faforce et fayatience {'accowtyfrr ce
modeste trattaiC
-C,e trayaifyrdsentd fnns cette mdmoire a dtd rdafrsd au fahoratoire de
cfrimie dn {eymtement 6e chimie de fafacuftd 6e science exacte et inforrnatique fe f"l,lniversitd JiieC sous fa ffirectiorr du tvl*
JCtsA UDEtsAZ Svles yfus gran[es gratitudes vont d notre encadreur,
yaur sa {uyonihifttd et fa confimtce qu'effe m'a accorille. ${ous
aimpriorc aussi faremercieryour Cautonotrrie quevorls rlnus cwez
[onnie, et ses yrd,cieux corueifs qui m'ont yermis fe mener d. 6ien ce
trava{[
Stous a.dressoru rtos sirrcdres rem.erei.em.ents aux m.emhres dtt.jury lvl*
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Stotts vou^forc retnqcis toutes ks yrsonrus qui rwus yermettent de
faire a"Soutir ce trayaitdans [e honncs conditioru,Jlour fettrs conseifs,
s outieru et anrouragem,srts.
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ABREVIATIONS
ABTS AcOEt CAT BHT DPPII ET FRAP GSH H.E ICso
MeOH
mg EAG/g Ext
mg EAG/g Mf
n-But ORAC PI soD TP TRAP
try
ABREVIATIONS
acide 2,2' - azinobis-(3 -6th ylbenzothiazol ine-6 -sulfonique) acdtate d'dthyle
capacitd antioxydant totale butylhydroxytoludne
2,2 - diphenyl - 1 -p icrylhy dr azyl 6cart type
Pouvoir antioxydant r6ducteur ferrique Glutathion r6duit
Huile Essentielle
concentration n6cessaire pour inhiber 50Yo du radical mdthanol
milligramme 6quivalent d'acide gallique par gramme d'extrait
milligramme dquivalent d'acide gallique par gramme de la matidre fraiche n- Butanol
Capacitd d'absorbance des radicaux oxygdne pourcentage d' inhibition
Superoxyde dismutase teneur en polyph6nol
Paramdtre antioxydant de pidgeage radicalaire total spectroscopie ultraviolet
Figure I
Figure 2 X'igure 3 Figure 4 Figure 5 Figure 6 Figure 7 Figure 8 F'igure 9 Figure 10
Figure 11
Figure 12 Figure 13
Figure 14
Figure 15
LISTE DES FIGURES
Photographie d'Asteriscus maritimus ... 4
Reprdsentation de I'isoprdne.. 12
Mdcanisme d'action des antioxydants phdnoliques. 16
Structure du radical 2,2'diphdnyl-1-picrylhydtazyle. 17
R6action de radical DPPH avec un antioxydant RH... l7
Mat6riel v6gdtal 6tudi6.. 19
Sch6ma rdcapitulatif de protocole d'extraction des alcaloldes. 20
Extraction des alcaloides... ' 2l
Epuisements dans les ampoules i ddcanter 2l
Sch6ma r6capitulatif de protocole d'extraction des composds ph6noliques ' ' ' ' ' ' 22
Montage d'hydrodistil1ation... 23
D6tection des alcaloides'.'.. 25
Courbe d'dtalonnage de l'acide gallique pour le dosage des polyphdnols totaux Teneurs en polyph6nols dans les extrais ; CHCb, AcOEt et n-but'
Reprdsentation graphique des pourcentages d'inhibition de radical DPPH en
25 26
Figure 16 Figure 17
pr€sence des extrait ; CHCll, AcOEt, n-but, alcaloides totaux et vitamine C' "'
: Activitd antiradicalaire des trois extraits ph6noliques d'Asteriscus maritimus : Correlation d'activitd antioxydant et contenu en polyph{nols ....
28 30 30
Liste des tableaux
Tableau 1
Tableau 2 Tableau 3 Tableau 4 Tableau 5 Tableau 6 Tableau 7 Tableau 8 Tableau 9
LISTE DES TABLEATX
: Classification phylogdnique d'Asteriscus rnaritimus 5
: Types d'alcaloldes et leurs prdcurseurs de synthdse en acides aminds 6 : Solubilitd des bases et des sels d'alcaloides.... 7 r Diffdrentes classes de composds ph6noliques... 10
: Diffdrentes classes de terpdnes 12
: Mat6riel v6gdral6rudi6 .. 19
: Teneur en composds ph6noliques dans I'extrait brut d'A. maritimus ... 26 : Teneurs en polyph6nols dans les extrais ; CHCI:, AcOEt et n-but .. ... 26
: Activit6 antiradicalaire exprimde en ICso des extraits ; CHCll, AcOEt,
n-butetalcaloTdes 29
TABLE DES MATIT,RES
REMERCIEMENT DEDICACE
ABREVIATIONS LISTE DES FIGURES LISTE DES TABLEATX TABLE DES MATIT,RE Introduction
Partie I : Etude bibliographique
l.l- Asteriscus maritimus... ..
I. 1. 1 - Description boknique..
I. 1.2- Rdpartition gdographique...
I.1.3- Place dans la systdmatique...
I. I .4-Composition chimique et activitd biologique.
I.2- M6tabolites secondaire^s des plantes : Diversit6, Extraction et Pharmacologie I.2.l- Les alcaloldes ...
I.2.l.l- Ddfinition
1.2.1.2- Classification des alcaloi'des
1.2.1.3- Propridtds physico-chimiques des alcalo'fdes. .
I.2.1.4- Extraction et dCtection des alcaloTdes...
1.2.1.5 - Propri€tds pharmacologiques des alcalo'fdes. . . . .
122- Les composds ph6noliques 1.2.2.1- Ddfinition
12.2 2- Classification des composds phinoliques. . . . . .
12.2.3- Extraction et analyse quantitative des composis phenoliques... ...
I.2.2.5- Proprirites pharmacologiques des composds ph6noliques... ...
12.* Les compos€s terp6niques 1.2.3.1- Ddfinition
I.2.3.2- Classification des terpdnes. . . .
I.2.3.3- Les huiles essentielles
I.2.3.4- Extraction des huiles essentielles
I.2.3.5- Propridt6s pharmacologiques des huiles essentielles
4 4 4 4
t I
3
t
6 7 7 8 9 9 9 10 11 11 11
t2
13 13 13
TABLE DES MATIERES
I.3- Activit6 antiorydante ...
I.3.1- Radicaux libres I.3.2- Antioxydants .
I.3.3- Stress oxydatif
I.3.4- Activitd antioxydante des compos6s phdnoliques. . . . . .
I.3.5- Mdthodes d'dvaluation de l'activit6 antioxvdante ...
I.3.5.1- Test DPPH
Partie If : Travaux personnels
II.1- Mat6riel et m6thodes ... ...
III. 1. 1- Mat6riel v9gdtal 6tudi6...
ILl.2- Extraction des mdtabolites secondaires. . .
II. I .2. I - Extraction des alcaloides totaux. . . 1I.1 .2.2- Extraction des compos6s ph6noliques.
II.1.2.3- Extraction des huiles essentielles.
II.l.3- Analyse des extraits
tr. I .3. 1- Ddtection des alcaloides. . . . . .
tr .L .3.2- Analyse quantitative des compos€s phdnoliques par spectrophotomdtrie. . . . . .
ll.l.4- Evaluation de I'activitd antioxydante par le test DPPH.
II.2- Rdsultats et discussion
II.2.l- DCtection des alcaloldes... ...
n.2.2- Teneurs eir compos6s phenoliques.. . ... . . . . .
1I.2.3- Activit6 antioxydante des mdtabolites secondabes d'Asteriscus maritimus....
Conclusion
R6f6renes bibliographiques
14
t4
14 15
l5
16
t7
19
t9 t9
19
2l
22 23 23 23 24 25 25 25 27 32 34
INTRODUCTION
Introduction
Les plantes m6dicinales restent toujours la source fiable des principes actifs. En effet, elles sont d la fois un produit fini destind d la consommation et une matidre premidre pour I'obtention de substances actives (Hamia etal.r20lq.
Le genre Asteriscus est l'un des genres les plus importants et les plus rdpandus dans la
famille d'Asteraceae (Pottier-Alapetite, 19Sl). L'espdce Asteriscus maritimus est l'une des cinq espdces d'Asteriscus quipoussent en Alg6rie (Quezel et Santa, 1963; Ozenda 2004). De nombreuses dtudes ont mis en dvidence la prdsence de mdtabolites secondaires telles que les
polyphdnols et les terpdnes dou6s de plusieurs activitds biologiques ; antioxydante,
antimicrobienne, anti-inflammatoires, insecticide, activitds hypoglyc6miques, et antifongiques...etc, dans les espdces de genre Asteriscus (Ahmed et al. 1991; Youssef et aI.
1995). Parmi ces compos6s, nous nous sommes plus particulidrement intdressds d ceux dou6s des activit6s antioxydantes.
Actuellement, les recherches scientifiques mettent en 6vidence le r6le tragique du processus oxydatif incontr6lable induit par les espdces r6actives oxygdn6es. Ces oxydants sont d I'origine directe de diff6rents 6tats pathologiques tels que I'Alzheimer et le cancer. Les antioxydants natwels font l'objet de nombreuses recherches et une nouvelle haleine vers l'exploitation des m6tabolites secondaires g6ndralement et les polyph6nols particulidrement dans la sanG et vis-d-vis des maladies pernicieuses. Les effets positifs exercds par les pollphdnols sur I'organisme humain en leur qualit6 d'antioxydants ont commencd d 6tre reconnus, notamment dans le domaine de la mddecine pr6ventive. En effet, l'efficacitd puissante de ces substances i stopper les rdactions radicalaires en neufalisant les radicaux libres est due principalement d leurs structures ph6noliques avec la prdsence des groupements hydroxyles (Goudable et Favier, lW7) (Seifu et al., 2012).
Ce travail est consacr6 d I'extraction des mdtabolites secondaires d'Asteriscus maritimus et i I'analyse de ces exfaits ainsi que l'6valuation de I'activitd antioxydante par le test DPPH.
La premidre partie de ce travail conceme tout d'abord une pr6sentation bibliographique
qui commence par une description botanique de I'espdce d'Asteriscus maritimr,rs. Elle se
poursuit par une revue de litt6rature sur les m6tabolites secondaires des plantes : diversitd, extraction et pharmacologie, et enfin un rappel sur I'activitd antioxydante est pr6sent6.
Dans la seconde partie, nous avons envisag6 la partie exp6rimentale qui se d6roule en
deux 6tapes. Dans la premidre 6tape, ce travail s'intdresse d l'extraction des mdtabolites
secondaires (alcaloides totaux, compos6s phdnoliques et huiles essentielles). Ensuite, notre travail se poursuit par l'analyse des extraits tels que la ddtection des alcaloides et l,analyse quantitative des oomposds phdnoliques par spectrophotomdtrie. pour la deuxidm e 6tape,
l'activitd antioxydante des extraits ; chloroformique, acdtate d'ithyle, n-butanolique, alcaloides totaux et hydrolat d'Asteriscus maritimus a 6t6 dvaluerpar le test DppH.
Nous avons enfin conclu ce travail et donnerons quelques perspectives de recherche pour la suite afin d'approfondir dans cette 6tude.
PARTIE I :
ftude bibtiographique
I- Etude bibliographique :
l.l- Asteriscus maritimus :
Asteriscus maritimus connue en Algdrie sous le nom ( kerkeba > est une espdce qui appartient d la famille des Astdracdes. En 1932, un important traitd sur la famille des Ast6rac6es a 6t6 publid oir la plante fut renommde Asteriscus maritimus par I'allemand Christian Friedrich Lessing (1809-1862), puis dernidrement en 2011, le botaniste suisse Werner Rodolfo Greuter a publid un autre trait6 ou il lui a attribud son nom actuel Pallenis maritima. C'est une plante trop peu employ6e, iddale pour les jardins sess, comme couwe sol ou en bordure @strada et aI2013).
I.1.1- Description botanique:
Le genre botanique mdditenanden Asteriscus appartient d la famille des Asteraceae, c'est une plante vivace (qui vit plusieurs ann6es), peut atteindre de 5-30 cm de hauteur.
Les fleurs sont groupdes sur un capitule entour6 d'un involucre de bract6es. Elles sont de couleur jaune, les pdriphdriques ligul6s, celles du disque central tubuldes. Sa p6riode de
floraison est de avril jusqu'd septembre. Elles r6sistent dgalement d la sdcheresse. Les feuilles, simples, sont alternes, plus ou moins lanc6oldes. Les bractdes, semblables aux feuilles sup6rieures, se terminent par une pointe ou par une 6pine (Gao et al ,1999).
Figu re 01 : Photographie d' Asteriscus maritimus.
1.1.2- R6partition g@raphique :
Asteriscus maritimus est frds largement repandue dans les zones rocheuses de la partie occidentale du bassin m6diterranden, donc adapt€e aux milieux arides et rocheux des fagades maritimes, ainsi que dans le sud du Portugal, dans I'ouest et le sud de la Grdce (Fraternale et
al2fi)1).
I.13- Place dans la syst6matique:
La classification botanique de cette plante peut 6tre r6sumde de la fagon suivante dans le tableau 0l (Mokaddem
"2011).
ETUDE BIBLIOGRAPHIQUE
Tableau 01 : classifi cation phylog6nique d' Asteriscus maritimus.
Rigne Plantae
Embranchement Classe
Ordre Famille Genre Espice
Spermatopltytes Dicotyl4dones Astdroles Asteraceae Asteriscus
Asteriscus maritimus Nom comm un: Aste ri s cus maritimus, Odoniospermum maritime.
Nom vernaculaire: L'astdrisque maritime, ast6roide maritime, ou mdme parfois 6toile de mer.
1.1,4- Composition chimique et activit6 biologique :
L'dtude de la composition chimique des huiles essentielles d'A. maritima,s provenant de la Tunisie, l'Espagne, et l'Italie, a rdv6l6 la pr6sence de : l'cr-pinene (27.5%o), le p-
eudesmol (24.25%),1'acide hexaddcanoique (30.35o/o),le B-phellandrene (l l3%) et I'ac6tate de myrtdnyle (44.2 %) comme compos6s majoritaires. En effet la pr6sence d'acdtate de
myrt6nyle (44,2%) comme composant principal ainsi que de terpindne-4-ol (4,5yo) et de
terphdnyle (17,5%) dans l'huile essentielle de l'6chantillon provenant de l,Italie, a dtd
associde i I'activit6 insecticide de I'huile contre les larves de la chair et les insectes.
Egalement, la littdrature a rapportd l'6tude des activitds antibacterienne, antifongique et anti- acetylcholinesterase de l'huile essentielle d'A. maritimus de la Tunisie. Il est a not6 qu,aucune dtude n'a rapportd la composition chimique de I'huile essentielle de cette plante en Algdrie.
(Pal{-Paf l et al, 2014 I Fraternale et al 2001 ; Medimagh et al ,2012; Medimagh et al 2013).
I.2- M6tabolites secondaires des plantes : Diversit6, Extraction et Pharmacologie I.2.1- Les alcaloides :
I.2.l.l- D6finition:
Un alcaloide est un composd organique naturel (le plus souvent d'origine vdgdtale), hdtdrocyclique avec l'azote comme hdtdroatome, de structure moldculaire complexe plus ou
moins basique et dou6 de propridtds physiologiques prononc6es m6me d faible dose
@runeton, 1999 ; Z,enk et JuengerrZ00T\.
I.2,1.2- Classification des alcaloildes:
La classification la plus adaptde est basde sur l'origine biogindtique, c'est-d-dire de les classer en groupes (Muniz,2006). Dans le tableau suivant (tableau 02) sont d6qits quelques types d'alcaloides ainsi que leur prdcurseur de synthdse en acides aminds (Muniz, 2006).
Tableau 02 : Types d'alcaloides et leurs prdcurseurs de synthdse en acides aminds.
Prdcurseur Type d'alcaloi'de
Pip6ridines, quinolizidines, indolizidines
Alcaloides du type 6phddrine, isoquinol6ines R=H ph6nylalanine
R:OH Tyrosine cooH
Indoles Tryptophane
Pyrrolidines, pyrrolizidines, tropanes Ornithine
Quinol6ines, quinazolines, acridines
oQ""o'
Acide anthanilique
Pwidines o
ff'oil
\/
Acide nicotinique
Histidine
Via aminations Alcaloides terpdniques et stdro1diens
ETUDE BIBLIOGRAPHIQUE
L2,1.3- Propri6t6s physico-chimiq ues des alcaloildes:
Les alcaloides sont des composds de masse moldculaire vaiant 100 e 900 g/mol caract6risds par une saveur amdre. Ils ont un caractdre basique; ils forment des sels avec les acides (organiques et mindraux), leur basiciti ddpend de la disponibilitd du doublet de l,azote.
La plus part sont douds de pouvoir rotatoire : les d6riv6s naturels sont souvent l{vogyres et les plus actifs physiologiquement @runeton, lggg\.
La solubilitd des alcaloides varie en fonction du pH selon I'dquation suivante :
*( H*x *{ *
ZN-R3 + N-Rs X
R2 oH- *i t"
La solubilit6 difftrentielle des bases et des sels d'alcaloides dans I'eau d'une part, dans les solvants organiques d'autre part est rdsumd dans le tableau 03.
Tableau 03 : Solubilitd des bases et des sels d'alcaloides.
Eau solvants organiques polaires solvants organiques apotaires
Based'alcaloides Insoluble Soluble Soluble
Sels d'alcaloides Soluble Soluble Insoluble
L2.1.+ Extraction et d6tection des alcaloides :
A. Extraction des alcaloides :
Comme les alcaloides se trouvent le plus souvent sous forme de sels d'acides mindraux ou organiques, on pulvdrise les plantes avec un alcalin. Leur mode d'extraction est trds variable selon la nature de I'alcaloide, mais on trouve tlpiquement deux sch6mas d'extraction : par un solvant apolaire en milieu alcalin ou par un solvant polaire en milieu acide @runeton, 2009).
o Extraction par un solvant en milieu alcalin :
Ia drogue pulvdrisee est milangee d une solution aqueuse alcaline (l'ammoniaque, carbonate alcalin,...etc) qui diplacc les alcaloides de leurs combinaisons salines; les bases
ainsi libdrdes sont ensuite solubilisdes dans un solvant organique (dichloromdthane, chloroforme, le benzdne, etc). L'exfiaction peut se faire par simple mac6ration ou par un appareil de Soxhlet. Le solvant est alors agitd avec une solution aqueuse acide : les alcaloides se solubilisent dans la phase aqueuse sous forme de sels tandis que les impuretds neutres restent dans la phase organique. Les acides utilisds sont trds variables (chlorhydrique, sulfurique, sulfamique, tartrique, etc.), mais sont toujours employ6s en solutions trds dilu6es
0.5'4. La solution aqueuse de sels d'alcaloides, est alcalinis6e par une base en prdsence d'un solvant organique non miscible d l'eau. Les alcaloides bases prdcipitent et se dissolvent dans la phase organique. En dernier lieu, le solvant organique contenant les alcaloides bases est ddcant6, d6barrassd des traces d'eau qu'il peut renfermer par ddshydratation sur un sel anhydre (par exemple le sulfate de sodium) et 6vapor6 sous pression r6duite. Il reste alors un r6sidu sec d' alcaloldes totaux (Brunetono 2009).
r Extraction par un solvant en milieu acide :
La drogue pulvdrisde est extraite avec une solution alcoolique ou hydro-alcoolique acidifi6e. Dans ce cas, I'extraction est suivie d'une distillation sous vide qui dlimine I'alcool et laisse une solution aqueuse acide de sels d'alcaloides. On a donc une solution aqueuse de sels d'alcaloides qu'il faut purifier. Pour ce faire, il est ndcessaire d'alcaliniser la solution et extraire les bases par un solvant organique non miscible (comme cas prdc6dent) (Bruneton, 2009).
B. D6tection des alcaloides:
La m6thode classique pour d6tecter ou quantifier les alcaloides ddbute par une phase d'extraction sdlective des alcaloides de la matrice vdgltale en exploitant gdndralement ses
propridGs basiques, c'est i dire en rdalisant une extraction liquide-liquide avec deux phases organique et aqueuse acide non-miscibles. Le principe est d'obtenir une prdcipitation en milieu acide, en pr6sence de r6actifs approprids, les plus utilis6s sont les suivants:
o Reactif de Dragendorff : solution de tdffaiodobismuthate de potassium formant un prdcitd orangde d rouge une fois en contact avec ces substances.
o Reactif de Mayer : solution de tdtraiodomercurate de potassium qui donne un precipitd blanc jaunOtre en prdsence des alcaloides.
o Reactif de Bouehardat : solution iodo-iodurde qui donne des pr6cipit€s bruns.
I.z.l.t Propri€tes pharmacologiques des alcaloides :
kurs propridtds sont gdndralement vari6es et ddpendent de leurs composantes chimiques par exemple :
o Action sur le systdme nerveux central comme anti-ddpresseur : Cod6ine et Morphine.
o Action sur systdme nervelx autonome : Hord6ine et Eph6drine.
o Action sur les vaisseaux < hypertenseur )) ! Hydrastine.
o Action antibiotique, antiparasitaire, anthelminthique i des doses vari6es (Chenni.
2010).
ETUDE BIBLIOGRAPHIQUE
1.2,2- Les compos6s ph6noliques : 1.2.2.1- D6finition:
Les polyphdnols ou composds phdnoliques, sont des moldcules spdcifiques du rdgne vdgdtal. Cette appellation gdndrique ddsigne un vaste ensemble de substances aux structures varides qu'il est difficile de d6finir simplement @runetono 1993). Selon leurs caract6ristiques structurales, ils se repartissent en une dizaine de classes chimiques, qui pr6sentent toutes un point commun : la prdsence dans leur strucfure d'au moins un cycle aromatique d 6 carbones, lui-m€me porieut d'un nombre variable de fonctions hydroxyles (OfD (Hennebel le et al., 2004), Ces espdces sont des monomdres, des polymdres ou des complexes dont la masse moldculaire peut atteindre 9000g/mol (Harbone, 1993).
1.2.2.2- Classification des compos6s ph6noliques I
En fonction du nombre et de I'arrangement de leurs atomes de carbone (structure carbonde de base), les composds ph6noliques peuvent 0tre regroupds en de principales classes (tableau 04) qui se diffdrencient d'abord par la complexitd du squelette de base (allant d'un simple C6 a des formes trds polym6risdes) ensuite par le degr6 de modifications de ce squelette (degrd d'oxydation, d'hydroxylation, de mdthylation ...) (Jean-Jacques Macheix et al.,2005 ; Crozier et al., 2006).
Tableau 04 : Diffdrentes classes de composds phdnoliques.
Squelette carbond
c6-c1-c6
Classe
Acide phdnylac6tique
Xanthones
Structurc de base
d-\.-tv-\
\^)
tl
c6-c2-c6
c5-c3-c5 (C6{3-C6)n
Stilbdnes
Flavonoids Tanins condens6s
r.2.23 Extraction et analyse quantitative des compos6s phdnoliques :
A. Extraction des composes ph6noliques :
Le but de toute extraction est de sdparer les composds ph6noliques solubles de la plante, le choix de la mdthode d'extraction est une dtape trds importante avant I'analyse quantitative et qualitative des compos6s phdnoliques. En effe! la m6thode d'extraction est choisie en fonction du tlpe des compos6s phytochimiques d extraire. La prdsence d'un ou de plusieurs cycles benzdniques hydroxyl6s chez tous les polyphdnols est responsable de
t0
ETUDE BIBLIOGRAPHIQUE
certaines propridtds communes utilisdes pour les extraire d partir du mat6riel vdgdtal (Sarker et al., 2006) (Stalikas, 2007).
Lamacdtation est la plus simple des m6thodes d methe en 6uvre pour l,extraction des composds phdnoliques. C'est une mdthode kaditionnelle trds utilisde, la technique est basde
sur l'utilisation des solvants, les plus couramment utiliser sont le methanol, l,6thanol, I'ac6tone et I'eau, elle consiste d laisser la poudre du mat6riel vdgdtal en contact prolongd avec un solvant pour en extraire les principes actifs, d'ailleurs cette technique ce fait i une
tempdrature ambiante pendant un certain temps (Mehmoudi et al., 2013).
B. Analyse quantitative des compos6s ph6noliques par spectrophotom6trie :
Le dosage colorimdfrique des polyphdnols totaux peut 6tre r6alis6 par diverses m6thodes. Le dosage par le r6actif de Folin-Ciocalteu est classd parmi les m6thodes les
plus utilisdes pour la quantification des composds phdnoliques totaux. Le rdactif de Folin Ciocalteu est constitud par un m6lange d'acide phosphotungstique (HfWrzO+s) et d,acide phosphomolybdique (I{3PMo12O*). 11 est rdduit, lors de looxydation des ph6nols, en un m6lange d'oxydes bleus de tungstdne et de molybddne (Rib6reau-Gayon et Gautheret 196g
; Boizot et Charpentier 2006). La coloration bleue produite possdde une absorption maximale aux environs de 760 nm. Elle est proportionnelle d la quantite de polyph6nols prdsents dans les extraits (scalbert et al., 19S9).
I.2.2.5' Propri6tes pharmacologiques des compos6s ph6noliques :
Les recherches rdcentes sur les compos6s ph6noliques en gdn6rale et les flavonoides en
particulier sont hds pouss6es en raison de leurs divers propri6tds physiologiques comme les
activitds antiallergique, anti-artherogenique, anti-inflammatoire, hdpatoprotective,
antimicrobienne, antivirale, antibactdrienne, anticarcinogdnique, anti-thrombotique, cardioprotective et vasodilatoire (Middleton et al.r2fiX) ; Ksouri et a1.r2007,), Ces actions sont athibuees d leur effet antioxydant qui est due d leurs propri6tds redox enjouant un r6le imporant dans la destruction oxydative par la neutralisation des radicaux libres, pidgeage de I'orygdne, ou d6composition des peroxydes (Nijvetdt et al.r200l).
I.2.3- Les composes terp6niques :
I.23.1- Ddfinition :
Les terpdnes sont des hydrocarbonds naturels, de structure soit cyclique soit i
chaine ouverte. Leur formule brute est (C5H*)n dont le x est variable en fonction du degr6 d'instauration de Ia mol6cule et n peut prendre des valeurs de I d 8 sauf dans les polyterpdnes
ll
qui peut atteindre plus de 100 (le caoutchouc). La mol6cule de base est I'isoprdne de formule C5Hs @igure 02). Le terme terpdnoide ddsigne un ensemble de substances prdsentant le squelette des terpdnes avec une ou plusieurs fonctions chimiques (alcool, ald6hyde, c6tone, acide, lactone, etc.) (Benayache et al, 2013).
Figure 02 : Repr6sentation de l,isoprdne.
1.2.3,2- Classification des terpines :
Il existe diffdrentes classes de terpdnes rangds selon le nombre d'unitds isoprdniques condensdes. Le tableau 05 regroupe ces diff6rentes classes de terpOnes.
Tableau 05 : Differentes classes de terpdnes (Costes. p.2007).
La classe Le nombre de carbone
Sesquiterpdnes
::i^",,
Squelette de base des structures acycliques
SesEerpdnes
Tetraterpines c40
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I.2.3.3- Les huiles essentielles :
Ce sont des substances volatiles et odorantes obtenues des vdg6taux par entrainement d
la vapeur d'eau. Elles se forment dans un grand nombre de plantes comme produits du m6tabolisme secondaire (Sanon ; 2002). Les huiles essentielles sont des m6langes liquides trds complexes, Les constituants des huiles essentielles peuvent 6tre repartis en deux classes
en fonction de leur voie de biosynthdse : les terpdnoides et les composds aromatiques
@uchanan et a1.2000).
1.2.3.4- Extraction des huiles essentielles :
Les huiles essentielles sont obtenues avec des rendements trds faibles (de I'ordre de lyfi
ce qui en fait des substances fragiles, rares, et pr6cieuses. Plusieurs mdthodes d,extraction sont mises au point, tel que hydrodistillation, expression i froid, hydrodiffusion, distillation d vapeur saturde et extraction assistde par micro-onde. L'hydrodistillation est le procdd6 le plus anciennement utilisd pour l'extraction des huiles essentielles. @aser & Buchbauer, 2010;
Wilson,2010).
o Hydrodistillation :
La m6thode d'extraction des huiles essentielles la plus simple est l'hydrodistillation.
Son principe consiste d immerger la matidre vdgdtale dans un bain d'eau, ensuite l,ensemble est portd d 6bullition d reflux. La chaleur permet l'dclatement et la libdration des moldcules odorantes contenues dans les cellules vdgdtales. Durant l'hydrodistillation, l,eau bouillante pdndtre dans les cellules vdgdtales et solubilise une partie de l'huile essentielle contenue dans les cellules de la plante. La solution aqueuse chargee de composds volatils, diffuse ensuite d travers le tissu de I'organe vdg6tale vers la surface ext6rieure or) I'huile essentielle sera vaporisee. Ces moldcules aromatiques forment avec la vapeur d'eau un mdlange azdotropique.
Le mdlange est ensuite refroidi. L'eau et les FIEs, une fois condens6es, se s6parent en deux phases @aser& Buchbauer, 2010). Bien que I'hydrodistillation soit la mdthode normalisde
pow I'extraction des huiles essentielles, l'effet de la chaleur peut causer des modifications chimiques et des d6gradations des composants thermosensibles. Par consdquent, l,huile essentielle rdcupdrde est un produit qui difGre de l'essence originelle, d'autant plus que la duree de distillation est longue (3 heures).
r.23.$ Propri6t6s pharmacologiques des huiles q*sentielles :
Le rdle physiologique des huiles pour le v6g6tal est encore inconnu. Cependant, la diversitd moleculaire des mdtabolites qu'elles contiennent, leur confbre des r6les et propridtds biologiques tels que :
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