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ARTICLE ORIGINAL
Évaluation de l’effet antilithiasique, oxalo-calcique et
phospho-ammoniaco-magnésien d’extrait aqueux d’ Erica multiflora L.
Evaluation of antilithiasic, oxalo-calcic and magnesium ammonium phosphate effect of Erica multiflora L. aqueous extract
C. Sadki , F. Atmani
∗Laboratoiredebiochimieetbiotechnologie,facultédessciences,départementdebiologie, universitéMohammed1er,Oujda,Maroc
Rec¸ule11f´evrier2017 ;acceptéle26septembre2017 DisponiblesurInternetle2novembre2017
MOTSCLÉS Ericamultiflora; Oxalatedecalcium; Struvite;
Rats; Invitro
Résumé
Objectif.—AuMaroc,commedansbeaucoupdepays,ungrandnombredemaladesutilisent lesplantesmédicinalesdansletraitementdeleursmaladiesdontlalithiaseurinaire.Lebut delaprésenteétudeestdetesterl’effetantilithiasiquedel’extraitaqueuxd’Ericamultiflora, réputéeantilithiasiquedanslarégionorientaleduMaroc.
Méthodes.—L’extraitaqueuxd’E.multifloraaétéétudiédansdeuxmodèlesoxalo-calciques deratsrendusexpérimentalementlithiasiques.Lesparamètresbiochimiquesurinairesontété mesurésetlescoupeshistologiquesdesreinsontétéanalysées.L’effetdel’extraitaétééga- lementtestédansunmodèledecristallisationdephospho-ammoniaco-magnésieninvitro.Le nombredecristauxetleurtailleenprésenceetabsenced’extraitontétécomparés.
Résultats.—E.multifloran’apasinhibéledéveloppementdescalcificationsparenchymateuses etpapillairesetparconséquentellen’apasd’effetsurlapréventiondedéveloppementdes cristauxd’oxalatedecalciumrénaux.Mêmes’ilyauneaugmentationdupHurinaireetune diurèseremarquable,l’extraitdelaplanten’apasprésentéd’activitéinhibitricesignificative- mentimportantesurlacristallisationdel’oxalatedecalcium.Parcontre,l’extraitdelaplante s’estmontréeplusefficacecontrelalithiasephospho-ammoniaco-magnésienneeninhibantla formationdescristauxdestruvitepardiminutiondeleurtailleetdeleurnombreainsiqueleur agrégation.
∗Auteurcorrespondant.
Adressee-mail:atmani@fulbrightmail.org(F.Atmani).
http://dx.doi.org/10.1016/j.purol.2017.09.011
1166-7087/©2017ElsevierMassonSAS.Tousdroitsr´eserv´es.
Évaluationdel’effetantilithiasique 1059 Conclusion L’extrait d’E.multiflora doitêtreutilisédansl’inhibitionet l’éliminationdes cristauxdetypephospho-ammoniaco-magnésienplutôtqueceuxd’oxalatedecalcium.
Niveaudepreuve.— 3.
©2017ElsevierMassonSAS.Tousdroitsr´eserv´es.
KEYWORDS Ericamultiflora;
Calciumoxalate;
Struvite;
Rats;
Invitro
Summary
Objective.—InMorocco,asinmanycountries,alargenumberofpatientsusemedicinalplants totreattheirdiseaseincludingurinarylithiasis.Theaimofthepresentworkistostudythe antilithiasiceffectofEricamultifloraaqueousextract,purportedforitsantilithiasiceffectin theorientalregionofMorocco.
Methods.—E.multifloraaqueousextractwasstudiedintwooxalo-calcicmodelsofratsrende- redexperimentallylithiasic.Urinarybiochemistryparametersweremeasuredandhistological slidesofkidneys wereanalyzed. Theeffectofthe extractwas also testedinamagnesium ammoniumphosphatecrystallizationmodelinvitro.Thenumberofcrystalsandtheirsizein presenceandabsenceofextractwerecompared.
Results.—E.multifloraextractdidnotinhibitthedevelopmentofparenchymalandpapillary calcificationsandthereforedidnotpreventcalciumoxalatecrystallizationintokidneys.Even iftherewasanincreaseinurinarypHanddiuresis,theplantextractdidnotshowasignificant inhibitoryactivityagainstcalciumoxalatecrystallization.However,theplantextractexertedan efficientantilithiasicactivitytowardstruvitecrystallizationinhibitingtheformationofcrystals byreductionoftheirsizeandnumbersaswellastheiraggregation.
Conclusion.—E.multifloraaqueousextractneedtobeusedintheinhibitionandelimination ofmagnesiumammoniumphosphatecrystalsratherthancalciumoxalateones.
Levelofevidence.— 3.
©2017ElsevierMassonSAS.Allrightsreserved.
Introduction
Lalithiaseurinaireconstitueunproblèmedesantépublique.
Elle a un impact économique et sanitaire négatif sur la population car elle affectepréférentiellement une popu- lation active [1,2]. Environ10 % des patients lithiasiques ont des formes multirécidivantes de lithiase responsable d’unemorbiditéimportanteetpouvantaboutirauxformes les plus graves telle une altération de la fonction rénale oumêmeuneinsuffisancerénaleterminale[3].Selon une étudeconduitedanslarégiondeRabat-Saléentre2008et 2013 [4], 66,6 % des lithiases rénales sont des lithiases oxalo-calciques,18,1%d’acidesuriques,7,9%carbapatite, 4,4% destruvite et0,6 % decystine.Demême,d’autres étudesfaitesdansdifférentesrégionsduMaroc,ensebasant sur l’analyse des calculs urinaires,ont montrédes simili- tudesaveclespaysindustrialisésavecuneprépondérance delalithiaseoxalo-calcique[5,6].Denombreuxpatientsont recours àla lithotritieextracorporelle ouàdes méthodes endoscopiquespouréliminerlescalculs urinaires,maisne préviennentpaslaformationdenouveauxcalculs[7]avec en plus des effets secondaires non négligeables [8]. Plu- sieurs traitements médicamenteux ont été proposés mais leur efficacitéscientifique est moinsconvaincante [9,10].
Ainsi,leslimitesdesthérapiesdutraitementdelalithiase ont poussé des chercheurs à découvrir d’autres thérapies alternatives. L’utilisation des plantes oude leurs extraits pourraitconstituer unexcellent moyende choix.Dans ce
contexte, de nombreux travaux ont été menés pour éva- luer l’activité in vitro et in vivo de nombreuses plantes [11,12].Nousnousintéressonsiciàuneplantemédicinale, EricamultifloradelafamilledesEricacées,connuepourses vertusthérapeutiquesparlebiaisdesesfleursutiliséesen décoctioncommeantiseptiquesdesvoiesurinairesetdiuré- tiques[13].Danscetteétude,notreprincipalbutestdonc de rechercher l’efficacité d’E. multiflora dans le traite- mentdelalithiaseurinairedansunmodèledecristallisation oxalo-calciqueinvivod’unepartetdansunmodèledecris- tallisationphospho-ammoniaco-magnésien in vitrod’autre part.
Matériel et méthodes
Matériel végétal et préparation de l’extrait aqueux
Leséchantillonsd’E.multifloraontétérécoltésàTafoghalt (régiond’Oujda,nord-estduMaroc)durantlapériodemars- avrilet séchés à l’étuve à 45◦C pendant touteune nuit.
Unéchantillonvégétalauthentiqueaétédéposéàl’herbier del’InstitutagronomiqueetvétérinaireHassanIIdeRabat (numérod’herbier13009).
L’extraitaqueuxaétépréparépardécoctionenfaisant bouillir10gdeplantesèche(fleursetfeuilles)dans200mL d’eaudistilléepouruneduréede10min.Onlaisserefroidir
àtempérature ambiantependant 15min,ensuite l’extrait aqueuxaétéfiltrésurpapier.Lefiltratestévaporéàl’étuve à45◦Cpendanttoutelanuit.Lerendementdecettepro- cédure enquantitéde substance végétaleextraite estde 18%.
Expérimentation sur les animaux
L’étudeestmenéesurdesratsmâlesblancsdesoucheWis- tar pesant 180 à 250g. L’apport hydrique est permanent (eau de robinet). Les animaux vivent dans une animale- rieconditionnéeàunetempératuremoyennede22±2◦C.
La photopériode a été réglée à 12 heures. Les rats ont été mis dans des cages métaboliques individuelles dans lesquelles ils ont séjourné pendant 24heures qui corres- pondent à une période d’adaptation. Ensuite la mesure des paramètres métaboliques a été réalisée juste après cette période. Toutes les expériences ont été conduites en accordance avec les procédures internationales stan- dardsacceptéesrelativesàl’utilisationdesanimauxdansles laboratoires.
Modèle de cristallisation oxalo-calcique in vivo
Laméthodologie utilisée estanalogue àcelle des travaux antérieurssurl’étudedelaplanteHerniariahirsuta[14,15].
Nousavonsutilisé l’éthylèneglycol (EG) à 0,75 % comme précurseurd’oxalate,quiestfournidansl’eaudeboisson, pour induire la formation des cristaux d’oxalate de cal- ciumauniveaudesreins. Deuxprotocoles ontétéutilisés commeschématisés danslaFig.1:leprotocolepréventif etleprotocolecuratif.Danslepremierprotocole,l’extrait deplante est administré aux rats par gavageà raison de 50mg/mL/rat/jour.Letraitementparl’EGà0,75%etpar l’extraitdelaplantecommenceenmêmetempsetlemême jour.Nosinvestigationsontportésurdeuxgroupes:lepre- miercomprendsixratsrecevantseulementl’EG,etgavés par1mLd’eaudistilléeparjour,lesecondcomprendéga- lementsix ratsrecevantEG etgavépar1mLd’extraitde la plantepar jour. L’expérience dure trois semaines. Aux joursj0,j1,j7,j14etj21,lesratsontétéplacésdansdes cagesmétaboliquesindividuellesafindecollecterlesurines de24heures.Descristauxdethymolontétéajoutéspour éviterlaproliférationbactérienne.
Dansleprotocolecuratif,lesratssonttoutd’abordren- duslithiasiquessuiteautraitementparl’EG0,75%associé auchlorured’ammonium1%pendanttroisjourspouraccé- lérerlaformationdescristaux,puisavecl’EGseulpendant troissemaines.Aprèscetempsettoujourssoustraitement parl’EG, lesratsontétéséparés enungroupelithiasique nontraité(n=6)recevant1mLd’eaudistilléeparjouretun groupe lithiasique(n=6) traité par 1mL d’extrait aqueux de la plante par jour. L’expérience a duré pendant deux semaines.Lacollectedesurinesestfaiteauxjoursj0,j1, j3,j7etj14.
Aprèstraitement,lesratssontsacrifiésetlesreinssont pesésetsectionnés transversalement,puis immergésdans unesolutiondeformaline4%quinedissoutpaslescristaux d’oxalatedecalcium.Onaréalisédescoupesde5à10m d’épaisseur,puiscolorées avecl’hématoxylineetl’éosine.
L’observation morphologique des coupes histologiques du
reinestréaliséeàl’aidedemicroscopeoptiqueenlumière blancheetpolarisée.
Les paramètres mesurés
Aprèschaquecollecte,onmesurelesparamètressuivants: le pH urinaire, le volume d’eau consommée, la diurèse de 24heures, le poids corporel, l’oxalate, le calcium, le magnésium,lesodiumetlepotassium.Lacristallurieaété analyséeparmicroscopiephotonique.
Modèle de cristallisation de la struvite in vitro
Leprotocoledecristallisationinvitroquenousavonsutilisé est similaire à celui décrit antérieurement par Kalous- tianetsescollaborateurs[16]avecquelquesmodifications mineures. La solution A de potassium dihydrogène phos- phate (KH2PO4) 0,1M. La solution B est composée de chloruredemagnésium(41g),chlorured’ammonium(50g), 20mL d’hydroxide d’ammonium complétée jusqu’à 50mL avecdel’eaubi-distillée,puisdiluée10fois.UnmLdela solutionAaétédistribuédansdestubesenverre,ensuite onajoute62,5Ld’extraitdeplanteàdifférentesconcen- trationspour avoir desconcentrations finales de0,0625 à 1mg/mL.Lestubestémoinscontiennent62,5Ld’eaudis- tilléeàlaplacedel’extrait.UnmLdelasolutionBaété ajoutéetlestubesontétéincubésà37◦Cpendant30min.
Àla finde l’expérience, lescristauxdechaque tubesont analysésaumicroscopephotonique.
Analyse statistique des résultats
Nousavonsemployéunteststatistiqueparamétriqueparle biaisdutesttdeStudentenvuedecomparerlesmoyennes toutenvérifiantlescritèresdenormalité.Lesrésultatsont étéexprimésenmoyennesplusoumoinsl’erreurstandard moyenne.Pourlesrésultatsoùcetteconditionn’étaitpas remplie,nousavonsoptépourletestnonparamétriqueUde Mann-Whitney quiconcerne lacomparaisondesmédianes.
Les résultats ontété exprimés enmédianeplus ou moins l’erreurstandard.
Danstouslescas, lesdifférencesdontlesvaleursdep inférieures à la valeur 0,05 sont considérées comme sta- tistiquement significatives. L’ensembledes analyses a été réaliséàl’aidedulogicielSigmaplot(version9.0).
Résultats
Dans le protocole préventif, l’effet de l’extrait aqueux d’E.multiflora montrequ’ilya unelégère augmentation delamasse corporellechezlegroupelithiasiquetraitéen comparaison avec le groupe lithiasique non traité, mais sansdifférencesignificative(Tableau1).Laprisehydrique exprimée en mL/24h augmente de manière significative chezlegroupederatslithiasiquestraitésparE.multiflora àj14lorsqu’elleestcomparéeàcelletrouvéechezlesrats lithiasiquesnontraités.Lesvaleursdediurèseaugmentent d’unemanière proportionnelleaveclesvaleursdelaprise hydrique notamment chez le groupe de rats lithiasiques traitésparE. multifloraetdeviennentsignificativeà j21.
Le pH urinaire des groupes de rats expérimentaux est
Évaluationdel’effetantilithiasique 1061
Figure1. Descriptionschématiquedesdeuxprotocolesexpérimentauxpréventifetcuratifutilisésdanscetteétude.
Tableau1 Effetde l’administration de l’extraitaqueux d’E. multiflorasur le poids corporel, l’eauconsommée, le volumeetlepHurinairechezlesratslithiasiquesdansleprotocolepréventif.Lesvaleursreprésententlamoyenne±SEM.
Statistique:testtdeStudent.
Jourde traitement
Poidscorporel(g) Eauconsommée(mL/24h) Volumeurinaire(mL/24h) pHurinaire
Témoin Traité Témoin Traité Témoin Traité Témoin Traité
j0 217,1±8,7 225,1±16,3 10,0±0,5 10,3±0,9 6,8±0,7 7,3±1,5 7,3±0,2 7,5±0,3 j1 228,9±8,6 238,7±14,6 35,0±2,2 38,4±0,7 8,1±0,9 9,0±0,7 7,8±0,3 8,0±0,3 j7 252,4±10,9 256,5±12,0 17,5±3,6 22,2±3,7 24,3±2,4 28,8±3,3 7,2±0,1 7,1±0,1 j14 253,3±11,2 259,0±11,2 12,0±2,0 30,0±3,1**
p=0,0013
20,5±3,7 29,0±3,9 6,4±0,1 6,6±0,1 j21 262,4±10,1 282,5±10,6 15,5±2,5 31,0±3,6**
p=0,006
18,0±1,7 33,0±3,4**
p=0,003
6,3±0,1 6,3±0,1
**:p<0,01parrapportauxratslithiasiquestémoins.
légèrement basique avant le traitement. Après l’introduction de l’éthylène glycol dans l’eau de bois- son,onnoteunediminutionprogressivedupHurinaire,les urinesdeviennentacidesàpartirdej14.
Le Tableau 2 montre que la concentration de l’oxalate urinaire augmente durant toute la période de l’expérimentation chez les deux groupes de rats.
Cependant,cette augmentationn’atteint pasla limite de significativité. De même, on n’a pas noté de différences significativesentrelesdeuxgroupesderatsconcernantle calcium,lemagnésiumetlesodiumurinaire.Letraitement induituneaugmentationdelakaliurèsequiestsignificative àj7etj21.
Le suivi de la cristallurie chez les rats non traités durantl’expérimentationnous montrel’existencede cris- taux d’oxalatedecalciummonohydratés(COM)degrande taille et quelques cristaux d’oxalate de calcium dihydra- tés (COD). Chez les rats lithiasiques traités par l’extrait aqueuxd’E.multiflora,lacristallurieestcaractérisée par uneprédominancedescristauxdeCOD,lesCOMsontmoins abondants.
L’examendescoupeshistologiquesdesreinsgauchesdes ratslithiasiquessousl’effetdel’EGmontrelaprésencedes cristauxd’oxalatedecalciumaussibiendanslazonecortico- médullaireque dans lazone papillaire.Le traitement par l’extrait aqueux d’E. multiflora à une dose de 50mg/mL
n’exerce pas d’effet marqué. La déposition des cristaux danslazonecortico-médullaireetlapapilleestmaintenue (Fig.2).
Concernantleprotocolecuratif,aucuneffetdel’extrait aqueuxsurlamassecorporelleestnoté(Tableau3).Laprise hydriqueet la diurèseaugmentent significativementchez lesrats lithiasiques traités à j3 et j7. Chez les rats trai- tésparE.multiflora,lepHaugmenteprogressivementpour atteindreunevaleursignificativeàj14.
Le traitement par l’extrait d’E. multiflora induit une augmentation de l’oxalurie de fac¸on significative à j3 (Tableau4).Lesvaleursdelacalciurienemontrentpasde différencessignificativesentrelesdeuxgroupes.Laconcen- tration du magnésium urinaire tend à diminuer chez les ratslithiasiques témoinspendant lestrois premiersjours, puiselle augmentelégèrement. Cependant, chezles ani- maux traitéspar l’extrait d’E. multiflora, la magnésiurie augmented’unemanièrestatistiquementsignificativeàj3.
Laconcentrationdusodiumurinaireestpratiquementstable chezlesratslithiasiquestémoins,parcontrechezlesrats traités,uneaugmentationsignificativeestproduiteàj3et j14. L’administration par voie orale de l’extrait aqueux d’E.multifloraentraîneuneaugmentation significativede lakaliurèseàj7etj14.
Avantletraitementparl’extrait,descristauxdeCOMet CODsontobservéschezlesdeuxgroupesderats.Àj14du
C.Sadki,F.Atmani Tableau2 Effetdel’administrationdel’extraitaqueuxd’E.multiflorasurlesparamètresurinaireschezlesratslithiasiquesdansleprotocolepréventif.Lesvaleurs représententlamoyenne±SEM.Statistique:testtdeStudent.
Jourde traitement
Oxalate(mg/24h) Calcium(mg/24h) Magnésium(mg/24h) Sodium(mg/24h) Potassium(mg/24h)
Témoin Traité Témoin Traité Témoin Traité Témoin Traité Témoin Traité
j0 0,09±0,01 0,12±0,02 0,12±0,01 0,09±0,01 1,45±0,08 1,15±0,14 7,50±0,65 6,54±0,67 134,93±11,25 130,19±20,43 j1 0,110±0,009 0,13±0,02 2,22±0,23 2,27±0,15 9,71±0,74 8,25±0,93 11,10±2,78 10,77±1,91 129,15±10,79 117,57±9,05
j7 0,180±0,004 0,19±0,04 3,39±0,74 4,19±0,67 7,43±0,74 7,28±0,85 35,35±4,13 45,21±5,05 147,28±5,70 166,96±5,62*p=0,049 j14 0,19±0,03 0,26±0,04 1,18±0,38 0,64±0,10 7,91±0,58 8,39±0,90 18,22±2,91 28,39±6,75 133,68±10,66 135,97±9,62
j21 0,26±0,03 0,27±0,03 0,92±0,29 0,71±0,12 5,13±0,77 6,65±0,73 14,38±2,28 15,36±1,81 64,76±4,24 96,48±5,35**p=0,0016
*:p<0,05;**:p<0,01parrapportauxratslithiasiquestémoins.
Évaluationdel’effetantilithiasique 1063
Figure2. Coupeshistologiquesàdifférentsniveauxd’unreinderatlithiasiquenontraité(a,betc)ettraitéparl’extraitd’E.multiflora (a’,b’etc’)vuaumicroscopephotoniqueémanantduprotocolepréventif;aeta’:cortex;betb’:médullaire;cetc’:papille.Barre: 200m.
Tableau3 Effetde l’administration de l’extraitaqueux d’E. multiflorasur le poids corporel, l’eauconsommée, le volumeetlepHurinairechezlesratslithiasiquesdansleprotocolecuratif.Lesvaleursreprésententlamoyenne±SEM.
Statistique:testtdeStudent.
Jourde traitement
Poidscorporel(g) Eauconsommée (mL/24h)
Volumeurinaire (mL/24h)
pHurinaire
Témoin Traité Témoin Traité Témoin Traité Témoin Traité
j0 232,5±7,6 234,6±5,4 11,4±1,8 11,4±1,9 16,2±2,1 16,6±2,2 6,1±0,1 6,3±0,1 j1 226,2±7,3 234,2±6,6 12,4±2,3 12,6±2,0 14,3±1,6 16,5±2,1 6,0±0,2 6,3±0,2 j3 223,9±7,3 215,1±12,3 9,6±1,3 28,8±7,7*
p=0,035
12,8±0,7 22,5±3,3* p=0,016
6,5±0,2 6,8±0,3 j7 220,9±8,2 216,9±11,9 15,6±3,2 32,7±7,2*
p=0,03
16,3±2,5 28,0±4,1* p=0,04
6,1±0,2 6,3±0,2 j14 217,0±11,6 230,9±12,1 33,8±4,6*
p=0,012
17,3±2,7 20,8±2,6 22,8±2,2 5,8±0,1 7,0±0,2**
p=0,0028
*:p<0,05;**:p<0,01parrapportauxratslithiasiquestémoins.
traitement,lacristallurieestdominéepardescristauxde COMchezlesdeuxgroupesderatstraitésetnontraités.
Après traitementparE.multiflora,lesdifférentespar- ties durein présentent des amas de cristauxgrossiers de COMvisiblesenlumièrepolarisée.Cependant,ladifférence n’estpassignificativeentrelesdeuxgroupesderats(Fig.3).
LaFig.4illustre l’effetdel’extraitd’E.multiflorasur lenombreetlataille descristauxdestruvite invitro.On remarquequeplus laconcentrationdel’extraitaugmente pluslenombredecristauxdiminue(Fig.4A).Demême,on observeunediminutiondelataille maximaledes cristaux destruvite(Fig.4B).Danslestubestémoins,lescristauxde struvite sontdegrande taille avecdesagrégatscristallins (Fig.5a).Unefois enprésence d’extrait,lesagrégatsdis- paraissentetdiminuent detaille (Fig.5b-e).Enprésence
deladosemaximaledel’extrait(1mg/mL),lenombrede cristauxformésaétéréduitde40%comparativementaux cristauxdansletubetémoin.Demême,latailleadiminué demoitiécommelemontrelaFig.5.
Discussion
Dansleprotocolepréventif,lesratssontrenduslithiasiques paradministrationdel’EGadditionnéàl’eaudeboissonen mêmetempsquele traitementparl’extraitaqueux dela plante, pour vérifier son pouvoirinhibiteur vis-à-vis dela cristallisationdel’oxalatedecalciumdanslesreins.Dansce protocole,notammentdèsledébutdel’expérience,onapu noteruneaugmentationdelaprisehydriquechezlegroupe
C.Sadki,F.Atmani Tableau4 Effetdel’administrationdel’extraitaqueuxd’E.multiflorasurlesparamètresurinaireschezlesratslithiasiquesdansleprotocolecuratif.Lesvaleurs représententlamoyenne±SE.Statistique:testtdeStudentettestUdeMann-Whitney.
Jourde traitement
Oxalate(mg/24h) Calcium(mg/24h) Magnésium(mg/24h) Sodium(mg/24h) Potassium(mg/24h)
Témoin Traité Témoin Traité Témoin Traité Témoin Traité Témoin Traité
j0 0,45±0,04 0,52±0,06 2,44±0,57 1,79±0,36 6,57±1,15 8,41±0,92 66,93±3,8 61,36±11,80 70,15±8,06 72,94±8,51 j1 0,49±0,07 0,38±0,04 1,64±0,14 1,29±0,15 5,10±0,76 6,51±1,31 64,53±10,42 85,79±8,97 57,05±8,96 45,47±5,54 j3 0,30±0,03 0,64±0,13*
p=0,031
0,83±0,18 1,39±0,37 3,13±0,32 7,05±0,96**
p=0,003
53,66±9,96 96,50±13,14* p=0,047
85,79±10,75 108,53±19,29 j7 0,36±0,05 0,81±0,12**
p=0,005
1,56±0,37 1,44±0,18 5,59±0,64 7,25±0,98 55,50±6,16 68,99±4,39 60,01±6,80 98,13±6,61**
p=0,002 j14 0,50±0,08 0,65±0,06 2,43±0,76 3,06±0,51 4,86±0,50 6,30±0,66 60,21±6,87 79,16±4,30*
p=0,041
40,18±4,56 77,37±8,96* p=0,01
*:p<0,05;**:p<0,01parrapportauxratslithiasiquestémoins.
Évaluationdel’effetantilithiasique 1065
Figure3. Coupeshistologiquesàdifférentsniveauxd’unreinderatlithiasiquenontraité(a,betc)ettraitéparl’extraitd’E.multiflora (a’,b’etc’)vuaumicroscopephotoniqueémanantduprotocolecuratif;aeta’:cortex;betb’:médullaire;cetc’:papille.Barre: 200m.
Figure4. Effetsdel’extraitaqueux d’E.multiflorainvitrosurlesparamètresdelacristallurie.Statistique:testtdeStudent(**: p<0,01;***:p<0,001parcomparaisonauxvaleurstémoins).
de rats traitéspar la plante. Les valeurs de diurèse aug- mententenparallèleaveclesvaleursdelaprisehydrique.
Laplantepossèdeuneactivitédiurétiquequirestevisible malgrél’effet del’EG, responsable d’une élévation de la diurèseparuneffetosmotique conduisantàunepolyurie.
Ceciconfirmenosrésultatsdéjàobtenusconcernantl’effet diurétiquedelaplante[17].LepHurinairenemontrepas de différencesignificative chezles deuxgroupes de rats.
L’oxalurie augmentechez les rats traitéspar rapportaux rats non traités mais de manière non significative entre lesdeux groupesexpérimentaux. Àcet égard, desétudes précédentes ont conclu que les plantes médicinales ont peud’effet surlachimieurinairedesurolithiases [18,19].
La cristallurie montredavantage des cristauxde COD par rapportauCOMsuiteautraitementavecl’extraitd’E.mul- tifloramaisàmoindredegrésencomparaisonavecl’effet
observé lors de l’utilisation d’Herniaria hirsuta [14,15], une plante très réputée pour son activité antilithiasique auMaroc.L’observationmicroscopiqueenlumièrepolarisée descoupeshistologiquesrénalesdesratsnéphrolithiasiques montre des dépôts cristallins intra-tubulaires et intersti- tiels.Cesdépôtsontétérépartisàtouslesniveauxdurein avecunelégère diminutionnon significativechez lesrats traités.Cesrésultatsdémontrentquelaplantenepossède pasunecapacitédeprévenirledéveloppementdescalcifi- cationsparenchymateusesetpapillairesetparconséquent iln’yapasd’effetsurlapréventiondedéveloppementdes calculsrénauxmalgrésoneffetdiurétique.
Dans leprotocole curatif, nousavons étudiél’effetde l’extrait aqueux sur le dépôt des cristaux d’oxalate de calcium déjà formé dans les reins des rats. Les cristaux d’oxalatedecalciumseformenteneffetpréférentiellement
Figure5. Cristauxformésenabsence(a)etenprésencedel’extraitaqueuxd’E.multifloraàuneconcentrationde0,0625(b);0,125 (c);0,25(d);0,5(e)et1mg/mL(f)vuaumicroscopephotonique.Barre:20m.
àpHacide,entre6,3et6,7.Mêmes’ilyauneaugmenta- tiondupHurinaireetunediurèseremarquable,laplantene présentepasd’activitéinhibitricedelacristallisationaussi biendansleparenchymerénalquedanslapapille.
Ilfautrappelerqueleprocessusdelalithiaseurinaireest unprocessusmétaboliquequisedéveloppe au coursd’un tempsplusoumoinslong.Ainsi,lesdeuxprotocolesexpé- rimentaux delithiase utilisés, mêmevalidéspar plusieurs chercheurs,sontlimitésdepointvulatranspositiondeces résultatsàl’échellehumaine.
Nos tests de cristallisation phospho-ammoniaco- magnésien in vitro montrent que l’incubation avec des concentrations de plus en plus élevées d’extrait aqueux d’E. multiflora a induit une inhibition de la croissance des cristaux de struvite avec une diminution du nombre et de la taille des cristaux. En présence d’une dose de 1mg/mL, le nombre de cristaux formés a été réduit de 40 % comparativement aux cristaux formés en absence d’extrait. De même, la taille a diminué de moitié. Par conséquent, les cristaux peuvent ainsi s’évacuer plus facilement dans l’urine ensuite de l’augmentation de la diurèse.Ses essaisin vitro montrent que l’extraitaqueux estefficacedansl’inhibitiondel’agrégationdescristauxde struviteconfirmantainsisonutilisationdans letraitement des cystites infectieuses, des prostatites, des lithiases rénalesetd’autres[13].L’agrégation descristauxestune étapedéterminantedanslaformationetlaprogressiondes calculsurinaires[20].Lapréventioncontrelaformationdes calculsrénauxreposeprincipalementsurl’inhibitiondela croissanceet/oul’agrégationcristalline.Ainsi,cesrésultats laissent suggérer que la plante contient des substances efficacesdans l’inhibition de la croissanteetl’agrégation descristauxdestruvite.
La lithiase phospho-ammoniaco-magnésienne connue souslenomminéralogiquestruviteestplusfréquentechez
lafemmequechezl’hommeetdiffèredeslithiasesmétabo- liquesparsaphysiopathologieuniqueoùl’infectionurinaire pardesmicroorganismesuréasiquesquipeuventdécompo- ser l’urée urinaireet rendrel’urine plus oumoins alcalin [21,22].
Conclusion
L’efficacité de l’extrait aqueux d’E. multiflora est négli- geablevis-à-visdelacristallisationoxalo-calciquemaisjoue unrôleessentieldansl’inhibitiondelaformationdescris- taux de struvite. Il nous paraît donc important dans des futures recherches d’étudier l’effet de l’extrait aqueux d’E.multifloradansletraitementdelastruviteinvivochez des rats. Des fractionnementsbio-guidés seronteffectués envuedeconnaître lanaturedesmolécules quecontient cetteplanteetquipeuventêtreresponsablesdesonactivité biologique.
Remerciements
Cette étude a été subventionnée en partie par le Centre nationalpourlarecherchescientifiqueettechnique,Maroc, Projet D14/29 et « Programme P3de la Coopération uni- versitaireMohammedPremier—Commissionuniversitairede développement(CUD,Belgique)».
Déclaration de liens d’intérêts
Lesauteursdéclarentnepasavoirdeliensd’intérêts.
Évaluationdel’effetantilithiasique 1067
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