cf - . - catcllitr- - : - c) b) - lu x - Ir I - : a) . - toronoie . . r

1.

Læ{,lv@, I ^Luÿ{, o4ls}r.B?. ¹

PqN COTPRETDRE

IA

CTMXATONOIIE

D.lflnition

11

y r

dcur

uott

drne

cytoÈa*onaie

:

'- cytologic .

étudc de

la cellule

- toronoie .

^{aeieacc (dca}

loia)

^de

la clarsificrÈion.

CltoÈaronmle

. _taxonmie (clareification) _à ltaide

dea caraetèrce de

le cellulc.

tbtioor

de

cytolorie

a) §tructure dc la ccllule

- ^{collu1e vêgétrlc} :

obrenretion

à

1a loupe

dtun fragnrnt

de ocrbranc 2.

- cellulc aainele

³

-

^{deua Lee}

2 cât,

^otr

vacuoleg

(cf Fig

1

intcrne

dtune

êcaille

dc bulbe dtoignon :

x

asna

coloration

(dens une goutte _dreau)

x

aana

coloration

dena une

aolutioa dc

raccherolc

I 6 I r

^avec

coloration

au rouge Dcutre

(cf

Anncxe 1)

obcenration drunc

paræÉcie, à ta

^{loupe :}

x

^aans

eoloration

x aprèr coloretion

au

bleu

de

réthyIàne, lu

^rolrga

neutre, à lteau iodo iodurée (cf

ânacro 1)

diatingue :

neobrene, cytoplasoe, rroyâu, auelSolc,

et Fig 2).

b) §trugture

du nryau

0n

dictinguc

dane un Boyau

:

nembrane, nuclêoplasne,

nuclêole, chrortioe (chornogoes). Cf Fig

3.

c)

^§Èrucùurc du chrooogile

Oa

dlatlague

Bur un chronos@e 3

- conrtriction prinaire

Gt

constriction

eecondaire

- btrti :

^{braa eourÈ(S)}

et

^bre§

long(t), brle droit(D) et brat

^gaucha(G)

- catcllitr -

^centrmèrG

- chrmnaa (filanentr chrærmiquee . eopileuentr

de gèncr)

cf Fig 4, Fig 5, Pig

6.

-2- d) 'æ

Notion de carvatvoe

Chaque eapÈee

a

un n@bre de chroqeeoqÊa

2

n . I

chez Droaophila melanogaeter- 2

n .

_{46 chez} Hooo sapiens

2 n - 6

chez

§iuuliro

^dæooeuq

epécifique

et généreleoent

pair

:

Iorequron dênmbre

lea

^paireede ehrosroaooes d'une

cellule,

^de

la

^plue

lorgue

à la plus courte,

on

constitue le

caryotype de

ltespèce. Cf Fig

7'

Flg 8, Fig

9.

On

diatingue les

ehræoeones

orôinsiree

(autos@es)

et les

chronoEomes

eeruela (hÉtÉrochronosomeg). _Ctrez

lrhoqe, il ^{y a}

^{44 autoEomes}

⁺ 2

^hÉtéro- chrouocooes

(XetY).

e)

Lee chrmoeopes, supporË de

f

^{rhêrêdit€}

ê.1.

I.a

divielon cellulaire

-æ--+--ÊÈ--

- Ir nitoae (cf rie

10)

Cteat

ce node de

divieion qui

assure

la

croiesence

et

^La

cicatrisation.

Elle aboutit

e

b

formation des chrornosooes géants (chronoeooes pachytènes ou chrornosones polytènes) dans

les cellules

des glandea

salivairee

des

dipiêres :

^pendant

la division, lee filanents

chronosomiques se

deçiralisent

au naxiuun (allongenent)

nais

ne

ee eêparent pas après dédoubleurent (épaississement)

et

Le

cyto-

plasue ne ae

diviee

pas r

la nÉlore(cf Fig. 1l)

CteeÈ ce noda de

divigion qui

a§Eure

2 celtules à n

chromosqpe _@amètes) donaer une

celLule â

2

n

chrooosomes

la

reproduction sexuée ^:

fueioaaent

(fécondatlon) pour

(oeuf).

&, ^qete (cf rig

¹²⁾

Q.2.

l'ra

rl

c.3.

Il6rédité

--+æ

-

^caracÈ

cSrec

G.4.

ttÉrêdlté

- ^cerrctè

CETACÈë

h1çtrix

3.

H

aoatre de chr

-

Donc

6 chrmeo

.

I la ^plur

courte

b)

^Denr

lea

noyaux

les chroosoêE roxuelles

(ovul

plua _loogr

_euê ^,

c) Irt caractérist

-3-

iéc

aux autoa@e8 (cxcoolas) es

dqirants . r

^chryeux crépuE

x "pcru foncêc

x

^groupês eanguine AB

x

^rhésus

poaitif

es

rêcessife - x albiaisue x

drêpanocytose

x

groupc canguin O

x

rhésus

nëgetif

i,ée atrx chroaotouee aexuela (excoples)

ls liéa

^au

chrqosme

X

- x héæphilie x

daltonisue

r li€s

au chroosooe

r - x

^ho@e

porc-êpic

(ichthyocia

iravior).

so[ês du

cmplore

dreepèceg de

§.

^daonoauE

egt :

²ⁿ

.

en

3 pairea

nuoÉrotées

I, II, III,

de

la plua

lorgue

§gg. (cf Fig. 13)

des

celluleg

dee glandce

galivairel,

nÈ en nombre

haplolde (n - 3),

co@e dana

les cellulee

Gt speruatozoïdas)

et i1e

pGuvent

être ^jusqute

t5O

toie

s lcs cellulee ordinairee

(ehronosüEE géanta).

gg-de _chacun de ces chronocooe§

sont les

suivanÈs 3

a

d

§ituetion r

centrmère

fdela

longueur

totale

Bapport des bras

Clrrærour I

! Èacentrique ₄₂

l: lrl

Chrmroe Il

^a rocentrique 30

1

: '1,5

Ghromrole

III

a rrocentrique ₂₈

111r7

I

a

4. CrtecÈèrce

-4- r sur lêt

t) Ice

chrooormcs

mt ^{ét€ dtvtrér}

^{Gû 100}

^prrtl,Gs,

nnruÉtotéer de

I I

l(X)

- lcr ptftlêr I à

42 corrsrpoodêaÈ eu chroæsoæ

I (f ^à

^{20 pour}

[§

Gr21lô2 I,t)3

- ^{laa prrÈtcr} cr55l72

à

72 corrcapondcnt cn chrouoaoe

fI

⁽⁴³

à

55 pour

IIS IIf.) l

- lcr

^pertiGs

III§ et

^{84 à}

I

¹⁰⁰ correrpondcnt au

chr@sone III

⁽⁷³

à

^{80 pour} pour

IIIL)

;

Chequc

partle

subdivle§a ea DortloadÉelgn6or

A, B, ^{C, D,} E, F,

^ec

denc chequc

lea

bander

trsnsveraalcr roîÈ nrdrot€ear

b)

^Dans

lce

chrorc

dc lrcrpècc §:-ggg!gg (cooplcxe), m digtln-

gue dec

olcræotahologiqucr

pernânGncs !

-

^{une rilglon}

- ^ltorganite

(Er) qui conttent le

eoatronàre ^(C)

tatre

^(NO) sur

IS,

dene

le

eegncnt 19

- lfenn:au

de

btani ^(B) ct lc

^doublc

^{pouf (db) aur} IfS,

danr

lea

eagncnta 5

- le

^{pera Belb}

- le ^pouf

^(b)

Le pouf

et le le pouf

aont dea Bections euchrouatlgues.

Cea carectèrea

ruattent

de reconnettre

lcr cbrqog@cr et lee diffÉreotr brea

^(cf,

Fig.

^L4

ct, 52 reepectl.vêmênt

t (P) sur fIL

dans

lc

^{BegEênt 61}

IIIS.

5.

Ier lnycrrlona Ler iovcrtionr

^toaÈ

dc chronoroüe, après

Ellcr

oont

ldcotif

iadlpendeucnÈ dee

rctourn@enta de 18Oo drun ou dc

pluaicure fr.gmnts rupture

en

2 pointr

^(cf,

Fig,

15).

par

braa de

chrmaotre et

nuoÉrotées

prr r€rlea,

8.

7.

-

iaversione

i iquca, écrites à

^gauche du chronogooc

- inverrlons lntr ifiqucc, écritea à droite

du chrmoeooe

-

^ioversions

re8 i ^rrs -

^717,

rrl. -

^4.614.6

- inversioos

hêt

es r

rS

-

^12,

^ttl. - lla

-

lnveraionc

uultip s l fIL -

^416.7,

fffl. -

^2.6.

6.

Pr€lèveuent _des

Pour

Éolte, voir f

technique ^(ânnerc 2)

tion

dee c Pour

Éoirc, voir

f,

8. Lccturc

dea

11

a'agit

^de

-4, IS-{ , IL-Ae ^IL-PQ

- ^6b, IIS - 7, ttl. - 4, II! - 6r fft -

^Ar

-D,rrt-x,rIL-7

- ehroosoe III

i -C1CZ,

IIIL -

^B

(la

_{sêçrence de}

rriple

lnvcrcion 17.2

est

touJours inpliquêe)

§.

rirbanuro/S _{g/ s ._!aung s rm /} s,_3&S§gr"g"".

-2' ^IS - 3, fL - 1, IL - 2, fL -

³⁵

Convcntlor

df€cri

- invcrrione fixee

^:

-

inveraione

f,lott

§. senctioauli

- chræeæ I - chrqosæ II

Écrites

en

italiquca ! IS-1, IIIL-4

ee, écriteE

en ceractères

droits : fL - I,IIL -

²⁵

technique ^(ânnexe

3).

i idcntificatlon

-der ^espècea

lea

inversione sp€cifiquee eutvantee I

-c,IfL-8,IIL-3

fL - b, IIIL - 7, (IIIL - ^{2 ear} roujourr

iupltouÉc)

-, L-8,

-5-

IL-12 IIS-b - ^chrmsoæ

-

^chrouoeoue

-

^chrGolooe

I II III

iI

:r :I

§,

rqurnourn/S

- chroocæ I -

chrouotoue

fI - chrmorme Iff

I r I

Cf

lnnexe

4 et

Annexe cs

mr,rî|rux ns

nèr3w

cpIo;f*a*c

n,^-fJ-(n.

(

o c^^

'tq

. ₉₈ -- Dtvrits NoY^ux

^u ^REPc'ls.

i

F,». L

c. tt.^}J onl,..*Qc'

F;x. &

c. tI J.

^v

i6JF*te

f-.

.F

I

I

Ii

@

_I

it

ri'I

-

^11,_t,

I

;

otillut\: D. novau dc larvc de Salam'

c; g, iâcine d'Z lliun ^ccpa, (original).

li;\

@'.'j'

.if.,,,

Iu-t / 'i/

F a'3

t, '' ^ti

.:. a,,, l"

':'

I

0t

---'Cm

.---'-".---'ch

- -'---- ---[tr

-__---_--pl

§---

Frc, ro7 * Sr:rrrlttr.t D'uN cgnoltosortr, Iir. DE srs coNsrrr.u^NTs.

Ijrspiré de.Schra<ler. Cp, constri€tion prirnaire; Cir, centronrètc;

Crr'con§triftion sccondaire; Clr, chromonétnas; M), rnauix; l;i,

pclliculc; J, setcllite.

Frc, 4 - ' TruE DU ^Srnucnrnr CHROMOSOME^scrÉue-

(Dhprès Heitz).

Ç cinétochore; C/.r, chromomète;

Ca, con§triétion secondaire; lI,

hétérochromatine; _Â1, matticc.

'ël'

Frâ, 5

ll lJ

l/'\ GFD _,3 ^dN,

^{1É t-D}

Nfl

Frc. rrr - Cnnouosoxrs sr cENrnouÀnr3."

A. r, chtomosome âcrocentrique; e et 1, chromosomc méts' ..ntriqu" ^égal et inégal; _4, chtomosonre acentriquc; B, leut com'

*rt.m"nt ^dans la mitose; lcs chronrosomes accnttiques nc se

àiri..nt ^{p"t et te§tent en} Pannô.suf lc fuseau; C, lcs chromosomes à

J"r" .rritrore,tes ^{ne sc} ,iivitcnt normalement quc dans cinquanté pour cent des cas, (d'après ^rù9hitc, ou inspiré dc lui).

îig. ⁶

'{e+Ê{t+ 1r-ü-il-

l-t

-ffi-{il-ril-lrttrn-ür-

I

-12

-{fô-mrrrô- +çI-rt-f-]t-

tt-[r- '"iir",i

_i

il-s

,qÿ.$j1;;,,

.

^,

..,e=.$}i,l

ⁱ

7-t2 t-t'o't*'""

:

^!'

rln-On-nf tHffif*-ï]

g-r5.- to t?n:+lfll/'ÿ,

;I

--XI;-_IX- -f'f,--'t.-

i

ts- z0

^2l

---j-lt

i

_ü-Ttr

x-5

t!-15

:-f-f-lGtr'-

|l-10

{-t

t7-t0 -1111-f1-a_;

2t-22

Ï

Fro. 39 - ^{Cenrqrtra NoRM^L} o,rNs CrspÈcs HUMATNE.

,, Chez I'Hommc I 46 cluomooomcs, dont r X ct r Y.

^(l

tr,A. f

{I .t,

' 1.,,

',,i1

,;iIfII

Frc. 14 - Clnvo'rvpr NoRMÀL-DÂNs r,'g3pÈcs HtruAlNB.

Clrez la Fenrnre : ₄₆ chtomosomes, dont,r X..,

., ., ^{..i'ir r".}

-, t^l

i^iq. ^É

.U

Fi».

U

App".r.,.rn.,n| O{J-,^bL*.rF J.r.'at

^{t oh^a}

- Jr1 c,[romo-

.

t '*r^

^Aoyrro.

^)svv:û

f2.r*

U*.q

c.^[.^la r^,.âc ^J iploi'"lc

U*c,

c.ll.r.l+ -

54nlLâ. -\rl ,."-il,îrâ ^{n^ch-}

1rra.n$'rô

A ll'^t',"o*'*l

)ryA eÀqrna -

"âmç,,i Àt*rr-

u'T\

)ivltl"'- J,r

.X t'rf.r".

^t-

5olarrrF'n

.l.r ^{..Jl *ir|}

[;t t-t

riliE

Iv\:

yr.,l'itn pe(oî'»t Ar^

(lt-

^{n... r^l-l}

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L.?dü ^-frttu

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t3 ii ^{-lo - /o.}

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Jc-

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^.la.Ale

_'r

S"'/

./

Fi xx Ü-

-/

XY G*g-.6

xY

Gaxgea

F;6 .7?, ' ,t-' Ai,t*'-lnel:'6 ^{aa A.a>cca}

PTATE

¹

QUA/v\OSU/ÿ\

Frc. rz8

- ^{Noyeu »r}

B^r,BrANr.1

' Glandcs ssliveircs de Cltironomu phmwrc,

(d'après tsalbiani).

Fl6, ⁴³

NO

'Cl

'l I 2

' 4

' 6 7 8 g totl

t 2 ri8 7 6

' 4ie ^t0

'r Flc. ₃₇

- ScrrÉua o'uNs rNvcrsloll nnovclqgÉn p,ln nuprtntl i

LÀ surrg DE LA ^poRMATroN o'uNr noucr-r o,rNs LÊ. ctlnouo§Ûrt'

-' 45

t'8'

I

I I I

I

I

F,a' 4+

ÊTupe Du @MPLEKÉ, SIMULTAM DÀMNOSUM EN.AFRIQUE DE L'OUEST

-

^I

Bil lc Yah Ni lc Sirbu S«rubrc

Fro. 5.

- Détermination des 6 cytotypes par comparaison

llL6a

-pb

Bantlanra de I'extrémité du chromosome II.

ser qu'en fait ^Bandama et Soubré forment un même cytotype, du moins en Côte d'Ivoire.

Le chromosome III ^(fiC. 6) donne quelques infonna-' {'':

tions supplémentaires. Il est standard chez Bille-Yah; chez Bandama-Soubré il possède les inversions fixes IIILa, IILI', et lIlL142; chez Nile il ^possède I'inversion fixe IIILI ^ct

chez Sirba

il

^possède de plus I'inversion IIIL6 _.à ^l'état

'

_,'

homozygote (rarement hétérozygote). Cette même inver- , ^' sion se retrouve à l'état hétérozygote chez

Nile. ,

^rl

Ces diverses inversions fixes ou déterminantes nous " "' ^'

permettent d'établir une clé de détermination des cytotypq..r !r pô : parabalbiani.

homozygote ou hétéro-zygote. D'après Vlrrur ^(comm.

pcrson.) cette inversion chez Yah serait liée au sexe, les femelles étant homozygotes et les ^n-r,âtes hétérozygotes

pour

lllrr

(rappelons que chez << Yah ^>»

il

^y a fusion cÊntromérique). Pour la paire Nile-Sirba on note la pré- sence sur le bras long du chromosome

lI

d'un complexe d'inversions que nous avons interprété comme formé de 3 inversions successives llLCr, llLCs et ItLCs. Chez Nile, considéré cornme le plus proche du standard Bille, Ylltur

pense que cette inversion complexe est également liée au sexe. Elle est standard pour les femclles et hétérozygote pour les m,âles. Chez Sirba oir elle n'aurait plus de relation avec le sexe, elle est homozygote. Enlin pour Bandama- Soubré linversion

lIL,

est homozygote chez Bandama et standard chez Soubré. Au cours de notre étudç de la

répartition géographique des cytotypes qui _fera I'objet d'une publication prochain€, nous avons trouvé de très nombrcux hétérozygoles llL-..-0l lll.-r-7 ce qui laisse pen-

lnversions lixes

-

^{ISr + II4. .}

-

^{IILrs standard}

.

1'

. .

^.

- IIL'

hétérozygote

.

^,

-

^llLr' homozygote. .

'l

r,l

'ri

lr i,t.'

I'

I

.lç

1,, l:t

i ,t' ,il l, t;

Btlle-Yah Bilte ,0

O.R,S.T.O,M., sér. Ent. méd. et Parasîlol,, vol. XllI, no 2, 1975 : 85-98

Grtotaxonomie

Annexe

I -

0bserration êe callu1es

1. E!»ideræ

lnterne

èrune

écaiIIe

^moyenne

alrrès

coloration

^{au rouge}

neutre).

Rincer

à lreau tlistillée.

J'[onter

entre

la^rne

et

1anelle Monter

entre

la"ue

et

IameI}e concentrée

à

₄₀ %.

ile

bulbe clroignon (ol!.servatiæ

dans

uæ

^ggutte èreatr.

dans une

solution

de saccharose

tGttre ltépiclerne

^d.ans

Ie

^{rouge nentre}

^{à Ort} ÿ1. ^prdant

quelques minutes.

2.

kra^nécie (observation après

coloration à lreau

ioèo-j.oth.rée).

Eau

iotlo-ioôurée :

1O

g

de ioêure de potassium

1 g

driotle

1OO cm] d,reau

d.istiLlée.

eYTèTAxoNaA!c

A^t\l ^cc-- Z

.WJ4LEJ1

Ià,réeolte et

La

fi:r.ation

^ôàs

larves

d.e,îi...d'.amno-S-ütrr

srl.

^{pour les}

recherchÈB oytoLogiques

a

clonné

lieu à

beaucoup de conirovêx§êr

PluEierÈs auteurs recomanclent

l,utilisation

^d.e glace panr

innobiliser

Les La.rrrcs.

oul sont ensuite

^{ouverten, séchfes}

et

^{p1on6éee tlaris Le}

^fiXateur

ar-Corroy (UÈ,6g" 1972,

C.

Vaifure ^Com.

pers),

_{_Dtauüree} prCfàrent ^plonger

i;"

^iÀcrËg

entièrea

^dâr.e

le

^Cazzroy

et

changer

le fixater:r

^à nouveaü après

lgi (4..r. Pootl eæ.

^pure).

Cepenfl.ant, Ja

ntai

^quant

^à

^{moi trouvé aucun ava^nta4s à}

utiliser

^des

Larnes afsâequà"i s,::e 1e

terraln i

^en

fait ^eIles

^donnent

^bien

^{Eouvent tles}

ré$rltate

^{noindrss èus}

^à

^La

^rapiclité et

aux

conditions êi,fficiLes

^êans

lesquelLee

gteffeatuent les

èissections.

Pour

cdtte raison,

nous recoumand.ons

les

procédrres suivantes ^:

1."

^Ànagt

Ie

départ pour ^Le

terrain,

des tubes contenartt ^d.e

lralcool

absolu

§elont

^préBarés

àtl:re

ind.j.cation

portée sur Ie

^trrbe

^préclsant Ia

^quan-

tité

cltâclàe acétique

g.lacial à ajopter*.

^Les tubes seront ^{mis clans} trne

glaolère (4 à

6- tuUes

par

sachet

plastic)

ou d.ans

wr

the:mos ^à

ouveiture"large.

^{On gard.era} séparément un

petit

f,lacon contenant ^d'e

Ltacide acéttque,

hernétiquenent bouché

;

^en

effet,

^placé

sur Ia

^g1ace,

lraaiêe acétl[ue gèle

rapid,ement. On gardera avec

]taciôe

^{acétique une}

bolte

contenant des

étiquettes

préparées.

Ê. §ur Ie terrain, Ia ^quantité

appropriée

dtacide

^a.e6tisuo

oo!

aJuutée cfteUporanéneni êans

te

^trrho

^êrolouul

^{au noment d,ry}

introduire

les

la,rvae.

§1 nÉeooo'a,lre, des tronçons de végétation porta.nt

les

^larves

.trârrÿerri.

t'üre lntro{iuits

^{égaLement d.ans}

Ie

tube.

Norrg.rêuwruqpflonE d.e ne

p""

êépaseer

!0 larres par

tube

(2r."

cLe

fixa- 'târ).

^Un ë+,1noEtte

nentimnant Ie 1ieu, Ia dale et si

posaible les

coor.râ,onnéas gp.rcrapUlques sera

introduite

dans

Ie

^tube

^qui

^sera

^renls

alons en

6Lacière. IsE

tuber^contEna,nt

les lawes

seront ^{gard.ée à} r:ne teupérature avotsihsnte _4ec pend.ant au moins

] ^{jours, ou,}

^de

préférence _Juscgutà Le'q

e:çé&ition

^por.r

identification.

Ie,

fixation eèt

dllrectaEent

lié"

".irapport lartresfi:a.teur, et

^porr

oette ralson,

^pas

plus

èu

!0

iarves/tuUe (25 mI de

fi:cateur)

sont recomanrlées.

'1.

De

retour

au

laboratoire

ou

à

ia. base

sur le temain,

^{Les tubee} selont rernplLe

à

nouveau de

fixateur

fra^ls.

4,

^{A l,a}

^réception

^d.es

^larves

^pour

id.entlfication cytologique,

1e ^Carcnoy sera ohangé

à

nouveau

(ceci _étant

_donné

Ia réaction

rapid.e ôe

ltalcooL

en présence d.racide acétique pour for^rnez'ûc

lrothyl

^{ao,itate qrr.i}

^duroit les

ehromosoues

; ^partant,

^{jusqutà conrplète}

^fixation

^des

^larves,

^1L

est

souhaitable de rernplacer

le ^fixateur.

xPLxateur _{cle CÂRNOY}

-

⁵

^parties

^drscoof

-

¹

partie

elracide

absoLu

acétique

glacial

-2-

5. Le cytotaxonouriste

doit trorver, lors

^de

Ia réception

des lartreet toqrs

les clétails

concezrrant

le iieu d'torigine, Ia date,

Ltiryortaoce de

ltéchantillonnage, les conditions (parasitisme, taille, etc') ^et

chaque

éctrantillorr-"àr" identifié

^sux

le forrsulaire

dtaccoq;agnenent

et

Jr.lr

le tube, et

^{garcté au}

réfri.6érateqr

^jusqutà 1rela,æ5y. ^Üne f,ois

les ^laryes

exa,niné.s,

le

^nombre corzespond.ant

strr Ie

ragSrort ^serA cootré, avec

tout cqulentaire

approprié.

I,ors ùe 1teramen êes

écha.ntillons, iI est sorhaitable

^cle nentioryle'r

les

irrversions

utili.sées

^pou:o

J-tiitentificatiæ

êes es1Èces, êe ^nêæ que 1es atr.tres. inve:rsionç-hétérozy6otes

et flottante§t

ainsii-que ^1-e nonbre de lagnes paorasitfics

ptlr iÈrniFhides,

Microslnres

et CoêIrytes

(à;" i.;];";; ""tàa."i"

_orrt

_ote

_éIaborés

_{à cet effet et}

_peuvent

_êhe

noclifiés si

^{besoin es{.}

î;;-i.rJ!à"i-""

^peut

^étre

conserrrés en

rorleatrx

^ctrassér

pæ

systèæ

cLe

riviêres et ^par

^date

et ainsi faciles ^à

^consulter.

6.

.cslsse3,Lgn

II existe plusienrs

teclmiques de

fixation

^êes chronosomes polyteæs

(voir »arfington et ta

^Cottr,

1}i6 ;

^{Danbar L9T2),} cependant non§ ^nou§

limiterons ici ^à

cleux néthod.es-

l.

Ie_csl_9§e-tr.og-gg-!qg§H

(voir

anng.re

porr ttétail

^èes

^solutions)

11

J"git-aËffie-ae coloratiou à

éebsu.e.

inrportamte.

^IIrre

hyCrolÿse

^.1égère

à lf

acid.e chlorhyctrique

à }6

^prép?re

^les

^chnomo-

somes

pur

"*pà"ition

du grotrpe afaàfryaà des d,esory-glycoses

qui réagit par Ia suite

en présence du

ôolorant.

Lr§rdrol,yse coRstittre 1tétape 1a

plus critique et _1»ut ^être

^{1a caïse de lr-échec ct_e La}

coloratiol.

por.:æ au matérie1

frais

^en bonne

conctiticl

une

ryarofyse

^cte

? nir»tes

à rme terrlÉratrue ae 6O-65%

est requise.

Cependantr si_

le Pté:eie}

a

séjollÙn-é da,rrs

}e fixateur

^{penda,nt -r.rr}

^laps

^{êe teups pro-Iægé}

(pi""i"""s _{mois), Ie}

tenps

ainyarotys"

^pe,rt

être

^a13.on6é,

or Ia

tenpé-

rature

}égèreurent augnentée.

Tectmique

Otez

les larres

^{èu Car.noSr}

et les ^{laver à} }reau ôistilLée, ^jetez

^lreau

ttistillée,

^égouttez

|es larves et placez-les

clans èe

lraciê" _thlq1'-

drique e

iCIt-e 6È65oC perxlant

I

rninrr.tes

(selon Itétat

ôu uoatériel).

Ap:cès hydrolyse ^vercsez rapider::ent

lttrcL et aioutez

^de

lreau distilléet

Làvez pânaani 1-2 rninutes,

sortex les larves, égoutlezlles

^{avarrt de}

. ^{les placer}

^{dans une}

^{petite quantité}

^dè

^colorant

de Feulgenr ^{d'ans uR}

l pàiii flacon,

soi5neüser;ent-bouché.

Ie colorant doit rester à }rabri

I

^àe

^ta

^lumièrâ

^(a*u

^cassettcs

^à filn vides sont idéales).

^{Le temps}

I

_du

coloration

^{àépena du}

mat,j.riel :

du

natériel frais

^{ou dré1eva6e ne}

néceesitera ^{que 1ÿZ}

t..ou, alors

^que

*/Z à ] ^helres

sravèreront

nécessair"" d*",ia ^plupart

^des

câs.

^{Ce teops peut}

^{être allongé}

^à

{-!

^{hepres, mais de}

^cette

augmentation du tenps de

coloration

^résu1te

r.rre

ctétérioration

^tte

1tétat

des chromosolnê§o

Q11anô

Ie

teups de

coloration est estiué

adéquatlle ^ooLorafft

est

versé

et

1es tarveÀ lavées

2

ou

l fois ^à

^Lte.arr de cHetritnrtLon,

-1-

PréeqFati,op

&r-

^lgnes

Les glandes

salivaipes sont extraites par dissection

tlans

ltacide

acétiquc

à 6qi et

trærsférées ôans nne zône propre de 1a

lane

êans une

anhe gortte

tlf aciêe acétique

à

6A/0. De

, ^à {

^{Lawes peuvent}

^être

^placées

^{sur Ia}

^nêne

I*

porr

1a ctiesection

et iI est

sotrvent

préférable

d,e

laisser les larres ranolllr

penaaErt quelqtres secondes dans

lracicte. Si les ^larves

présentent tearcorp üe

cor?s graE, ou

sl

^on

note la

^{présence ôe beaucoup de soi,e stE}

^{les glades,}

^@

peu,t

utllràeæ

Ae

lraciêe

acétique

à

WÂ.

ùr

place un cou\,:re-objet

(faneffe)

propre srrr

les

61anôes en

évitæt

soi.- gn"',*eeærU

ta

foruati,op de

bulies dtralr, et

1a lanre

et la

Laoelle

so*t iléliriaft'

raent séchéês.

Au cas où

il ^{y a}

^{ôu corps grcaE ou rle 1a}

^{soie, or} lnut plus faci,leæat

éterp

dre les

chræosæes ert chauffant moôérément 1a

lane §rr

une

laqn ^à

^a}cool.

Pour étenrtre

les

ctlroarosomes on

peut tapotter

I.égèrenent

Ia }aæIle

^avec

la pointe

dtun crayon ou une

aiguille à dissections et

^ensuite presses avee lee

d.eux premie-s cloig:ts. }}â

pressant,

&aL*et d.e mctrvol-

la la,relle. I8 }aneIle iloit

être iutée

avec une

solution

tte caourtchorc pour

évlter Ia

déssication

(la _ilissc- lution utilieée po:r læréparations

cle chasrbres

à air

de

bicyclettes

colrrrlent).

Plusieurs

l-aæs peuvent

être

préparées avarrt de passer

à

lrexanen au mleroseope

conventionnel. I,es

larvee

peuvent égal.euent

être

cæse:ct ées att

frigo

^ôurant

plusieurs

heures avan't

ltexanen,

orr. en vtre d,tune préparation pe*ær:ente.

2.

ta

colora

tion à

ltorcei.ne

Ce pnocétté clowre souvent des

péparatlons

de

qualité

snllérienre

à celles

obtenues a,veo

le fetrlgen,

næis

il eet très lent et

^{ne pertt}

stutilisele

^{qtæ pour}

des lasves

indivièrrelles.

Cependant,

Ia

^tecbnique

est utile

^poer

ile petits

échantillorsuges

et

^{égalenent poæ}

^recolorer

^dee prieparattors «téjà eoloréee selon Feulgen.

îechnioue

Sortir }es

larrres êu Carnoy

et Ies placer

dans rrne gotrite dracicle acétique

ï

6G;{ penrlant

I à 2

mi,nutes. Les g}andee

saliTaires

ssÀt

alors erkraites ^et

tra*sfèrées

dalrs rxre

goutt"

poop"à

ôtacide

acétigue à _.6ü,6

et

èorceærrt réchatrffées

su!

rrne lanrpe

à alcooi.

Ltacicle

est alors#cfré:

^{e'b æ'a3oute une}

^gputte

^cltOr- celne BaEto-Aoétique. Le lâ.üe

est

d,,xrcesrent réchsuffée

à

plusierrrs

reprises

^atrrrès J-B

ninutes,

1e

c|lorant est

srjché au

papier fiJ.tre, ot ajorte

^{cle Lracida acétigue}

à

6tt!'

et Ie

^{cor?s gtras}

et la soie sont

ôtés des glaades

sâlivai:res. ttàcide

^esi;

séciré ap

papier fiitre et

une

goutte

dtoreeine

gst ajortée.

Après

2-J

^ruinuteet

àn enlève-llorceine,

^on

ajoute

cle

ltacl.de à

6Ûii

et oi _fcraee les

chræro§oæs

cornne

d.écrit plus haut

I

ⁱ

ft1d*âr31lisgs_-gege.ri_e-Ltg-

11

existe

d.eux rnéthodes prj.ncipales pour obteai-r tles pnéparations pernaneEtes.

Ie, rrremière

i-upliEre ia réfrigeratiôn raplde

au niütqgÈne

liguide or ^à

1a neigS carüonique

(fes

lal"es peuvent

être réfrlgérées

au cougÉfateur,

nais la réfrigÉ- ration

moins rapid.e

porrrait

ne ^pas

6vttàr Ia tùessicatim).

I,e oærvro-obJet-eat

rapideænt

sorùàÿ,â

"r"c ,*"

^{lame de}

^{rasoLr et}

^lane

^et

cou\Ee-ob$et ploqgÉs ^tlarm

Italcool

abeolu chrrant 2 rninutes. ^De

oette nanière,

Les chromoeæes.eoat Se|és

sqr

^place

et ^Ltalcool

^{peut remplacer}

Ia eolution

^{aqueuee ctracide}

acétique.

^Iene

et lamelle sont sorties

«Ie

l'"f"ooil

égouttéeei

un;

goutte drEIIPliRÀt

est

^posée

suirla

Lare

et la laroelle replacé"", ff faut

^proc6iter rapiclement

porr

p:eévenir

la

dessication

et

^Le pllsseroént cles chræosomes

; ^{lraloool doit êire}

^absÔ}u

(;;;-i;;-i=àpiq".", i'"1.ool

^s rhyclrate rapld,enent).

7

t

-4-

.

^-ïr8nê

^nt

^hydrogÈno

^{liqutôe, ni}

ryige.carhonique ne sont

disponiblggt ol recorrt

^a.

ra

seâànàË méthoâa o,ais

celLelci

ne donnera ^gue ôes préparations èe

qualité inférieure

^I

i,es Laneg sont placées ilans une

boite

ûe FE'IEI, recouvertæcle J.iquiôe ^de

tmuoilitï;;;;, piô ta nutt. ^Lrarcool

^acétique reurplace progresslvenent

la aolutlon

&qgeus", lre Lenclenain

les lames'sot{ retirées,

^séchées,

et

^laneg

^et

. lanelLes

pas"6"" à ltalcool

^conme

d'écrit plus

^haut'

.S.e..rs-I

Iüe.ts:lr

Iixstesx-Èe--g48[wi4]-"*opàsé*tls"-)

. , ^parties

tlra]-cooL

cltet]ryl

^absolu

1 partie

êtaoiêe acétique ^glacj'aL

Ce

fj.xaterrr cloit Être

^préparé extemporanément'

rbræ

_,

s,1-o§ge-t--êg--q$§Jry.(§rchsineLeuooBasique) CorrooeLtion ^:

*d.æ.-*

I ^g

ôe I\rchslde Basique 2 g:rs ôe I(2 S2 05

1.0 co ê'ECL'

à

10';'5

200

cc

^II20 Préoaration

a5rù-æ-

1.

2.

,.

4,

Chauffer

à

BOoc 2OO

cc

^d.reau

d.istillée et ^ajouter I ^g

^d'e tr\rchsine ^basiquc îanener

à

50oc

et ^{ajouter 2 grs}

^{d'e T? s2 05}

Banener

à

_50oc

et

^{aJouter 10}

^cc

^dtI{CL

^{à Lt/'}

Blen

a6tter at

garcler au

réfrigÉrater:r

clurant 24 heures ^dans un

récipient blen hermétique'; a

"u

^moment,

}a ilécoloration

§era complète'

J,

AJouter environ

o,5 g

de charbon

aetlf

au co].orant

et bien agiter,

6. FlLtrer

rapid,anent por:r

él,ininer le

^oharbon

et les

irnpuretés' I'e colorant

résultant

^{sera un}

^liquld.e i""oiot"- i

^{une fuchsine d'e mauvalee}

^ouallté

d.onnera un coLorant ^jar:ne ou orangé.

si tel

".t r" cas, ajoutei

aat'arrtage èe charbon

et fiLtrer ^à

^nouveau.

it faut

^prendre

^soin d'éIi:riner

^pan

fil-

tragÉ

torte ^trace

êe charbon'

?.

^{Garcler au}

réfr16Érateur

^{èane un}

récipient

herr:nétlquement fermé'

6ÿtotaxonomle

Annere

3 - Èéparation

rlss

cüroesoæs

^goants èes gl.antles

salivaires

1.

^Versel ).e caænoy

2.

R.iæer 1es

lases à lreau ôistillée : J

^uioutes

,.

^Seche,s

^{les larves}

^sux

papier.§gi,énique, puis _sur

1»rpier buvarè.

4. ^{Iibttre les larves}

^{dans rle}

^ltacicle

chloElqÿilrigrre

à

_{10 É}

et à

^6OoC

pendant

7

minutes dans des tubes à

hæ§se

3 c&auff,agê

arec themstat.

&incer

à lreau rtistillée : J fois

Sécher

les

Larves (paBier trygiéniquer

puis papier

buvartl).

I&ttre les lawes ,l,ns

1e trbulgen

pnflant ]

^heùres.

frtits pilluliers

propres

et ^bien

sêcs. Résene cte trleu}gan

toujours à lrabni tle Ia

lurnière ^(sac

noir) et toujours

au

frais.

Ri*eer

1es

larnes à lteau

^cùe

robiaet. Ies laisser

tlaos

la dernière

^eau jusq*rau préIèverent des gl,a,ndes

salivaires.

9.

^Disséquer

(extraction

des,glanêes

salirraires et

préIèveænts d.es chronoosomes) Oans de

ltacide

acétique

à

₅₀ 16.

IO.

^l'lcnter 1es chromosomes

(les

noyaux èe

hlbiani) e»tre lane et laæ}le

d.a»s rsre

goutte

d.torcéine.

ltr.

Ecraser sous

lnpier buvarè.

_'

(

6.

7.

8.

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