MISE EN PLACE DU PROCESSUS DE VALIDATION DES REACTIFS DE BIOCHIMIE AU SERVICE DES EXPLORATIONS DIAGNOSTIQUES DE LA DIRECTION DE LA PHARMACIE DU MEDICAMENT ET DES EXPLORATIONS DIAGNOSTIQUES (MINISTERE DE LA SANTE).

(1)

REPUBLIQUE DU BENIN

**********

MINISTERE D’ETAT CHARGE DEL’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE

*********

ECOLE POLYTECHNIQUE D’ABOMEY-CALAVI

**********

DEPARTEMENT DE GENIE DE BIOLOGIE HUMAINE

**********

RAPPORT DE STAGE DE FIN DE FORMATION

POUR L’OBTENTION DU DIPLOME DE LICENCE PROFESSIONNELLE

THEME

:

Présenté et Soutenu le 07 Novembre 2014 par :

Sodiki .A. ADELANI &Josias T.E. ZOUNMA Devant le jury:

Président: Prof Hyacinthe AHISSOU Membre 1: Prof Frédéric C. LOKO

Membre 2: Dr Eugénie ANAGO

Sous la direction de :

SUPERVISEUR DE STAGE TUTEUR DE STAGE Prof Frédéric LOKO M. Henri MIDINGOYI

Pharmacien, biologiste Ingénieur d’analyses Biomédicales, Professeur titulaire de biochimie EPAC/UAC Master en gestion des microassurances santé Directeur LARBA/EPAC

MISE EN PLACE DU PROCESSUS DE VALIDATION DES REACTIFS DE BIOCHIMIE AU SERVICE DES EXPLORATIONS DIAGNOSTIQUES DE LA DIRECTION DE LA PHARMACIE DU MEDICAMENT ET DES EXPLORATIONS DIAGNOSTIQUES (MINISTERE DE LA SANTE).

Année académique 2013-2014

2009

7^ème Promotion de licence professionnelle

(2)

Mise en place du processus de validation des réactifs de biochimie au Service des Explorations Diagnostiques de la Direction de la Pharmacie du Médicament et des Explorations Diagnostiques (Ministère de la Santé).

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page iv

REPUBLIQUE DU BENIN

*********

MINISTERE D’ETAT CHARGE DEL’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE

**********

UNIVERSITE D’ABOMEY-CALAVI (UAC)

*********

ECOLE POLYTECHNIQUE D’ABOMEY-CALAVI (EPAC)

DIRECTEUR : Professeur. Félicien AVLESSI

DIRECTEUR ADJOINT : Professeur Clément BONOU

CHEF DU DEPARTEMENT : Docteur Julien SEGBO

(3)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page v

ANNEES ACADEMIQUES : 2011-2014 I- ENSEIGNANTS PERMANENTS

N° NOM et Prénoms Matières enseignées

01 Feu ADISSODA Cyrille Anglais

02 AHOYO Théodora Angèle Microbiologie Générale

03 AIKOU Nicolas Biochimie

04 AKPOVI Casimir Pharmacologie et Toxicologie

05 ANAGO Eugénie Biochimie Clinique

06 ANAGONOU Sylvère Education Physique et Sportive

07 ATCHADE Pascal Parasitologie

08 BANKOLE Honoré Bactériologie Appliquée

09 DOSSOU Cyriaque Techniques d’Expression et Méthodes de Communication

10 HOUNNON Hyppolite Mathématiques

11 HOUNSOSSOU Hubert Biométrie et Anatomie Générale

12 LOKO S. Frédéric Biochimie Clinique

13 LOZES Evelyne Immunologie Générale

14 SECLONDE Hospice Immuno-Hématologie et Transfusion Sanguine 15 SEGBO A. G. Julien Biologie Générale, Biochimie Structurale, Biochimie

Métabolique et Biologie Moléculaire

16 TOPANOU Adolphe Hématologie Générale

17 YOVO K. S. Paulin Physiologie Humaine, Pharmacologie et Toxicologie LISTE DES ENSEIGNENTS DU DEPARTEMENT DE

GENIE DE BIOLOGIE (GBH)

(4)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page vi

II- ENSEIGNANTS VACATAIRES N° NOM et Prénoms Matières enseignées 01 ABLEY Sylvestre Déontologie Médicale

02 ADOMOU Alain Physiques

03 AGBANGLA Clément Génétique Moléculaire

04 AGOSSOU Gilles Législation et Droit du Travail

05 AKOGBETO Martin Entomologie Médicale

06 BINAZON Claude César Soins Infirmiers et Education pour la Santé

07 DARBOUX Raphaël Histologie

08 DOUGNON Victorien Méthodologie de la Recherche

09 DESSOUASSI Noël Biophysique

10 DOSSEVI Lordson Techniques Instrumentales

11 FOURN Léonard Santé Publique

12 SENOU Maximin Histologie

13 YANDJOU Gabriel Techniques d’Expression et Méthodes de Communication

(5)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page vii

DEDICACE

(6)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page viii Nous dédions ce travail à nos parents !

(7)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page ix

REMERCIEMENTS

(8)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page x

Nos sincères remerciements vont à l’endroit :

 du Professeur Fréderic LOKO, Votre sens du travail bien fait et votre rigueur ont permis la réalisation de ce travail. Malgré vos multiples occupations, vous avez été toujours présent durant ce travail. Par vos conseils et votre sens de la discipline, vous avez été, pour nous, un père. Puisse l’Eternel vous accorder longévité et prospérité afin que les générations futures bénéficient aussi de vos connaissances ;

 de M. Henri MIDINGOYI, plus qu’un tuteur vous avez été pour nous un père de par votre soutien, vos analyses, vos sages conseils et votre attention à notre égard. Vous avez su nous faire bénéficier de vos expériences et de votre savoir-faire. Que le Seigneur vous comble de sa grâce ;

 de mesdames AGOSSOU Chantal, DOUSSOH Mariette et KOUNNOU Lucienne, pour votre soutien, vos sages conseils et les efforts consentis pour la réalisation de ce travail, nous vous remercions infiniment ;

 à tout le personnel du Service des Explorations Diagnostiques (SED), pour votre disponibilité, votre soutien, vos multiples conseils ;

 aux enseignants de l’EPAC, en particulier ceux du département de Génie de Biologie Humaine, recevez ici le témoignage de notre profonde gratitude.

 de Dr Victorien DOUGNON pour nous avoir donné le plus beau cadeau que l’on puisse offrir à quelqu’un : votre temps, votre attention et votre amour. Pour la confiance que vous nous redonnez à chaque moment où nous vacillons. Merci à vous, pour le grand frère et l’ami que vous êtes pour nous ;

 de Dr Jean Robert KLOTOE, M. Lauris FAH, M. Hornel KOUDOKPON, FANOU Brice, Puisse le Seigneur vous le rendre au centuple ;

 à AGBATCHI Romeo, puisse le seigneur te le rendre au centuple.

Sodiki&Josias

(9)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page xi

Merci à Allah le tout puissant pour ses innombrables bienfaits, je dois satisfaire à un agréable devoir de témoigner ma gratitude à tous ceux qui de prés ou de loin ont participé à l’élaboration de cette œuvre. Mes sincères remerciements à :

 A mon cher père, El -Hadj ADELANI LATIF

Homme courageux et compréhensif, ce travail est le fruit des inestimables efforts, soutiens et sacrifices que tu as toujours consentis pour moi. Que cette œuvre reste le témoignage vivant de ton immense amour paternel sans lequel je ne pouvais y parvenir. Tu peux être certain que tu es un père exemplaire. Qu’Allah te bénisse et te prête longue vie. Tes efforts sont indélébiles dans le cœur de ton fils.

 A ma chère mère EL- Hadja AMUDAT LATIF

Tu as toujours accepté les souffrances et les humiliations de ce monde afin de garantir à tes enfants un meilleur avenir. Jai eu la chance de t’avoir comme maman. Ton amour a été pour moi un bras sur lequel je m’appuie toujours, tes appels a chaque moment me donnait le courage de continuer malgré les difficultés que je rencontrais, prend ce travail comme l’aboutissement des énormes sacrifices consentis. Qu’Allah te donne longue vie, t’accorde la santé pour que tu cueillies les fruits de l’arbre que tu as planté.je t’aime maman.

 A ma grand-mère EL- Hadja AMINATH SALAMI

Affable, honorable, aimable. Tu représentes le symbole de la bonté par excellence, la source de tendresse et l’exemple du dévouement qui n’a pas cessé de m’encourager et de prier pour moi.

Ta prière et ta bénédiction m’ont été d’un grand secours pour mener à bien mes études. Qu’Allah te donne longue vie, t’accorde la santé pour que tu cueilles les fruits de l’arbre que tu as planté.

 A mon cher oncle OSSENI FATAI et ses épouses

Papa, les mots me manquent pour rendre compte de tout l’amour que tu m’as donné durant les dix ans que j’ai passé avec toi. De toi j’ai appris que seul le travail libère l’homme. Dans la rigueur et l’amour, tu as fait de moi ce que je suis aujourd’hui, reçois en mes sincères remerciements.

 A mon grand frère OSSENI MOUIDINE et son épouse

(10)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page xii Grand frère, reçois ce travail comme un pardon de toutes les actes manquées que j’ai eu envers toi, Dans l’amour et la rigueur tu m’as donné le gout du travail bien fait. Sincères remerciements.

 A mes frères et sœurs en particulier MUFTAHU, FAOSIA, AMIRA ET BARAKAT, GAFARU

Avec toute mon affection et désir de vous faire honneur, votre amour et soutient m’ont beaucoup aidé, Que ce travail vous donne beaucoup d’ardeur et de goût pour les études durant votre parcours et puisse le seigneur raffermit notre lien fraternel

 A mes cousins et cousines, en particulier Kafayath, Moufidath, Mounirou, Kassim, Sherifath, Issiaka

Vous m’avez fortement soutenu tout au long de mes années d’études, recevez ici l’expression de mon amour familiale, soyons toujours unis

 A Mme GANIOU Judith,

Pour ton rôle de mère que tu as su joué ceci par tes conseils et ton soutient matériel et financier, que Dieu fasse que sa soit ainsi pour tes enfants.

 A tous mes oncles et tantes,

Pour les soutiens moraux, matériels, et financiers, Qu’Allah le tout puissant vous accordent longues vies.

 A tous mes amis de la 7^ème promotion ABM particulièrement IBRAHIMBoussari, DJOSSOURock, HOUNTON Sylvestre, DENANKPO Ghislain, TOSSOU Sonita, TOHON Stecy, HOUNSINOU Sylvie, TOAFODE Merla, KOUGLENOU Constant, ZINGAN Alice, SOTON Annick, pour tous les moments intenses passés ensemble je vous porte dans mon cœur.

 A tous mes parents, alliés et amis qui m’ont soutenu de prés ou de loin, recevez ici le témoignage de ma profonde reconnaissance

 A ZOUNMA Josias,

Le hasard nous a réunis autour de ce rapport de stage et malgré les dures épreuves, nous avons su dominer nos orgueils personnels. Si ce travail est à refaire je le ferai avec toi.

Sodiki ADELANI

(11)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page xiii

 A DIEU tout puissant maître du savoir.

Nous croyons en ta bonté. Ta sagesse est divine, oui, nous savons que tu veux le bien de tes enfants. Seul toi tu connais où et quand tes enfants auront le passeport de leur vie. Sans tout comprendre encore, à tes pieds nous nous prosternons. Ta grâce nous suffit et nous rend confiant.

Donnes nous la force et la sagesse de continuer et que ta volonté soit faîtes. Amen !

 A mon père Philippe ZOUNMA

Dans l’amour et la rigueur, vous m’avez donné le goût du travail bien fait. Recevez ce travail en signe de ma profonde reconnaissance. Amour filial.

 A ma mère Hortense GBAGUIDI

Symbole d’amour, d’affection et de compréhension, vous avez consenti d’énormes sacrifices en vue de faire de moi ce que je suis. Trouvez ici la concrétisation de vos vœux. Que Dieu vous accorde une longue vie pour jouir pleinement des fruits de vos efforts. Tendre affection.

 A mon très cher oncle Siméon ZOUNMA

En témoignage de ma reconnaissance et de ma gratitude pour égard à tout ce que vous me faites et continuez de faire pour moi. Merci pour vos soutiens et sages conseils. Le meilleur reste à venir. Que Dieu vous bénisse.

 Mes oncles Richard, Omer, Donatien, Donatien ZOUNMA:

Pour tout le soutien moral, matériel et financier et surtout pour les moyens mis à ma disposition pour m’assurer de bonnes conditions d’étude. Puisse DIEU vous combler de ses merveilles.

 Mes frères et sœurs

Pour leur grand amour et leur soutien. Recevez par ce travail l’expression de mon amour fraternel.

 A tous mes amis de la 7^ème promotion ABM particulièrement HOUESSOUVO Berenger, DJOSSOU Rock, HESSOU-DJOSSOU Donald , DOUSSOH Bernice, TOSSOU Sonita, AVALIGBE Salmath, OUATTARA Amy et AKPLA Ulrich pour tout ce moment de joie et de dur labeur passé ensemble.

 A Monsieur Henri MIDINGOYI, mon tuteur de stage

(12)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page xiv Vous m’avez surprise par votre simplicité, votre humilité et votre disponibilité permanente.

Vous n’avez ménagé ni effort, ni moyen pour me soutenir et guider mes recherches. Votre apport a été fondamental pour l’aboutissement de cette œuvre, je vous en remercie.

 Mon binôme ADELANI Sodiki

Pour son sens du travail d’équipe et sa complicité qui ont aidé à la réalisation du présent travail.

 A mes amis DOGBAN José, ADJAHO Marius, AGBANGLA Hosanna et BRUN Gauthier pour tout le soutien juste pour vous dire pour unir on peut tous atteindre nos objectifs. Que Dieu vous bénisse.

A tous ceux que nous aimons, tous ceux qui nous aiment et qui nous sont chers.

Josias ZOUNMA

(13)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page xv

HOMMAGES

(14)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page xvi

 Au Président de jury,

Excellence Mr le Président du jury, En acceptant de présider notre jury de soutenance de rapport de fin de formation vous nous faites un grand honneur. Cher Président du jury, par vos observations nous espérions améliorer la qualité scientifique de ce travail. Nous vous prions de croire en l’expression de nos profonds respects et vives gratitudes.

 Aux membres de jury

Vous avez bien voulu revoir notre travail et nous faire l’honneur de siéger parmi les membres de notre jury. Soyez rassurés que vos critiques et apports seront pour nous une source de progrès.

Hommages respectueux.

 A notre superviseur de stage le Professeur Frédéric LOKO

Par votre esprit d’ouverture, vous nous avez orientés et soutenus pour cette étude. Votre humanisme et votre rigueur scientifique nous ont guidés durant ce travail. Malgré vos préoccupations et sollicitations multiples, vous avez été disponible durant ce travail. Puissiez- vous trouver à travers ce travail, la satisfaction morale d’avoir atteint votre objectif.

(15)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page xvii

LISTE DES SIGLES ET

ABBREVIATIONS

(16)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page xviii AQ : Assurance de la Qualité

CEQ : Contrôle Externe de qualité CIQ : Contrôle Interne de Qualité CN : Contrôle Normal

CP : Contrôle Pathologique CQ : Contrôle de Qualité CV : Coefficient de Variation CSR : Centre de Santé de Référence

DDS : Direction Départementale de la Santé

DEDTS : Direction des Explorations Diagnostiques et de la Transfusion Sanguine

DO : Densité Optique

DPMED : Direction de la Pharmacie du Médicament et des Explorations Diagnostiques

EEQ : Evaluation Externe de Qualité ET : Ecart-Type

GBEA : Guides de Bonne Exécution des Analyses ISO : Organisation International de Standardisation LABM : Laboratoire d’Analyses Biomédicales MS : Ministère de la Santé

OMS : Organisation Mondiale de la Santé PAP : Papaïne

RESAOLAB +: Réseau d’Afrique de l’Ouest des Laboratoires plus R1 : Réactif 1

R2 : Réactif 2

SAQ : Système d’Assurance Qualité

SARAQ : Service d’Approvisionnement en Réactifs et de l’Assurance Qualité

(17)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page xix SED : Service des Explorations Diagnostiques

SMQ : Système de Management de la Qualité

UEMOA : Union Economique Monétaire Ouest Africaine VIH : Virus Immunodéficience Humaine

% : Pourcentage g : gramme L : Litre µ : Micron

°C : Degré Celsius σ : Ecart-type

(18)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page xx

LISTE DES TABLEAUX

ET FIGURES

(19)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page xxi

1- Liste des tableaux

Tableau I : Mode opératoire du dosage de glucose.…… ………. 32 Tableau II a : Technique de préparation des dilutions pour la détermination du seuil de

détection à partir d’une solution mère à 1g/L de D-Glucose …………... 34

Tableau II b : Mode opératoire de la détermination du seuil de détection ………….. 34 Tableau III a : Technique de préparation des dilutions pour la détermination de la limite

supérieure de linéarité à partir d’une solution mère à 10g/l de D-Glucose... 35 Tableau III b : Mode opératoire de la détermination de la limite supérieure de

linéarité.……….

.

35 Tableau IV a : Mode opératoire de la détermination du test de répétabilité avec le

contrôle normal……… 36

Tableau IV b : Mode opératoire de la détermination de la répétabilité avec le contrôle pathologique... 37 Tableau V a : Mode opératoire de détermination de la reproductibilité avec le contrôle

normal……… 38

Tableau V b : Mode opératoire de la détermination de la reproductibilité avec le contrôle pathologique………... 38

Tableau VI : Mode opératoire de la détermination de la stabilité du milieu réactionnel………... 39

Tableau VII : Mode opératoire de la détermination de la stabilité de l’ensemble spectrophotomètre/étalon/réactif…... 39

(20)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page xxii

Tableau VIII a : Détermination du Seuil de détection de R1……… 42

Tableau VIII b : Détermination de la limite supérieure de linéarité de R1……… 43

Tableau IX a : Détermination du Seuil de détection de R2……… 44

Tableau IX b : Détermination de la Limite supérieure de linéarité de R2……… 45

Tableau X : Caractéristiques des sérums contrôles ……… 46

Tableau XI a : Statistiques du test de répétabilité réalisé sur R1 avec les contrôles normal et pathologiques.……… 46

Tableau XI b : Statistiques du test de répétabilité réalisé sur R2 avec les contrôles normal et pathologiques.……… 47

Tableau XII a : Statistiques du test de reproductibilité réalisé sur R1 avec les contrôles normal et pathologiques………... 47

Tableau XII b : Statistiques du test de reproductibilité réalisé sur R2 avec les contrôles normal et pathologiques. 49 Tableau XIII Statistiques du test de stabilité des réactifs R1 et R2……… 51

(21)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page xxiii

2- Liste des figures

Figure 1 : Limite de détection et limite de quantification par signal de bruit…….…16

Figure 2 : Droite de linéarité………..………..…....16

Figure 3 : Intervalle de linéarité………..……….17

Figure 4 : Exemple de bonne et mauvaise précision………..……….21

Figure 5 : Organigramme de la SED………...………….…29

Figure 6 : Droite de linéarité de R1 (seuil de détection)………42

Figure 7 : Droite de linéarité de R1 (limite supérieure de linéarité)…..………..….43

Figure 8 : Droite de linéarité de R2 (seuil de détection)………...44

Figure 9 : Droite de linéarité de R2 (limite supérieure de linéarité)…………..….45.

Figure 10 : Graphe de Levey-Jennings pour la reproductibilité de R1 du contrôle normal……….48.

Figure 11 : Graphe de Levey-Jennings pour la reproductibilité de R1 du contrôle Pathologique………..……49

Figure 12 : Graphe de Levey-Jennings pour la reproductibilité de R2 du contrôle normal………..50

Figure 13 : Graphe de Levey-Jennings pour la reproductibilité de R2 du contrôle pathologique………50

Figure 14 : Histogramme de l’exactitude de R1……….…………52

Figure 15 : Histogramme de l’exactitude de R2……….53

(22)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page xxiv

RESUME

(23)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page xxv La qualité des résultats des analyses de biologie médicale dépend de nombreux facteurs dont l'un des plus déterminants est représenté par la qualité des réactifs utilisés. De ce fait il est question de promouvoir la qualité des réactifs de dosage en biochimie dans le secteur de la biologie médicale au BENIN. L'utilisation de protocoles standardisés permet d'assurer une interprétation uniforme quels que soient le laboratoire et le type de matériel utilisé. Le document présenté rassemble sous une forme pratique les éléments nécessaires à l'étude du domaine analytique (limites de linéarité, de la limite de détection, de la répétabilité et de la reproductibilité, de l’exactitude) avec du matériel de référence ou des spécimens de contrôles, et des plasmas de patients.

Le contrôle qualité a porté sur deux réactifs R1 et R2 du dosage spectrophotométrie de la glycémie. Deux sérums contrôles (normal et pathologique) ont étés utilisés. Les performances obtenues sont les suivantes :

 Linéarité : 0,05g/l -5g/l pour R1 et 0,05-4g/l pour R2

 Répétabilité : un coefficient de variation de 2,81% et 3,81% pour R1 et 6,81% et 3,94%

pour R2 respectivement pour les contrôles normale et pathologique,

 Reproductibilité : un coefficient de variation de 4,70% et 4,95% pour R1 et 8,79% et 8,19 % pour R2 respectivement pour les contrôles normale et pathologique

 Stabilité : la coloration reste stable pendant 60 min pour R1 et 30 min pour R2

 Exactitude : R1 est exact à 95%, et R2 à 65%.

Nous pouvons en déduire que R1 est précis, exact, et stable donc peut être utilisé pour le dosage in-vitro du glucose. Par contre, les faibles performances obtenus avec R2 nous amène à émettre un avis réservé quant à son utilisation pour le dosage spectrophotométrique in-vitro du glucose.

Mots clés : Analyse biochimiques, validation, contrôle qualité réactif, exactitude, dosage spectrophotométrique glucose.

(24)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page xxvi

ABSTRACT

(25)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page xxvii In the laboratory, the quality of results depends on numerous factors among which one is the quality of reagents used. This work aimed to promote the quality of biochemistry in Benin.

The use of standardized protocols allows a uniform interpretation whatever the laboratory and the type of material used. This work was gathering under a practical shape elements necessary for the study of the analytical domain with the reference material or specimens control and patients’ plasma..

The quality control was done with two reagentsR1 and R2 of the dosage spectrophotometry of the glycemia. Two serums controls (normal and pathological) were used.

The results were about:

 Linearity : 0.05g/l -5g/l furR1 and 0.05-4g/l for R2.

 Repeatability :a coefficient of 2.81 % variation and 3.81 for r1 and 6.81% and 3.94

% for R2 respectively for the normal and pathological controls.

 Reproducibility :a coefficient of 4.70 % variation and 4.95 % for R1 and 8.79 %and 8.19 % for R2 respectively for the normal and pathological controls.

 Stability :The coloration remains stable during 60min for R1 and 30min for R2.

 Accuracy: R1 is exact in 95 % and R2 in 65 %.

It can be deducted that reagent R1 is precise, exact , and stable. It can be used for the in-vitro dosage of the glucose. However, the low performance obtained with R2 showed that it is not recommended for the in-vitro dosage of the glucose.

Keys words: Biochemistry analyses, validation, quality control reagents, accuracy, spectrophotometry dosage glucose.

(26)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page xxviii

SOMMAIRE

(27)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page xxix Introduction ………... 01 Première partie : Synthèse bibliographique………..……….… 04 Deuxième partie : Cadre, matériel et méthodes……….. 25 Troisième partie : Résultats ……….………..………... 41

Discussion……….……….. 54

Conclusion……….…….… 57

Suggestions……….. 59

Références bibliographiques……… 61

Annexe……….… 65

(28)

Mise en place du processus de validation des réactifs de biochimie au Service des Explorations Diagnostiques de la Direction de la Pharmacie du Médicament et des Explorations Diagnostiques

(Ministère de la Santé).

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page 1

INTRODUCTION

(29)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page 2 La biologie médicale est un ensemble d’actes s’inscrivant dans une démarche, préventive, diagnostique et pronostique. Le biologiste assure la responsabilité de cet acte qui inclut le prélèvement, l’exécution de l’analyse, la validation des résultats et si nécessaire, leur confrontation avec les données cliniques des patients. Les résultats concourent au diagnostic et à la prescription des soins. En conséquence la recherche de qualité doit être la préoccupation essentielle et constante du biologiste et du personnel du laboratoire [29].

L’enjeu de la recherche de qualité totale par le laboratoire est donc la fidélisation des clients et une bonne image de marque [10].

Au laboratoire, de nombreuses sections contribuent à l’image qualité de la structure. Au nombre de celles-ci, il existe la : Microbiologie, Hématologie, Sérologie, et Biochimie [1].

Cette dernière fait spécifiquement objet de la présente étude. En effet, c’est une partie de la biologie humaine qui s’intéresse à divers explorations diagnostics des organes humains. A ce titre, la moindre erreur est fatale pour le patient [3]. De plus, selon l'Organisation Mondiale de la Santé (OMS) " de par le monde, des centaines de millier de décès ou de maladies graves sont imputables chaque année à des inexactitudes ou des erreurs commises dans les laboratoires cliniques et de santé publique ". Ce manque de fiabilité est souvent du à l'absence d'un système d’assurance qualité [25].

Au Bénin, l’un des facteurs de la qualité d’un examen biochimique est l’usage de bons réactifs sans cesse renouvelés et améliorés [28], il s’avère important de mettre en place un processus de validation des réactifs en biochimie. Pour mieux assumer le leadership du secteur de la biologie médicale du SED (Service des Explorations Diagnostiques) par rapport aux autres laboratoires, la DPMED(Direction de la Pharmacie du Médicament et des Explorations Diagnostiques) du ministère de la Santé du Benin a entrepris plusieurs réformes parmi lesquelles figure l’appropriation du processus de validation des réactifs grâce à une approche progressive dont la première phase commence par la section de la biochimie qui devra s’étendre dans les autres sections du SED.

Pour ce faire nous avons amorcé une démarche préliminaire à travers le contrôle de qualité des réactifs R1 et R2 du dosage spectrophotométrique du glucose.

L’objectif général de cette étude est de promouvoir la qualité des réactifs de dosage en biochimie dans le secteur de la biologie médicale au BENIN.

(30)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page 3 Spécifiquement il s’est agi de :

- Faire le contrôle de qualité des réactifs R1 et R2 par dosage spectrophotométrique du glucose,

- Evaluer l’exactitude de ces réactifs R1 et R2 par rapport à un réactif de référence, -Evaluer les conditions de conservation et de stabilité des réactifs « R1 et R2 » Ces objectifs sont sous-tendus par les hypothèses suivantes :

- les réactifs sont précis - les réactifs sont exacts

- les réactifs sont fiables, ils peuvent être utilisés pour le dosage in vitro du glucose sanguin.

Le présent document comporte dans sa première partie une synthèse bibliographique, sa deuxième partie la méthodologie et enfin, les résultats suivis de la discussion dans la troisième partie.

(31)

SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE

(32)

1-CLARIFICATION CONCEPTUELLE 1-1 Analyses de biologie médicale [6]

Ce sont des examens biologiques qui concourent au diagnostic, au traitement, au suivi ou à la prévention des maladies humaines ou qui font apparaître toute autre modification de l’état physiologique.

1-2 Assurance de la qualité [5]

C’est l’ensemble des activités préétablies et systématiques, mises en œuvre dans le cadre du système qualité, et démontrées au tant que besoin, pour donner la confiance appropriée en ce qu’une entité satisfera aux exigences pour la qualité.

1-3Audit externe [7]

L’audit est un examen méthodique d’une situation relative à un produit, processus, organisation, en matière de qualité, réalisé en coopération avec les intéressés en vue de vérifier la conformité de cette situation aux dispositions préétablies et l’adéquation de ces dernières à l’objectif recherché. Dans l’audit externe, ce constat est établi par un organisme extérieur à l’entreprise auditée.

1-4 Audit interne [7]

L'Audit Interne est une activité indépendante et objective qui donne à une organisation une assurance sur le degré de maîtrise de ses opérations, lui apporte ses conseils pour les améliorer, et contribue à créer de la valeur ajoutée. Il aide cette organisation à atteindre ses objectifs en évaluant, par une approche systématique et méthodique, ses processus de management des risques, de contrôle, et de gouvernement d'entreprise, et en faisant des propositions pour renforcer leur efficacité.

1-5 Bonne exécution des analyses [6]

C’est un ensemble de mesures qui permettent d’assurer au cours des différentes étapes de l’analyse (pré analytique, analytique et post analytique) la qualité et la traçabilité des résultats d’analyse tout en garantissant la sécurité des personnes et de l’environnement.

1-6 Démarche de la qualité [29]

C’est le processus mis en œuvre pour implanter un système qualité et s'engager dans une démarche d'amélioration continue. Le terme désigne aussi, de façon figurée, les tentatives, la motivation et les approches en vue d'obtenir une certification et conserver le certificat, par exemple un certificat ISO 9001

(33)

1-7 Evaluation externe de la qualité [15]

Il correspond au contrôle, par un organisme extérieur, de la qualité des résultats fournis par un laboratoire.

1-8 ISO [4]

Organisation International de standardisation, Organisation regroupant les organismes similaires de 161 pays (2010), visant à définir des référentiels d’audit du système qualité.

1-9 La qualité [22]

C’est l’ensemble des caractéristiques d’une entité qui lui confère l’aptitude à satisfaire les besoins exprimés et implicites.

1-10 Management de la qualité [29]

C’est l'ensemble des activités qui permettent l'orientation et le contrôle d'une structure dans le domaine de la qualité. Par définition le management de la qualité inclut les activités d'assurance qualité, d'amélioration de la qualité, de contrôle de la qualité, de maîtrise de la qualité, de planification de la qualité, etc. …

1-11 Normes [30]

Référentiels. Ce sont des textes normatifs servant obligatoirement de supports pour l’accréditation ou la certification qui sont des démarches volontaires

(Ex : ISO/EN 15 189)

1-12 Politique de qualité [29]

Orientations et objectifs généraux d'un organisme concernant la qualité, tels qu'ils sont exprimés formellement par la direction au plus haut niveau. La politique qualité est généralement cohérente avec la politique générale de l'organisme et fournit un cadre pour fixer des objectives qualités.

1-13 Système de la qualité [7]

C’est l’ensemble de l’organisation, des procédures, des processus et des moyens nécessaires pour mettre en œuvre le management de la qualité.

(34)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page 7 1-14 Traçabilité[28]

La traçabilité est l’aptitude à retrouver l’historique, la mise en œuvre ou l’emplacement de ce qui est examiné. Elle fait état des résultats obtenus ou apportant la preuve de la réalisation d’une activité

2- Démarche de qualité au laboratoire de Biochimie

La mise en place d'un système d'assurance qualité au laboratoire est indispensable afin d'acquérir la confiance des patients et des médecins prescripteurs mais cela représente aussi un enjeu économique. En effet l'existence de l'assurance qualité au laboratoire permet de développer des relations de partenariats avec des entreprises du secteur de la Santé. De plus, selon l'OMS " de par le monde, des centaines de millier de décès ou de maladies graves sont imputables chaque année à des inexactitudes ou des erreurs commises dans les laboratoires cliniques et de santé publique ". Ce manque de fiabilité est souvent du à l'absence d'une assurance qualité [25].

2-1 Référentiel applicable aux laboratoires de biologie médicale 2-1-1 GBEA (Guide de Bonne Exécution des Analyses)

Le GBEA est défini comme un instrument au service de la qualité dont la mise en application permet de maitriser la plupart des évènements pré, per et poste analytique. A ce titre, il consacre un chapitre à l’AQ (Assurance de la qualité) qui définit comme l’ensemble des actions pré établi et systématique nécessaire pour qu’un produit ou un service satisfasse aux exigences de la qualité.

Le GBEA impose la mise en place du SAQ (Système d’Assurance de la Qualité), prévoit la mise en œuvre du CQI (Contrôle de Qualité Interne), la participation au CNQ (Contrôle National de Qualité) et recommande aux laboratoires de participer à d’autres programmes d’EEQ (Evaluation Externe de la Qualité). Le respect du GBEA implique de la part du biologiste :

 La formalisation par écrit de l’organisation et du fonctionnement du laboratoire

 La rédaction de procédures opératoires

 La gestion du système documentaire en formant et en informant le personnel

(35)

 L’assurance de la mise en œuvre effective et correcte de ce qui est décrit dans le système documentaire.

 L’archivage des documents prévus par les textes législatifs et réglementaires et ceux relatif à la qualité des « réactifs »

Des publications et communications ayant trait à la démarche qualité en biologie mettent l’accent sur l’AQ et la mise en place d’un SAQ ainsi que sur l’implication du personnel et de la direction commun un facteur clé de la réussite de la mise en œuvre du GBEA [19,26].

Le GBEA bouscule les habitudes des biologistes quant ‘à leur perception de la qualité. En effet, la qualité analytique ne suffit pas à répondre aux exigences des « clients » (médecin prescripteur et patient) et l’introduction d’une politique qualité indispensable. Par ailleurs, le respect, de ces référentiels implique le passage de la tradition orale à une communication écrite et la traçabilité des activités. Ce changement d’écriture ne doit donc pas être perçu par la personne comme un moyen de surveillance et de sanction. La formation du personnel (biologiste inclus) aux « pratiques qualité » est indispensable afin de partager une culture commune [26]. Le GBEA peut être un levier d’amélioration des performances .Ils proposent comme perspective « d’aller au-delà des obligations réglementaires et de faire de la mise sous qualité un levier pour améliorer non seulement la performance analytique mais la performance globale du laboratoire » [26].

2-1-2 LES NORMES ISO

La norme ISO 17025 contient d’une part, des exigences qualités et, d’ autre part met l’accent sur les compétences techniques. Ces exigences concernent entre autre, le SMQ, la responsabilité de la direction, l’analyse et l’amélioration de l’activité. Cette norme ne fait pas référence au biologiste, au patient et au médecin prescripteur [30].

La norme ISO 15189, spécifique au LABM (Laboratoires d’Analyses Biomédicales) est facilement appréhendable par les biologistes et couvrent la totalité de leur activité. Elle détaille notamment les exigences techniques concernant la compétence du personnel, les locaux et les qualifications des matériels. Par ailleurs ces exigences prennent en compte l’ensemble de l’analyse y compris les phases pré et post analytiques. Elles reprennent celles de la norme ISO 17025 auxquelles s’ajoutent notamment la communication interne, la mesure

(36)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page 9 de la satisfaction des clients, la surveillance de tous les processus et l’amélioration en continu de l’efficacité du SMQ [4].

2-1-3 Etude comparative des référentiels [29]

Les normes ISO et plus particulièrement la norme ISO 15189 ont des exigences supplémentaires en matière de la qualité qui ne figurent par le GBEA notamment la mise en place d’objectif et d’indicateur qualité. La communication interne, les audits internes et l’amélioration continue du SMQ. En revanche le GBEA comporte des règles pratiques très précise et spécifique à la biologie. Les points communs entre le GBEA et les normes ISO permettent aux laboratoires respectant le premier référentiel de se lancer dans l’accréditation et d’approfondir leur démarche qualité. En d’autres termes après la phase de mise en conformité réglementaire les laboratoires estiment nécessaire de valoriser leur démarche qualité en intégrant dans un processus d’amélioration continue via l’accréditation.

2-2 Préconisations

Le Guide de Bonne Exécution des Analyses pour les laboratoires, élaboré en 2005 et adopté en novembre 2008 par le Ministère de la Santé (MS) comme référentiel national qualité fait d’une exigence la mise en place de l’assurance dans les laboratoires d’analyses biomédicales.

La réponse à cette exigence a été qualité l’élaboration d’un plan national d’Assurance Qualité pour les laboratoires d’analyses médicales dans le cadre du projet RESAOLAB (Réseau d’Afrique de l’Ouest des Laboratoires) plus en collaboration avec la DPMED[6]. Ce plan a été adopté par le Ministère de la Santé du BENIN [8]. Son but est de contribuer au développement de la qualité dans les laboratoires du réseau avec notamment la mise en place d’un programme national d’évaluation externe de la qualité. La mise en œuvre de ce plan a permis la réalisation de certaines activités :

 Diffusion du plan national qualité et du GBEA au niveau national

 Formation des formateurs et des acteurs du réseau en management de la qualité

 Formation du personnel de laboratoire en maintenance des équipements du laboratoire

 Elaboration des modes opératoires normalisés sur le diagnostic du VIH (Virus de l’Immunodéficience), du paludisme et la Tuberculose

 Construction et équipement d’une unité d’évaluation externe de la qualité

 Formation des techniciens de laboratoire au diagnostic du paludisme [7].

(37)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page 10 2-2-1 Niveau Central ou National [8]

Ce niveau dispose des structures de troisième référence en ce qui concerne les activités cliniques et de laboratoire. Il existe à ce niveau le laboratoire national de référence qui est le centre des activités en matière de surveillance intégrée de la maladie et de confirmation rapide des épidémies et les laboratoires de référence spécialisés publics et privés qui assurent la référence par discipline biologique. Les responsables à ce niveau jouent un rôle essentiel dans la mise en œuvre des programmes de lutte contre les maladies.

Les missions de ces laboratoires se résument à :

- la conception et l’élaboration de documents, de normes, de politique et de plans stratégiques, - la mobilisation de ressources financières et matérielles nécessaires à la mise en œuvre des interventions pertinentes retenues,

- le développement des ressources humaines nécessaires à la mise en œuvre desdites interventions,

- l’appui aux structures régionales chargées de mettre en œuvre ces interventions, - le suivi et l’évaluation des interventions,

- la mise en place d’un système d’assurance qualité,

- l’appui et la coordination des activités de surveillance des laboratoires,

- l’organisation de l’acheminement dans les délais requis des échantillons au laboratoire national de référence et / ou aux laboratoires sous régionaux.

2-2-2Niveau intermédiaire ou régional [8]

Ce niveau, à travers les DRS (Direction Régional de Santé), joue un rôle dans : - la coordination des interventions,

- l’adaptation des stratégies développées au niveau central au contexte régional, - l’élaboration de plans d’action régionaux,

-la mise en place d’un système d’assurance qualité

- le suivi de la mise en œuvre des interventions au niveau opérationnel,

- l’approvisionnement des Centres de Santé de Référence en réactifs et matériels.

Ce niveau regroupe les laboratoires des hôpitaux régionaux et ceux de certaines cliniques privées.

2-2-3 Niveau périphérique ou opérationnel [8]

(38)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page 11 Ce niveau est constitué de la zone sanitaire qui représente l’entité opérationnelle la plus décentralisée du système de santé. Elle est appuyée par le laboratoire de l’hôpital de première référence public ou privé (hôpital de zone), et destiné à desservir une aire qui abrite entre 100.000 et 200.000 habitants.

2-3 Mise en œuvre de la démarche qualité [10]

La démarche qualité est basée sur la volonté d'agir pour prévenir les dysfonctionnements ou après les avoir identifiés. Elle consiste à :

- Ecrire tout ce que l'on doit faire de façon précise et détaillée, ce sont les procédures : standardisées, enregistrées, elles exigent des réactifs fiables, la rédaction de fiches techniques actualisées en permanence, un équipement vérifié et entretenu. Elles précisent l'organisation du travail.

- Faire tout ce qu'on a écrit : le prouver en gardant la trace, c'est la traçabilité.

- Gérer les erreurs en retrouvant les causes, adopter des mesures correctives pour parvenir à l'assurance qualité.

- Assurer la continuité par des vérifications, c'est le contrôle qualité.

La démarche qualité étant un nouvel état d’esprit qui est « un devoir pour tous de s'imposer une véritable prise de conscience, c'est un devoir de tout mettre en œuvre pour améliorer la qualité au quotidien, déceler et surtout prévenir les erreurs ». Cette démarche pourrait reprendre "la formule des 3A" préconisée par l'OMS pour gérer les problèmes de santé publique :

• Appréhender :

- déceler les problèmes, le dysfonctionnement

- avoir des indicateurs : trop de résultats positifs ou négatifs entraînant la comparaison des résultats dans le temps avec d'autres laboratoires

- constater trop de discordances avec la clinique

- déplorer une incapacité de répondre à la demande ou les échecs répétés de traitements.

• Analyser :

(39)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page 12 - comprendre où se situe un défaut de qualité, pourquoi y-a-t-il ou peut-il y avoir un défaut de qualité?

• Agir :

- mieux gérer le travail

- organiser les locaux et leurs équipements - se doter de moyens de contrôle, de références - mettre en place des mesures correctives

3- Difficultés de mise en œuvre du contrôle de qualité des réactifs du système national dans les pays en voie de développement

Dans les 8 pays membres de l’UEMOA, il n’existe pas de politique nationale sur la mise en œuvre et le développement du système national de qualité. A ce jour il n’existe pas dans aucun pays de l’UEMOA une politique nationale développée pour encourager la mise en œuvre de la démarche qualité. Les principales difficultés citées sont :

- la faible sensibilisation des décideurs ;

- l’inexistence de cadre juridique pour les systèmes d’accréditation ; - l’absence de textes législatifs et réglementaires ;

- l’insuffisance de ressources humaines qualifiées, matérielles et financières;

- la faible capacité des organismes accréditeurs.

- La faible prise en compte du système de qualité par les laboratoires de recherche ; - L’absence d’auditeurs de laboratoire qualifiés [9].

Au BENIN, Aux plans institutionnel et organisationnel, ce sous secteur ne bénéficie pas de l’appui nécessaire à son bon fonctionnement. En effet, on observe essentiellement au niveau des explorations diagnostiques, la non maîtrise de l’approvisionnement et de la gestion des réactifs et consommables et l’absence d’un encadrement règlementaire et législatif. Notons enfin que le système qualité au niveau des analyses biomédicales est balbutiant [8].

(40)

4-Structure chargé du contrôle de qualité des réactifs au ministère de la santé

Au sein de la DPMED, ancienne DEDTS, la validation des réactifs à été initie depuis la création du SARAQ (Service d’Approvisionnement en Réactifs et de l’Assurance Qualité) par l’arrêté année 2007/1807/MS/DC/SGM/CTJ/DEDTS/S. La mission du SARAQ était de réaliser l’homologation des réactifs de laboratoire, processus au bout du quel est délivrée une autorisation de mise sur le marché des réactifs. Les réactifs dont les modèles sont apportés par les fournisseurs agréés sont préalablement soumis à un contrôle qualité. Les résultats de l’étude analytique sont étudiés et soumis à l’appréciation d’un comité technique qui prononce la décision de mise sur le marché du réactif concerné. Les problèmes posés au cours de l’étude analytique délaie de restitution de communications d’acheminer les résultats aléatoires, non visibilité des procédures analytiques.

5-Protocoles de validation de réactifs en biochimie 5-1 Les examens qualitatifs

Le résultat de ce type de méthode n'apporte pas d'information sur la quantité de l'analyte l'identification (cellule ou organisme), mais seulement sur sa présence ou son absence (positif/négatif), ou de la caractéristique recherchée. On peut classer dans cette catégorie tous les examens où aucune mesure d'une donnée quantifiable ne peut être déterminée et ceux dont le résultat est obtenu par l'observation de la réaction, par comparaison avec des témoins positif et négatif notamment. Les paramètres de validation pour un examen quantitatif sont : la répétabilité, la reproductibilité, la sensibilité et l’exactitude [3].

5.2 Les examens quantitatifs

Elles fournissent un résultat chiffré, sur une échelle continue à partir de la mesure d'un signal en relation directe avec une quantité (analyte, molécule, substance, cellule ou organisme …) ou une activité donnée de l'analyte (enzymes). Sont également assimilés au type quantitatif, les examens fournissant un résultat de type qualitatif, extrapolé à partir de la mesure d'un signal continu quantifiable (absorbance par exemple), avec interprétation par rapport à un seuil. Les paramètres de validation pour un examen qualitatif sont : la linéarité, la répétabilité, la reproductibilité, la sensibilité, l’incertitude et l’exactitude [3].

(41)

5.3 Critères de performance d’un réactif quantitatif

5.3.1 Evaluation de la linéarité

La linéarité est la capacité d’un procédé à générer des résultats de mesure dans une certaine plage de concentrations. L’évaluation de la limite supérieure de linéarité permet de vérifier la linéarité entre les dilutions effectuées et les concentrations calculées. Elle permet, avec la limite de détection, de définir le domaine de validité du réactif. La dépendance par rapport à la concentration ou à la quantité d’analyte dans l’échantillon peut être décrite de manière statistiquement significative par une équation de droite (régression linéaire). Ce test nous permet de réaliser la moyenne de trois essais pour chaque concentration et pour chaque méthode afin d’en déduire la droite de régression linéaire de type y=ax+b avec le coefficient « a » proche de 1 et la constante « b » proche de zéro [3].

Après la dilution d'un échantillon de concentration très élevée, les résultats obtenus permettront de vérifier la linéarité entre les dilutions effectuées et les concentrations calculées (s'assurer de l'adéquation du diluant nécessaire et des pipettes utilisées). La limite supérieure de linéarité et la limite de quantification permettent de définir le domaine de validité du réactif [24].

5.3.1 .1 Evaluation de la limite de détection et de quantification

L’évaluation de la limite de détection correspond à la détermination du plus petit signal exprimé en quantité ou en concentration qui peut être distingué avec une probabilité donnée d’un blanc de réaction réalisée dans les mêmes conditions, c’est-à-dire la quantité minimale détectable pour laquelle la réponse peut être distinguée avec une probabilité donnée d’un blanc de réaction. Cette étude est basée sur l’analyse statistique de la différence des signaux observés pour les blancs et les échantillons. Elle peut être calculée selon la formule suivante :

Limite de détection = 3xET

ET : écart type calculé à partir des mesures répétées des blancs.

La limite de quantification correspond à la plus petite valeur mesurée exprimée en concentration. On peut la calculer selon la formule :

La limite de quantification = 10xET

(42)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page 15 Pour estimer ces différentes valeurs, on effectue trente mesures répétées des blancs (ici de l’eau physiologique) dans une même série. On obtient alors la moyenne et l’écart type (ET) [3].La limite de quantification peut également être évaluée à l'aide de dilutions d'un étalon ou de l'échantillon de Contrôle Interne de Qualité le plus bas (différent de 0) avec le diluant, selon le schéma : 100 + 0 ; 90 + 10 ; ….10 + 90 ; 0 + 100 soit 11 échantillons mesurés chacun 10 fois dans une série unique. On calcule, pour chaque série de mesures des différentes dilutions, l'écart-type (ET), le Coefficient de Variation (CV) et l'écart de la moyenne (m) à la valeur théorique (réalisation d'un profil de « précision » ou profil de fidélité). A partir de la courbe des CV en fonction des concentrations (courbe d'Horwitz), est déterminée la concentration correspondant à un CV de 10 % et représentant la limite de quantification. La limite de quantification est la plus petite valeur qui peut être fournie pour un échantillo n de patient [22].

Figure 1 : Limite de détection et limite de quantification par signal du bruit [19]

(43)

Réalisé par Sodiki .A. ADELANI & Josias .T .E. ZOUNMA Page 16 Figure 2 : Droite de linéarité [19]

5-3-1-2 Evaluation de la limite supérieure de linéarité

La limite supérieure de linéarité s’évalue après la dilution d'un échantillon de concentration très élevée, les résultats obtenus permettront de vérifier la linéarité entre les dilutions effectuées et les concentrations calculées (s'assurer de l'adéquation du diluant nécessaire et des pipettes utilisées). La limite supérieure de linéarité et la limite de quantification permettent de définir le domaine de mesure de la méthode. [3]

Figure 3 : intervalle de linéarité [19]

5-3-2 Evaluation de la précision

5-3-2-1 Evaluation de la répétabilité [33]

L'essai de répétabilité consiste à analyser un même échantillon dans les conditions suivantes : même opérateur, même lot de réactifs, même instrument, même étalonnage dans un délai le plus court possible. L'objectif est de caractériser la meilleure performance possible, dans des conditions optimales et de vérifier le bon fonctionnement du système (instrument/réactif) pour le paramètre concerné. L'évaluation de la répétabilité est indispensable lors de l'installation d'un nouvel analyseur afin de connaître les performances initiales. En pratique, Il est recommandé d'utiliser au minimum 2 niveaux de concentration avec si possible un niveau proche de la zone décisionnelle.