! "# $
% &'(()))$ $
*! !! !+ + +*!
INSTRUKTION FÖR ANVÄNDNING AV POLYBIND
Inledning
De flesta immunoassy används i fast-fas diagnostik. Ibland kan det vara svårt att adsorbera lågmolekylära peptider eller oligonukleotider till ytan. Till
Polybind är det möjligt att binda peptiden med hjälp av t ex glutardialdehyd och adsorbera komplexet till plastytan. Vid experiment har 301 ng/cm2 peptid adsorberats på en Maxisorb yta.
Polybind är en grenad organisk förening med flera primära amingrupper.
Metoden är använd för att bestämma antigeniska determinanter vid
antikroppscreening. Ingen blockeringslösning behöver användas efter coatning.
Metoden kan också användas för lågadsorberande plattor som polypropylen och polysorp.
För att uppnå maximal respons och så liten ospecifik bindning som möjligt rekommenderas följande betingelser:
! "# $
% &'(()))$ $
*! !! !+ + +*!
Metod
1. Späd Polybind 10 ggr med 0.1 M fosfatbuffert pH 6.9.
2. Späd antigen eller peptid med 0.1M fosfatbuffert pH 6.9 till 1 µg/µl. Det får inte finnas andra buffertar som innehåller primära amingrupper eller tiolgrupper närvarande.
3. Före reaktion, späd 25% glutardialdehyd till 0.5% med destillerat vatten (1000 µl dest. vatten + 20 µl 25% glutardialdehyd).
4. Blanda i ett eppendorf rör:
• 100 µl antigen 1 µg/µl
• 15 µl Polybind
• 95 µl 0.1 M fosfatbuffert pH 6.9 Blanda på vortex.
Tillsätt 21 µl 0.5% glutardialdehyd och blanda på vortex.
Inkubera 30 minuter i rumstemperatur.
Späd reaktionsblandning med 10 ml 0.1 M fosfatbuffert pH 6.9.
Späd ytterligare om en lägre koncentration skall användas.
Adsorbera komplexet 120 min eller över en natt. Dekantera och tvätta med PBS buffert innehållande 0.05% Tween 20. Lufttorka eller torka i värmeskåp 60 min, 50oC.