Les cellules sanguines

Les cellules sanguines

chez les Mammifères

• Globules rouges

• Globules blancs

• Plaquettes

Les globules rouges: introduction

 cellules anucléées chez les Mammifères

 pigment rouge caractéristique: l’hémoglobine

Les globules rouges: cytologie

microscopie photonique

Les globules rouges: cytologie

Globule Rouge de Chien en Microscopie électronique à balayage sous

CHIEN CHAT CHEVAL BOVIN

anisocytose

rouleaux

 Variations morphologiques:

Les globules rouges: cytologie

microscopie photonique

 Corps de Howell-Joly

 petite ponctuation

basophile soutenu à noirâtre

 Erythroblaste

 Noyau basophile soutenu, excentré (en voie

d’expulsion)

Les globules rouges: cytologie

microscopie photonique

 Erythroblaste

(coloration:May Grünwald-Giemsa)

 Réticulocytes

(coloration: Nouveau bleu de méthylène)

Les globules rouges: cytologie

microscopie photonique

Les globules rouges: cytologie

Oiseaux

Les globules rouges: cytologie

Camélidés

(chameaux, lamas, alpagas,..)

Caprins

Poikylocytose physiologique

chèvre angora

Les globules rouges: cytologie

microscopie électronique

 La population des GR circulants peut être quantifiée:

réalisation d’un hémogramme

Les globules rouges: données numériques

Tubes avec anticoagulant EDTA

(bouchon violet)

 Paramètres de l’hémogramme:

 les numérations (GR, GB, Plaquettes)

 (le taux de réticulocytes)

 l’hématocrite

 l’hémoglobinémie

 le volume globulaire moyen (VGM)

 la concentration corpusculaire moyenne en hémoglobine (CCMH)

 la teneur corpusculaire moyenne en hémoglobine (TCMH)

 la formule leucocytaire

 le frottis sanguin: renseignements morphologiques, validation des résultats

Les globules rouges: données numériques

 Paramètres de l’hémogramme concernant les GR:

 la numération des GR

 Le taux de réticulocytes

 l’hématocrite

 l’hémoglobinémie

 le volume globulaire moyen (VGM)

 la concentration corpusculaire moyenne en hémoglobine (CCMH)

 la teneur corpusculaire moyenne en hémoglobine (TCMH)

Les globules rouges: données numériques

Paramètres mesurés (méthode manuelle)

Paramètres calculés

HISTOLOGIE - Année A1- n.bourges-abella@envt.fr- Ecole Nationale Vétérinaire de Toulouse

1.Les paramètres mesurés:

 1.1.Examens liés à la cellule:

a. la numération des GR : nbre/L de sang (nbre/mm ³ ) b. le taux de réticulocytes: %

c. l’hématocrite: % ou L/L

 1.2. Valeur liée à l’hémoglobine:

 l’hémoglobinémie: g/L (g/dL)

Les globules rouges: données numériques

Les globules rouges: données numériques

1.1.Examens liés à la cellule:

a. la numération des GR : méthode manuelle

 dilution du sang (prélevé sur EDTA):

fermer et agiter (laisser min 30 sec)

Dilution sang facilitée: kit bioanalytic®

Pipette à dilution de

Potain

Les globules rouges: données numériques

Cellule de Malassez

Résultat: nbre cellules/mm ³ U.I.: nombre/litre GR: 10 ¹² /L

Vol=1mm

GB: 10 ⁹ /L Plqs: 10 ⁹ /L

zones de comptage

1 2

1.1.Examens liés à la cellule:

a. la numération des GR : méthode manuelle

 numération: comptage en cellule hématimétrique

HISTOLOGIE - Année A1- n.bourges-abella@envt.fr- Ecole Nationale Vétérinaire de Toulouse

Les globules rouges: données numériques

1.1.Examens liés à la cellule:

a. la numération des GR : méthode automatisée. Par exemple:

Procédé COULTER de détection

volumétrique par variation

d’impédance cellules en

suspension dans liquide avec électrolytes

 comptage du nombre d’impulsions

 mesure du volume de chaque particule comptée proportionnelle à l’amplitude de l’impulsion

 valeurs seuils pour chaque espèce (carte spécifique)

 Cours « analyseurs hématologie en médecine vétérinaire » en A2 (module de biologie médicale)

Les globules rouges: données numériques

Chien Chat Cheval de sang Bovin Globules

rouges

x10

/l 6,7 (5,5-8,5)

7,5 (5,0-10,0)

8,3 (6,8-12,9)

7,0 (5,0-10,0)

Voir fichier « intervalles de référence en hémato. vétérinaire » sur moodle

Les globules rouges: données numériques

1.1.Examens liés à la cellule:

b. le taux de réticulocytes:

Colorant spécifique:

Bleu de Crésyl ou

Nouveau bleu de méthylène

Chien Chat Taux de réticulocytes (%)

Normal 0-1,5 0,4

Anémie peu régénérative 1,5-4 0,5-2

Anémie modérément régénérative 5-20 3-4

Anémie fortement régénérative 21-50 > 5

Les globules rouges: données numériques

1.1.Examens liés à la cellule:

b. le taux de réticulocytes:

Frottis après coloration Bleu de Crésyl ou

Nouveau bleu de méthylène

Les globules rouges: données numériques

1.1.Examens liés à la cellule:

c. l’hématocrite (Ht)

• sang sur EDTA pipeté dans tube capillaire

• 2 600g/min 3 à 5 min

Gomme de scellement

1

2

90

°

Gomme de scellement spécifique pour microhématocrite Surface plane

Tube à

microhématocrite rempli

Doigt maintenu à l’extrémité du tube jusqu’à son scellement par la gomme

D’après Thèse Doctorat vétérinaire C.L.Etienne, 2009, 09-TOU3-4101

Centrifugeuse à microhématocrite

Les globules rouges: données numériques

1.1.Examens liés à la cellule:

c. l’hématocrite (Ht)

Chien Chat Cheval de sang Bovin Ht % 46

(37-55)

37 (24-45)

41 (32-53)

35

(24-46)

abaque de lecture

Les globules rouges: données numériques

1.1.Examens liés à la cellule:

c. l’hématocrite (Ht)

Monocytes (d=1.065) Plaquettes

Lymphocytes (d=1.071) Granulocytes

Chien Bovins, ovins (JF Guelfi,

Granulocytes, plus lourds

avec les GR

Les globules rouges: données numériques

1.2. Valeur liée à l’hémoglobine:

 l’hémoglobinémie: g/l (g/dl)

 Test colorimétrique (Hb→ CyanmetHb) après lyse des GR

 Lecture à 540nm

Résultat: g/dl U.I.: g/l

Chien Chat Cheval de sang Bovin Hémoglobine g/dl 15

(12-18)

12 (8-15)

14,4 (11-19)

11,0

(8-15)

2.Les paramètres calculés: les index érythrocytaires

 le Volume Globulaire Moyen (VGM)

 la Concentration Corpusculaire Moyenne en Hémoglobine (CCMH)

 la Teneur Corpusculaire Moyenne en Hémoglobine (TCMH)

Les globules rouges: données numériques

Les globules rouges:

données numériques

les index érythrocytaires de Wintrobe

1. VOLUME GLOBULAIRE MOYEN (VGM)

(= Mean Corpuscular Volume: MCV) femtolitres (fl =10

l)

population:

. normocytaire . macrocytaire . microcytaire

2. TENEUR CORPUSCULAIRE MOYENNE en HEMOGLOBINE (TCMH) (= Mean Corpuscular Hemoglobin: MCH) picogrammes (pg)(pg =10

g)

population:

. normochrome . hypochrome

3. CONCENTRATION CORPUSCULAIRE MOYENNE en HEMOGLOBINE (CCMH) (= Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration: MCHC) (g/l)

population:

. normochrome . hypochrome

.= Hémoglobine (g/dl) x 100

(en g/dl)

Hématocrite (%)

C.C.M.H.= Hémoglobine (g/l) Hématocrite (l/l) T.C.M.H.= Hémoglobine (g/l)

Numération globulaire (10

/l)

INDEX ERYTHROCYTAIRES DE WINTROBE

Hématocrite (l/l)

Numération globulaire (10

/l)

V.G.M.=

Les globules rouges: données numériques

Chien Chat Cheval de sang Bovin VGM ^{fl 69}

(60-77)

45 (39-55)

45,5 (37-58,5)

52 (40-60)

TCMH ^{pg 23}

(19,5-24,5)

15

(12,5-17,5)

15,9 (12,3-19,7)

14,0 (11,0-17,0)

CCMH g/dl 34

(32-36)

33 (31-35)

35,2 (31-38,6)

32,7 (30-36)

Voir fichier « intervalles de référence en hémato. vétérinaire » sur moodle

Les globules rouges: propriétés

1. Propriétés physiques

2. Propriétés biochimiques

Les globules rouges: propriétés

1. Propriétés physiques

1. liées à l’organisation moléculaire de la membrane

Les globules rouges: propriétés

1. Propriétés physiques

Barrière sélective retenant Hgb tout en permettant échanges avec plasma

H

0, anions (Cl

, HCO

) Na

K

Protéine transport glucose

Les globules rouges: propriétés

1. Propriétés physiques

1. Déformabilité et élasticité

Les globules rouges: propriétés

1. Propriétés physiques

2. Perméabilité membranaire sélective

 Régulation échanges entre milieu intracellulaire et milieu plasmatique:

 Hémoglobine: ne quitte pas le GR

 H ₂ O, anions (Cl ^- , HCO ₃ ^- ), glucose, acides aminés: transport passif

 K ⁺ , Na ⁺ , Ca ⁺⁺ : transport actif (ATPases K ⁺ , Na ⁺ ou ATPases Ca ⁺⁺ )

Les globules rouges: propriétés

1. Propriétés physiques

2. Perméabilité membranaire

 forme normale du GR quand pression osmotique du milieu voisine de celle du plasma (NaCl: 8,5‰)

seuil hémolyse

Les globules rouges: propriétés

1. Propriétés physiques

3. Agglutinabilité

CV, CT

(agglutination immune)

Les globules rouges: propriétés

2. Propriétés biochimiques

• liées à l’ultrastructure du GR (absence de noyau, de mitochondries)

 Métabolisme énergétique:

 la glycolyse anaérobie (glucose, seule source d’énergie du GR)

 Formation d’ATP, NADH et 2,3DPG

 Métabolisme oxydoréducteur:

 le GR lutte contre formation de metHb grâce à enzymes réductrices (metHb réductase, glutathion réductase)

 Régulation acido-basique de l’organisme:

 grâce à la richesse en anhydrase carbonique du GR

Corps de Heinz

Les globules rouges: propriétés

2. Propriétés biochimiques

 L’hémoglobine : pigment des GR, en solution saturée dans la cellule

 Constituée: - 1 hétéroprotéine, la globine: 2 paires de ss unités a et b

- 4 hèmes

L’HÉMOGLOBINE

Les globules rouges: Fonction

• Le transport des gaz respiratoires: O ₂ ,CO _2:

 dans tissus: Hb libère O ₂

 dans poumons: Hb se sature en O ₂

Principaux facteurs influençant l’affinité de l’Hb pour l’O₂

(In: N.C.Jain, Essentials of Vet. Hematology, Lea & Febiger, Philadelphia, 1993)

DésoxyHb (T) OxyHb (R)

État contraint (T):

-Faible affinité pour O₂ -Forte affinité pour C0₂ -Affinité pour protons -Fixation du 2,3DPG

État relâché (R):

-FORTE affinité pour O₂ -Faible affinité pour C0₂ -Relargage des protons

POUMONS

TISSUS

P50 ^Alvéole pulmonaire

Les globules rouges: Origine et évolution

1. Origine:

 l’érythropoïèse (cf cours hématopoïèse)

2. Evolution:

 Durée de vie

Espèce (adulte)

Durée de vie moyenne (jours) homme 120

chien 100-120 chat 66-78 cheval 140-155 bovin 160

chèvre 125 mouton 70-153 porc 63

rat 45-50

souris 20-30

Les globules rouges: Origine et évolution

 Vieillissement des GR

 Cellule incapable de renouveler son stock d’enzymes

 Diminution du catabolisme

oxydatif du glucose

Les globules rouges: Origine et évolution

 L’érythrolyse

1. localisation:

 en quasi-totalité extravasculaire: MO, rate, foie

 par des macrophages

2. Déroulement

Les globules rouges: Origine et évolution

 L’érythrolyse

2. Déroulement

1-Etape pré-hépatique

2-Etape hépatique