Impact de la recherche d'amorces mutées sur les résultats d'analyses métagénomiques

Texte intégral

(1)Impact de la recherche d’amorces mutées sur les résultats d’analyses métagénomiques Aymeric Antoine-Lorquin, Frédéric Mahé, Micah Dunthorn, Catherine Belleannée. To cite this version: Aymeric Antoine-Lorquin, Frédéric Mahé, Micah Dunthorn, Catherine Belleannée. Impact de la recherche d’amorces mutées sur les résultats d’analyses métagénomiques. Journées Ouvertes en Biologie, Informatique et Mathématiques (JOBIM), Société Française de Bioinformatique (SFBI), Jun 2016, Rennes, France. �hal-01343121�. HAL Id: hal-01343121 https://hal.archives-ouvertes.fr/hal-01343121 Submitted on 7 Jul 2016. HAL is a multi-disciplinary open access archive for the deposit and dissemination of scientific research documents, whether they are published or not. The documents may come from teaching and research institutions in France or abroad, or from public or private research centers.. L’archive ouverte pluridisciplinaire HAL, est destinée au dépôt et à la diffusion de documents scientifiques de niveau recherche, publiés ou non, émanant des établissements d’enseignement et de recherche français ou étrangers, des laboratoires publics ou privés..

(2) "ZNFSJD "łŉŃĽłĹ-ŃŇŅŊĽł FU BM. *NQBDU EF MB SFDIFSDIF EBNPSDFT NVUÊFT TVS MFT SÊTVMUBUT EBOBMZTFT NÊUBHÊOPNJRVFT "ZNFSJD "OUPJOF-PSRVJO n 'SÊEÊSJD .BIÊ .JDBI %VOUIPSO $BUIFSJOF #FMMFBOOÊF o . %:-*44 */3*" *3*4" Ǽ */3*" 6OJWFSTJU§ EF 3FOOFT $/34 6.3 Ǽ $BNQVT EF #FBVMJFV ' 3˅ˎˎ˅˓ $FEFY 'SBODF $*3"% Ǽ $FOUSF EF DPPQ§SBUJPO JOUFSOBUJPOBMF FO SFDIFSDIF BHSPOPNJRVF QPVS MF E§WFMPQQFNFOU 613 Ǽ 'SBODF 5FDIOJDBM 6OJWFSTJUZ PG ,BJTFSTMBVUFSO 56 ,BJTFSTMBVUFSO Ǽ 10 #PY ,ˁˉ˓˅˒˓ˌˁ˕˔˅˒ˎ "MMFNBHOF. *OUSPEVDUJPO &O NÊUBHÊOPNJRVF DJCMÊF VOF QSPCMÊNBUJRVF SÊDVSSFOUF DPODFSOF MB RVBOUJUÊ EF MFDUVSFT SÊFMMFNFOU FYQMPJUBCMFT FO TPSUJF EVO TÊRVFODFVS Æ IBVU EÊCJU -VOF EFT ÊUBQFT JOĚVFOÉBOU DFĨF RVBOUJUÊ FTU MB EÊUFDUJPO EBOT DIBRVF TÊRVFODF EFT BNPSDFT VUJMJTÊFT QPVS BNQMJėFS MF HÍOF DJCMÊ )VTF FU BM ƿƽƾƽ POU ÊNJT MIZQPUIÍTF RVF OF SFUFOJS RVF MFT TÊRVFODFT EJTQPTBOU EBNPSDFT QBSGBJUFT OPONVUÊFT QBS VOF FSSFVS EF TÊRVFOÉBHF QFSNFĨSBJU EBNÊMJPSFS MB RVBMJUÊ HMPCBMF EVO ÊDIBOUJMMPO $FĨF BQQSPDIF CBTÊF TVS MJEÊF RVF MFT TÊRVFODFT EFT BNPSDFT EPJWFOU EPNJOFS OVNÊSJRVFNFOU Æ MJTTVF EF MÊUBQF EF 1$3 QSÊTFOUF MBWBOUBHF EF OF QBT OÊDFTTJUFS MVUJMJTBUJPO EPVUJMT DPNQMFYFT QVJTRVJM FTU QPTTJCMF EF SFDIFSDIFS MFT BNPSDFT QBSGBJUFT Æ MBJEF EF TJNQMFT FYQSFTTJPOT SÊHVMJÍSFT OBUVSFMMFNFOU QSJTFT FO DIBSHF QBS EF OPNCSFVY MBOHBHFT EF QSPHSBNNBUJPO QZUIPO QFSM SVCZ FUD /ÊBONPJOT DFĨF TUSBUÊHJF ÊMJNJOF QSPCBCMFNFOU BVTTJ EFT TÊRVFODFT DPSSFDUFT $FTU QPVSRVPJ NBJOUFOBOU RVJM FYJTUF EFT PVUJMT DBQBCMFT EÊMJNJOFS B QPTUFSJPSJ MFT TÊRVFODFT MFT NPJOT ėBCMFT UFM RVF 48"3. EF .BIÊ FU BM ƿƽƾǂC. OPVT BWPOT WPVMV TBWPJS TJ MF GBJU EF SFDIFSDIFS EFT BNPSDFT QPUFOUJFMMFNFOU NVUÊFT QFSNFĨBJU EBVHNFOUFS MF OPNCSF EF TÊRVFODFT FYQMPJUBCMFT QBS ÊDIBOUJMMPO FU TJ DFĨF BVHNFOUBUJPO JNQBDUBJU MFT SÊTVMUBUT PCUFOVT BV UFSNF EF MBOBMZTF NÊUBHÊOPNJRVF. .BUÊSJFM FU NÊUIPEFT +FVY EF EPOOÊFT /PVT BWPOT USBWBJMMÊ TVS ǆ ÊDIBOUJMMPOT CJPMPHJRVFT EBOT MF DBESF EVOF ÊUVEF DBSBDUÊSJTBOU MB CJPEJWFSTJUÊ EFT TPMT USPQJDBVY DIF[ MFT FVDBSZPUFT VOJDFMMVMBJSFT .BIÊ FU BM ƿƽƾǂB. -FT ÊDIBOUJMMPOT POU ÊUÊ TÊRVFODÊT Æ MB GPJT FO 3PDIFǁǂǁ FU FO *MMVNJOB .J4FR BėO EF QPVWPJS DPOTUBUFS MJNQBDU EF MB UFDIOPMPHJF TVS MFT SÊTVMUBUT JF PCUJFOUPO MFT NËNFT TÊRVFODFT BWFD MFT EFVY UFDIOPMPHJFT -FT SÊTVMUBUT TPOUJMT MFT NËNFT FO 3PDIFǁǂǁ FU FO *MMVNJOB .JTFR -F TÊRVFOÉBHF B DJCMÊ MB SÊHJPO 7ǁ EF MB TPVTVOJUÊ ƾǅ4 EF M"3/ SJCPTPNJRVF 4UPFDL FU BM ƿƽƾƽ. &O FĎFU DFĨF SÊHJPO QPTTÍEF VOF QPSUJPO IZQFSWBSJBCMF TQÊDJėRVF EF DIBRVF FTQÍDF FU FODBESÊF QBS EFVY TFHNFOUT EF TÊRVFODFT FYUSËNFNFOU DPOTFSWÊT VUJMJTBCMFT FO UBOU RVBNPSDFT VOJWFSTFMMFT DJBQSÍT BNPSDFT 'PSXBSE FU 3FWFSTF -B EÊUFDUJPO FU MÊMJNJOBUJPO EFT BNPSDFT EBOT MFT ÊDIBOUJMMPOT TÊRVFODÊT QFSNFU EPOD EJTPMFS MB QBSUJF TQÊDJėRVF BQQFMÊF BNQMJDPO 1PVS MFOTFNCMF EFT ǆ ÊDIBOUJMMPOT MF TÊRVFOÉBHF 3PDIFǁǂǁ B QSPEVJU ǀƾƽ ǀǄǂ TÊRVFODFT DPOUSF ǂ ƿƿǀ ƾǀǅ TÊRVFODFT TPVT *MMVNJOB .J4FR *OUFSWFOBOU n $PSSFTQPOEJOH BVUIPS o $PSSFTQPOEJOH BVUIPS . BZNFSJDBOUPJOFMPSRVJO!JSJTBGS DBUIFSJOFCFMMFBOOFF!JSJTBGS. ǃǄ . 4FTTJPO T§RVFODFT OVDM§JRVFT NBSEJ I 4BMMF EFT UI¦TFT.

(3) "ZNFSJD "łŉŃĽłĹ-ŃŇŅŊĽł FU BM 3FDIFSDIF EFT BNPSDFT -B SFDIFSDIF EFT BNPSDFT QBSGBJUFT TFTU GBJUF Æ MBJEF EFYQSFTTJPOT SÊHV MJÍSFT SFDIFSDIÊFT FO 1ZUIPO $$"($"<$(>$<$5>($((5""Ĉ$$ QPVS 7ǁ' FU 5<$5><"(>"5 $""(""$("""(5 QPVS 7ǁ3 MFT TÊRVFODFT PCUFOVFT GPSNFOU MFOTFNCMF EFT BNQMJDPOT 3FHFY OPNCSF UPUBM EBNQMJDPOT 3FHFY 3PDIFǁǂǁ ǀǆ ǆƾǄ *MMVNJOB .JTFR ƿǄǁ ǅƽƾ -B SFDIFSDIF EFT BNPSDFT NVUÊFT QBSNJ MFT TÊRVFODFT OPO SFHFY TFTU GBJUF Æ MBJEF EF MPVUJM EF QBĪFSO NBUDIJOH HSBNNBUJDBM -PHPM #FMMFBOOÊF FU BM ƿƽƾǁ. MFT TÊRVFODFT PCUFOVFT GPSNFOU MFOTFNCMF EFT BNQMJDPOT -PHPM OPNCSF UPUBM EBNQMJDPOT -PHPM 3PDIFǁǂǁ ƿ ǂƿƽ *MMVNJOB .JTFR ƿƽ ǂǂǅ $BMDVM EF MB QSPYJNJUÊ EF EFVY FOTFNCMFT EF TÊRVFODFT -F UFTU EF EJTTJNJMBSJUÊ EF #SBZ$VSUJT QFSNFU EF WJTVBMJTFS TVS VO HSBQIF MB TJNJMBSJUÊ EF EFVY FOTFNCMFT EF TÊRVFODFT *M FTU CBTÊ TVS MFT DPNQBSBJTPOT ƿ Æ ƿ EFT QSPėMT EF TÊRVFODFT EF EFVY FOTFNCMFT EF UBJMMF JEFOUJRVF -FT TÊRVFODFT 3FHFY ÊUBOU CJFO QMVT OPNCSFVTFT RVF MFT TÊRVFODFT -PHPM MB WBMFVS ėOBMF EF EJTTJNJMBSJUÊ B ÊUÊ PCUFOVF FO GBJTBOU MB NPZFOOF EF ƾƽ ƽƽƽ DBMDVMT EF EJTTJNJMBSJUÊ EF TPVTÊDIBOUJMMPOT BMÊBUPJSFT EF ƾ ƽƽƽ TÊRVFODFT 3FHFY PV -PHPM FU DF JOEÊQFOEBNNFOU QPVS DIBRVF ÊDIBOUJMMPO CJPMPHJRVF 3FHSPVQFNFOU EFT TÊRVFODFT QBS TJNJMBSJUÊ 6OF DMVTUÊSJTBUJPO B ÊUÊ GBJUF BWFD MPVUJM 48"3. .BIÊ FU BM ƿƽƾǂC. TVS MB UPUBMJUÊ EFT BNQMJDPOT 3FHFY FU -PHPM FU DF TÊQBSÊNFOU QPVS DIBRVF UFDIOPMPHJF $IBRVF DMVTUFS DPOTUJUVÊ QBS 48"3. DPOUJFOU EFT TÊRVFODFT QSPDIFT MFT VOFT EFT BVUSFT Æ RVFMRVFT TVCTUJUJPOT QSÍT -B SÍHMF EF WBMJEBUJPO EVO DMVTUFS EBNQMJDPOT B ÊUÊ MB TVJWBOUF QPVS ËUSF DPOTFSWÊ VO DMVTUFS EPJU SFHSPVQFS VO NJOJNVN EF ǀ TÊRVFODFT PV BV NPJOT ƿ TÊRVFODFT QSPWFOBOU EF ƿ ÊDIBOUJMMPOT EJĎÊSFOUT $IBRVF DMVTUFS WBMJEF GPSNF VO 056 0QFSBUJPOOBM UBYP OPNJD VOJU VOJUÊ UBYPOPNJRVF PQÊSBUJPOOFMMF TPVWFOU DPOTJEÊSÊ DPNNF SFQSÊTFOUBOU VOF FTQÍDF CJPMPHJRVF. 3ÊTVMUBUT .PEÍMF EBNPSDFT NVUÊFT -F NPEÍMF EF NVUBUJPO EÊėOJ QBS MFYQFSU FTU MF TVJWBOU MFT BNPSDFT 'PSXBSE FU 3FWFSTF QFVWFOU QPTTÊEFS KVTRVÆ ƿ TVCTUJUVUJPOT 06 KVTRVÆ ƾ JOTFSUJPOEÊMÊUJPO 1BS BJMMFVST MBNPSDF 3FWFSTF QFVU ËUSF QBSUJFMMFNFOU USPORVÊF TVS TFT ƿ OVDMÊPUJEFT UFSNJOBVY TBOT RVF DFMB DPNQUF DPNNF VOF EÊMÊUJPO JF PO BVUPSJTF MBNPSDF 3FWFSTF B ËUSF MÊHÍSFNFOU JODPNQMÍUF BWBOU EF DPOTJEÊSFS MB QSÊTFODF EF NVUBUJPOT *M OFTU QBT TJNQMF EF EÊėOJS EF UFMT NPEÍMFT VOJRVFNFOU BWFD MFT FYQSFTTJPOT SÊHVMJÍSFT &O FĎFU MFT FYQSFTTJPOT SÊHVMJÍSFT OÊDFTTJUFOU EF EÊėOJS FYQMJDJUFNFOU DIBRVF QPTTJCJMJUÊ SFDIFSDIÊF 1BS FYFNQMF BVUPSJTFS EFVY TVCTUJUVUJPOT TBOT BQSJPSJ EF QPTJUJPO TVS VO NPU EF UBJMMF O DSPSSFTQPOE Æ O Y Oƾ ƿ WBSJBOUT TPJU ƾǆƽ NPUT EJĎÊSFOUT QPVS VOF TÊRVFODF EF UBJMMF ƿƽ EPOD VO OPNCSF EFYQSFTTJPO SÊHVMJÍSF FYQMPTJG FO GPODUJPO EF MB UBJMMF EV NPU $FTU QPVS DFĨF SBJTPO RVF OPVT BWPOT VUJMJTÊ VO PVUJM EF QBĪFSO NBUDIJOH QFSNFĨBOU EFYQSJNFS EFT FYQSFTTJPOT SÊHVMJÍSFT BQQSPDIÊFT -PHPM RVJ QFSNFU EF SFDIFSDIFS GBDJMFNFOU EFT WBSJBOUT EF TÊRVFODFT OPUBNNFOU FO BVUPSJTBOU MBKPVU EF QSPQSJÊUÊT BVY NPEÍMFT UFM RVF MF OPNCSF EFSSFVST BVUPSJTÊFT QBS SBQQPSU Æ VOF SÊGÊSFODF "JOTJ -PHPM QFVU DPVWSJS MFT ƾǆƽ NPEÍMFT EFYQSFTTJPOT SÊHVMJÍSFT EF MFYFNQMF QSÊDÊEFOU BWFD VO VOJRVF NPEÍMF EFYQSFTTJPO %ÊUFDUJPO EFT TÊRVFODFT BWFD BNPSDFT NVUÊFT -B SFDIFSDIF EFT BNPSDFT QBSGBJUFT QFSNFU EF SÊDVQÊSFS SFTQFDUJWFNFOU ǆƽ ƿ FU ǅƿ Ǆ EFT TÊRVFODFT UPUBMFT -B SFDIFSDIF EBNPSDFT NVUÊFT QFSNFU EF DBQUVSFS SFTQFDUJWFNFOU ǅ ǀ FU Ǆ ƾ EF TÊRVFODFT BEEJUJPOOFMMFT QPVS VO UPUBM SFTQFDUJG EF ǆǅ ǂ FU ǅǆ ǅ -B SFDIFSDIF EFT BNPSDFT NVUÊFT QFSNFU EPOD EBKPVUFS VOF RVBOUJUÊ OPOOÊHMJHFBCMF EF TÊRVFODFT

(4) ƿǂ ǃƾǆ TÊRVFODFT FO 3PDIFǁǂǁ FU

(5) ǀǃǅ ƿǃƽ TÊRVFODFT FO *MMVNJOB .J4FR . 7BMJEBUJPO EFT TÊRVFODFT BWFD BNPSDFT NVUÊFT %FVY TJUVBUJPOT QFVWFOU TF QSÊTFOUFS QPVS VOBNQMJDPO -PHPM TPJU JM FTU EÊKÆ DPOOV UZQJRVF NFOU JM FTU JEFOUJRVF Æ VOBNQMJDPO 3FHFY FU EPOD UPVU BVUBOU CJPMPHJRVFNFOU FOWJTBHFBCMF TPJU JM FTU OPVWFBV FU MB RVFTUJPO TF QPTF EF TBWPJS TJM OF TBHJU QBT EVO BNQMJDPO USPQ MPVSEFNFOU NVUÊ ǃǅ .

(6) "ZNFSJD "łŉŃĽłĹ-ŃŇŅŊĽł FU BM PV DIJNÊSJRVF OF SFĚÊUBOU EPOD QBT MB SÊBMJUÊ CJPMPHJRVF 1PVS SÊQPOESF Æ DFĨF JOUFSSPHBUJPO OPVT BWPOT SFHBSEÊ TJ MFOTFNCMF EFT BNQMJDPOT -PHPM GPSNBJU VOF QPQVMBUJPO DPNQBSBCMF Æ MB QPQVMBUJPO 3FHFY QVJT OPVT BWPOT PCTFSWÊ MF EFWFOJS JOEJWJEVFM EF DIBRVF BNQMJDPO $PNQBSBJTPO HMPCBMF EFT BNQMJDPOT -PHPM FU 3FHFY -VUJMJTBUJPO EV UFTU EF EJTTJNJMBSJUÊ EF #SBZ$VSUJT B QFSNJT EF WÊSJėFS RVF MFT BNQMJDPOT -PHPM TPOU SFMBUJWFNFOU TJNJMBJSFT BVY BNQMJDPOT 3FHFY -FT SÊTVMUBUT NPOUSFOU EVOF QBSU RVF MFT BNQMJDPOT -PHPM TPOU USÍT QSPDIFT EFT BNQMJDPOT 3FHFY FU EBVUSF QBSU RVF MFT BNQMJDPOT -PHPM FU 3FHFY PCUFOVT WJB MB NËNF UFDIOPMPHJF EF TÊRVFOÉBHF TPOU QMVT QSPDIFT FOUSF FVY RVBWFD MFVST IPNPMPHVFT EF MB UFDIOPMPHJF EF TÊRVFOÉBHF BMUFSOBUJWF QPVS VO ÊDIBOUJMMPO EPOOÊ QBS FYFNQMF MFT BNQMJDPOT 3FHFY*MMVNJOB TPOU QMVT QSPDIFT EFT BNQMJDPOT -PHPM*MMVNJOB RVF EFT BNQMDJPOT 3FHFYǁǂǁ -FT BNQMJDPOT -PHPM TPOU EPOD DPNQBSBCMFT BVY BNQMJDPOT 3FHFY NBMHSÊ MFVST BNPSDFT NVUÊFT $BSBDUÊSJTBUJPO JOEJWJEVFMMF EFT BNQMJDPOT -PHPM %BOT MF DBESF EF OPUSF BOBMZTF DIBRVF BNQMJDPOT -PHPM DPSSFTQPOE Æ MVOF EFT ǁ TJUVBUJPOT TVJWBOUFT BQSÍT MB DMVTUÊSJTBUJPO QBS 48"3. $BT ƾ -BNQMJDPO -PHPM BQQBSUJFOU Æ VO DMVTUFS OPOWBMJEF JF FTU JTPMÊ *M OB BMPST QBT EJNQBDU TVS MFT SÊTVMUBUT ėOBVY DBS JM FO TFSB ÊMJNJOÊ -FT BNQMJDPOT DIJNÊSJRVFT GPOU QBS FYFNQMF QBSUJF EF DFĨF DBUÊHPSJF $BT ƿ -BNQMJDPO -PHPM TBKPVUF Æ VO DMVTUFS 3FHFY WBMJEF *M BVHNFOUF BJOTJ MBCPOEBODF UPUBMF EV DMVTUFS NBJT OF NPEJėF QBT MF OPNCSF E056 JEFOUJėÊT $FMB WBMJEF UPVU EF NËNF MBNQMJDPO $BT ǀ -BNQMJDPO -PHPM TBKPVUF Æ VO DMVTUFS 3FHFY OPOWBMJEF FU MF SFOE WBMJEF *M QFSNFU MJEFOUJėDBUJPO EVO OPVWFM 056 $BT ǁ -BNQMJDPO -PHPM BQQBSUJFOU Æ VO DMVTUFS WBMJEF QVSFNFOU -PHPM *M QFSNFU MJEFOUJ ėDBUJPO EVO OPVWFM 056 -FT EFVY EFSOJFST DBT TPOU QBSUJDVMJÍSFNFOU JOUÊSFTTBOUT QVJTRVJMT NPEJėFOU DPODSÍUFNFOU MF SÊTVMUBU EF MBOBMZTF FO BKPVUBOU EF OPVWFBVY 056 &O 3PDIFǁǂǁ ǆ EFT TÊRVFODFT -PHPM BQQBSUJFOOFOU Æ VO DMVTUFS OPOWBMJEF DPOUSF ǂ QPVS MFT TÊRVFODFT 3FHFY FU TPOU EPOD SFKFUÊFT -B DMVTUÊSJTBUJPO BCPVUJU Æ ǁ ǁǀƿ 056 EPOU ƿ ƽǂǆ DPOUJFOOFOU EFT TÊRVFODFT -PHPM ǁǃ ǂ 1PVS ƾ ǃǀƿ 056 JM TBHJU EVOF BVHNFOUBUJPO EF MBCPOEBODF UPUBMF E056 EÊKÆ EÊUFDUÊT BWFD MFT TÊRVFODFT 3FHFY -FT ǁƿǄ BVUSFT 056 TPOU EF OPVWFBVY 056 EPOU ƿƽǂ VOJRVFNFOU DPOTUJUVÊT EF TÊRVFODFT -PHPM &O *MMVNJOB ƿǁ EFT TÊRVFODFT -PHPM BQQBSUJFOOFOU Æ VO DMVTUFS OPOWBMJEF DPOUSF ƿƽ QPVS MFT TÊRVFODFT 3FHFY FU TPOU EPOD SFKFUÊFT -B DMVTUFSJTBUJPO BCPVUJU Æ ƿǅ ǀǄǄ 056 EPOU ƾƿ ǃǆǀ DPOUJFOOFOU EFT TÊRVFODFT -PHPM ǁǁ Ǆ 1PVS ƾƽ ǅǀǂ 056 JM TBHJU EVOF BVHNFOUBUJPO EF MBCPOEBODF UPUBMF E056 EÊKÆ EÊUFDUÊT BWFD MFT TÊRVFODFT 3FHFY -FT ƾ ǅǂǅ BVUSFT 056 TPOU EF OPVWFBVY 056 EPOU ǆǀǄ VOJRVFNFOU DPOTUJUVÊT EF TÊRVFODFT -PHPM -B SÊDVQÊSBUJPO EFT TÊRVFODFT EJTQPTBOU EBNPSDFT NVUÊFT B EPOD QFSNJT MJEFOUJėDBUJPO EF ƾƽ Æ Ǆ EF OPVWFBVY 056 EBOT MFT ÊDIBOUJMMPOT SFTQFDUJWFNFOU FO ǁǂǁ3PDIF FU *MMVNJOB . $PODMVTJPO -B SFDIFSDIF EFT BNPSDFT NVUÊFT QFSNFU EBNÊMJPSFS EF GBÉPO OPOOÊHMJHFBCMF MB TFOTJCJMJUÊ EVOF BOBMZTF NÊUBHÊOPNJRVF FO BVHNFOUBOU MF SBQQFM QBSNJ MFT TÊRVFODFT EVO ÊDIBOUJMMPO #JFO TÚS DFĨF SFDIFSDIF OÊDFTTJUF MVUJMJTBUJPO EF NPZFOT BEBQUÊT *M FYJTUF VO DFSUBJO OPNCSF EPVUJMT EJTQPOJCMFT QPVS NFĨSF FO VWSF MB SFDIFSDIF EFT BNPSDFT NVUÊFT UFMT RVF $VU"EBQU .BSUJO ƿƽƾƾ TJNQMF FU USÍT SBQJEF NBJT BTTF[ QFV ĚFYJCMF PV -PHPM CFBVDPVQ QMVT MFOU RVJ QFSNFU VO DPOUSÔMF DPNQMFU TVS MFT TQÊDJėDJUÊT EV NPEÍMF &O FMMFNËNF DFĨF SFDIFSDIF FTU TJNQMF Æ JODMVSF EBOT MFT QJQFMJOFT NÊUBHÊOPNJRVFT FYJTUBOUT 6O QPTUėMUSBHF QBS DMVTUÊSJTBUJPO QFSNFU EÊMJNJOFS QBSNJ MFT OPVWFBVY DBOEJEBUT MFT TÊ RVFODFT JTPMÊFT FU EF OF DPOTFSWFS RVF MFT TÊRVFODFT TJNJMBJSFT BVY TÊRVFODFT Æ BNPSDFT QBSGBJUFT $FT TÊRVFODFT TVQQMÊNFOUBJSFT QFSNFĨFOU EBDDSPÏUSF MB TFOTJCJMJUÊ EFT BOBMZTFT NÊUBHÊOPNJRVFT ǃǆ .

(7) "ZNFSJD "łŉŃĽłĹ-ŃŇŅŊĽł FU BM FO QFSNFĨBOU MB EÊUFDUJPO EF OPVWFBVY 056

(8) Ǆ Æ

(9) ƾƽ EBOT OPUSF ÊUVEF FO GPODUJPO EF MB UFDIOPMPHJF EF TÊRVFOÉBHF RVF DF TPJU FO BVHNFOUBOU MBCPOEBODF EF TÊRVFODFT EÊUFDUÊFT FO OPNCSF JOTVđTBOU QPVS ËUSF WBMJEÊFT PV RVF DF TPJU FO EÊUFDUBOU EFT TÊRVFODFT UPUBMFNFOU OPVWFMMFT RVJ OÊUBJFOU QBT WJTJCMFT BVQBSBWBOU. 3ÊGÊSFODFT #FMMFBOOÊF $ 4BMMPV 0 BOE /JDPMBT + ƿƽƾǁ i-PHPM &YQSFTTJWF 1BĨFSO .BUDIJOH JO 4FRVFODFT "QQMJDBUJPO UP 3JCPTPNBM 'SBNFTIJě .PEFMJOHu 1BĪFSO 3FDPHOJUJPO JO #JPJOGPSNBUJDT OVNCFS ǅǃƿǃ JO -FDUVSF /PUFT JO $PNQVUFS 4DJFODF QQ ǀǁmǁǄ 4QSJOHFS *OUFSOBUJPOBM 1VCMJTIJOH IUUQTIBMJOSJBGSIBMW. #SBZ + 3PHFS BOE + 5 $VSUJT i"O 0SEJOBUJPO PG UIF 6QMBOE 'PSFTU $PNNVOJUJFT PG 4PVUIFSO 8JTDPOTJOu &DPMPHJDBM .POPHSBQIT ƿǄǁ ƾǆǂǄ ǀƿǃmǀǁǆ 8FC )VTF 4 . 8FMDI % . .PSSJTPO ) ( BOE 4PHJO . - ƿƽƾƽ i*SPOJOH PVU UIF XSJOLMFT JO UIF SBSF CJPTQIFSF UISPVHI JNQSPWFE 056 DMVTUFSJOHu &OWJSPONFOUBM .JDSPCJPMPHZ ƾƿ Ǆ ƾǅǅǆmƾǅǆǅ .BIÊ ' .BZPS + #VOHF + $IJ + 4JFNFOTNFZFS 5 4UPFDL 5 8BIM # 1BQSPULB 5 'JMLFS 4 BOE %VOUIPSO . ƿƽƾǂB i$PNQBSJOH )JHIUISPVHIQVU 1MBUGPSNT GPS 4FRVFODJOH UIF 7ǁ 3FHJPO PG 446S%/" JO &OWJSPONFOUBM .JDSPCJBM &VLBSZPUJD %JWFSTJUZ 4VSWFZTu +PVSOBM PG &VLBSZPUJD .JDSPCJPMPHZ ǃƿ ǀ ǀǀǅmǀǁǂ .BIÊ ' 3PHOFT 5 2VJODF $ EF 7BSHBT $ BOE %VOUIPSO . ƿƽƾǂC i4XBSN Wƿ IJHIMZTDBMBCMF BOE IJHISFTPMVUJPO BNQMJDPO DMVTUFSJOHu 1FFS+ ǀFƾǁƿƽ .BSUJO . ƿƽƾƾ i$VUBEBQU SFNPWFT BEBQUFS TFRVFODFT GSPN IJHIUISPVHIQVU TFRVFODJOH SFBETu &.#OFUKPVSOBM ƾǄ ƾ QQ ƾƽmƾƿ 4UPFDL 5 #BTT % /FCFM . $ISJTUFO 3 +POFT . % . #SFJOFS )8 BOE 3JDIBSET 5 " ƿƽƾƽ i.VMUJQMF NBSLFS QBSBMMFM UBH FOWJSPONFOUBM %/" TFRVFODJOH SFWFBMT B IJHIMZ DPNQMFY FVLBSZPUJD DPNNVOJUZ JO NBSJOF BOPYJD XBUFSu .PMFDVMBS &DPMPHZ ƾǆ 4VQQM ƾƿƾmǀƾ. .PUT DMFGT QBĨFSO NBUDIJOH *MMVNJOB 3PDIFǁǂǁ ƾǅ4 SJCPTPNBM 3/". Ǆƽ .

(10)