ESSAI DE PREPARATION DU SERUM CONTROLE A L’HOPITAL BETHESDA :

(1)

***********

MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE (MESRS)

***********

UNIVERSITE D’ABOMEY-CALAVI (UAC)

***********

ECOLE POLYTECHNIQUE D’ABOMEY-CALAVI (EPAC)

***********

DEPARTEMENT DE GENIE DE BIOLOGIE HUMAINE

***********

POUR L’OBTENTION DU

DIPLOME DE LICENCE PROFESSIONNELLE THEME

Réalisé et présenté par : Carina ALOFA

Tuteur : Superviseur :

Mr Christophe GNONLONFOUN Ingénieur des Travaux en Analyses Biomédicales Chef Service laboratoire à l’Hôpital BETHESDA

Dr Casimir D. AKPOVI

Maître de Conférences des Universités de CAMES Enseignant-Chercheur EPAC/UAC

Composition du jury :

Président : Professeur Julien SEGBO Examinateur : Professeur Eugénie ANAGO Superviseur : Professeur Casimir D. AKPOVI

Année académique 2016-2017

10^ème promotion de Licence Professionnelle

RAPPORT DE STAGE DE FIN DE FORMATION

ESSAI DE PREPARATION DU SERUM CONTROLE A

L’HOPITAL BETHESDA : DUREE DE STABILITE DU

GLUCOSE, DE LA CREATININE ET DU MAGNESIUM

(2)

Réalisé par Carina ALOFA II REPUBLIQUE DU BENIN

*******

MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE

*******

UNIVERSITE D’ABOMEY-CALAVI (UAC)

*******

ECOLE POLYTECHNIQUE D’ABOMEY-CALAVI (EPAC)

*******

DEPARTEMENT DE GENIE DE BIOLOGIE HUMAINE (GBH)

*******

OPTION: ANALYSES BIOMEDICALES (ABM)

DIRECTEUR: Professeur Mohammed SOUMANOU

DIRECTEUR ADJOINT: Professeur Clément AHOUANNOU

CHEF DE DEPARTEMENT: Docteur Pascal ATCHADE

(3)

Réalisé par Carina ALOFA III

LISTE DES ENSEIGNANTS DU DEPARTEMENT DE GENIE DE BIOLOGIE HUMAINE (GBH)

N° NOM et Prénoms Matières enseignées 01 ABLEY Sylvestre Déontologie Médicale

02 ADOMOU Alain Physique

03 AGBANGLA Clément Génétique Moléculaire

04 AGOUA Jean Informatique

05 AHOYO Théodora Angèle Microbiologie/ Santé Publique et Hygiène Hospitalière 06 AKAKPO B. Huguette Education Physique et Sportive

07 AKOGBETO Martin Entomologie Médicale

08 AKPOVI Casimir Biologie Cellulaire / Physiologie humaine / Biochimie métabolique

09 ALITONOU Alain Guy Chimie Générale / Chimie Organique

10 ANAGO Eugénie Biochimie Structurale / Biochimie Clinique / Biologie Moléculaire

11 ANAGONOU Sylvère Education Physique et Sportive 12 ATCHADE Pascal Parasitologie / Mycologie

13 AVLESSI Félicien Chimie Générale / Chimie Organique 14 BANKOLE Honoré Bactériologie / Virologie

15 DARBOUX Raphaël Histologie Appliquée

16 DESSOUASSI Noel Biophysique

17 DOSSEVI Lordson Techniques Instrumentales

18 DOSSOU Cyriaque Techniques d’Expression et Méthodes de

Communication

19 DOUGNON T. Victorien Microbiologie / Méthodologie de la Recherche

20 HOUNNON Hyppolite Mathématiques

21 HOUNSSOSSOU Hubert Biostatistique et Epidémiologie 22 LALLY Armel Législation et Droit du Travail 23 LOKO Frédéric Biochimie Clinique

24 LOKOSSOU Gatien Immunologie / Immunologie-Pathologie

25 LOZES Evelyne Immunologie /Immuno-Pathologie/ Equipements Biomédicaux

26 MASSOULOKONON Vincent Histologie Générale 27 OGOUDIKPE Nicarette Informatique Médicale 28 SECLONDE Hospice Transfusion Sanguine

29 SEGBO. Julien Biochimie / Biologie Moléculaire

30 SENOU Maximin Histologie Appliquée

31 TOPANOU Adolphe Hématologie / Hémostase et pharmacologie

32 SOEDE Casimir Anglais

33 YOVO K. S. Paulin Pharmacologie / Toxicologie

34 TOHOYESSOU Zoé Soins Infirmiers

(4)

Réalisé par Carina ALOFA IV

DEDICACE

A tous les scientifiques qui œuvrent pour le bien-être des populations !

(5)

Réalisé par Carina ALOFA V

REMERCIEMENTS

 A Dieu tout puissant pour nous avoir protégés et guidés durant toute cette période.

 A l’Ecole Polytechnique d’Abomey-Calavi en général et en particulier au département de Génie de Biologie Humaine pour ces trois (03) ans de formation continue dirigée par le personnel enseignant.

 A notre maître de mémoire Dr Casimir AKPOVI, qui a contribué par ses actions, sa disponibilité, ses conseils divers à la bonne réalisation de ce travail, trouvez ici ma sincère reconnaissance. Nous n’oublions pas de remercier Mr Salomon FIOGBE, pour son accompagnement dans la réalisation de ce travail.

 Au chef service du laboratoire de l’Hôpital BETHESDA de Cotonou Mr Christophe GNONLONFOUN et ses collaborateurs : Mr Clément AVODAHO, Mr Romain Laurent ANIOU, Mr Dénis KIKI, Mr Alexis GBEHOUNOU, Mme Elisabeth AGUEMON, Mme Prudence ZINSOU, Mr Ignace HOUNKPE, Mme Laurenda ADOUKONOU, pour leur implication et la disponibilité dont ils ont fait montre pour mettre cette étude dans les meilleures conditions de travail. Nos remerciements vont aussi à l’endroit de nos camarades stagiaires du laboratoire.

 A mes camarades de dixième promotion de Licence Professionnelle: Casimir LIGAN, Madiyatou TOUKOUROU, Jordy FADE, Abel YEKPE, Déo-Gratias MENSAH, Marie-Prosper KESSO, Lisbeth BONOU, Achille KISSEZOUNON, Boris CHABI, Antoine HOUNDONOUGBO, Socrate HOUESSINON pour ces moments partagés.

 A Mlle Pentesprit AHISSOU, pour toute l’aide apportée dans la réalisation de ce travail.

 A mes frères Bernice et Gérard pour le soutient quotidien.



Enfin à mes très chers parents pour leurs soutiens financiers, matériels, spirituels et moraux ; que vous trouvez ici mes plus profonds remerciements.

(6)

Réalisé par Carina ALOFA VI

HOMMAGES

A son excellence Monsieur le Président de jury

C’est un grand honneur que vous nous faites en acceptant de présider notre jury de soutenance de rapport de stage de fin de formation pour l’obtention de la licence professionnelle. Monsieur le Président de jury, par vos observations, nous espérons améliorer la qualité de ce travail. Nous vous prions de croire en l’expression de notre profond respect et nos vives gratitudes.

Hommages respectueux !

Aux honorables membres de jury

Nous sommes très heureux de vous avoir dans notre jury de soutenance. Vos remarques, suggestions et apports contribueront à l’amélioration de ce travail. Veuillez trouver ici, l’expression de notre profonde gratitude et de nos sincères considérations.

(7)

Réalisé par Carina ALOFA VII

LISTES DES SIGLES ET ABREVIATIONS

EPAC : Ecole Polytechnique d’Abomey-Calavi GBH : Génie de Biologie Humaine

CQ : Contrôle Qualité

CIQ : Contrôle Interne de Qualité CEQ : Contrôle Externe de Qualité

PAQE : Programmes d’Assurance Qualité Externes MC : Matériaux de Contrôle

MR : Matériaux de Référence

MRM : Matériaux de Référence Maison CV : Coefficient de Variation

ET : Ecart-Type

HIV : Human Immunodeficience Virus Ag HbS : Antigène de l’hépatite B HCV : Hepatite C Virus

(8)

Réalisé par Carina ALOFA VIII

Résumé

Grâce au contrôle de qualité, les erreurs peuvent être minimisées et le laboratoire peut s’assurer de la fiabilité des résultats qu’il produit. A cet effet, les sérums de contrôle de qualité sont utiles. Disponible dans le commerce mais couteux, le sérum contrôle n’est pas facilement accessible à tous les laboratoires. Dans cette étude, nous avons préparé un sérum contrôle maison dans le but de montrer qu’il est possible d’en préparer pour une utilisation à durée définie.

Les essais effectués sur ce sérum contrôle juste après sa préparation ont permis de déterminer pour le glucose une valeur cible de 0,91 g/L, un intervalle de confiance de 0,8 à 1,02 g/L ; pour la créatinine une valeur cible de 9,02 mg/L et un intervalle de confiance de 7,5 à 10,5 mg/L et pour le magnésium une valeur cible de 16,63 mg/L et un intervalle de confiance de 13,3 à 19,9 mg/L. Ce contrôle maison a été comparé au contrôle commercial utilisé pour la validation des résultats des dosages du glucose, de la créatinine et du magnésium pendant 30 jours.

Les résultats obtenus ont montré que lorsque le sérum contrôle est préparé avec l’azide de sodium comme agent conservateur, il est de qualité comparable au contrôle commercial pendant 30 jours dans le cas du glucose, 29 jours dans le cas de la créatinine et 30 jours dans le cas du magnésium.

Ensemble, nos résultats ont montré que le sérum contrôle maison préparé avec l’azide de sodium comme agent conservateur peut être utilisé pour la validation du dosage du glucose, de la créatinine et du magnésium sanguin pendant au moins quatre (04) semaines.

Mots clés : Contrôle de qualité interne (CQI), contrôle commercial, sérum contrôle maison, paramètres biochimiques.

(9)

Réalisé par Carina ALOFA IX

Abstact

Errors can be minimized and the laboratory can guarantee the reliability of its results. The invention relates to one or more tools for controlling the quality of the products, available commercially but accessible to all laboratories. In this study, we have prepared a control scenario in a house but it is possible to prepare a house for a maximum duration.

The tests carried out on this serum, checked just after its preparation, made it possible to determine a target value for glucose of 0.91 g / L a confidence interval of 0.8 to 1.02 g / L;

for creatinine a target value of 9.02 mg / L and a confidence interval of 7.5 to 10.5 mg / L and for magnesium a target value of 16.63 mg / L and a confidence interval of 13, 3 to 19.9 mg / L. This control was compared to the commercial control used to validate glucose, creatinine and magnesium assay results for 30 days.

The results obtained during the serum control are prepared with sodium azide as a preservative; it is comparable in quality to the commercial pendant control 30 days in the case of glucose, 29 days in the case of creatinine and 30 days in the case of magnesium.

The present invention relates to the preparation of the creatinine preparation using the preservative which can be used to validate the blood glucose, creatinine and magnesium assay for at least four (04) weeks. .

Key words: Internal quality control (IQC), commercial control, house control serum, biochemical variables.

(10)

Réalisé par Carina ALOFA X

LISTES DES TABLEAUX ET FIGURES TABLEAUX

Tableau I : Mode opératoire du dosage du glucose……….. 15 Tableau II : Mode opératoire du dosage de la créatinine………. 15 Tableau III : Mode opératoire du dosage du magnésium………. 16 Tableau IV : Valeur cible et intervalle de confiance du contrôle commercialisé « ELITROL

I »……… 17

Tableau V : Résultats issus du calcul des valeurs cibles, des écart-types, des CV et des intervalles de confiances de chaque paramètre pour la répétabilité………. 17

(11)

Réalisé par Carina ALOFA XI

FIGURES

Figure 1 : Variations des valeurs des dosages du glucose du sérum contrôle avec

conservateur………... 18

Figure 2 : Variations des valeurs des dosages du glucose du contrôle commercial………….. 18

Figure 3 : Variations des valeurs des dosages de la créatinine du sérum contrôle avec

Figure 4 : Variations des valeurs des dosages de la créatinine du contrôle commercial……. 19

Figure 5 : Variations des valeurs des dosages du magnésium du sérum contrôle avec

Figure 6 : Variations des valeurs des dosages du magnésium de contrôle commercial……. 20

Figure 7: Représentation graphique des valeurs des dosages du glucose selon les moyennes

± écart-type…….……….. 21

Figure 8: Représentation graphique des valeurs des dosages de la créatinine selon les

moyennes ± écart-type……… 21

Figure 9: Représentation graphique des valeurs des dosages du magnésium selon les

moyennes ± écart-type……… 22

(12)

Réalisé par Carina ALOFA XII

SOMMAIRE

INTRODUCTION

1ère PARTIE : SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE

2ème PARTIE : CADRES – MATERIEL ET METHODOLOGIE DE TRAVAIL 3ème PARTIE : RESULTATS – DISCUSSION

CONCLUSION ET SUGGESTIONS BIBLIOGRAPHIE

(13)

Réalisé par Carina ALOFA 1

INTRODUCTION

L’importance de l’analyse biologique dans le domaine de la santé humaine, impose une qualité constante, vérifiée en permanence par la mise en œuvre d’un contrôle de qualité. Le contrôle de qualité en biologie clinique se rapporte à la fiabilité des résultats fournis par le laboratoire au bénéfice d’un patient. C’est l’ensemble des procédures définissant les moyens utilisés par le biologiste de façon permanente pour détecter et corriger l’erreur pouvant entacher les résultats des examens biologiques. Dans certains pays, le contrôle de qualité est rendu obligatoire par le législateur, ce qui n’est pas encore le cas au Bénin.

L'enjeu de la recherche de la qualité totale par le laboratoire est donc la fidélisation des clients et une bonne image de marque. Cette qualité résulte de l'adéquation entre les moyens mis en œuvre par le laboratoire dans les processus opératoires et les informations attendues par le médecin prescripteur.

Malheureusement, la plupart des laboratoires, surtout ceux aux ressources limitées, ne respectent pas toujours cette démarche qualité à cause du coût élevé des contrôles commerciaux. A cet effet certains laboratoires utilisent l’étalon comme contrôle, lequel est préalablement utilisé pour la calibration et ne répond pas aux normes. Par contre, d’autres laboratoires préparent eux-mêmes le sérum contrôle. Mais, ce dernier n’ayant préalablement pas un intervalle de confiance, un mode de conservation appropriée et une durée de stabilité connue, ne peut être utilisé pour valider les résultats de dosage.

C’est dans cette optique que nous nous sommes proposé de préparer un sérum contrôle interne afin d’étudier sa variabilité chaque jour pour déterminer la durée de stabilité et le mode de conservation pour son utilisation ultérieure dans la validation des résultats de glycémie, de créatininémie et de magnésémie. Le thème de ce travail est intitulé «ESSAI DE PREPARATION DU SERUM CONTROLE A L’HOPITAL BETHESDA : DUREE DE STABILITE DU GLUCOSE, DE LA CREATININE ET DU MAGNESIUM ». L’objectif général de ce thème est de déterminer les conditions d’utilisation du sérum contrôle interne pour le dosage du glucose, de la créatinine et du magnésium.

(14)

Réalisé par Carina ALOFA 2 De façon spécifique, il s’agit de :

• Préparer le sérum contrôle à partir d’un pool de sérum pré testé

• Réaliser la répétabilité et la reproductibilité des dosages des paramètres biochimiques

• Déterminer la variabilité des paramètres biochimiques (moyenne, variance, l’écart type …)

• Déterminer les conditions d’utilisation du sérum contrôle maison.

(15)

1 SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE

1.1 Contrôle de qualité au laboratoire

Dans un sens large, le contrôle de qualité peut se définir comme un ensemble de moyens pour assurer la fiabilité des résultats jour après jour et sur une longue période de temps. Il s’applique à tous les types de méthodes, soit quantitatifs, semi-quantitatifs ou qualitatifs. Il est constitué du contrôle interne et externe de qualité. Selon le type de la méthode et la catégorie de matériaux de contrôle utilisés, il renseigne sur les indicateurs de performance telle l’exactitude, la fidélité et la justesse. (Lapointe, 2011)

1.1.1 Historique de la gestion de qualité au laboratoire

Les concepts de gestion de la qualité utilisés aujourd’hui sont apparus au 20ème siècle et proviennent principalement de la croissance des processus de production et de vente.

Un des premiers concepts de la gestion de la qualité a été le contrôle de qualité du produit.

Shewhart a développé une méthode de contrôle statistique des processus dans les années 1920, formant ainsi la base des procédures de contrôle qualité au laboratoire. Les méthodes de contrôle qualité n’ont pas été appliquées aux laboratoires jusque dans les années 1940.

D’autres chercheurs et innovateurs tels que Feigenbaum, Ishikawa, et Taguchi ont enrichi ces concepts (OMS, 2013). Les travaux les plus récents et les plus importants pour le laboratoire sont les travaux de Galvin sur la réduction des erreurs à micro échelle.

La gestion de la qualité n’est donc pas un nouveau concept (OMS, 2013).

1.1.2 Importance du contrôle de qualité

La qualité au laboratoire peut être définie comme la justesse, la fiabilité des résultats d’analyses. Les résultats au laboratoire doivent être aussi juste que possible, tous les aspects des activités de laboratoire doivent être fiables et le rendu doit être correct afin d’être utilisé à des fins cliniques ou de Santé Publique. Lorsque des analyses sont pratiquées, il existe toujours un certain degré d’inexactitude. Le défi est de réduire autant que possible le niveau d’inexactitude en tenant compte des limites des systèmes d’analyse.

Un niveau d’exactitude de 99% peut apparaître à première vue comme acceptable, mais le 1% d’erreur en découlant peut devenir particulièrement important dans un système dans lequel de nombreux événements se produisent, cas typique du laboratoire d’analyse.

(16)

Réalisé par Carina ALOFA 4 Les laboratoires d’analyses produisent des résultats qui sont largement utilisés à des fins clinques ou de santé publique et les bénéfices pour la santé dépendent de la justesse de ces analyses et du rendu des résultats. Si des résultats inexacts sont rendus, les conséquences peuvent être très graves : traitements inutiles, complications du traitement, traitement inapproprié, retard dans l’établissement d’un diagnostic correct, analyses supplémentaires et inutiles.

Ces conséquences entraînent une augmentation en coût, en temps, en ressources humaines et n’apportent aucun bénéfice au patient. (OMS 2013)

1.1.3 Contrôle de qualité des disciplines biomédicales

Le processus de contrôle qualité varie selon le type de méthode d’analyse utilisé au laboratoire produisant des résultats quantitatifs, qualitatifs ou semi-quantitatifs. Ces processus diffèrent ainsi :

Les analyses quantitatives mesurent la quantité d’un analyte présent dans l’échantillon, les mesures ont besoin d’être justes et précises. La mesure fournit une valeur numérique, exprimée dans une unité de mesure particulière. Par exemple, le résultat d’un test de glucose dans le sang peut être donné comme suit : 5mg/dL.

Les analyses qualitatives sont celles qui mesurent la présence ou l’absence d’une substance, ou évaluent les caractéristiques cellulaires telles que la morphologie. Les résultats ne sont pas exprimés en valeur numérique mais en termes qualitatifs tels que

«positif » ou « négatif » ; « réactif » ou « non réactif » ; « normal »ou « anormal » ;

«croissance » ou « pas de croissance ». Exemples d’examens qualitatifs : examens microscopiques, examens sérologiques pour la recherche de la présence ou non d’antigènes et d’anticorps, examens microbiologiques.

Les analyses semi-quantitatives sont similaires aux analyses qualitatives, par le fait que les résultats ne sont pas exprimés en termes quantitatifs. La différence est que les résultats sont exprimés par une estimation de la quantité présente de la substance mesurée. Les résultats sont exprimés par les termes suivants « traces », « quantité modérée », ou « 1+, 2+, or 3+ ». Exemples : bandelettes urinaires, recherche de corps cétoniques, et examens sérologiques par agglutination. Dans le cas d’autres examens sérologiques, le résultat est souvent exprimé sous forme de tiret – impliquant de nouveau un nombre, mais fournissant une estimation plus qu’une valeur exacte de la quantité présente. (OMS, 2013)

(17)

1.2 Contrôle de qualité en biochimie clinique

1.2.1 Différents types de contrôle de qualité 1.2.1.1 Contrôle interne de qualité (CIQ)

À tort, le contrôle interne de qualité est souvent réduit aux résultats de l’analyse de matériaux de contrôle. En réalité, il s’agit plutôt d’une procédure réalisée en même temps que la mesure quantitative ou l’évaluation qualitative d’analytes dans des échantillons de patients. Il implique l’utilisation de matériaux de contrôle de valeurs connues analysés à une fréquence déterminée par un processus analytique identique à celui utilisé pour les échantillons de patients. Il permet de surveiller en continue, tel un film, la qualité des résultats produits en évaluant des indicateurs de performance tels l’exactitude, la fidélité et la justesse des processus analytiques et en validant la calibration des instruments. Il suppose l’application de concepts statistiques pour l’établissement des valeurs cibles et des écarts acceptables, le suivi sur des supports tels le graphique de Levey-Jennings et la mise en place de règles telles que celles de Westgard pour déterminer l’acceptabilité des résultats produits. Il permet de détecter les erreurs aléatoires et systématiques (biais) et de prendre action pour prévenir la transmission de résultats erronés. (Lapointe, 2011)

1.2.1.2 Comparaison inter laboratoires

C’est l’une des méthodes les plus élémentaires pour évaluer inexactitude et imprécision et comparer les moyennes et les écart-types de la méthode du laboratoire aux autres laboratoires utilisant le même automate et la même méthode (groupe de pairs). (Cooper, 2009)

1.2.1.3 Contrôle externe de qualité (CEQ)

Assurance qualité externe, évaluation externe de la qualité, essais d’aptitude, tests d’aptitude ou programmes d’assurance qualité externes (PAQE) sont autant de termes retrouvés dans la littérature pour parler de CEQ. Quel que soit le terme, le CEQ peut se définir comme une évaluation externe, indépendante et ponctuelle de la qualité des résultats produits. Il s’agit d’une photo à un moment précis de la performance des processus analytiques. Il implique la mesure de matériaux d’essais d’aptitude de valeurs inconnues analysées par un processus analytique identique à celui utilisé pour les échantillons de patients, mais à une fréquence déterminée par le fournisseur du PAQE.

(18)

Réalisé par Carina ALOFA 6 Selon les PAQE, il permet de vérifier du pré au post analytique ainsi que d’évaluer et de comparer différentes méthodes d’analyse. Il a également un objectif de formation continue et d’éducation. Il améliore la performance des participants et renforce la confiance dans les résultats transmis. Il peut aussi servir à démontrer la qualité des résultats à des tiers tels que médecins, patients, organisme d’agrément, etc. (Lapointe, 2011)

1.2.1.4 Contrôle interne de qualité externalisé

Lorsque le CIQ est réalisé par plusieurs laboratoires sur un même lot d’échantillons de contrôles, les résultats des différents laboratoires peuvent être confrontés entre eux par établissement des moyennes (généralement mensuel) et permet d’estimer la justesse.

Lors de son choix, le laboratoire privilégie des CIQ externalisés intégrant des fournisseurs de réactifs d’origines différentes afin d’assurer la pertinence de cette estimation. (SH GTA 06)

1.2.2 Outils de contrôle de qualité 1.2.2.1 Matériaux de contrôle

Les matériaux de contrôle (MC) ou matériaux de référence (MR) sont des matériaux de valeurs connues (quantitatives, semi-quantitatives ou qualitatives) simulant le plus possible les échantillons réels de patients. Ils ont des propriétés d’homogénéité et de stabilité spécifiées et, idéalement, sont disponibles en grande quantité. Ils sont soumis, en tout ou en partie, au même processus analytique que les échantillons de patients. Ils permettent de vérifier, tout au long de la série de mesures, la qualité des résultats produits. Ils ne doivent pas être confondus avec les étalons ou les calibrateurs qui ne peuvent en aucun cas être utilisés comme matériaux de contrôle. Les matériaux de contrôle servent au contrôle interne de la qualité. (Lapointe, 2011)

1.2.2.2 Matériaux de référence certifié

Les MRC sont des « MR, accompagnés d’une documentation délivrée par un organisme faisant autorité et fournissant une ou plusieurs valeurs de propriétés spécifiées avec les incertitudes et les traçabilités associées, en utilisant des procédures valables.» (Lapointe, 2011)

(19)

Réalisé par Carina ALOFA 7 1.2.2.3 Matériaux de référence maison

Les MRM sont des matériaux de référence fabriqués par le laboratoire à partir d’échantillons de patients ou d’ajout dosé d’étalons dans une matrice biologique.

(Lapointe, 2011)

1.3 Fabrication d’un sérum contrôle de référence maison

1.3.1 Mode de préparation Critère de sélection

Avant d’effectuer le mélange de sérum provenant de différents patients, il faut s'assurer de leur innocuité (recherche d'antigènes : Ag HBs, HCV, VIH, etc) et de vérifier leurs caractéristiques générales (pH, turbidité, homogénéité).

Mode de Préparation selon L’OMS

Le pool de sérum contrôle liquide stabilisé par des conservateurs a été établi selon la méthode de l'OMS. Cette procédure est applicable à la fois au sérum humain, ainsi qu’au sérum bovin. Cette préparation est économique et appropriée pour une utilisation dans les laboratoires des pays en développement.

 Collecter environ 1-2 litres de sang (humain ou bovin) dans un plastique propre de 5 litres.

 Laisser coaguler à température ambiante pendant environ 30 minutes.

 Trancher le caillot en petits morceaux à l'aide d'un couteau bien aiguisé et laissez le plastique au réfrigérateur (2-8°C) pendant 12 heures afin de permettre au sérum de suinter. Décanter le sérum brut dans un bécher.

 Transférer ce sérum brut dans plusieurs tubes de centrifugeuse en verre (taille 15x120 mm) et puis centrifuger à 3500 trs/ minute pendant 10 minutes.

 Décanter le sérum clair dans une bouteille en plastique d’un litre.

 Mélanger soigneusement le contenu et distribuer le sérum dans les flacons stérile de 5 ml.

 Identifier les flacons et conserver à -20°C; les laboratoires peuvent décider du volume d’aliquotes en fonction de leur besoins.

Pour surveiller la performance journalière en laboratoire avec CQ interne, il est préférable d’utiliser différents niveaux de matériaux CQ pour couvrir l'ensemble des gammes de

(20)

Réalisé par Carina ALOFA 8 résultats. Ainsi, les méthodes de préparation du CQ sont de trois niveaux : matériaux de contrôle faible, normal ou élevé.

 Valeur cible

La valeur vraie est la quantité réelle de substance contenue dans l’échantillon utilisé pour réaliser le contrôle. En pratique, il faut faire référence à une valeur particulière, appelée valeur cible. La détermination de la valeur cible est réalisée par répétition des dosages et utilisation de la statistique, soit à l’intérieur d’un même laboratoire, soit par le concours de plusieurs laboratoires. La valeur est obtenue par calcul itératif (2 ou 3 fois) en éliminant chaque fois les valeurs aberrantes (supérieures à deux ou trois écart-types). La valeur cible est donc une moyenne tronquée, qui peut varier pour un même échantillon selon la méthodologie. (SH GTA 06).

 Limite acceptable

L’analyse à des instants différents d’un même échantillon, donne le plus souvent des résultats différents entre eux et différents de la valeur vraie. Si un échantillon est analysé une seule fois, ce qui est généralement le cas des sérums de malade, il y a donc toutes les chances de rendre un résultat faux. Mais cela ne signifie pas que ce résultat est mauvais ou inutile, les moyens analytiques permettent de maintenir l’erreur dans des limites acceptables, compte tenu de la méthodologie. Ces limites acceptables sont définies statistiquement à partir d’un grand nombre de résultats et sont rapportées à la valeur cible, soit en utilisant les percentiles, soit en utilisant l’écart type ou le double de l’écart type (SH GTA 06).

1.3.2 Critères de validation

Exactitude

L’exactitude se définit comme l’étroitesse de l’accord entre une valeur mesurée et une valeur vraie d’un mesurande. N’étant pas une grandeur, elle ne s’exprime pas numériquement. L’exactitude s’obtient par comparaison de la valeur mesurée avec la valeur de référence certifiée, la valeur du fabricant ou avec celle du groupe de pairs.

(Lapointe, 2011) Fidélité

La fidélité se définit comme l’étroitesse de l’accord entre les indications ou les valeurs mesurées obtenues par des mesures répétées du même objet ou d’objets similaires dans des conditions spécifiées. Elle s’exprime généralement de façon numérique par l’écart-type, la

(21)

Réalisé par Carina ALOFA 9 variance ou le coefficient de variation. Elle sert à définir la répétabilité, la fidélité intermédiaire et la reproductibilité de mesure. Elle ne doit pas être confondue avec l’exactitude. (Lapointe, 2011)

Répétabilite

La répétabilité correspond à l’étroitesse de l’accord, à un niveau donné, dans la zone quantifiable de la méthode entre les résultats individuels obtenus sur un même objet ou des objets similaires soumis à l’analyse dans les conditions suivantes : même analyte, même système de mesure, même méthode, même lieu, courte période de temps. La répétabilité s’exprime habituellement sous forme de coefficient de variation (CV) et correspond, en biologie médicale, au CV intra-série. (Lapointe, 2011)

Fidélité intermédiaire

La fidélité intermédiaire correspond à l’étroitesse de l’accord, à un niveau donné, dans la zone quantifiable de la méthode, entre les résultats individuels obtenus sur un même objet ou des objets similaires soumis à l’analyse dans les conditions suivantes : même méthode, même lieu, période de temps étendue. Par conséquent, les conditions relatives à l’analyte et au système de mesure varient. La fidélité intermédiaire s’exprime habituellement sous forme de coefficient de variation (CV) et correspond, en biologie médicale, au CV inter- série. (Lapointe, 2011)

Reproductibilité

La reproductibilité correspond à l’étroitesse de l’accord, à un niveau donné, dans la zone quantifiable de la méthode, entre les résultats individuels obtenus sur un même objet ou des objets similaires soumis à l’analyse en faisant varier au moins un des éléments suivants: l’analyste, le système de mesure, la méthode, le lieu. La reproductibilité s’exprime habituellement sous forme de coefficient de variation (CV). (Lapointe, 2011) Justesse

La justesse ou exactitude est un résultat de mesure qui est le plus proche de la valeur vraie.

(Lapointe, 2011)

Processus de validation

L’écart-type est communément utilisé pour préparer des tableaux de Levey-Jennings (L-J ou LJ). Le tableau de Levey-Jennings présente les valeurs de contrôle de qualité (série par série ou jour après jour) chronologiquement sous forme de graphique. Chaque test et chaque niveau de contrôle possède son tableau. La première étape est de calculer les

(22)

Réalisé par Carina ALOFA 10 limites de décision. Ces limites sont de plus ou moins 1, 2 ou 3ET par rapport à la moyenne.

Les règles de Westgard permettent de détecter les erreurs aléatoires et les erreurs systématiques et de les distinguer (13s et R4s pour détecter les premières et 22s, 41s et 10x pour détecter les secondes). S’il n’y a aucune règle d’alarme ni de rejet, les CIQ sont conformes et la série peut être validée. Pour les règles d’alarme, la série peut être validée mais une surveillance est nécessaire. Parmi les règles d’alarme, il est nécessaire de différencier la règle 12s des règles 41s et 10x. La règle 12s demande une surveillance particulière du système analytique puisque selon le résultat du CIQ suivant, il peut être généré une règle de rejet 22s ou R4s. En cas de règle de rejet, une action immédiate est nécessaire pour pouvoir valider la série.

Regle 12set : C’est une règle d’alarme qui est violée lorsqu’une seule valeur de contrôle est en dehors des limites de ± 2ET. Il ne faut pas oublier que sans erreur analytique surajoutée, environ 4,5 % de tous les résultats de contrôle seront situés entre les limites de 2 et 3ET.

Cette règle signale simplement qu’une erreur aléatoire ou systématique peut être présente dans le système analytique. Les valeurs des contrôles des séries antérieures et en cours doivent être prises en compte. Si aucune relation ne peut être trouvée et ni aucune source d’erreur identifiée, une seule valeur de contrôle en dehors des limites de 2ET est une erreur aléatoire acceptable. Alors, les résultats de patients peuvent être validés.

(23)

Réalisé par Carina ALOFA 11 Règle 13set : Cette règle détecte les erreurs aléatoires inacceptables et peut aussi indiquer le début d’une erreur systématique importante. Tout résultat de CQ en dehors des ±3ET viole cette règle.

Quand un processus analytique est sous contrôle, environ 68% des valeurs de CQ sont comprises entre ± 1ET (écart-type). De la même manière, 95,5% des valeurs de CQ sont comprises entre ± 2ET par rapport à la moyenne. Environ 4,5%de toutes les données seront en dehors des limites de ± 2ET quand le processus analytique est sous contrôle. Environ 99,7% de toutes les valeurs de CQ sont comprises entre ± 3ET par rapport à la moyenne.

Comme seulement 0,3% ou 3 valeurs sur 1000 seront situées en dehors des limites ± 3ET, toute valeur en dehors des ± 3ET sera associée à un état d’erreur significatif et les résultats de patients ne devront pas être validés.

(24)

2 CADRES, MATERIELS ET METHODOLOGIE DE TRAVAIL

2.1 Cadres d’études

2.1.1 Cadre institutionnel

Notre formation a eu lieu à l’Ecole Polytechnique d’Abomey Calavi (EPAC). Elle comprend le secteur industriel et le secteur biologique dans lequel se trouve le département de Génie de Biologie Humaine (GBH) où nous avons suivi notre formation durant trois (03) ans.

2.1.2 Cadre technique

Notre étude a eu lieu au laboratoire de l’hôpital Bethesda de Cotonou.

Présentation du centre

L’Hôpital Bethesda de Cotonou est situé dans le quartier Gbèdjromèdé non loin du marché wologuèdè. Il présente plusieurs services dans lesquelles se font différentes prestations.

Parmi ces services nous pouvons citer : Médecine, Chirurgie, Ophtalmologie, Pédiatrie, Maternité, Laboratoires, Service d’ORL, Service de radiologie, Bloc opératoire, Cardiologie, Gastrologie, Kinésithérapie.

Présentation du Laboratoire

Le laboratoire situé dans l’enceinte de l’hôpital, juste en face du Service de Radiologie, à environ cinquante (50) mètres de l’entrée principale comprend des sections comme la Sérologie, la Bactériologie, l’Hématologie-parasitologie, la Biochimie.

Comme autres locaux, nous pouvons citer la Salle de Prélèvement, la Salle de Garde, le Bureau du Chef de Service, l’accueil, le Secrétariat, la Laverie.

Son personnel est composé de 06 biotechnologistes, 02 aides-soignants et 01 secrétaire répartis en équipes de garde et de permanence.

Nos manipulations se sont déroulées dans la section biochimie.

2.2 Matériels

Pour la préparation de notre sérum contrôle, nous avons utilisé le matériel suivant : - Aiguille,

- Garrot,

(25)

Réalisé par Carina ALOFA 13 - Alcool,

- Coton,

- Tubes à hémolyse de 5 mL - Tubes Eppendorf

- Micropipettes et cônes neufs - Réfrigérateur,

- Automate de marque SELECTRA

- Réactifs de glycémie, de créatininémie, de magnésémie (ELITech) - Sérum contrôle commercialisé« ELITROL I »

- Azide de sodium pur (conservateur)

2.3 Méthodologie de travail

2.3.1 Type et période d’étude

Il s'agit d'une étude analytique qui s’est déroulée sur une période allant du 29 juillet au 30 août 2017.

2.3.2 Population d’étude Population d’étude :

Notre étude a porté sur un pool de sérums humains.

Critère d'inclusion

Ont été inclus dans cette étude les échantillons testés sur des personnes saines dont les paramètres à doser sont normaux.

Critère d'exclusion

Ont été exclu de l’étude les échantillons dont les tests sérologiques (HIV, AgHBs et HCV) ont été positifs.

2.3.3 Procédure

La tâche effectuée pour la validation des résultats des dosages du glucose, de la créatinine et du magnésium a consisté à :

 Choisir les échantillons selon les critères prédéfinis (négatifs aux tests HIV, AgHBS et HCV et ayant des valeurs normales pour les paramètres choisis) ;

(26)

 Réaliser le pool de sérum en ajoutant l’azide de sodium (conservateur) ;

 Doser le pool de sérum préparé ;

 Réaliser une série de dix dosages pour chaque paramètre choisi à l’aide de l’automate ;

 Valider ces dosages à l’aide d’un contrôle commercialisé ;

 Déterminer la valeur cible et l’intervalle de confiance du sérum contrôle selon les paramètres choisis ;

 Répartir le sérum contrôle dans les tubes Eppendorf ;

 Conserver à -20°C

NB : Avant l’utilisation, sortir les spécimens du congélateur et laisser à la température ambiante (à 25°C). Les spécimens décongelés ne doivent plus être recongelés.

Protocole de la préparation du sérum contrôle

- Rassembler les échantillons selon les critères prédéfinis - Centrifuger et recueillir les sérums

- Mélanger les sérums recueillis dans un bécher

- Mettre le mélange sur un agitateur à 130 tours/minute pendant 60 minutes - Prendre une fiole jaugée de 250 ml et mesurer 100 ml de sérum

- Peser 0,1g du conservateur (azide de sodium pur: 1g pour 1L du sérum) - Verser les 0,1g du conservateur pesé dans un autre bécher

- Y ajouter les 100 ml de sérum

- Bien homogénéiser et déposer sur l’agitateur à 130 tours/minute pendant 20 minutes

- Distribuer 1ml de sérum préparé avec conservateur dans les tubes Eppendorf, Marquer les tubes et déposer au congélateur à -20°C.

2.3.4 Dosage du glucose Principe

Elle est basée sur la méthode de Trinder. Le glucose est oxydé par le glucose oxydase (GOD) en acide gluconique et en H2O2. En présence de la peroxydase, le H2O2 formé réagit avec le chloro-4-phenol et le 4-amino antipyrine (4AAP) pour former un chromogène: la Quinonémine de couleur rouge dont l’absorbance est mesurée à 505 nm.

(27)

Réalisé par Carina ALOFA 15 Tableau I : Mode opératoire du dosage du glucose (ELITech)

Laisser au bain marie pendant 10 minutes. Faire la lecture au spectrophotomètre à 505nm.

2.3.5 Dosage de la créatinine Principe

La créatinine forme en présence de l’acide picrique en milieu alcalin du picrate de créatinine dont la vitesse d’apparition lue à 505 nm est proportionnelle à la concentration en créatinine.

Tableau II : Mode opératoire du dosage de la créatinine (ELITech)

Mélanger et lire à 505 nm la variation de l’absorbance DO.

2.3.6 Dosage du magnésium Principe

Le calmagite, un indicateur métallochronique, forme un complexe coloré, en milieu alcalin avec le magnésium. L’absorbance du complexe est mesurée à 546nm et est proportionnelle à la concentration en magnésium dans l’échantillon.

Blanc Etalon Dosage

Réactif - 1000 μL 1000 μL

Eau distillée 1000 µl - -

Etalon - 10 μL -

Contrôle préparé - - 10 µl

Réactif 1 - 500 μL 500 μL

Réactif 2 - 500 µl 500 µl

Eau distillée 1000 µl

Etalon - 100 μL -

Contrôle préparé - - 100 μL

(28)

Réalisé par Carina ALOFA 16 Tableau III : Mode opératoire du dosage du magnésium (ELITech)

Réactif - 1000µl 1000µl

Eau distillée 1000µl - -

Etalon - 10µl -

Contrôle préparé - - 10µl

Mélanger et incuber 5 minutes à 37°C. Faire le zéro avec le blanc. Lire la DO de l’étalon et du contrôle préparé. La lecture se fait à 546nm. La réaction est stable pendant 60 minutes 2.4 Outils statistiques

 La moyenne (𝒙̅) ou valeur cible (VC) Soient 𝒙 une variable aléatoire et 𝒏 l’effectif total

(𝒙̅) =𝒙_𝟏+ 𝒙_𝟐… + 𝒙_𝒏 𝒏

 L’écart – type ET, s’obtient à partir de la formule suivante :

𝐄𝐓 = √∑(𝒙_𝒊− 𝒙̅)^𝟐 𝒏 − 𝟏

𝒏

𝒊=𝟎

 Coefficient de variation (CV %) : Mesure de la dispersion de résultats calculées en divisant l’écart-type par la moyenne et en reportant le résultat sous forme de pourcentage.

CV = ^𝐸𝑇 𝑥̅

100

 Intervalle de confiance (IC) : IC

= [-2ET, +2ET]

 Traitement et analyse des données

La saisie des données, les moyennes avec leur écart type ont été réalisées à l’aide du logiciel Microsoft Excel 2007.

(29)

3 RESULTATS ET DISCUSSION

3.1 Résultats

Les résultats et les calculs obtenus après les manipulations sont consignés dans les tableaux ci-dessous.

Tableau IV : Valeur cible et intervalle de confiance du contrôle commercialisé

« ELITROL I »

1- Calcul des valeurs cibles, des écarts types, des CV et des intervalles de confiances de chaque paramètre

Tableau V : Résultats issus du calcul des valeurs cibles, des écart-types, des CV et des intervalles de confiances de chaque paramètre pour la répétabilité.

Valeurs Glucose (g/L) Créatinine (mg/L) Magnésium (mg/L)

Valeur cible 0,91 9,02 16,63

Ecart-type 0,056 0,748 1,645

CV (%) 6,15 8,29 9,89

Intervalle de confiance

[0,8 - 1,02] [7,5 - 10,5] [13,3 - 19,9]

Ce tableau résume respectivement pour le glucose, la créatinine et le magnésium une valeur cible de 0,91g/L ; 9,02 mg/L et 16,63mg /L ; un écart-type égale à 0,056 ; 0,748 et 1,645 ; un intervalle de confiance compris entre [0,8 – 1,02] g/L ; [7,5 – 10,5] mg/L et [13,3 – 19,9] mg/L ; un coefficient de variation supérieur à 5% pour tous les paramètres (6,15% ; 8,29% et 9,89%).

Valeurs Glucose (g/L) Créatinine (mg/L) Magnésium (mg/L)

Valeur cible 0,95 9,1 19,20

Intervalle de confiance

[0,81 – 1,09] [7,5 – 13,7] [16,90 -21,5]

(30)

Réalisé par Carina ALOFA 18 2- Représentation des graphes illustrant l’évolution des valeurs du contrôle

Figure 1 : Variations des valeurs des dosages du glucose du sérum contrôle avec conservateur

L’observation de ce graphe montre que les valeurs des dosages du glucose du sérum contrôle avec conservateur sont dans l’intervalle de confiance pendant 30 jours; ce qui traduit la stabilité du sérum contrôle pendant 30 jours.

Figure 2 : Variations des valeurs des dosages du glucose du contrôle commercial L’observation de ce graphe montre que les valeurs des dosages du glucose du contrôle commercial sont dans l’intervalle de confiance pendant toute la période d’étude.

0,7 0,8 0,9 1 1,1

J1 J3 J5 J7 J9 J11 J13 J15 J17 J19 J21 J23 J25 J27 J29

Glucose avec conservateur M-3ET M-2ET M-ET M M+ET M+2ET M+3ET

0,7 0,9 1,1

Glucose du contrôle commercial M-3ET M-2ET M-ET M M+ET M+2ET M+3ET

(31)

Réalisé par Carina ALOFA 19 Figure 3 : Variations des valeurs des dosages de la créatinine du sérum contrôle avec conservateur

L’observation de ce graphe montre que les valeurs des dosages de la créatinine du sérum contrôle avec conservateur sont dans l’intervalle de confiance pendant 29 jours; ce qui traduit la stabilité du sérum contrôle pendant 29 jours.

Figure 4 : Variations des valeurs des dosages de la créatinine du contrôle commercial L’observation de ce graphe montre que les valeurs des dosages de la créatinine du contrôle commercial sont dans l’intervalle de confiance pendant toute la période d’étude.

7 8,5 10

Créatinine avec conservateur M-3ET M-2ET M-ET M M+ET M+2ET M+3ET

6 8 10 12 14

créatinine du contrôle commercial

M-3ET M-2ET M-ET M M+ET M+2ET M+3ET

(32)

Réalisé par Carina ALOFA 20 Figure 5: Variations des valeurs des dosages du magnésium du sérum contrôle avec conservateur

L’observation de ce graphe montre que les valeurs des dosages du magnésium du sérum contrôle avec conservateur sont dans l’intervalle de confiance pendant 30 jours; ce qui traduit la stabilité du sérum contrôle pendant 30 jours.

Figure 6: Variations des valeurs des dosages du magnésium de contrôle commercial L’observation de ce graphe montre que les valeurs des dosages du magnésium du contrôle commercial sont dans l’intervalle de confiance pendant toute la période d’étude.

10 15 20

Magnésium avec conservateur M-3ET

M-2ET M-ET M M+ET M+2ET M+3ET

13 18 23

Magnésium du contrôle commercial M-3ET

M-2ET M-ET M M+ET M+2ET M+3ET

(33)

Réalisé par Carina ALOFA 21 3- Représentation graphique des valeurs des dosages de chaque paramètre selon les

moyennes ± écart-type

Figure 7: Représentation graphique des valeurs des dosages du glucose selon les moyennes ± écart-type

L’observation de ces histogrammes montre que 67%, 33% et 0% des valeurs du contrôle avec conservateur et du contrôle commercial sont comprise respectivement entre ±1ET,

±2ET et ±3ET par rapport à la moyenne pour le dosage du glucose. Les résultats du contrôle avec conservateur et ceux du contrôle commercial sont donc sous contrôle.

Figure 8: Représentation graphique des valeurs des dosages de la créatinine selon les moyennes ± écart-type

Glucose avec conservateur

Glucose commercial

67% 67%

33% 33%

0% 0%

M±ET M±2ET M±3ET

Créatinine avec conservateur

Créatinine commercial

73% 73%

23% 27%

3% 0%

M±ET M±2ET M±3ET

(34)

Réalisé par Carina ALOFA 22 L’observation de ces histogrammes montre que 73%, 23% et 3% des valeurs du contrôle avec conservateur et 73%, 27% et 0% des valeurs du contrôle commercial sont comprise respectivement entre ±1ET, ±2ET et ±3ET par rapport à la moyenne pour le dosage de la créatinine. Les résultats du contrôle avec conservateur et ceux du contrôle commercial sont donc sous contrôle.

Figure 9: Représentation graphique des valeurs des dosages du magnésium selon les moyennes ± écart-type

L’observation de ces histogrammes montre que 70%, 27% et 3% des valeurs du contrôle avec conservateur et 57%, 43% et 0% des valeurs du contrôle commercial sont comprise respectivement entre ±1ET, ±2ET et ±3ET par rapport à la moyenne pour le dosage du magnésium. Les résultats du contrôle avec conservateur et ceux du contrôle commercial sont donc sous contrôle.

Magnésium avec conservateur

Magnésium commercial 70%

57%

27%

43%

3% 0%

M±ET M±2ET M±3ET

(35)

3.2 Discussion

Le contrôle de qualité est un outil facilitant et fiabilisant les diagnostics médicaux. Le contrôle de qualité est exigeant et nécessite la réalisation de plusieurs étapes primordiales afin d’assurer la confiance dans les résultats transmis.

La norme précise que l’échantillon de contrôle doit avoir une composition la plus proche possible des échantillons biologiques analysés. La plupart des solutions de contrôle proposées par les fournisseurs sont constitués d’une matrice non-humaine. Il en résulte des effets matrices que des différences de comportement soient mises en évidence entre les solutions de contrôle et les échantillons de patients, pouvant entraîner de faux rejets ou de fausses acceptations selon les cas. Les niveaux de concentration proposés par les solutions de contrôle commerciales ne correspondent pas toujours à nos zones d’intérêt clinique alors que cette disposition est préconisée dans la norme. L’alternative possible à l’utilisation de solutions de contrôle commerciales, citée dans le SHGTA-06, est l’utilisation de pools d’échantillons biologiques. Cette solution a plusieurs avantages:

indépendance des fournisseurs, matrice humaine, choix du niveau de concentration dans les zone d’intérêt clinique. Cependant l’inconvénient majeur est de devoir prouver la stabilité du paramètre durant toute la période d’utilisation du pool. De plus il faut pouvoir collecter suffisamment de sérums pour une utilisation sur une longue période. (Sègues, 2015)

Le sérum contrôle maison a été préparé au laboratoire à partir d’un pool de sérum humain sur lequel une répétabilité du dosage de glucose, de la créatinine et du magnésium a été réalisée. Les mesures effectuées dans la même série sur le sérum contrôle préparé ont permis de mettre en évidence une mauvaise répétabilité. Selon Bernard (Bernard, 1989), le coefficient de variation associé aux dosages en série du glucose, de la créatinine et du magnésium sanguins devrait être inférieur à 5%. Nos résultats ont montré que les coefficients de variation du dosage du glucose, de la créatinine et du magnésium sont supérieur à 5% pour le sérum contrôle préparé avec l’azide de sodium. Cette observation serait due à une probable erreur dans la préparation du sérum contrôle ou à des erreurs aléatoires lors du test de répétabilité.

(36)

Réalisé par Carina ALOFA 24 Afin de déterminer l’efficacité d’un conservateur pour un meilleur résultat, durant trente (30) jours, les paramètres ont été dosés sur le sérum avec azide de sodium (NaN3), lesquels ont été conservés à – 20°C.

D’une part, selon Amoussou et Domingo (Amoussou et coll. 2009) (Domingo et coll.

2013), le sérum contrôle avec conservateur congelé ou mis au frais est stable pendant au moins 10 jours pour la créatinine et d’autre part selon Tambse (Tambse et coll. 2015), la stabilité du sérum contrôle avec conservateur congelé ou mis au frais compris entre 28 et 30 jours. Nos résultats ont montré que pour le dosage du glucose, le sérum contrôle préparé avec l’azide de sodium est stable pendant 30 jours. Quant à la créatinine, le sérum contrôle préparé avec l’azide de sodium est stable pendant 29 jours. La durée de stabilité du magnésium est de 30 jours. Ces observations révèlent une bonne stabilité du sérum contrôle avec agent conservateur.

Le sérum contrôle avec conservateur est meilleur en ce sens qu’il rend bien compte d’une faible dispersion des valeurs (67% pour glucose ; 73 % pour créatinine et 70% pour le magnésium) et implique de faible ressource de réalisation comparativement aux coûts du sérum contrôle commercial.

(37)

CONCLUSION

Au terme de notre étude portant sur la préparation du sérum contrôle interne à l’Hôpital BETHESDA de Cotonou, nous avons remarqué que les valeurs obtenues pour les dosages des paramètres choisis se situent dans les intervalles de confiance fixés pendant une période donnée. Nous pouvons conclure que le sérum contrôle avec l’azide de sodium conservé à -20°C est stable et peut être utilisé pendant au moins 04 semaines.

Notons que nos résultats ont été utiles pour le laboratoire car ceci leur permettra d’avoir une idée sur la durée et le mode de conservation approprié pour l’utilisation du sérum contrôle. D’après les résultats de notre étude, l’utilisation d’un contrôle de qualité est un moyen efficace pour maintenir la qualité des résultats du dosage des paramètres biochimiques afin de vérifier régulièrement le niveau de la qualité des résultats fournis par le laboratoire. Notre étude a été effectuée sur trois paramètres, il serait souhaitable de l’élargir à d’autres paramètres.

SUGGESTIONS

A l'issu de notre étude nous suggérons:

Aux techniciens de laboratoire :

- d’initier la préparation locale des solutions de contrôle de biochimie clinique ;

- d’assurer et garantir la qualité des analyses biochimiques ainsi que la maintenance des appareils de laboratoire.

Aux autorités de l’EPAC :

D’améliorer les conditions d’étude aussi bien en théorie qu’en pratique pour permettre aux étudiants de mieux s’adapter aux réalités du terrain.

(38)

Bibliographie

1. Lapointe S. (2011), Contrôle de qualité, La revue des biotechnologistes médicaux du Québéc : LABEXPERT, Vol. 1 No 4, p32

2. OMS, (2013), Système de Gestion de la Qualité au Laboratoire

3. Cooper G., (2009), Leçons de base de contrôle de qualité au laboratoire, BIO- RAD Laboratoires

4. SH GTA 06, (2005), Guide Technique d’accréditation: les contrôles de la qualité analytique en biologie médicale, Révision 00- Juillet 2005.

5. Sègues R., (2015), « Mise en place de la norme NF en iso 15189 au laboratoire : application à la gestion des contrôles de qualité et à un changement de méthode de dosage », Thèse pour l’obtention du DIPLOME d’ÉTAT de DOCTEUR EN MÉDECINE

6. Bernard S., (1989), Biochimie clinique, 2^cde éd., Edition Maloine Paris

7. Amoussou B. et coll (2009) « Préparation locale d’une solution de contrôle composite, pour le dosage du glucose, de l’urée, de la créatinine et des protides dans le sang ». Rapport de fin de formation ABM/ EPAC/UAC.

8. Domingo H. etcoll, (2013), «Evaluation de la durée de validité du sérum contrôle interne dans le dosage de l’urée et de la créatinine à l’hôpital de zone de OUIDAH», Rapport de fin de formation ABM/EPAC/UAC

9. Tambse V. et al ,(2015), Study of the stability of various biochemical analytes in pooled sera perserved at 4-8°C, Asian journal of biomedical and Pharmaceutical Sciences , 2015

(39)

Table des matières

LISTE DES ENSEIGNANTS DU DEPARTEMENT DE GENIE DE BIOLOGIE HUMAINE (GBH) ... III DEDICACE ... IV REMERCIEMENTS ... V HOMMAGES ... VI LISTES DES SIGLES ET ABREVIATIONS ... VII Résumé ... VIII Abstact ... IX LISTES DES TABLEAUX ET FIGURES ... X TABLEAUX ... X FIGURES ... XI SOMMAIRE ... XII

INTRODUCTION ... 1

1 SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE ... 3

1.1 Contrôle de qualité au laboratoire ... 3

1.1.1 Historique de la gestion de qualité au laboratoire ... 3

1.1.2 Importance du contrôle de qualité ... 3

1.1.3 Contrôle de qualité des disciplines biomédicales ... 4

1.2 Contrôle de qualité en biochimie clinique ... 5

1.2.1 Différents types de contrôle de qualité ... 5

1.2.2 Outils de contrôle de qualité ... 6

1.3 Fabrication d’un sérum contrôle de référence maison ... 7

1.3.1 Mode de préparation ... 7

1.3.2 Critères de validation ... 8

2 CADRES, MATERIELS ET METHODOLOGIE DE TRAVAIL ... 12

2.1 Cadres d’études ... 12

2.1.1 Cadre institutionnel ... 12

2.1.2 Cadre technique ... 12

2.2 Matériels ... 12

2.3 Méthodologie de travail ... 13

(40)

2.3.1 Type et période d’étude ... 13

2.3.2 Population d’étude ... 13

2.3.3 Procédure ... 13

2.3.4 Dosage du glucose ... 14

2.3.5 Dosage de la créatinine ... 15

2.3.6 Dosage du magnésium ... 15

2.4 Outils statistiques ... 16

3 RESULTATS ET DISCUSSION ... 17

3.1 Résultats ... 17

3.2 Discussion ... 23

CONCLUSION ... 25

SUGGESTIONS ... 25

Bibliographie ... 26