Contribution à l'étude de l'action de l'alpha-phénylindole et de son métabolisme

(1)

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Contribution à l’étude de l’action de

l’alpha-phénylindole et de son métabolisme

Georges Morel

To cite this version:

Georges Morel. Contribution à l’étude de l’action de l’alpha-phénylindole et de son métabolisme.

Santé. Université Paul Verlaine - Metz, 1980. Français. �NNT : 1980METZ001S�. �tel-01775636�

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(3)

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GI|IITRIBUTII|I{

A

DE

f c( - PHEllTtlllll0tE

SUJET

I ETUIIE

IIE I AGTII|]I

(4)

A T O U S C i t U X QUr ONT P A R T T C T P E A C E T R A V A T L

(5)

ce travair'

_{de Recàerche a été efrectué dans J,es Laboratoires}

de

L'INSTTTI]T NATTONAL

_{DE RECHERCTTE}

_{ET DE SECT.JRTTE}

_(T.N.P..S.)

545OO VANDOETJVRE

Les études sur l-e foie isoré et perfusé ont été téarisées au Laboratoire _{de phantacod.gnanie de LtIl.E.R.}

SCTENCES PT:ARTIACEUTTQI]ES _{ET BTOLOGTQUES} Université _{de NANC]' I}

(6)

(7)

P L A N

NITRODUCTTON

Proltr ié té s phg s i c o -c hin i clue s Propr iété s toxicol_ogiclues.

EæfîrtGffitr

PARAI{ETRES BTOLOGIQUES EN RELATTON AVEC L'EXPOSITTON A L'O,PHENWÏNDOLE

T - METHODOLOGTE r . 1 _{D o s a g e e t i d e n t i f i c a t i o n} d e s n o y a u x i n d o - l e s dans lrurine I . 2 _{D o s a E e d e j , a c i d e} _{h i p p u r i g u e} _{u r i n a i r e} r - 3 _{D o s a g e e t i d e n È i f i c a t i o n} _{d e s s - h g d r o x g i n d o r e s} d a n s r . , u r i n e I.4 _{Dosage de La serotonine} _urinaire

I.5 _{Dosages sanguins}

I.6 Expérinentatjons _animales

Aninaux

Expér intentations

_{chzonique s}

Expér imentation aiguë.

3

4

5 I

t2

t 7

r7

t8

2l

a ) b ) c )

(8)

TÏ - RESULTATS

Expérinentation sur -le Lapin - Intoxication chronique ( ininl-ation)

Expérimentation sur -l.e Rat

A ) l n t o x i c a t i o n a i g u ë a ) B i L a n s s a n g u i n s b ) E L i n i n a t i o n u r i n a i r e

c) Prétraitement au trgptophane.

Intox ication chroniclue

Acide hippurique

5-hgdroxgindoLes.

a) Chez les ténoins

b) Après 3 mois de traitement

c ) A p r è s 6 m o i s d e t r a i t e m e n t .

ITI - DTSCUSSIONS et CONCLUSTONS

DEUXIEME PARTIE

ACTION DE L,1PTIENYLTNDOLE SUR LE TIETABOLTS;TIE DU TRYPTOPHANE

ï - ACTION DE L'e'PHEI'I1'LIND0IE SUR LE I'IETABOLISIi'E DU TRYPTOPHANE I T . 1 T T . 2

24

30 3l

3l

48

56

59

60

67

B )

69

74

I.1 I'Iétabol-isne du trgptoplnne

1 " ) V o i e d e J a c g n u r é n i n e

2o) Voie des S-izydroxyjndol,es

76

82

(9)

I.2 Technique de séparation

des nétabolites

du trgptophane

I.3 Exltérinentation

animale

I . 4

R é s u l , t a t s e t discussions

a)

Etude du métabolisne du trgptophane

b)

Etude Ce La Tiaison de 7'a,phéngTindole à L'albumine

I . 5

C o n c J , u s i o n s .

TT . ETL;DE DE L'TTTHTBITTON DE LA MONO-AI4TNE-OXYDASE

I I . 1 E t u d e d e 7 ' e n z g n e

II.2 l,lethode de mesute de l'activité mono-amine<xgdase

a)

Dosage de L'anmtoniac dégagé

b)

ùIesure Ce Ia consonnnation d'oxgEène

c)

Teclniques radiométriEues

et spectrophotométrigues

ët) rechnique de ntesure d.e L'activité

i.a.O.

- _Sol.utions

- _{MéthodoTogie}

I I . 3 E x p é r i m e n t a t i o n '

a) Teclni<,'ue cl'extraction cj'un i';étabolite hépatique 7'og;hénglindoLe

b) Expérinentation animaLe I I . 4 R é s u J . t a t s

a) Etude du K.M. de Ia cAnuramine

b) Action de 7'aphénglindole (in piuo) sur la rt.A.o.

de difîérents organes

c) Etude de 7'inhibition de 7a M.A.O. de foie de Rat

in oitno

tr

8 7

8 8

9 5

t 0 3

de

r06

t06

109 t09

il0

il3

ilû

ilt

il7

ilg

r2l

- _?-ction - _Action - _Action - _Action II.5 Concfusions

d . e 7 ' i p r o n i a z i d e

de 7'uphénglindole

d'un métabolite

hépatiEue

du même nétabolite

urinaire.

(10)

ffi

ETUDE DU METArcLTSTTE DE L'APHENWINDOLE

Ifi{TRODITCTTON

I - TECHIIIQT]ES T'TILTSEES

I.1 Cathétérisme _{pennanent chez Le RaÈ vigihe}

r-2 ,esure de 1'activité ètes échantil70ns _biorogigues f .3 Techniclue drautoradiographie _{sur -le Rat}

r.4 _{Techniciues de séparation} _{des nétabo.zites}

de |uphéngrindore des njl, jeux biologiç.ues

a) _{Recherche des métabo-ljtes} _libres

b) Recherche et séparation _{d.es métabolites} _conjugués r-5 _{Technique d,e séparation} _{et de purification}

du nétaborite principal _{de -l ,urine} _{de RaÈ}

I.6 _{lLléthodes dranalyse} _{du métabolite}

principaT I.7 _{Technigue de séparation} _{d.e 7,o.phénglind,ole}

et de boLite principal

a) Séparation à partir _{des tjssus} b) Séparation â partjr _{du sang} I.8 _{Techni,true du foie} _perfusé _{de Rat.}

TT - EXPERTMEMTAST2N ANTI,îALE

r20

l2l

r2t

t n

128 1 3 0

t 3 l

t33

son méta-

_lg{

1 3 5

I I . t C i n é t i q u e s g l o b a T e s II.2 Autoradiographie

II.3 Etude des métabol,ites ïI.4 Cinétigue sanguine de

principal

urinaires

7'ophéngTindole et de son

r30

r36

t 3 7

r3t

nétaboLite

(11)

II.5 Cinétiques à -Z'aide du foie perfusé I1.6 Répartition de 7'aphénglindoLe et de

dans différenÈs tissus.

son métabolite

1 3 8

principal

₁₃₉

TTT - RESTTLTATS Eî DTSCUSS.rOJV.9

I1I.1 Cinétique totaTe sur -l,e Rat jnstrunenté

1II.2 Etude autoradiographique de 7'o,phénglindoTe

I I I . 2 . 1 V o i e p e r o s I I 1 . 2 . 2 V o i e I . P .

III.3 Mesute de 7'activité dans différents tissus après

7 ' i n j e c t i o n d ' a p h é n g l i n d o l e L 4 C 2

IU.4 Etude des métaboJ,jtes urjnajres de l'aphénglindole chez Ie

R a t

a) Rechetclrc d.u nombre de métabo.Zites urjnaires b) Identification du métabolite urinaire principal

III.5 Cinétiques de J'aphénglindo-le et des nétabolites

a) Dans le sang (in vivo)

b) A l'aide du foie isolé _{et ;tertusé .(in vitto)}

CONCLUSTONS GEI,IERALES

1 " )

I { e s u r e d e L ' a c t i v i t é

t o t a L e

2o)

Recherche des métaboJ,jtes .bi-ljajres,

hépa-tigues et sanguins (perfusat)

3o)

cinétiques de 4 nétabolites

biliaires

l6E

4 o )

C o n c L u s i o n s

1 6 0

rII.6

Répartition

de 7'aphénglindole

et de son métabotiÈe princi-

172 pa7 dans q,uelgues organes

III.7

Comparaison du nétabolisne de L'aphénglindoie

et de 7'indofe

175 III.8

Toxicité d,e I'oxo-j-1tlÉnç7-2-:ind,ole

_l?6

l f 0

t { 0

t 4 3

t { 3

t 4 6

t 5 l

t 5 3

t 6 0

I t 0

t 6 2

r6x

t 6 6

t ? t

(12)

A B R E I ' T A T T C T V S U T I L T S E E S

Acide hippurique : EenzoglgTgcine

D - r . s o

D . M . S . O . D r P . M . E . O . P . S . G . O . T . G . P . T . 5-HIt].A 5-HOI H . P . M . C . T . P . l i . M . L . D . T I . J V . À . D . I T . A . D . P .

a ? r

P . V . P . P . M . * R R . F . Sètotonine T . B .

r . v .

C

*

t

m

Distance parcourue par Ie so-Lvant

:

S-hgdroxgtrçptamine

Serun phgsioTogi<;ue : Sol.ution pàgsioTogique : Na CI à 9 lo : Dose LéthaLe 50

: DinéthgTsulfoxgde

: Désintégtation par ninute

: Exempt d'organisn:es pathogènes spécifigues

: Glutanate oxaToacétate transarninase

: Giutamate pgtuvate transamjnase

: Acide S-hgdroxgindoTe acétique

: 5-àgdroxgindoles

: Hgdroxgpropç7néthVTceTLufose à OrS %

: Intrapéritonéale

: Constante de I|ICHAELIS

: Lactate deshgdrogénase

: Àtcotinamide adénine dinucTéotide

.. rtlicot inamide adénine dinucléotide phosphate

: aphénglindole ou 2-phéngTindole

: Poids mo7écul,aire

: Coefficient de corréLation

Distance parcourue pat 7a zone

: Témoins bLancs

: Témoins véhicules

: Ecart tgpe

: Valeur du test de ST|./D.EI//f

(13)

(14)

7'a*héngTinci.oLe synthétisé _{1:ar tsISCHLER À.,} en 1892, est

utiLisé deituis 1969 en tant que stabiJisant dans Ia fabrication de

divers produits _{à base de 1;olychLorure} de vinETe.

D'autres produits _{1;euvent être} utiTjsés _{à 7a ç;Lace de} 1'apnénglindole pour 7a protection des L;Lastic;'ues contre les ragons u L t r a v i o L e t s . i t a i s L ' u p h é n y T i n d o T e a s u r e u x L ' a v a n t a g e d e d o n n e r

une coloration bLeutée particulièrement jnÈéressante pour J,es eaux m i n é r a l " e s .

Les études connues sur La toxicité de l'aphénglindole

n'avaient potté avant ce ttavaiT c.ue sur -l,a toxicité giat voie otale.

Se-lon LEFAUK R., en 1972 (At), i7 s'agit d'une substance faiblenent

toxique aux doses courén;hlent uti-Zisées. La dose 7éthale 50 (D.L.59)

par voie orale chez 7e Rat a été trouvée éEate à 10 g/kg (ef).

La tctxicité

à Tong terme par voie orale a été étudiée par

NOTHil.IRET

H. et coL. , en 1964 (Zl). Ces auteurs n'onÈ constaté aucun

trouble, ni renarqué de hésion organique.

Aucune étude n'a été conduite p,at voie pulmonaite.

Les signes cliniques

sujyants observés chez des ouvrjers

ont

été rapportés a L'exltositjon

à L'uphéngTindole :

1")

Derftatoses (eczéma, conédon)

2")

Troubles iÉmatoTogiEues (inversion

de formule).

Contpte tenu de cjue-lçues observations

de Tabotatoire,

i7 a

paru intéressant

de s'attacher

à l'étude

biochiniçue de ce conposé,

I'abordant

par 2 voies :

(15)

2

- _{son action} _{ou cefles} _{de ses nétabolites} _{sur 7e}

ntétabo-fisae généra7

- _{sa nétaboLisation} chez 7'animal de Taboratoire.

Ces connaissances peuvent conduire d'une part à une mei-lfeure

a p p r é c i a t i o n d e s a t o x i c i t é s i e 7 7 e e x i s t e , d ' a u t r e p a r t à 7 a m i s e a u point de dosages bioToEiclues permettant d'évafuet 7'exp;osition et' 7e

(16)

P R O P R I E T E S P H Y S T C O C H T M T g U E S

nom o4héng7 indole = pléngl- 2-indole

Fornule déveToppée

fotnuLe

brute

conyosition

en %

C 1 4 I f 11 IV c = 8 7 t O 1 9 6 I I = 5 t 7 8 9 t N = 7 1 2 4 %

sËructure

mol-écuLe plane

poids moléculaire

P . M . = 1 9 3 . 2 3

aspect

poudte fine de couJ,eur crème

point de fusion

1 8 0 - 1 8 5 0 C point de subLination

_{1 9 6 " c}

sol.ubiJ.ite

soJ,ub]e dans Jes sol.yants organiques (Ethanolt

E t h e r , n B u t a n o T , . . . ) .

Très peu so-l,ubJ.e dans 7 'eau et 7es méTanges

(eaut éthanol).

p'roduit de

décomposition

d a n s 7 ' a i t

à 3 5 o 0 c

HCI = 47t2 % pas de toluène C O = 1 % r é s i d u = 4 O t 2 %

B e n z è n e = 5 1 1 4 %

(17)

P R O P R I E T E S T O X I C O L O G I Q U E S ( T r a v a u x r . f ' t . R . ^ 5 . )

animal- véhicule v o L e

sexe

D . L . s o

ns/kg

R.P.T Labrafil ,t H . P . M . C .

,,

T . P .

P e r . O s .

I . P . P e r . O s .

t

?

3 I

600 > 1o,c,0

= 20,00

> 30c,0

SOUIITS LabrafiT ,t t t J . P . T . P . P e r . O s .

T

I

400 5 2 0

500

(18)

IE]C PARTIE

PABAilETRES

Btllrl|Gt0uES

Elt RErATt0rl

(19)

GIIAPITRE

I

(20)

P A ; < A I { L : T R E S s l O L O G r ç U E S E N R E L A T I O N

A V E C L , E X P O S T T I O I T A L , g , P H E I T Y L T N D O L E

H E T T ; O D O L O G T E

I . 1 D o s . t E e e t i d e n t i t i c a t i o n d e s ux indol-es dans L'urine

Dans une étude toxicologiçue à caractère biocltinic;ue une c'es

litenières éta1;es consiste à recherclter une uéthocle de d.osage au toxic-ue et des ntétaboLites dans Les nilieux bioTogiçues et notarunent dans

l-'urine. KonM. et i:oGGoIt H. en 1965 (Ss) ae"rivent une techniçue de

dosage de 7'ctphéngrindole par spectro'çIntocoLorinétrie. cel-ui-ci en 1trésence d'cr -odjchlorodipiténglmétltane et en mil-ieu sulfuric;ue déve-Jolto,e une coLoration rouge. ^Ious ayons p;référé utjJiser une néthoô.e de

dosage pTus générale (noyaux indoTes) _{ç'ui nous permettait} de doser Les rûétabolites urjnajres éventuefs ajnsi que 7'uo-hénglindole. La téacticn

d e S A L K I I , I S K I ( 1 8 8 3 - 1 8 8 5 ) n o d i f i é e p a r î L L E T e n 1 9 6 1 ( t r ) e s t b i e n c o n -n u e . C e t t e m é t h o d e -n o u s a p e r -n i s d e r é a L i s e r i - e b i T a n d e L ' e x c r é t i o n

des cot::t1tosés jndoiigues urjnajres.

3'g"it'z

?arni toutes les réactions spécific-'ues ciu nogau indoTe, ceLle

de SALKO,iSKI apparaît comme la plus utjl,jsée. C'est la réaction du no7au

indole avec 7e chTorure ferriçue en présence d'acides ninéraux.

Dans certains cas, La colotation peut être modifiée seLon 7a

(21)

- _Réactifs

S o l . u È j o n . . P e s e r 1 , 2 1 6 g d e F e C I g r 6 H 2 O , a j o u t e r 5 3 n I d ' e a u b i d i s t i l T é e , a p r è s d i s s o l , u t i o n c o m p T è t e v e r s e r T e n t e m e n t , e n

agitant constannrcnt sous un courant d'eau froide, 60 nI dracide sulfu-rique concentré 98 %. compJéter ensuite avec 50 mL d'eau bidistiTlée.

Jeglnique

A l nL d'échantiTl-on, ajouter 4 nl de réactif ci-dessus. .te

mé7ange est, chauffé 30 minutes à 40 oC. Mesurer ensuite lrabsorption à

546 nn contre un bl-anc réactif .

La gaflane d'étalonnage est effectuée avec du 2-phéngTindole ( f i S . 1 ) q u e - l ' o n s o - l u b i T i s e d a n s d e l t é t h a n o L . L ' a d d i t i o n d u s o l v a n t

n t a p a s d t a c t i o n s u r - l e d o s a g e .

- _{Identification} _des

sut couche mince

n o g a u x

_!91

" "Ær

chromatogr ^Ehi"

Jvous ayons utiJ.jsé l-a tecLvtique décrite par STOWE B.B. et THII.IANN K.V. en 1954 (fOl) d.ans TagueTl-e Le papier Whatnan no 7 est remplacé par des plaques (cefful-ose) prétes à 7'enpToi pour chromato-graphie sur coucàe mince (I,Ierck). Le soLvant util, jsé est Le sujyant :

f s o p r o p a n o T , e a u , a m n o n i a q u e 2 8 % ( 8 , 1 r 1 , V / V ) . L e r é a c t i f d e r é v é T a t i o n est -le méIange : de PILET cité plus haut. IL est dilué au 1/2 (V/V) avec d e L ' é t h a n o J j u s t e _{a v a n t L ' e m p 7 o i .} _{S r c w E B . B . e t T H I M A N N}_{K . v .} ( l O f )

citent dans Leur articTe, 35 dérivés indoliques dont 7e 24théngTindoTe

(22)

att

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C' € o' I x

:

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(23)

f . 2 D o s a g e e t i d e n t i f i c a t i o n d e L , a c i d e h i p p u r i q u e u r i n a i r e

Ces dernières années de nombreux auteurs ont décrit et util-isé

différentes méthodes de dosages de L'acide hippurique. foutes ces

méthodes ont été réaJ-isées pour étudier 7'éTinination urinaire de cet acide après diverses expositions (to7uène, _{xgl-ène). Jvous pouvons cJ,asser}

ces méthodes en 3 groupes.

1") Wr-q"""

u t i l , i s a n t L a chromatographie - _{Chromatographie} _{en phase gazeuse}

Cette technique nécessjte au préaTabLe une extraction,à

L ' a c é t a t e d ' é t h g 7 e a j n s i q u ' u n e n é t n g T a t i o n . E L l , e a é t é d é c r i t e p a r B U C H E T J . p . e t L A : u Ë i E R T S _{À . R . , 1973 (rr).}

Chromatogtaphie sur coJ-onne

sflw#l s.Jv. et 1ABRIELI E.R. , 1968 (SA) preconisenÈ d,utj-ljser une coTonne de séphadex Glg pour séparer J'acide hippurique et jls

mesurent ensujte 7'absorption à 232 nn. Cette technique n'est pas spéci-fique, d'autres composés peuvent être é7ués en même temps et absotber à

ceÈte nêne Tongaeur d'onde.

Chromatographie sur plaque ou sur papier

?AFFNEIr c.w. et coL., 1954 (:U) uti-ljsent 7a chromatographie

sur papier Whatman no J sans extraction de,L'acide hippurique urjnajre

au préalable. La révéLat,ion est effectuée à L'aide du p.

dinéthglamino-benzal-déhgde en milieu anhgdrique acétique.

ocATA I.t. et col.,

1969 (ZS) preconisent une exttaction

à pH 2

avec 7e mé7ange éthanoT/éther

(1/1, v/V) avant 7a séparation

(24)

chromato-I

graphiwe' qui est effectuée soit sur papier, sojt sur une praque de gel de siTice. Le méLange de migration est -Le suivant ; tol.uêne, acid,e

acétique, eau 1@/50/2,3 (v/v). La révélation _{peut être} effectuée soit avec l-e réactif de GAEFNEY c.tl. et co7. (rU) ou Le ëbTorure aè benzène-gultonyle.

TEU1HY H. et VANSWERE C.F., 1969 (tol) ae"tivent une technique gui nécessjÈe une extract,ion de I'urine à l racétate d'éthgle pH < 2. puiÉ une sépatation sur une plaque de chromatographie prépatée avec un né7ange

de 50 g de ge7 de siLice et 50 g de ceTlufose conne suppart. La détection e s t e f f e c t u é e a v e c L e r é a c t i f _{d e G A F F N E r c . W . ,} t g , 4 ( r t ) .

ces différentes teclnigues chromatographiques s radaptent mal

à 7'analgse en grande série et e-L-l,es nécessitent un traitement d.e Lrurine

avant le dosage (extraction, méthglation).

MATSUT H., _{KASAI M. et IMAMITRA 5.,} _{rcZA (SZ) d.écrivent} _une teclnique de dosage de L'acide hippurique par chromatographie hauËe pression. cette néthode est simpre, sensjbl,e et spécifique, nais erle

nécessite un matérieJ sophistiqué pour étre réa_lisée.

2")

Technieues coforinétrjgggt

L M B E R C , E R

C . J . e t F T O R E S E

F . F . , t g 6 3 ( l O e ) ae.rjyenÈ une

technique de dosage coTorimétrigue

de J,acide hippuriq,ue urinaire

qui

uÈiJjse 7e cltlorure d,e benzènesulfanyie.

Tf,ItoKUNr K. et ocATA M., 1972 Qoa) pratiquent une néthode

anaTogae.

I<ANEK2

I. et coL. en 1975 (Sl) f" modifient à des fins

d'auto-matisation.

(25)

l 0

reconnues conme étant peu spécifiques. En etfet L'acide salicylurigue et

gueJqnres acides aminés interfèrenù sur 7e dosage.

IûIKfuSKI _{P. et wIcLUsZ R. en ISZO (AA) décrivent} une méthod.e col-orimétrigue gui utiJise -le p. dinéthglaminobenzaldéhgde en miTieu

anhydride acétique _{avec conmte catalgseur} _{de. Ia} _réaction _{du chl_orure} fettique anhgdre. Cet,te technique nécessite une extraction à 7'acétate

d'éthgle. L'urée interfère mais eLl,e est éliminée presque totalement Lors de l-'extraction. Cette méthode est Tongue et dilficiTe à réaTiser en grande série.

Ivous ayons préféré utjl,iser une tecfùrigue pJus ancienne

nodifiée. En 1940 DENI1ES G. (te) décrit une réaction coTorée gnur 7'acid.e hippuriq'ue, elfe est, nodiliée par DEyssON c. et ALLT}T M. en naZ (zz), puis pal. GRTILER R. et co|. en 1978 (oo).

PRITVCIPE ..

Cette néthode de dosage coTorimétrique est .basée sur .l,,action de 7'hggnbromite en miLieu alcalin sur J.,acide hippurique. En fin de

réaction Ie composé coToré est extrait pat un soJ.vant organique.

D E ï S S 2 N c . e t A L L I 7 T M . ( Z Z ) c i t e n t ' 1 , ' j n t e r f é r e n c e d . e I ' u t é e . . ' C e l h e - e l réagit avec Lthgpobromite (dégagement gazeux). Dàns notrè -néthode nous-ajoutons de llhypobromite et de 7a saude en excès pout éIininer l!,action*

dé 7'urée. La mesure de 7a densité optique est eftecÈuée à 313 nm de

façon à augmenter -La sensibj-lité de La néthode. Le maximwn d'absorption

s e s i t u e à 2 6 0 n n , m a i s à c e t È e T o n g u e u r d ' o n d e , d ' a u t r e s p r o d u i t s r ' t e l

(26)

t l

TECHNTQUE DE DOSAGE :

Réactifs I

S o u d e à 4 0 g % d a n s d e 7 ' e a u b i d i s t i l j é e . S o - l u ù i o n A : B r o m e

166,5 g:, de bromure de potassiun + 2gO nl H2 O + 25 nI de brome.

. SoLution B : Hgpobromite

80 nl_ de soude à 40 % + O,3 g d,iodure de potassium,

compTéter à 15o m7 avec Hz o. Ajouter lso nr de so]uÈi on A.

tléthodoTogie

eré7evpr 2oo ul d'urine dans un tube à essais, ajouter g@ vL

de soude à 40 %, puis 2r5 n7 de solution B. Les Èubes sont chauffés

5 mjnutes au bain-marje

à loo oc puis refroidjs.

Le composé coloré

est

ensuite extrajÈ

par 1 ml- de tétrachlorure

de carbone. La mesure de 7a

densjté optique sur Ja phase organique est effectuée au

spectrophoto-mètre à CJ3 nm.

Une vérification

_{par chromatographie sur plaque (geL ète}

siJjce)

est effectuée

sur pJusieurs

urines

contenant des quantités

variabTes dtacide hippurique.

Ls sorvant

de migration

utjljsé

est Js

sujyant

: chLoroforme, acide acétique (SO/2O).

3" )

l(éthode de.dosaye perc;lytac|;ophorèse

soLLENBERc

J. et BALDESTEN

A., 1977 (SS) ae.rivent

une

nouvelTe méthode d'anaLgse de l,acide

hippurique et de certains autres

acides organiques. EIIe est basée sur Le principe ële rrél.ectrophorèse

dans un sgsÈème d'éLectroJyÈes

discontinus.

Cètte technique est simple

et spécifique,

_{mais eJ,l.e est très récente et nécessite un matérier}

spécia7 q,ue nous ne possédions pas au moment d,e cette étude.

(27)

t2

I.3 Dosage et identification des S-hgdroxgindoLes urinaires

Les r"étlrccies de dosaEes de ces cTérivés sont de quaÈre types

1" ) H"S"t

cpnapragh:luues

JvïsItIJvo M. ' NOGU1HI T. et KIDT R. ' 1972 (72) uti-lisenÈ une teclnigue de séparation des S-hgdroxgindoles urinajrec par chtomato-graphie d'échanges d'ions et mesurent 7'absorption de chague fraction

à 275 rn.

Ilne teclnique

récente décrite

par. HosKINs A.J. et NLLITT R.J.

en 1975 (nr) utjlise

des standards jntetnes

d'acide S-hgdroxgindole

acétigue et d,acide

indole acétique deutériés.

Ie"d dosageË sont ensujte

effectués

par chromatographie en phase gazeuse coupTée à un

spectro-gtaphe de masse.

BECK

O., PALI,TSKOG

G. et HWTI,IAN

8., rczl

(lo)

déctivent

une

néthode pour Ia déternination

quantiÈative

de 7'acide S-hgdroxgindole

acétigue urinajre.

Celle-ci

est basée sur -la chtomatograpàie liquide

haute performance â phase jnyerse.

La détection

est effectuée

par

fluorimétrie.

2" ) I,léthodes

ig.lgrigaes

et col.,

1973 (AA) ae.rivent

une technique de

spécifique et sensible,

basée sur fe principe

dosage de

sujvant

s

SAAVEDRA J.M.

(28)

t3

A c . C o A . Sérotonine N atcétglsérotonine 8 . C . 2 . 3 . 1 . 5 . 3H méLatonine

E . C . 2 . 3 . 1 . 5 .

E . C . 2 . 1 . 1 . 4 .

3 n s.a.u.

A c . C o A . N acétgltransférase hgd r o x g i ndo 7 e -O-méthg 7 t r an s f é r a s e 3a ,étngl-s-adénosyl I néthionine acétgL Co enzgme A

La méTatonine formée est ensujte

exttaite

par un solvant

otga-nigue, puis Ia radioactivité

est mesurée. C'esÈ une méthode Tongue,

coûùeuse gui s'adapte ma7 aux dosages en gtandes sérjes.

3") Méthode de

do sage spectrof Tuor imétr ique

Les dérivés indoliq,ues subsÈitués en 3 et portant, en 5, un

gtoupement-OV ou -@Hg présentent après excitation à 295 nm un speetre

de fluorescence avec deux bandes d'absorption, une bande à 34O nm qui

décrolt en miLieu fortement acide et une bande à 54O-55O nm dont L'inten-siÈé est inversement proportionneTle au pH.

Ces méthodes ont été appTiguées par s

.5EMrE'JVÀC ROUT,|ANOU H. et col. en 1967 (rr), DRETTX C., 1968 (re), LOREZ

H . P . e t D A P R A D A M . , 1 9 7 8 ( A a ) .

Cette teclnique nécessite une purification des dérivés

indo-Iigues. EIIe peut s'effectuer sojÈ par : - _extraction _séTective _(butanoT)

chronatographie d' échange d I ion

adsorption sur fTorisil de cerùajns composés acjdes (pigments).

(29)

t 4

Chez L'Hormne cette technique est parfaitement

applicabTe

pour

r e s a n g e t J , ' u r j n e . chez L'Animar

( R a t ) nous n'arrivons jamais à

éLi-minet totaLqnent fes pigments urinajres,

gui perturbent

7a

spectro-fluorinétrje.

ÀIous avons donc recherché une Èecànique coTotiméttique.

4") Méthodes

_{?olginétrigg}

Méthode de IIANSON

modifiée

par SHIRARDIJV

Il. et METAIS p. en

/ \

1 e 6 o le7J.

Àprès extraction par L,éther en miTieu _{acid,e, Ie soJ.vant est} técupéré puis évaporé et 7'extrait sec est reptis avec de lracide chTorhgdrigue O'IN. La réaction de IIANSON uti-Zise fe p. aminobenzaldé-hgde en miTieu chTorhgdrique. MaTgré l-'extraction, cette méthode n'est

pas spécifique.

lvous avons uti-lisé

7a méthode i'IID.ENFRTEND

S. à l

SnaphtoT, e71e a été décrite

ou nodifiée

par^ :

rÆ,ENFRTEMD

s. eÈ co7. en 1958 (toS), DREUr c. et DELAUNEIr

( : r ) .

'cnitroso-B . e n 1 9 6 4

Principe

.L'onitroso$naphtoT réagit avec de nombreux phéno7s substitués,

en présence d'acide nitrigue. .Les S-hgdroxgindoles réagissent dans des

conditions différentes, en a.bsence d'acide nitrique mais en présence

dtacide chTorhgdrique ou sulfuriq,ue diLué contenant des traces de

nitrite. Dans ces conditions 7a réaction est spécifique. Le composé

formé est rzio-Zet. En miTieu chTorhgdrique ou suJ,furigue, Les dérivés du phénol ne téagissent pas ajnsj que 7e trgptophane, 7a trgptanine, 7e 7-hgdroxgtrgptophane eù 7a 7'-hgdroxgttgptamine. La réaction avec le

5- hgdroxgtrgptophane, Ia S-hgdroxgtrgptanine, 7 t acide S-hgdroxgindole

acétique et probablement _{7a ùacétglsérotonjne} _{nous donne des} chromo-phores avec des spectres patfaitement semblabl,es. Lorsque nous effectuons

(30)

t 5

l-a reaction directement sur -1,'urine, nous dosons probai-.1-ement ces 4

conposé s sjnul, tanénent.

- _Reactifs

S o l - u t i o n A : c t n i t r o s o $ n a l i l t t o T à O r I 9 , J d a n s - L ' é t I ; a n o l à . 9 5 i ? ,

Solution B : acide nitreux _i,réparé extem]totanénent, 5 nI a ' a c i d e s u T t u r i ç u e 2 N + O r 2 m I d e n i t r i t e d e s o d i w i à

2 , 5 % d a n s d e 7 ' e a u b i d i s t i l l é e .

Tecinigues

Les urines sont acidifiées à p,H 2 avec de 7'acide

chTorhg-ciriç ue.

I r r é L e v e r 2 r ' ù - d ' u t i n e , a j o u t e r 1 r . : l - d e s o l , . À e t l n t l d e s o l . t s .

Chauffer 5 minutes au bain-narie _{à 55 oC, I;uis Laisser} refroidir. .t'èxcès d ' c r n j t r o s o i n a t r i i t o L e s t e n s u j t e é 7 i n i n é p a r u n e e x t r a c t i o n a u d i c h L o t o 1 2

-étlnne. Ea nesure cie L'absorption est effectuée au photomètte à 546 nn

sur .La phase aEueuse contte un bLanc utine sans onjÈtoso$natr;hto7.

Nous avons reaLisé 2 gammes d'étaLonnage, I'une avec de la

séro-t o n i n e , 7 ' a u t r e a v e c d e L ' a c i d e S - h g d r o x g i n d o i e a c é t i E u e ( t i g . 2 ) .

Lors aes Cifférents dosages effectués dans cette première _1'artie

neus avons uÈjJisé 1;rincipaTenent des tectvtiEues coLorimétriçues plus

pra-ÈiEues â réal.iser; nais nous sorîrmes conscients que ces tecltniques peuvent être _{eueJ.c.ue :lois nloins spécitiques} gue d'autres méthocies plus é7aborées.

La révéLation des plaques chronatographiclues est effectuée avec

(31)

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(32)

l 7

I.4 hsage et révéTation de La sérotonine dans L'urine

Les méthodes de dosage utjl,jsées sonÈ identiq,ues à cel.l.es décrjÈes dans Le paragraphe précédent. Cependant avant d'appliquer ces

méthodes, ji. est nécessaire d'extraire spécifiquement Ia sérotonine en

éTiminant J,es autres S-hgdrôxgind.oles (aciile S-hgdroxgind.ole acétigue

et S-hgdroxgtrVptophane) .

Jvous ayons utiiisé l-a technique de DREL;X C., leAt (Za) ex-traction au butanol- en niTieu al-caLin, puis reTargage en miTieu açlueux

par 7'heptane. Le dosage colorimétrigue q'ue nous avons util-isé est jden-tique au dosage des S-hgdroxgindoles urjnajres.

La vétilication

de fa présence de sérotonine dans Les urjnes

eÈ dans -1,'exùraiÈ butanolioue

a été etfectuéè

_{par chroriatàgra7,hie sur l,laque}

de ceTLuLose avec I solvant et 3 révélations

différentes.

S o l - v a n t : I s o p r o p a n o l - , a m m o n i a q u e , e a u ( 8 r 1 r l ) .

RévéTations : - ninhgdrine

- composés indoJigues - 5 HO-indoLes.

I.5 Dosages sanguins

Les différentes techniques de dosages sont pratiquées sur J,e

sérum. Ivous avons uÈjJisé Les cofftets Boerhinger non optimjsés eÈ

téa7isé ces dosages en microméthodes. Pour fes chJ,orures nous ayons

appliqué La méthode coLorimétrique au perchTorate de fer décrite par

(33)

t 8

I.6 Expéylr,r"rtation aninal-e

a) animaux

- _{L a p i n s n é o z é l _ a n d a i s , d r u n ç;oids compris entre 2r5 et 3 kg..} ces anintaux ont subi une 1tériode d'adaptation en animarerie, d.rune d i z a i n e d e j o u r s a v a n t L e d é b u t d e 7 , e x p é r i e n c e .

- _{R a t s E . o . P . s .} _{a T b i n o s} _{( s o u c l r c 2FAS), origine} _{s p r a g u e - D a w l e g ,} cie sexe nâLe et L'enel7e, d,un poids comç,ris entre 160 et 24O g.

b) _-inÂtuti;Expérintentations chroniçues .. Intoxication _1,ar

-- _Lapins

Les 2 anintaux sont pracés dans la même cage à intoxication.

Caractéristigues de 7a cage à intoxication : paralléIépiç;ède rectanEle en pTexigl,as d'un volume de 12A J,jtres.

Les animaux sonÈ intoxiclués I heures par jout, 5 jouts pat sentaine pendant 5 senaines. fls ont placés en cage à nétabol-jsme Ia nujÈ et -Ze week-end afin de récupérer Jes urines.

Les Tapins ténpins sonx pTacés uniquement en caEe à métabolisne.

- _{R a t s}

CaractérisÈiq'ues des ceTluJ,es à atmosç;hère contrô\ée : Vo|ume u t i T e = 7 7 O L i t r e s ( f i g . 2 b i s ) .

Chaçue cel-IuLe est éEuipée drun séparateut ,rutine-fèces', en té-ilon. .Les urjnes, fiTtrées, _{sont i;ompées au fut et à mesure de Leur émission} et dirigées vers un coTTecteut de fractions, pTacé dans une enceinte réfri-gérée à 4 oC.

(34)

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(35)

2 0

Les animaux sont traités 6 heures par jout, 5 jours par serrajne pendant 6 mois.

?rois LoÈs sont constiÈués eÈ traités sel_on ie tableau s u i v a n t L o t N o Nombre d'animaux Concentration ( e n m g d ' u p h é n g l i n d o L e p u , , 3 1

1 - 2

2 x 1 2

O Témoins

3 - 4

2 x 1 2

20 5 - 6

2 x 1 2

60

.Les Rats sont exposés par groupe de 12 dans chaque cel.J.uJe. La nourrjture eÈ J.'eau de bojsson Leur sont présentées en dehors des heures

d ' e x p o s i t i o n . L ' a p h é n g L i n d o L e e s t s u b l - i n é à 1 9 6 o C à I ' a i d e d , i n j e c t e u r s spéciaux.

- _{Contrôl.e de La concentration} _{en aphénglindole} _{dans L,air}

Des pré7èyements d'atmosphère sonÈ effectués sur fiTtres, .deux teclzniq,ues peuvent être util-isées ..

1 " ) f i L t r e d ' a l - f a e t d ' a m i a n t e h g d r o f u g é , s o i u b i J i s a t i o n d e 7 ' u p h é n g l i n d o L e d a n s - 2 , ' a c é t a t e d ' é t h g 7 e , p u i s a n a l g s e p a r f l u o r i m é t r i e

( e x c i t a t i o n _{à 3 1 5 n n ) i}

2 " ) f i f t r e d e p a p i e r , s o l u b i T i s a È j o n d a n s 7 ' é t h a n o l a b s o l u et anaTgse par spectrophotométrie à 31O nn.

(36)

2 l

c)

Expérl1men,lu*,

_4g

-

_{Animaux RaÈs femeTl-es d'un poids mogen de 22o g.}

1 " ) B i L a n s b i o c h i n i E u e s s a n g u i n s

V o i e d ' a d m i n i s t r a t i o n : I . P . ( i n t r a p é r i t o n é a L e )

véhicuJ.e : PoTgvingTpgroTidone (PM 25.O0O-3O.OOO Merck). soJ.utjon aqueuse à 3 %. C'est un véhicule approprié pour

de suspension d'aphéngTindofe à l-a concentration maximaTe injectabTe par voie intrapéritonéa7e.

P . V . P . e n I a r é a l i s a t i o n

d e 2 0 % ,

Administration du produit : 2 Lots de 30 animaux sonÈ effectués par

"Randomisation". L'un d'eux reçoit 7'aphénglindole à La dose de 5OO ng/kg, sous un voLurne de O,5 nL/2OO g. Le deuxième 7ot reçoit Le véhicuJe seuf

sous J.e même voLume. Dans chaque 7ot, 10 animaux sont sactifiés à 24, 48

et 72 h.. Des examens biochiniques sont ensuiÈe ptatiqués sur -le sérum.

Des animaux témoins, ntagant rien teçu, sont égaTement

sacri-fiés. Les animaux traiÈés n'ont pas perdu de poids par rappott aux té-moins. Aucune nortal-ité n'a été observée, à -la dose de 5OO ng/kg, pendant

- Z e s 3 j o u r s d e 7 ' e x p é r i e n c e .

2 o ) E t u d e d e L ' é L i m i n a t i o n u r i n a i r e d e s S - h g d r o x g i n d o T e s , d e l-a sérotonine et de L,acid.e hippurique

- _{Après une injection} _{d'aphénglindol.e} _seu-Z

Animaux .. Rats

I poids 22O g. V o i e : I . P .

VéhicuLe : LabrafiL.

L ' o . p h é n g l i n d o l - e e s t s o f u b i L i s é d a n s I ' é t h e r , c e t t e s o i u È i o n

(37)

22

o b È e n o n s u n e s o - L u t i o n d ' u p h é n g l i n d o l e d a n s 7 e l a b t a f i L .

Nous formons 5 lots de 3 animaux pat "randomisation" ; 1 fot témoin bfanc ; 1 l-ot témoin, qui teçoit Ie véhicule sous 7e même vofume gue 1es animaux traités ; 3 fots d'animaux recevant des doses croissantes

d'aphéngTindofe (25O, 5OO, LOOO ng/kg) dans un même voLume de véhicufe (O,5 n7/1OO g de poids corporel). Les animaux sont placés par 2 dans des c a g e s à n é t a b o f i s m e , a f i n d e r e c u e i l - l - i r l , ' u r i n e t o u t e s L e s 2 4 h e u r e s . I 7 s

d . i s p o s e n t d e L a n o u r r i t u r e e t d e L ' e a u a d L i b i t w n .

- _{Àprès un prétraitement} au tr7ptophane et une injection

d ' a p h é n g T i n d o L e .

Animaux : Rats

I Poids = 22O g. V o i e : I . P .

Véhicul-e : o,phénglindoLe

Labrafil-Trgptophane gomme atabique (5 % dans H2 O). Dose : aphénVLindoJ.e 5OO nS/kS

3 Trg?toghane IOOO

nS/kS-Vofume de véhicuie : O,5 nl/l)O g de poids cotpoteT'

La solution d'aphéngTindole est prépàrée comme ci-dessus. JVous

formons 5 LoÈs de 3 animaux pal^ "randomisation". Le tableau ci-après nous montre 1e traitement de chaque 7ot d'animaux. Les Lots 4 et 5 suLrjssent un

traitenenÈ identicue.

-I V " d u f o t I

2

3

4

5

, è t e i n j e c t i o n VéhicuJ-e seuL gomne arabique 5 %

x

o o o o Trgptophane lOOo ng/kg o x

x

x ,ème injection Véhicule seul Labrafil o o

x

o o aphénglindoTe 5@ ng/kg o o o

x

(38)

23

Les animaux reçoivent fa deuxième injection 5 heures après la pranière. Pour chaque lot, Les urines sonÈ recueiTlies pendant Les 5

heures gui suivent la premiète injectiont _{Puis toutes} les 24 àeures pendant 5 jours.

Les animaux disposent de nourriture et d'eau de boisson ad,

(39)

CHAPITRE

tr

(40)

2 4

-R E S U L T A T S

II.1 Experiritentation sur Le Lapin

C e t t e e x p ; é r i n : e n t a t i o n a p o u r b u t d e t é a L i s e r L e b i L a n d e L ' é l i -mination urinaire des composés indoLiques après intoxication par

inhala-tion d 'a4-théngJ indol-e.

Les résul-tats sont exprimés _{en ç'uantité d'aphénglindole} excrété dans l-turine. En effet, nous ne connaissons pas La nature des différents c o r r t p o s é s d o s é s . L e s f i g u r e s 3 e t 4 n o u s m o n t t e n t 7 t é T i m i n a t i o n u r i n a i r e

des coirposés indoli<;ues chez 2 Tapins intoxiqués par inhalation à

7'ap;héng7-irtdol-e (concentration mogenne 5O ng/n3). ÀIous remarquons une augmentation

< i e l - ' e L i r n i n a t i o n a p r è s c h a E u e p é r i o d e d ' i n t o x i c a t i o n . P e n d a n t L e w e e k - e n d 7 e

taux de cette éLirnination d.e nogaux incioles, revient pratiquenent à La même

vaLeur que J.es témoins.

Les tabLeaux I et II regroupent Les concentxations d'aphénglindoLe

c i a n s l , ' a t n o s p à è r e , 7 a d u r é e d e 7 ' e x p o s i t i o n , L a d u r é e d u p r é 7 è v e m e n t u r i n a i r e

ajnsj clue ies ya-leurs cie la concentraÈion des comp;osés indoliques urjnaires.

D ' a p r è s G w T o N A . C . , 1 9 4 7 ( n Z ) c h e z 7 e L a p i n L e v o l u m e c o u r a n t est de 21 nL et La tréctruence respiratoire, 51 mouvements par minute : ce

çui nous donne un voLume d'échange pulmonaire mogen de 60 7/h.

Le dispositil expérinentaT _{ne T,ermet pas de contrôLer} La concentra-tion atmosphérigue en cphéngfindole. IVous observons rjes variations d'un j o u r à L ' a u t r e p o u v a n t a l l e r d u s i n p l e a u d o u b T e .

(41)

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(42)

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3

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(43)

27 D O S A G E S

D E S i l O Y A U X

I I { D O t E S

u r a n o

d e h p i n

D u r ô r

d r l '

intoricrtion

rn hruros

Gonccntrrtion

de

1 4 I l n d o l c

c n

n ! 1 m 3

D u r Ô c d u p r c h

-Y c m c n t

d ' u r i n c

c n h l u r c r

C o n c c n t r r t i o n

d c s

n o y r u x I n d o l c r d r n s

l ' u r i n r c n G l I

r'=lo

rïol

8 , 1 5

6 3 , 2

t 5

orTl

1,00

E,45

50,9

1 5 , 2 5

l , l 5

l,||o

8,35

3 9

1 5 , 1 5

l , o 2

0,82

4 8

0 , 6 8

0,62

8,40

67,2

| 5,30

0 , 9 8

l,(|8

8,30

5 6 , 9

t 5 2 0

l , lo

l , l 5

E,25

6 0 , 4

| 5,45

l , 2 l

1 , 2 9

8,30

47,7

| 5,30

1 , 2 2

1 , 3 6

8,30

4q2

| 6,50

l , l 7

1 , 8 2

46,40

0 J 2

0J2

8d35

2qE

| 5r25

0,7

6 0,58

Iablcru I

(44)

2 8

D O S A G E S

D E S [ { O Y A U X

I t { D O t E

S

u r i n G

d c lt p i n

D u r ô r d c l '

i n t o

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c n h a u r o r

C o n c e n t r r t i o n

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_{Ç l n d o h}

drns l'rtmosphàrc

m l t n S

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-Y e

m o n t d u r i n r

G n h o u r c s

C o n c c n t r r t i o n

d c r

n o y r u x I n d o l c r d r n s

l ' u r i n r c n G l I

a a

[=76

.

il=107

I

8 , 3

5 7 8 , 6

| 5 , 2 5

l , l 3

1 , 3 6

8,3

5 7 7 . 9

1 6 , 5

5 l , l I

1 , 2 9

8 .

4 4 , 8

3 e J

5 0,58

0,73

4 8

0,40

0,55

8,40

4 0 , 9

15,20

0,64

0,83

8,35

3 9,4

| 5,25

l,o2

l , l 6

E,35

42,5

| 5,25

1,06

0,83

8,50

40,9

t 5

0,83

0 , 6 7

Irtlmu ll

(45)

2 g

ELimination urinaire de nogaux indofes

chez Les .Lapins témoins et trajtés

Nombre de val-eurs rË m t o

s/1

2 Témoing 2 x 3

_{o r 4 1 ! o r 1 5}

Lapin N" 76

1 9

o,

9 2 ! o , 2 5

Lapin No 1O7 1 9

_{o , 9 9 ! o , 3 3}

f* mogenne ! écart tgpe

L a d u t é e d e L ' i n t o x i c a t i o n é t a n t e n m o g e n n e d . e I h . 4 O p a r j o u r . Nous obtenons un voLume d'échange puTmonaire pendant l,intoxication de 5 2 o 1 s o i È e n v j r o n o r 5 n 3 . ce qui représente, s j t o u t é t a i t a b s a r b é , u n e

quantité mogenne d'aphéngTindoLe _{de 25 mg J-L.}

Pour des animaux de 216 kg re vol-ume urinaire mogen est de 160 nL pat 24 h. Nous util.isons _{ce voLume mogen pour 7e cajcuL car nous} ne disposons pas des urines de 24 h.

Les quantités _{mogennes de nogaux ind,oLes excrétées} _{en 24 h.} s o n t ( d ' a p r è s _{7 e t a b L e a u c j - d e s s u s )} _:

65 ng J-l pour J.es témoins 1 4 7 n g J - l p o u r 7 e L a p i n n o 76

1 5 8 n g J - l p o u r 7 e L a p i n n o lO7.

À u v u d e c e s r é s u J , t a t s , _{i 7 e s t J o g i ç ' u e . d e penset gue Je bilan} de L'excrétion journaliège _{oes contç;osés ind.olicrues est Jargenent} excéd.en-taire _{par rapL)ort à ra çuantité} _{<i,uphéngrindole}

Eui peut être absorbée.

Les composés indol,iques du nétabolisme normaL présents dans

l-'urine sont principalenent _{tous des métaboJ.ites} _{du trgptophane.}

Jvous avons donc poursuivi

_{notre étude en étudiant}

_-l,es

nétabo-IiÈes urinaires

du tryptophane et plus partjcuiièrernent

_{Les nétaAolites}

(46)

3 0

de l-a voie des 5-hgdrox;indoLes. Cette voie de nétabolisation cond.uit à l-a fottnation d.e substances p)lçsiologicruenent _active _{conlne 7a}

5-Itg'dtoxgtry;g;ta-mine. Cel-l-e-ci a une action _{au niveau du sgstènte nerveux central , ctest,} conne dtautres amines, une substance neutotransmetttice, _EARCÈ;AS_{J. et}

| S D I N E . ' 1 9 7 3 ( , g ) .

" ' a u g ' r : t e n t a t i o n d e f ' e x c r é t i o n d e c e s m é t a b o l i t e s l - o r s < l e l - ' i n c o x i c a t i o n p a r 7 ' a i L l ' é n g J i n d o J e , e x L . f i q u e r a i t p o u r u n e p a r t L e s c o n -centtaiions très _{éLevées en con.lposés indol-ic.'ues urinajres} _rettouvés _chez

L e s 2 L a p i n s t r a i t é s à 7 ' e . ; , h é n g T i n d o l e .

rl- est po::sibLe _{a;ue res 2 nogaux composant J,aphénElindole} _aient des actions indétr'endantes. _{celTe du nogau inciole sera étudiée} _{pTus en} cie-taiL dans La suite de notre travaiL. Parmi Les actions probab.Ies du no;au piÉngl _{nous en avons retenu} _une _{: action} _{au niveau du cgcle} phénglalanine-tgrosine. Pour vériiier cette _{h;o^othèse nous avons dosé L,acide} _hippuriçue u r i n a i t e .

I I . 2 E x p é r i n e n t a t i o n s u r L e R a t

N o u s a v o n s r é a l i s é 2 t g p e s a ' i n t o x i c a t j o n s . .

1 1 ) u n e i n t o x i c a t i o n a i g ' u ë

E77e contporte une injection uniçue d.u toxiçue à cies doses él,e-vées, Les aninaux sont suivjs _{pend.ant un terirps Èrès courÈ 3 à 6 jours.}

2") une intoxication chroniçue par inhalation (faibie _dose) p;endant 6 mois.

(47)

3 l

A - TNTOXTCATTON AIGI]E

a) Eil-an biochimiçue sanguin

L e o i l " a n a é t é r é a L i s é s u r 3 j o u r s ( v o i r _{c h a p î t r e} _{r ) ,} _{p a r a g r a} -lzes 5 et 6. Les préJèvements sanguins sonteîlectués _{;:ar section, de La}

caroti<ie, l-e natin _{de t h. à 11 lt. 30. Tous l-es dosaEes sont effectués} sur -l,e sétunt. Les dosages d'enzgmes et de bil-irubines sonÈ réa-Ljsés dans Les 3 àeures ç'ui suivent l-e préièvement. _{Les autr'es ciosages sont} etfectués sur -le sérun conqeJ-é.

.Les résuJ.tats obtenus sonÈ présentés _{dans ie tabLeau no rrr.}

Itous rentarquons Eue naJjré queTç'ues résul,tats significativement différents seuJe La baisse des citol-inestérases nous apparaît connne suffi-sar'Tnent riiarçuée pour être reTevée.

Iilous avons ef fectué -Les comparaisons de tliog-ennes suivant ]e test de STIJDENT - ITISI{ER conne suit :

Témoins vehicules contre Ténpins bLancs

Traités contre Téntoins vehicuLes

Les vaLeurs significativement différentes sont marquées ainsi :

xx

x

xx

xxx

Probabilité , t > t , >

9 0 %

9 5 ' / .

9 9 %

v o i r t a b l e a u n o I I I

b ) Elinination urinaire des S-hydroxe-indoTes _{_ _} et de 7'acide Itil;'1iuriç.ue après une i n j e c t i o n unigue d' aplénElindoLe

(48)

3 2

OOSAGES

SANGUINS

SUR RATS

IEMETTES

INTOITOUES

PAR

[ 4.PHEtUTtIttIDOIE

DOSAGES

IIIORM.

( tômoins

_'absolus

I

T.V.

2 4 h

TRAITES

24h

T.V.

4 8 h

TBAITES

4 8 h

T.V.

7 2 h

T R A I T E S

7 2 h

G'P'T

utrt

ll,7 r 0,9 12/1 t0J0 12,27

t0J3

12,4

t0Ji

17,9

i 0J3

f 3,g

, f,051

12 I 0,8

G.O.T

u t ,

t

99 t 8,2

4 4 t \ 5

X X X

62,5

t 3/

139,8

t l6,t

_{l 6 3 t 1 3 , 3 ll I t 13,4 ll2 t 0,6}

Protélnes

Totales

srL

71,3

t 0,75 7 0 t Q 5

OtO

, O,g 6?,6

r 0/S

66,3t

Q35 ?1,5

tQ9l

xX X

65,8 t QB

Cholesterol

g r t

1,24

!0p4

fsrïopq

l,l3 t 0,01

tJÛta,22

li lr0p3l 1.25

rQ06 f,SA

, qôt

Uree

g f t

0,35

t |lpl

Q3l t 002 Q3l t opl Q34t0p0l

Q 3 6

t Q 0 3 0,4

0tQ00l Q4 | t 0,64

gpldes

_tot.ur

nr,

10,3

r 02

5,0A,

qZZ 178

r olt

,,ri' qrn

9l t o,ot

12,6

t gjll

_{l4 ! 0,22}

Chlore

tét,Ou,f,rOr,

9 9 t 2 . 8

88,5

r 2,4t

_{95 t l6t}

ezJ

_{t \01}

93,7

tl/0

85,6

t 2,1

8{l t l,3l

Ghollnestérare

ulrt

2140

! il7 2 9 9 7

t 7 3

x

l 8 3 E

t Zl 2 1 9 8

t 9 Z

X X X

l52l tttz

2063

t 78,5

X X X

1384

t 57

Phosphatrso

Alcaline

Ulil.

2 3 r l

21,2

rlJ9

22,2tlJ

28,1

r 1,36

29,7

t1,65

43,0

t 2/

5 1 , ? = ;

[.0.H

Total.

UllI

1 2 0 7

r 9 0

7 6 7

t 6 [ 5

x x x

1 0 2 8

t l 0 l

2218!217 1 9 9 6

t 9 6

1 8 5 9 t

1 6 9

x x x

l 2 6 E

t 1 0 3

Bilirublne

Totale

m g ' I

l,gl 10J2

l,3l 1 0J6

2,34rfJ9

166 t 0J5

x x x

2,510J4 lpl. O,tf

3,40

_{t Q20}

Bilirublne

Dlrecte

m g

_{1 [}

033 t 0.03 9,5

4 t Q02

r.roîz

0ll t sJs

1,27

t 0,15

Q3

3 t g.g4

X X

1,20

t 0,2

5 C r é a t l n l n e m g

| [

2.1 t 0,00

2,û2

t 0.ll

z,lo

_{r 4}

3,1

r 0,04

x x

2.61 0,09

2,2870p4

_e,3

* 0,1|

x x x

> 9 g l

x x

> 0 5 1

'

> 9 0 7

. . .

> g g t 6

.

> 9 5 ' 6

ïalloru lll

(49)

3 3

A p r è s l ' i n t o x i c a t i o n l - e s u r i n e s s o n t r e c u e i l " I i e s È o u t e s J , e s

24 neures pendant 5 jours, puis dosées suivant i.es technic1ues décrites dans Le cnapÎtre I, paraEraphes 2 et 3.

P o u r L e s S - h g d r o x g i n d o l e s , 1 ' a c i d e h i p p u r i ç u e e t L a S h g d r o x g

-t r 9 ; l -t -t a n i n e u r i n a i r e s , 7 e s r é s u l t a È s s o n t e x p r i n i é s d ' u n e p a r t e n à g p a r

k g d e p < t i d s c o r E o r e L e t p a r j o u r ( m g i c g - I i - t ) e t , d ' a u t r e p a r t tr;our 7es val-eurs cun:uLées en mg kg-r . Pour fes jours au cours ciesE.ueJ,s un

aninal-e s t n t o r t L e c a f c u f e s t e f f e c t u é e n é L i m i n a n t 7 e p o i d s d e c e l - u i - c i .

Pour l-es S-hgdroxgindoTes Les résuftats sont présentés dans Les tabLeaux no ÎV et IV bis. La val-eur mogenne chez les ténoins est de

- r i - r

1 , 1 2 n g k g - t t - t , 7 ' é c a r t t g p e e s t d e O , 8 5 p o u r 1 5 v a L e u r s ( t a b l e a u n o V ) .

L a f i g u r e n o 5 r e - p r é s e n t e L ' é L i m i n a t i o n u r i n a i r e d e c e s c o m p o s é s e n

lonction du tenps.

IVous observons aucune différence significative entre Les

té-moins bLancs et J.es tété-moins véhicuLes, Pour Les animaux intoxiqués à la

d o s e d e 2 5 O r n g k g - I , 7 e m a x i m u n d e f ' é l - i m i n a t i o n s e s i t u e d a n s i e s p r e

-m i è t e s 2 4 h . D ' a u t r e p a r t , 3 j o u r s a p r è s L ' i n t o x i c a t i o n , c e t t e é T i n i n a

-Ëion est revenue à une valeur identicue à ce7le des témoins.

Four.Z.es animaux intoxiciués à 5oo et l.ooo ng/kg, 7e maximum

d'éTimination

se situe au 2ène jour.

Les valeurs reviennent

ptatiquement

identiçues à ceLles des témoins au 4ème jour.

La figure no 6 représente L'éTimination des 5-hgdroxgindc-l.es

urinaites exprinée en vaLeut cumulée en fonction du tenps. Pout fes ani-rnaux témoins (bTancs et véhicules) L'éTinination est Linéaire en fonc-tion du Èenps en ptenant 24 Lteures coIITme unité de base.