Coloration panoptique en hématologie : Etude comparative (Sysmex SP 1000 et RAL STAINER

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UNIVERSITE MOHAMMED V DE RABAT FACULTE DE MEDECINE ET DE PHARMACIE - RABAT DOYENS HONORAIRES :

1962 – 1969 : Professeur Abdelmalek FARAJ 1969 – 1974 : Professeur Abdellatif BERBICH

1974 – 1981 : Professeur Bachir LAZRAK 1981 – 1989 : Professeur Taieb CHKILI

1989 – 1997 : Professeur Mohamed Tahar ALAOUI 1997 – 2003 : Professeur Abdelmajid BELMAHI

2003 – 2013 : Professeur Najia HAJJAJ - HASSOUNI

ADMINISTRATION :

Doyen : Professeur Mohamed ADNAOUI

Vice Doyen chargé des Affaires Académiques et estudiantines

Professeur Mohammed AHALLAT

Vice Doyen chargé de la Recherche et de la Coopération

Professeur Taoufiq DAKKA

Vice Doyen chargé des Affaires Spécifiques à la Pharmacie

Professeur Jamal TAOUFIK

Secrétaire Général : Mr. Mohamed KARRA

1- ENSEIGNANTS-CHERCHEURS MEDECINS ET

PHARMACIENS

PROFESSEURS :

Décembre 1984

Pr. MAAOUNI Abdelaziz Médecine Interne – Clinique Royale

Pr. MAAZOUZI Ahmed Wajdi Anesthésie -Réanimation Pr. SETTAF Abdellatif pathologie Chirurgicale

Novembre et Décembre 1985

Pr. BENSAID Younes Pathologie Chirurgicale

Janvier, Février et Décembre 1987

Pr. CHAHED OUAZZANI Houria Gastro-Entérologie Pr. LACHKAR Hassan Médecine Interne Pr. YAHYAOUI Mohamed Neurologie

Décembre 1988

Pr. BENHAMAMOUCH Mohamed Najib Chirurgie Pédiatrique

Décembre 1989

Pr. ADNAOUI Mohamed Médecine Interne –Doyen de la FMPR

Pr. CHAD Bouziane Pathologie Chirurgicale Pr. OUAZZANI Taïbi Mohamed Réda Neurologie

Janvier et Novembre 1990

Pr. CHKOFF Rachid Pathologie Chirurgicale Pr. HACHIM Mohammed* Médecine-Interne

Pr. KHARBACH Aîcha Gynécologie -Obstétrique Pr. MANSOURI Fatima Anatomie-Pathologique Pr. TAZI Saoud Anas Anesthésie Réanimation

Février Avril Juillet et Décembre 1991

Pr. AL HAMANY Zaîtounia Anatomie-Pathologique

Pr. AZZOUZI Abderrahim Anesthésie Réanimation –Doyen de la FMPO

Pr. BAYAHIA Rabéa Néphrologie

Pr. BELKOUCHI Abdelkader Chirurgie Générale Pr. BENCHEKROUN Belabbes Abdellatif Chirurgie Générale Pr. BENSOUDA Yahia Pharmacie galénique

Pr. BERRAHO Amina Ophtalmologie

Pr. BEZZAD Rachid Gynécologie Obstétrique Pr. CHABRAOUI Layachi Biochimie et Chimie

Pr. CHERRAH Yahia Pharmacologie

Pr. CHOKAIRI Omar Histologie Embryologie

Pr. KHATTAB Mohamed Pédiatrie

Pr. SOULAYMANI Rachida Pharmacologie – Dir. du Centre National PV

Pr. TAOUFIK Jamal Chimie thérapeutique V.D à la pharmacie+Dir du CEDOC

Décembre 1992

Pr. AHALLAT Mohamed Chirurgie Générale V.D Aff. Acad. et Estud Pr. BENSOUDA Adil Anesthésie Réanimation

Pr. BOUJIDA Mohamed Najib Radiologie

Pr. CHAHED OUAZZANI Laaziza Gastro-Entérologie Pr. CHRAIBI Chafiq Gynécologie Obstétrique Pr. DEHAYNI Mohamed* Gynécologie Obstétrique Pr. EL OUAHABI Abdessamad Neurochirurgie

Pr. FELLAT Rokaya Cardiologie

Pr. GHAFIR Driss* Médecine Interne

Pr. JIDDANE Mohamed Anatomie

Pr. TAGHY Ahmed Chirurgie Générale

Pr. ZOUHDI Mimoun Microbiologie

Mars 1994

Pr. BENJAAFAR Noureddine Radiothérapie

Pr. BEN RAIS Nozha Biophysique

Pr. CAOUI Malika Biophysique

Pr. CHRAIBI Abdelmjid Endocrinologie et Maladies Métaboliques Doyen de la FMPA

Pr. EL BARDOUNI Ahmed Traumato-Orthopédie Pr. EL HASSANI My Rachid Radiologie

Pr. ERROUGANI Abdelkader Chirurgie Générale- Directeur CHIS

Pr. ESSAKALI Malika Immunologie

Pr. ETTAYEBI Fouad Chirurgie Pédiatrique

Pr. HADRI Larbi* Médecine Interne

Pr. HASSAM Badredine Dermatologie

Pr. IFRINE Lahssan Chirurgie Générale Pr. JELTHI Ahmed Anatomie Pathologique Pr. MAHFOUD Mustapha Traumatologie – Orthopédie Pr. RHRAB Brahim Gynécologie –Obstétrique

Pr. SENOUCI Karima Dermatologie

Mars 1994

Pr. ABBAR Mohamed* Urologie

Pr. ABDELHAK M’barek Chirurgie – Pédiatrique

Pr. BELAIDI Halima Neurologie

Pr. BENTAHILA Abdelali Pédiatrie

Pr. BENYAHIA Mohammed Ali Gynécologie – Obstétrique Pr. BERRADA Mohamed Saleh Traumatologie – Orthopédie

Pr. CHAMI Ilham Radiologie

Pr. CHERKAOUI Lalla Ouafae Ophtalmologie Pr. JALIL Abdelouahed Chirurgie Générale Pr. LAKHDAR Amina Gynécologie Obstétrique

Pr. MOUANE Nezha Pédiatrie

Mars 1995

Pr. ABOUQUAL Redouane Réanimation Médicale Pr. AMRAOUI Mohamed Chirurgie Générale Pr. BAIDADA Abdelaziz Gynécologie Obstétrique Pr. BARGACH Samir Gynécologie Obstétrique Pr. CHAARI Jilali* Médecine Interne

Pr. DIMOU M’barek* Anesthésie Réanimation Pr. DRISSI KAMILI Med Nordine* Anesthésie Réanimation Pr. EL MESNAOUI Abbes Chirurgie Générale Pr. ESSAKALI HOUSSYNI Leila Oto-Rhino-Laryngologie

Pr. HDA Abdelhamid* Cardiologie - Directeur HMI Med V

Pr. IBEN ATTYA ANDALOUSSI Ahmed Urologie Pr. OUAZZANI CHAHDI Bahia Ophtalmologie

Pr. SEFIANI Abdelaziz Génétique

Pr. ZEGGWAGH Amine Ali Réanimation Médicale

Décembre 1996

Pr. AMIL Touriya* Radiologie

Pr. BELKACEM Rachid Chirurgie Pédiatrie Pr. BOULANOUAR Abdelkrim Ophtalmologie Pr. EL ALAMI EL FARICHA EL Hassan Chirurgie Générale

Pr. GAOUZI Ahmed Pédiatrie

Pr. MAHFOUDI M’barek* Radiologie

Pr. OUADGHIRI Mohamed Traumatologie-Orthopédie

Pr. OUZEDDOUN Naima Néphrologie

Pr. ZBIR EL Mehdi* Cardiologie

Novembre 1997

Pr. ALAMI Mohamed Hassan Gynécologie-Obstétrique Pr. BEN SLIMANE Lounis Urologie

Pr. BIROUK Nazha Neurologie

Pr. ERREIMI Naima Pédiatrie

Pr. FELLAT Nadia Cardiologie

Pr. HAIMEUR Charki* Anesthésie Réanimation Pr. KADDOURI Noureddine Chirurgie Pédiatrique Pr. KOUTANI Abdellatif Urologie

Pr. LAHLOU Mohamed Khalid Chirurgie Générale Pr. MAHRAOUI CHAFIQ Pédiatrie

Pr. TAOUFIQ Jallal Psychiatrie

Pr. YOUSFI MALKI Mounia Gynécologie Obstétrique

Novembre 1998

Pr. AFIFI RAJAA Gastro-Entérologie

Pr. BENOMAR ALI Neurologie – Doyen de la FMP Abulcassis

Pr. BOUGTAB Abdesslam Chirurgie Générale Pr. ER RIHANI Hassan Oncologie Médicale Pr. BENKIRANE Majid* Hématologie

Pr. KHATOURI ALI* Cardiologie

Janvier 2000

Pr. ABID Ahmed* Pneumophtisiologie

Pr. AIT OUMAR Hassan Pédiatrie

Pr. BENJELLOUN Dakhama Badr.Sououd Pédiatrie

Pr. BOURKADI Jamal-Eddine Pneumo-phtisiologie Pr. CHARIF CHEFCHAOUNI Al Montacer Chirurgie Générale Pr. ECHARRAB El Mahjoub Chirurgie Générale Pr. EL FTOUH Mustapha Pneumo-phtisiologie Pr. EL MOSTARCHID Brahim* Neurochirurgie

Pr. ISMAILI Hassane* Traumatologie Orthopédie- Dir. Hop. Av. Marr.

Pr. MAHMOUDI Abdelkrim* Anesthésie-Réanimation Inspecteur du SSM

Pr. TACHINANTE Rajae Anesthésie-Réanimation Pr. TAZI MEZALEK Zoubida Médecine Interne

Novembre 2000

Pr. AIDI Saadia Neurologie

Pr. AJANA Fatima Zohra Gastro-Entérologie

Pr. BENAMR Said Chirurgie Générale

Pr. CHERTI Mohammed Cardiologie

Pr. ECH-CHERIF EL KETTANI Selma Anesthésie-Réanimation

Pr. EL HASSANI Amine Pédiatrie Directeur Hop. Chekikh Zaied

Pr. EL KHADER Khalid Urologie

Pr. EL MAGHRAOUI Abdellah* Rhumatologie

Pr. GHARBI Mohamed El Hassan Endocrinologie et Maladies Métaboliques Pr. MAHASSINI Najat Anatomie Pathologique

Pr. MDAGHRI ALAOUI Asmae Pédiatrie Pr. ROUIMI Abdelhadi* Neurologie

Décembre 2000

Pr. ZOHAIR ABDELAH* ORL

Décembre 2001

Pr. BALKHI Hicham* Anesthésie-Réanimation Pr. BENABDELJLIL Maria Neurologie

Pr. BENAMAR Loubna Néphrologie

Pr. BENAMOR Jouda Pneumo-phtisiologie Pr. BENELBARHDADI Imane Gastro-Entérologie

Pr. BENNANI Rajae Cardiologie

Pr. BENOUACHANE Thami Pédiatrie

Pr. BEZZA Ahmed* Rhumatologie

Pr. BOUCHIKHI IDRISSI Med Larbi Anatomie Pr. BOUMDIN El Hassane* Radiologie

Pr. CHAT Latifa Radiologie

Pr. DAALI Mustapha* Chirurgie Générale Pr. DRISSI Sidi Mourad* Radiologie

Pr. EL HIJRI Ahmed Anesthésie-Réanimation Pr. EL MAAQILI Moulay Rachid Neuro-Chirurgie

Pr. EL MADHI Tarik Chirurgie-Pédiatrique Pr. EL OUNANI Mohamed Chirurgie Générale

Pr. ETTAIR Said Pédiatrie Directeur. Hop.d’Enfants

Pr. GAZZAZ Miloudi* Neuro-Chirurgie

Pr. HRORA Abdelmalek Chirurgie Générale

Pr. KABBAJ Saad Anesthésie-Réanimation

Pr. KABIRI EL Hassane* Chirurgie Thoracique Pr. LAMRANI Moulay Omar Traumatologie Orthopédie

Pr. LEKEHAL Brahim Chirurgie Vasculaire Périphérique Pr. MAHASSIN Fattouma* Médecine Interne

Pr. MEDARHRI Jalil Chirurgie Générale Pr. MIKDAME Mohammed* Hématologie Clinique Pr. MOHSINE Raouf Chirurgie Générale

Pr. NOUINI Yassine Urologie Directeur Hôpital Ibn Sina

Pr. SABBAH Farid Chirurgie Générale

Pr. SEFIANI Yasser Chirurgie Vasculaire Périphérique Pr. TAOUFIQ BENCHEKROUN Soumia Pédiatrie

Décembre 2002

Pr. AL BOUZIDI Abderrahmane* Anatomie Pathologique

Pr. AMEUR Ahmed * Urologie

Pr. AMRI Rachida Cardiologie

Pr. AOURARH Aziz* Gastro-Entérologie

Pr. BAMOU Youssef * Biochimie-Chimie

Pr. BELMEJDOUB Ghizlene* Endocrinologie et Maladies Métaboliques

Pr. BENZEKRI Laila Dermatologie

Pr. BENZZOUBEIR Nadia Gastro-Entérologie Pr. BERNOUSSI Zakiya Anatomie Pathologique Pr. BICHRA Mohamed Zakariya* Psychiatrie

Pr. CHKIRATE Bouchra Pédiatrie

Pr. EL ALAMI EL FELLOUS Sidi Zouhair Chirurgie Pédiatrique Pr. EL HAOURI Mohamed * Dermatologie

Pr. FILALI ADIB Abdelhai Gynécologie Obstétrique

Pr. HAJJI Zakia Ophtalmologie

Pr. IKEN Ali Urologie

Pr. JAAFAR Abdeloihab* Traumatologie Orthopédie

Pr. KRIOUILE Yamina Pédiatrie

Pr. LAGHMARI Mina Ophtalmologie

Pr. MABROUK Hfid* Traumatologie Orthopédie Pr. MOUSSAOUI RAHALI Driss* Gynécologie Obstétrique Pr. OUJILAL Abdelilah Oto-Rhino-Laryngologie Pr. RACHID Khalid * Traumatologie Orthopédie Pr. RAISS Mohamed Chirurgie Générale

Pr. RGUIBI IDRISSI Sidi Mustapha* Pneumophtisiologie

Pr. RHOU Hakima Néphrologie

Pr. SIAH Samir * Anesthésie Réanimation

Pr. THIMOU Amal Pédiatrie

Pr. ZENTAR Aziz* Chirurgie Générale

Janvier 2004

Pr. ABDELLAH El Hassan Ophtalmologie

Pr. AMRANI Mariam Anatomie Pathologique Pr. BENBOUZID Mohammed Anas Oto-Rhino-Laryngologie Pr. BENKIRANE Ahmed* Gastro-Entérologie Pr. BOUGHALEM Mohamed* Anesthésie Réanimation

Pr. BOULAADAS Malik Stomatologie et Chirurgie Maxillo-faciale Pr. BOURAZZA Ahmed* Neurologie

Pr. CHAGAR Belkacem* Traumatologie Orthopédie Pr. CHERRADI Nadia Anatomie Pathologique

Pr. EL FENNI Jamal* Radiologie

Pr. EL HANCHI ZAKI Gynécologie Obstétrique Pr. EL KHORASSANI Mohamed Pédiatrie

Pr. EL YOUNASSI Badreddine* Cardiologie

Pr. HACHI Hafid Chirurgie Générale

Pr. JABOUIRIK Fatima Pédiatrie

Pr. KHARMAZ Mohamed Traumatologie Orthopédie Pr. MOUGHIL Said Chirurgie Cardio-Vasculaire Pr. OUBAAZ Abdelbarre* Ophtalmologie

Pr. TARIB Abdelilah* Pharmacie Clinique Pr. TIJAMI Fouad Chirurgie Générale Pr. ZARZUR Jamila Cardiologie

Janvier 2005

Pr. ABBASSI Abdellah Chirurgie Réparatrice et Plastique Pr. AL KANDRY Sif Eddine* Chirurgie Générale

Pr. ALLALI Fadoua Rhumatologie

Pr. AMAZOUZI Abdellah Ophtalmologie

Pr. AZIZ Noureddine* Radiologie

Pr. BARKAT Amina Pédiatrie

Pr. BENYASS Aatif Cardiologie

Pr. BERNOUSSI Abdelghani Ophtalmologie Pr. DOUDOUH Abderrahim* Biophysique Pr. EL HAMZAOUI Sakina* Microbiologie

Pr. HAJJI Leila Cardiologie (mise en disponibilité)

Pr. HESSISSEN Leila Pédiatrie

Pr. JIDAL Mohamed* Radiologie

Pr. LAAROUSSI Mohamed Chirurgie Cardio-vasculaire Pr. LYAGOUBI Mohammed Parasitologie

Pr. NIAMANE Radouane* Rhumatologie

Pr. RAGALA Abdelhak Gynécologie Obstétrique

Pr. SBIHI Souad Histo-Embryologie Cytogénétique Pr. ZERAIDI Najia Gynécologie Obstétrique

Décembre 2005

Pr. CHANI Mohamed Anesthésie Réanimation

Avril 2006

Pr. ACHEMLAL Lahsen* Rhumatologie

Pr. AKJOUJ Said* Radiologie

Pr. BELMEKKI Abdelkader* Hématologie

Pr. BENCHEIKH Razika O.R.L

Pr. BIYI Abdelhamid* Biophysique

Pr. BOUHAFS Mohamed El Amine Chirurgie - Pédiatrique Pr. BOULAHYA Abdellatif* Chirurgie Cardio – Vasculaire Pr. CHENGUETI ANSARI Anas Gynécologie Obstétrique

Pr. DOGHMI Nawal Cardiologie

Pr. FELLAT Ibtissam Cardiologie

Pr. FAROUDY Mamoun Anesthésie Réanimation Pr. HARMOUCHE Hicham Médecine Interne Pr. HANAFI Sidi Mohamed* Anesthésie Réanimation Pr. IDRISS LAHLOU Amine* Microbiologie

Pr. JROUNDI Laila Radiologie

Pr. KARMOUNI Tariq Urologie

Pr. KILI Amina Pédiatrie

Pr. KISRA Hassan Psychiatrie

Pr. KISRA Mounir Chirurgie – Pédiatrique Pr. LAATIRIS Abdelkader* Pharmacie Galénique Pr. LMIMOUNI Badreddine* Parasitologie

Pr. MANSOURI Hamid* Radiothérapie

Pr. OUANASS Abderrazzak Psychiatrie Pr. SAFI Soumaya* Endocrinologie Pr. SEKKAT Fatima Zahra Psychiatrie

Pr. SOUALHI Mouna Pneumo – Phtisiologie

Pr. TELLAL Saida* Biochimie

Pr. ZAHRAOUI Rachida Pneumo – Phtisiologie

Octobre 2007

Pr. ABIDI Khalid Réanimation médicale

Pr. ACHOUR Abdessamad* Chirurgie générale

Pr. AIT HOUSSA Mahdi* Chirurgie cardio vasculaire Pr. AMHAJJI Larbi* Traumatologie orthopédie

Pr. AOUFI Sarra Parasitologie

Pr. BAITE Abdelouahed* Anesthésie réanimation Directeur ERSM

Pr. BALOUCH Lhousaine* Biochimie-chimie Pr. BENZIANE Hamid* Pharmacie clinique Pr. BOUTIMZINE Nourdine Ophtalmologie Pr. CHARKAOUI Naoual* Pharmacie galénique Pr. EHIRCHIOU Abdelkader* Chirurgie générale Pr. ELABSI Mohamed Chirurgie générale Pr. EL MOUSSAOUI Rachid Anesthésie réanimation

Pr. EL OMARI Fatima Psychiatrie

Pr. GHARIB Noureddine Chirurgie plastique et réparatrice

Pr. HADADI Khalid* Radiothérapie

Pr. ICHOU Mohamed* Oncologie médicale

Pr. ISMAILI Nadia Dermatologie

Pr. KEBDANI Tayeb Radiothérapie

Pr. LALAOUI SALIM Jaafar* Anesthésie réanimation Pr. LOUZI Lhoussain* Microbiologie

Pr. MADANI Naoufel Réanimation médicale

Pr. MAHI Mohamed* Radiologie

Pr. MARC Karima Pneumo phtisiologie

Pr. MASRAR Azlarab Hématologie biologique

Pr. MRABET Mustapha* Médecine préventive santé publique et hygiène

Pr. MRANI Saad* Virologie

Pr. OUZZIF Ez zohra* Biochimie-chimie Pr. RABHI Monsef* Médecine interne Pr. RADOUANE Bouchaib* Radiologie

Pr. SEFFAR Myriame Microbiologie

Pr. SEKHSOKH Yessine* Microbiologie

Pr. SIFAT Hassan* Radiothérapie

Pr. TABERKANET Mustafa* Chirurgie vasculaire périphérique Pr. TACHFOUTI Samira Ophtalmologie

Pr. TAJDINE Mohammed Tariq* Chirurgie générale

Pr. TANANE Mansour* Traumatologie orthopédie Pr. TLIGUI Houssain Parasitologie

Pr. TOUATI Zakia Cardiologie

Décembre 2007

Pr. DOUHAL ABDERRAHMAN Ophtalmologie

Décembre 2008

Pr ZOUBIR Mohamed* Anesthésie Réanimation Pr TAHIRI My El Hassan* Chirurgie Générale

Mars 2009

Pr. ABOUZAHIR Ali* Médecine interne

Pr. AGDR Aomar* Pédiatre

Pr. AIT ALI Abdelmounaim* Chirurgie Générale Pr. AIT BENHADDOU El hachmia Neurologie

Pr. AKHADDAR Ali* Neuro-chirurgie

Pr. ALLALI Nazik Radiologie

Pr. AMINE Bouchra Rhumatologie

Pr. ARKHA Yassir Neuro-chirurgie

Pr. BELYAMANI Lahcen* Anesthésie Réanimation

Pr. BJIJOU Younes Anatomie

Pr. BOUHSAIN Sanae* Biochimie-chimie

Pr. BOUI Mohammed* Dermatologie

Pr. BOUNAIM Ahmed* Chirurgie Générale

Pr. BOUSSOUGA Mostapha* Traumatologie orthopédique Pr. CHAKOUR Mohammed * Hématologie biologique

Pr. CHTATA Hassan Toufik* Chirurgie vasculaire périphérique Pr. DOGHMI Kamal* Hématologie clinique

Pr. EL MALKI Hadj Omar Chirurgie Générale Pr. EL OUENNASS Mostapha* Microbiologie Pr. ENNIBI Khalid* Médecine interne

Pr. FATHI Khalid Gynécologie obstétrique

Pr. HASSIKOU Hasna * Rhumatologie

Pr. KABBAJ Nawal Gastro-entérologie

Pr. KABIRI Meryem Pédiatrie

Pr. KARBOUBI Lamya Pédiatrie

Pr. L’KASSIMI Hachemi* Microbiologie Directeur Hôpital My Ismail

Pr. LAMSAOURI Jamal* Chimie Thérapeutique Pr. MARMADE Lahcen Chirurgie Cardio-vasculaire

Pr. MESKINI Toufik Pédiatrie

Pr. MESSAOUDI Nezha * Hématologie biologique Pr. MSSROURI Rahal Chirurgie Générale

Pr. NASSAR Ittimade Radiologie

Pr. OUKERRAJ Latifa Cardiologie

Pr. RHORFI Ismail Abderrahmani * Pneumo-phtisiologie

PROFESSEURS AGREGES :

Octobre 2010

Pr. ALILOU Mustapha Anesthésie réanimation Pr. AMEZIANE Taoufiq* Médecine interne Pr. BELAGUID Abdelaziz Physiologie

Pr. BOUAITY Brahim* ORL

Pr. CHADLI Mariama* Microbiologie

Pr. CHEMSI Mohamed* Médecine aéronautique Pr. DAMI Abdellah* Biochimie chimie Pr. DARBI Abdellatif* Radiologie

Pr. DENDANE Mohammed Anouar Chirurgie pédiatrique

Pr. EL HAFIDI Naima Pédiatrie

Pr. EL MAZOUZ Samir Chirurgie plastique et réparatrice

Pr. EL SAYEGH Hachem Urologie

Pr. ERRABIH Ikram Gastro entérologie Pr. LAMALMI Najat Anatomie pathologique Pr. MOSADIK Ahlam Anesthésie Réanimation Pr. MOUJAHID Mountassir* Chirurgie générale

Pr. NAZIH Mouna* Hématologie

Pr. ZOUAIDIA Fouad Anatomie pathologique

Mai 2012

Pr. AMRANI Abdelouahed Chirurgie Pédiatrique Pr. ABOUELALAA Khalil* Anesthésie Réanimation Pr. BELAIZI Mohamed* Psychiatrie

Pr. BENCHEBBA Driss* Traumatologie Orthopédique Pr. DRISSI Mohamed* Anesthésie Réanimation Pr. EL ALAOUI MHAMDI Mouna Chirurgie Générale Pr. EL KHATTABI Abdessadek* Médecine Interne Pr. EL OUAZZANI Hanane* Pneumophtisiologie Pr. ER-RAJI Mounir Chirurgie Pédiatrique

Pr. JAHID Ahmed Anatomie pathologique

Pr. MEHSSANI Jamal* Psychiatrie

Pr. RAISSOUNI Maha* Cardiologie

Février 2013

Pr. AHID Samir Pharmacologie – Chimie

Pr. AIT EL CADI Mina Toxicologie

Pr. AMRANI HANCHI Laila Gastro-Entérologie Pr. AMOUR Mourad Anesthésie Réanimation Pr. AWAB Almahdi Anesthésie Réanimation Pr. BELAYACHI Jihane Réanimation Médicale Pr. BELKHADIR Zakaria Houssain Anesthésie Réanimation Pr. BENCHEKROUN Laila Biochimie-Chimie

Pr. BENKIRANE Souad Hématologie

Pr. BENNANA Ahmed* Informatique Pharmaceutique 0.

Pr. BENSGHIR Mustapha* Anesthésie Réanimation Pr. BENYAHIA Mohammed* Néphrologie

Pr. BOUATIA Mustapha Chimie Analytique

Pr. BOUABID Ahmed Salim* Traumatologie Orthopédie Pr. BOUTARBOUCH Mahjouba Anatomie

Pr. CHAIB Ali* Cardiologie

Pr. DENDANE Tarek Réanimation Médicale

Pr. DINI Nouzha* Pédiatrie

Pr. ECH-CHERIF EL KETTANI Mohamed Ali Anesthésie Réanimation Pr. ECH-CHERIF EL KETTANI Najwa Radiologie

Pr. ELFATEMI Nizare Neuro-Chirurgie

Pr. EL GUERROUJ Hasnae Médecine Nucléaire Pr. EL HARTI Jaouad Chimie Thérapeutique

Pr. EL JOUDI Rachid* Toxicologie

Pr. EL KABABRI Maria Pédiatrie

Pr. EL KHANNOUSSI Basma Anatomie Pathologie

Pr. EL KHLOUFI Samir Anatomie

Pr. EL KORAICHI Alae Anesthésie Réanimation Pr. EN-NOUALI Hassane* Radiologie

Pr. ERRGUIG Laila Physiologie

Pr. FIKRI Meryim Radiologie

Pr. GHFIR Imade Médecine Nucléaire

Pr. IMANE Zineb Pédiatrie

Pr. IRAQI Hind Endocrinologie et maladies métaboliques

Pr. KABBAJ Hakima Microbiologie

Pr. KADIRI Mohamed* Psychiatrie

Pr. LATIB Rachida Radiologie

Pr. MAAMAR Mouna Fatima Zahra Médecine Interne

Pr. MEDDAH Bouchra Pharmacologie

Pr. MELHAOUI Adyl Neuro-chirurgie

Pr. MRABTI Hind Oncologie Médicale Pr. NEJJARI Rachid Pharmacognosie Pr. OUBEJJA Houda Chirurgie Pédiatrique Pr. OUKABLI Mohamed* Anatomie Pathologique Pr. RAHALI Younes Pharmacie Galénique

Pr. RATBI Ilham Génétique

Pr. RAHMANI Mounia Neurologie

Pr. REDA Karim* Ophtalmologie

Pr. REGRAGUI Wafa Neurologie

Pr. RKAIN Hanan Physiologie

Pr. ROSTOM Samira Rhumatologie

Pr. ROUAS Lamiaa Anatomie Pathologique Pr. ROUIBAA Fedoua* Gastro-Entérologie Pr. SALIHOUN Mouna Gastro-Entérologie

Pr. SAYAH Rochde Chirurgie Cardio-Vasculaire Pr. SEDDIK Hassan* Gastro-Entérologie

Pr. ZERHOUNI Hicham Chirurgie Pédiatrique

Pr. ZINE Ali* Traumatologie Orthopédie

Avril 2013

Pr. EL KHATIB Mohamed Karim* Stomatologie et Chirurgie Maxillo-faciale

Pr. GHOUNDALE Omar* Urologie

Pr. ZYANI Mohammad* Médecine Interne

MARS 2014

ACHIR ABDELLAH Chirurgie Thoracique

BENCHAKROUN MOHAMMED Traumatologie- Orthopédie BOUCHIKH MOHAMMED Chirurgie Thoracique

EL KABBAJ DRISS Néphrologie

EL MACHTANI IDRISSI SAMIRA Biochimie-Chimie

HARDIZI HOUYAM Histologie- Embryologie-Cytogénétique

HASSANI AMALE Pédiatrie

HERRAK LAILA Pneumologie

JANANE ABDELLA TIF Urologie

JEAIDI ANASS Hématologie Biologique

KOUACH JAOUAD Génécologie-Obstétrique LEMNOUER ABDELHAY Microbiologie

MAKRAM SANAA Pharmacologie

OULAHYANE RACHID Chirurgie Pédiatrique RHISSASSI MOHAMED JMFAR CCV

SABRY MOHAMED Cardiologie

SEKKACH YOUSSEF Médecine Interne

TAZL MOUKBA. :LA.KLA. Génécologie-Obstétrique

*

DECEMBRE 2014

ABILKACEM RACHID' Pédiatrie

AIT BOUGHIMA FADILA Médecine Légale

BEKKALI HICHAM Anesthésie-Réanimation

BENAZZOU SALMA Chirurgie Maxillo-Faciale

BOUABDELLAH MOUNYA Biochimie-Chimie

BOUCHRIK MOURAD Parasitologie

DERRAJI SOUFIANE Pharmacie Clinique

DOBLALI TAOUFIK Microbiologie

EL AYOUBI EL IDRISSI ALI Anatomie

EL GHADBANE ABDEDAIM HATIM Anesthésie-Réanimation EL MARJANY MOHAMMED Radiothérapie

FE]JAL NAWFAL Chirurgie Réparatrice et Plastique

JAHIDI MOHAMED O.R.L

LAKHAL ZOUHAIR Cardiologie

OUDGHIRI NEZHA Anesthésie-Réanimation

Rami Mohamed Chirurgie Pédiatrique

SABIR MARIA Psychiatrie

SBAI IDRISSI KARIM Médecine préventive, santé publique et Hyg.

AOUT 2015

Meziane meryem Dermatologie

Tahri latifa Rhumatologie

JANVIER 2016

BENKABBOU AMINE Chirurgie Générale

EL ASRI FOUAD Ophtalmologie

ERRAMI NOUREDDINE O.R.L

NITASSI SOPHIA O.R.L

2- ENSEIGNANTS – CHERCHEURS SCIENTIFIQUES

PROFESSEURS / PRs. HABILITES

Pr. ABOUDRAR Saadia Physiologie

Pr. ALAMI OUHABI Naima Biochimie – chimie

Pr. ALAOUI KATIM Pharmacologie

Pr. ALAOUI SLIMANI Lalla Naïma Histologie-Embryologie

Pr. ANSAR M’hammed Chimie Organique et Pharmacie Chimique Pr. BOUHOUCHE Ahmed Génétique Humaine

Pr. BOUKLOUZE Abdelaziz Applications Pharmaceutiques Pr. BOURJOUANE Mohamed Microbiologie

Pr. CHAHED OUAZZANI Lalla Chadia Biochimie – chimie

Pr. DAKKA Taoufiq Physiologie

Pr. DRAOUI Mustapha Chimie Analytique Pr. EL GUESSABI Lahcen Pharmacognosie Pr. ETTAIB Abdelkader Zootechnie Pr. FAOUZI Moulay El Abbes Pharmacologie

Pr. HAMZAOUI Laila Biophysique

Pr. HMAMOUCHI Mohamed Chimie Organique Pr. IBRAHIMI Azeddine Biologie moléculaire Pr. KHANFRI Jamal Eddine Biologie

Pr. OULAD BOUYAHYA IDRISSI Med Chimie Organique

Pr. REDHA Ahlam Chimie

Pr. TOUATI Driss Pharmacognosie

Pr. ZAHIDI Ahmed Pharmacologie

Pr. ZELLOU Amina Chimie Organique

Mise à jour le 14/12/2016 par le Service des Ressources Humaines

A mes très chers parents KOUROUB Hannouma

et HANNAN Abdelhakim

Vous le premier amour que j’ai connu, c’est pour cette raison

que je débute en vous remerciant, vous m'avez offert plus

que tout ce que je pouvais désirer et mériter, et vous jouez

un rôle primaire et dominant dans ma vie.

Toi ma mère symbole d’amour et de tendresse, tu as toujours

été là pour m’écouter, merci de m’avoir mis au monde, de m’avoir

enseigné tout ce qui est important pour y vivre et

pour ton soutien constant

Toi mon père symbole de la force et source d'inspiration,

tu m’as appris à avoir confiance en moi et c’est grâce

à ton éducation que je suis aujourd’hui une personne autonome,

indépendante et heureuse de vivre.

Par le biais de cette thèse, mon amour pour vous pourra

garder une trace écrite, mais dans mon cœur il est présent

A ma petite sœur adorée Hannan Rim

Merci pour les moments extraordinaires de joie qu’on a partagés et

pour les moments de déprime et de tristesse où j’avais besoin de parler

à une sœur, je te souhaite une vie pleine de bonheur et réussite et

saches que je t'aime de tout mon cœur.

A mes oncles, tantes, cousins et à tous les membres

de la famille

Je vous remercie chaleureusement pour votre présence

et votre soutien et je vous souhaite santé, bonheur et prospérité.

A mes très chères amis

Nafissa Arragragui, Fadma Gouaz, Sanae Guarti, Siham El Founini,

Soraya Bouhairi, Zineb Hammouch, Kawtar Zinedine, Najoua

Sefiani, Meriem EL Hajjaji, Hanae Berreho, Gharbi Malak Asmaa

Benmouloud, Asmae Benkerroum, El Oudani Mehdi, El Idrissi

Bouhiaoui Mehdi, Jamaaoui Imad, Sarsi Mehdi, El Harrass

Abdassamad, Chokri Anas, El Harghi Ismail, Almoustapha Brahima

Qui m'ont accompagné, aidé, soutenu et encouragé tout au long de la

réalisation de cette thèse. Pour ces moments d’amitié de bonheur

Un énorme MERCI pour cet homme tout simplement génial Chiba

Mouncef avec qui j’ai partagé beaucoup d’émotions de bonheur,

sympathie, admiration et tendresse.

Je suis vraiment touchée et reconnaissante

pour ton soutien constant et ton réconfort que tu m’as témoigné

durant les moments difficiles je ne pourrai jamais

A notre maitre et Président

de thèse Monsieur le professeur ABDELLAH DAMI

Professeur de biochimie

Permettez-moi de vous remercier Monsieur le président,

pour ce grand honneur que vous me faites, en acceptant

de présider ce jury.

C'est avec un réel plaisir que j'ai assisté à vos cours car

J’étais toujours curieuse de découvrir et comprendre

le principe des méthodes analytiques

Je vous prie, cher Maître, d'accepter dans ce travail

A notre maitre et encadrant de thèse

Monsieur le professeur AZLARAB MASRAR

chef de service hématologie biologique CHU

Je tiens à vous exprimer ma profonde gratitude ainsi

que mes sincères remerciements pour m’avoir accueilli dans votre

service et d'avoir accepté de m'encadrer pour ce travail de thèse.

Je dois vous avouer que vous êtes parmi les professeurs qui ont

marqué mon esprit, vous m’avez donné le goût de l’apprentissage,

vous m’avez aidé à me surpasser et à prendre confiance en moi,

je tiens à vous dire que vous êtes un excellent professeur je vous

remercie pour votre savoir et vos connaissances que vous

avez partagé avec nous durant vos cours.

Vos conseils avisés, vos encouragements incessants ainsi que vos

qualités humaines m’ont été d’une très grande utilité pour mener

à terme ce travail. Je vous suis sincèrement reconnaissante

pour toutes ces choses.

Veuillez trouver ici le témoignage de toute mon estime

et de mon profond respect.

A notre maitre et juge de thèse

Madame le professeur NAZIH MOUNA

professeur d’hématologie biologique

Je vous remercie d’avoir accepté de faire partie des membres du jury.

Votre rigueur scientifique, votre amour pour le travail font de vous

une professeur de qualité et c’est grâce à vos compétences

pédagogiques que j’ai suivi vos cours avec beaucoup

d’attention et plaisir.

Je suis particulièrement honorée de votre présence

et je vous exprime ici ma plus haute considération.

A notre maitre et juge de thèse

Madame le professeur SOUAD BENKIRANE

professeur d'hématologie biologique

C’est pour moi un immense plaisir que vous ayez

accepté de participer au jury.

Je n’oublierai jamais l’atmosphère chaleureuse

et assidue de vos séances

Je tiens absolument à vous présenter mes meilleurs vœux

de santé et que votre futur bébé arrivera à vous faire sourire

ou pleurer de joie, vous émerveiller et vous attendrir tout à la fois.

Que ce travail soit pour moi l’occasion de vous exprimer mon

admiration ainsi que ma gratitude.

LISTE DES ABREVIATIONS

ADN : Acide désoxyribonucléique

C : Cytosine

CAS : Chemical Abstracts Service

EDTA : Acide éthylène-diamine-tétra-acétique

Ex : Exemple

G : Guanine

GBEA : Guide de Bonne Exécution des Analyses

GR : Globule rouge

HT : Hématocrite

IgM : Imunoglobuline

ISCMPA : Irmandade de Santa Casa de Misericórdia de Porto Alegre

ISO : International Standard Organisation

MCDH : Micro Chromatic Detection Haematology

MGG : May-Grünwald-Giemsa

Min : Minute

n : Nombre

p : La valeur-p

PBS : Tampon phosphate salin

R/B : Rouge/ Bleu

r2 : Coefficient de corrélation

RBC : Red blood cell

REG : Réticulum endoplasmique granuleux

RFID : Identification par Radio Fréquence

RVB : Système rouge vert bleu

Sec : Seconde

SPSS : Paquet statistique pour les sciences sociales STAT : Urgent

T : Thymine

TLA : Total Laboratory Automation

V/B : Vert / Bleu

VHL : Organisation hollandaise pour la recherche dans l'hématologie biologique σ : Ecart type

LISTE DES FIGURES

Figure 1. Présentation de l’automate de coloration de lames RAL STAINER . ...7 Figure 2. Description du kit RAL Stainer MCDh ...8 Figure 3. Le Kit MCDh du RAL Stainer...9 Figure 4. Etapes de mise en place du kit de coloration. ... 12 Figure 5. Etapes d’installation des lames dans leur porteur. ... 13 Figure 6. Etapes de chargement de lames dans l‘automate... 13 Figure 7. Unité de Préparation de lame hématologique automatisée SP-1000i de

Sysmex. ... 14

Figure 8. Graphe représentant la variation de la netteté des frottis sanguins selon les

deux méthodes de coloration : automatique et semi automatique. ... 23

Figure 9. Graphe représentant la forme des globules rouge selon les deux méthodes

de coloration : automatique et semi automatique. ... 23

Figure 10. Technique d’étalement d’un frottis sanguin. ... 26 Figure 11. Adaptation de la technique d’étalement à la viscosité du sang. ... 27 Figure 12. A,B,C exemples de coloration de May-Grünwald-Giemsa correcte avec des

hématies beige rosé, non réfringentes, les autres éléments colorés selon leurs constituants cellulaires et une zone intercellulaire transparente et claire. ... 32

Figure 13. Coloration considérée comme correcte : les hématies sont rose orangé ou

«chamois» et le cytoplasme des polynucléaires est rosé (flèche noire). Les corps lympho-glandulaires sont bien visibles. MGG × 400. ... 33

Figure 14. Coloration considérée comme optimale : les hématies (cercle rouge) sont

rose orangé ou « chamois », le cytoplasme des polynucléaires est quasi transparent et les granulations bien visibles (flèche noire), les granulations des mastocytes sont violet sombre (carré jaune) et les corps lympho-glandulaires sont bien visibles (flèche bleue). MGG × 400... 33

Figure 15. Coloration considérée comme inadéquate : les hématies sont verdâtres, ce

qui démontre l’usage d’une solution de dilution/rinçage alcaline. MGG × 400……..34

Figure 16 . A, B colorations réalisées avec un tampon au pH trop alcalin. Le frottis est

alors sur coloré: les hématies ont un aspect bleu-vert, les cytoplasmes deviennent Grisâtres... 34

Figure 17. A, B Hématies réfringentes sur un frottis mal fixé par le May-Grünwald

soit que la qualité du colorant ne soit pas correcte (le méthanol entrant dans sa composition ne doit pas contenir plus de 3% d’eau) soit qu’il n’a pas été renouvelé assez fréquemment. ... 35

Figure 18. Exemple de coloration mal rincée (A,B) ou de coloration réalisée à partir

d’un prélèvement fait sur héparine et non sur EDTA (C,D). Le fond de la lame entre les éléments cellulaires n’est pas net. On peut aussi observer ce phénomène en présence d’une importante hypergammaglobulinémie, en particulier de type IgM. ... 35

Figure 19. Exemple d’un frottis sanguin correct : homogène, de bonnes longueur et

largeur, sans franges. ... 38

Figure 20. Exemples de mauvais frottis. ... 39 Figure 21. Zone de décompte inadaptée : trop épaisse, hématies tassées. ... 40 Figure 22. Zone de décompte inadaptée : trop fine, hématies écrasées. ... 40 Figure 23. Zone optimale de décompte : hématies en couche monocellulaire, au centre

clair visible. ... 41

Figure 24. Zone optimale de décompte et réalisation d’un trajet en créneaux pour la

Figure 25. Quelques exemples de coloration. ... 46 Figure 26. Couleur moyenne des hématies (n > 30) des échantillons (n = 40). ... 47 Figure 27. Analyse des rapports de couleurs des hématies (n > 30) des échantillons (n

= 40). ... 48

Figure28. Analyse des hématies de 32 frottis d'archives de Necker . ... 49 Figure 29. Diminution du temps de réponse corrélé à la diminution du nombre

d’étapes manuelles d’après les travaux de R. Dadoun. * : Statistiquement significatif (p<0,01) ... 53

Figure 30. a) Frottis sanguin périphérique manuel de mauvaise qualité b) Frottis

automatisé de bonne qualité ... 55

Figure 31. Régression linéaire et de dispersion des parcelles pour les neutrophiles

des bandes neutrophiles, les neutrophiles segmentés, les éosinophiles, les monocytes, les lymphocytes, les lymphocytes atypiques, les granulocytes immatures et érythroblastes. ... 67

LISTE DES TABLEAUX

Tableau I. Affinités tinctoriales des différents constituants cellulaires après coloration

panoptique. ... 18

Tableau II. Protocole de coloration May Grunwald Giemsa avec tampon RAL

pH 7.0 ... 19

Tableau III. Produits nécessaires à la coloration ... 36 Tableau IV. Résultats de la coloration ... 37 Tableau V. Procédure et protocole de coloration. ... 45

Tableau VI. Protocole de la coloration May-Grünwald- Giemsa manuelle et avec la

méthode SP 1000 i ... 58

Tableau VII. Tampons utilisés pour la coloration ... 59 Tableau VIII. Paramètres des frottis sanguins effectuées par l'équipement Sysmex

SP-1000i calculée à partir de l'hématocrite du patient ... 62

Tableau IX. Evaluation de la qualité des lames produites par le Sysmex SP-1000i

utilisant le control de qualité par CellaVision DM96 pour chaque niveau d'hématocrites. ... 64

Tableau X. Nombre de lames et de leucocytes mal classés par le CellaVision DM96

utilisant des lames préparées par le Sysmex SP-1000i. ... 66

Tableau XI. Valeurs de corrélation correspondantes ... 66 Tableau XII. Résultats de coloration avec le kit RAL Stainer MCDh ... 71

SOMMAIRE

I. INTRODUCTION ...2 II. MATERIELS ET METHODES ...6

II.1 L’automate de coloration des lames RAL Stainer ...6 II.1.1 Principe ...7 II.1.2 Description du kit ...8 II.1.3 Caractéristiques techniques ...9 II.1.4 Mode opératoire ... 10 II.1.4.1 Préparation des frottis sanguins ... 10 II.1.4.2 Mise en place du kit de coloration ... 11 II.2 Unité de Préparation de Lame Hématologique Automatisée SP-1000i de

Sysmex ... 14 II.2.1 Technologie ... 15 II.2.1.1 Préparation de la lame ... 15 II.2.1.2 Coloration ... 15 II.2.1.3 Mécanisme d’action de la coloration MGG ... 16 II.3 Les critères de jugement des colorations ... 20

III. RESULTATS ... 23 IV. DISCUSSION ... 25 V. CONCLUSION... 78 RESUMES ... 79 REFERENCES ... 83

1

2

I. INTRODUCTION :

Malgré l’amélioration des analyseurs automatisés d’hématologie destinés à la réalisation des hémogrammes, l’examen du frottis sanguin au microscope est indispensable quand les données fournies par les appareils sont qualitativement ou quantitativement anormales. Sa réalisation apporte alors des informations permettant dans un nombre de cas la validation technique du résultat. Dans certaines situations, les cellules pathologiques et anormales dont les aspects morphologiques sont proches de ceux des cellules normales ne déclenchent pas d’alarmes et ne sont donc pas détectées. Leur recherche systématique au microscope est alors nécessaire [1]. Les différentes étapes de préparation d’un frottis doivent respecter des critères précis afin de limiter les risques d’erreur liés à un artefact technique lors de l’analyse au microscope : préparation de l’échantillon à analyser et du matériel utilisé pour l’étalement, réalisation du geste, séchage à l’air libre et coloration. L’examen du frottis devra comprendre obligatoirement une analyse morphologique des éléments figurés du sang, à laquelle sera ajoutée la réalisation d’une formule leucocytaire microscopique si les données quantitatives de l’automate ne sont pas satisfaisantes. Il reste néanmoins des limites liées à la nature même de cet examen, qu’il est nécessaire de connaître afin d’éviter tout biais dans l’interprétation des résultats et les frottis d’intérêt devront ensuite être conservés. Les circonstances les plus courantes nécessitant la réalisation d’un frottis sanguin sont les suivantes [2]:

 présence d’anomalies quantitatives de l’hémogramme : thrombopénie, leucopénie ou hyperleucocytose (selon les données de la formule leucocytaire automatisée), anémie (pour la recherche

3

d’anomalies morphologiques des hématies), macrocytose ou microcytose isolées ;

 présence d’anomalies quantitatives de la formule leucocytaire : neutropénie ou agranulocytose, hyperlymphocytose, monocytose;  présence d’alarmes « constructeur », liées à une difficulté à identifier

ou séparer les populations leucocytaires : suspicion de présence de blastes, de cellules lymphoïdes anormales, de schizocytes par exemple.

Ces anomalies peuvent être liées entre elles, l’examen du frottis peut permettre un diagnostic ou au moins l’orientation vers un diagnostic. Les conditions de travail au microscope se sont considérablement modifiées, avec notamment la standardisation de la confection des frottis et des colorations qui facilitent la lecture au microscope et rendent plus aisée l’interprétation en cas d’anomalies. La coloration combinée de May-Grünwald-Giemsa (MGG), dite «coloration panoptique de Pappenheim », et celle de Wright ont succédé à l’ancienne coloration aux triacides d’Ehrlich modifiée par Romanovski. Les colorants de ce groupe contiennent du bleu de méthylène (colorant basique) et de l’éosine (colorant acide) en différentes proportions et ils diffèrent aussi par la méthode utilisée pour activer le bleu de méthylène. Avec le nombre croissant de demandes d’analyses biomédicales les techniques manuelles classiques se trouvent dépassées pour répondre à ce grand besoin, l’introduction des instruments automatiques soulage efficacement cette situation en procurant des résultats d’analyse rapides et fiables. Pour une lecture optimale du frottis sanguin, des colorations automatisées ont été aussi développées ainsi que

4

plusieurs types de techniques de confection automatisée d’étalements sanguins avec un ajustement en fonction de l’hématocrite ont été successivement mis en place [1].

L’objectif de notre travail est d’évaluer deux colorations panoptiques : MCDH (RAL Stainer), une coloration formulée sans méthanol, prête à l'emploi et ne nécessite aucune dilution assurant ainsi reproductibilité et standardisation, et May-Grunwald-Giemsa (MGG) à pH7 (Sysmex SP1000) : possédant une unité de préparation et de coloration de lames complètement automatisée et intégrée qui permet la préparation cohérente et fiable de frottis sanguins de haute qualité.

5

Matériels

et méthodes

6

II. MATERIELS ET METHODES :

L’étude est menée au niveau du laboratoire central d’hématologie à l’hôpital Ibn Sina (Rabat). La population cible est constituée des patients ayant présenté un hémogramme nécessitant la réalisation d’un frottis sanguin. L’effectif de notre échantillon est de 60 frottis sanguins. Les critères d’étude sélectionnés pour examiner l’apparence des frottis sont la coloration des hématies, leur forme, la netteté de l'image et sa brillance [3].

II.1 L’automate de coloration des lames RAL Stainer :

Le RAL Stainer est un automate de coloration simple d’utilisation il propose comme coloration hématologique le Kit RAL Stainer MCDh .Les réactifs sont conditionnés dans des bacs scellés, munis d’une puce RFID pour éviter toute utilisation du réactif au-delà de la date limite d’utilisation et tout excès, problème récurrent avec les procédés « ouverts ». Les protocoles de coloration ont été optimisés pour les frottis sanguins périphériques préparés avec l’Hemoslider. L’analyseur permet un chargement et un déchargement en continu, en laissant la possibilité d’insérer une lame urgente à tout moment. L’ensemble ne nécessite aucune maintenance et, du point de vue de la sécurité et des questions environnementales, les colorants sont dépourvus de méthanol [4].

7

Figure 1. Présentation de l‘automate de coloration de lames RAL STAINER [5]. II.1.1 Principe :

La coloration panoptique MCDh permet de réaliser la formule sanguine et médullaire, elle s’effectue par l’utilisation successive de quatre réactifs : le MCDh 1, le MCDh 2, le MCDh 3 et le MCDh 4. Le MCDh 1, formulé avec de l’alcool éthylique, est un mélange de colorants neutres ; il permet la fixation du frottis et prépare la coloration, notamment, des éléments hydrosolubles tels que les granulations basophiles. Ces colorants sont inactifs en milieu alcoolique et n’agissent de façon sélective qu’au moment de leur libération dans la solution MCDh 2. Cette libération provoque la précipitation des colorants neutres permettant la coloration des hématies, du cytoplasme des granulocytes neutrophiles ainsi que les granulations éosinophiles. Le MCDh 3 est une solution aqueuse de couleur bleue, qui permet la coloration du cytoplasme des

8

monocytes et des lymphocytes. Le MCDh 3 permet également le phénomène de métachromasie en colorant les granulations azurophiles en rouge. Enfin, le MCDh 4 vient éliminer l’excès de colorant et participe à la différenciation des éléments cellulaires grâce à l’action d’agents de rinçage spécialement sélectionnés. Ce dernier réactif est fourni sous la forme d’un concentré qu’il faut diluer à 6 litres avec de l’eau, de préférence déminéralisée. C’est l’action successive des 4 réactifs qui permet l’apparition de la couleur violette au niveau de la chromatine, des plaquettes et des granulations neutrophiles [6].

II.1.2 Description du kit : [6]

9

Figure 3. Le Kit MCDh du RAL Stainer [6]. II.1.3 Caractéristiques techniques : [7]

 Kit de réactifs MCDh pour RAL Stainer - Prêt à l'emploi

- Capacité de coloration maximale 500 lames - Durée de conservation 18 mois avant ouverture - 20 jours après ouverture

- Température de stockage entre 15 °C et 30 °C  Débit Selon le protocole de coloration utilisé.

- Protocole de coloration standard 11 min - Cycle de séchage : 2 minutes

- Coloration, 4 bains de coloration et 1 bain de rinçage - Capacité de chargement jusqu'à 10 lames par support

10

- 2 stations de chargement

 Dimensions automate de coloration RAL - Hauteur 62,4 cm

- Diamètre 42,5 cm - Poids 28 kg

- Coloration supportée, kit de réactifs MCDh (sans méthanol) - Entretien, aucune préparation de réactif

- Pas de maintenances

- Température ambiante 15 °C à 30 °C

- Consommation électrique 150 VA ou moins - 50 – 60 Hz

- 110 – 23 V

II.1.4 Mode opératoire :

II.1.4.1 Préparation des frottis sanguins :

Le principe de confection d'un frottis consiste à étaler une goutte de sang uniformément sur une lame de verre, de manière à obtenir une seule couche de cellules, qui après coloration et fixation, pourra permettre d'effectuer l'étude morphologique des éléments figurés du sang, et de déterminer s'il y a anomalies de présence, d'aspect ou de nombre de cellules[8].

11

II.1.4.2 Mise en place du kit de coloration : [5,6]

 Si à l’allumage, l’appareil ne détecte pas de kit de coloration, il demande d’insérer un kit de coloration.

 Dans la page Réglages on a appuyé sur

 On a placé les 4 flacons numérotés de 1 à 4 dans leur emplacement respectif puis on a ôté les bouchons.

 On a Préparé le liquide de rinçage : dans le bidon de rinçage, on a dilué le contenu des flacons 5 (MCDh 4, concentré) jusqu’à 6 litres avec de l’eau, de préférence déminéralisée.

 On a Connecté le bidon de rinçage au RAL Stainer.

Temps de réalisation : les temps de coloration de référence sont préprogrammés.

RAL Stainer est un appareil automatique de bain de coloration. Un bras qui suit une trajectoire circulaire et verticale successivement :

 accroche le porteur de lames déposé par l‘utilisateur ;

 Apporte le porteur de lames dans chaque réservoir de coloration et ensuite dans le réservoir de rinçage en fonction de l'enregistrement protocole ;

 fait retourner le porteur de lames à sa position initiale.  Les lames sont ensuite séchées.

12

Figure 4. Etapes de mise en place du kit de coloration [6].

Le bras de l’automate va ouvrir les couvercles des stations de coloration, les

portes de chargement des réactifs sont correctement alignées.

Rompre la bague d’inviolabilité puis positionner les flacons encore fermés du kit

de coloration en faisant correspondre les numéros visibles sur les étiquettes des

flacons et sur les emplacements dans l’appareil. Enlever les bouchons avec

précaution

Fermer délicatement les tiroirs de chargement des réactifs jusqu’à entendre un « clic » de verrouillage. L’automate referme

les couvercles des stations de coloration et identifie le kit de

13

Figure 5. Etapes d‘installation des lames dans leur porteur [5].

Figure 6. Etapes de chargement de lames dans l‘automate [5].

Tourner le support de lames et libérer la mâchoire en plaçant le bouton sur le O(Open)

Placer jusqu'à dix lames (identification

maintenu).

Bloquer la mâchoire par le déplacement de la manette sur la position C "Closed"

14

II.2 Unité de Préparation de Lame Hématologique Automatisée SP-1000i de Sysmex :

Le SP-1000i est la troisième génération de produits de préparation et de coloration de lame intégrés éprouvés, développés, fabriqués et soutenus par Sysmex. Dans le cadre de l’exploitation de routine, le SP-1000i offre une préparation automatisée rapide des frottis de sang périphérique pour aider les laboratoires à satisfaire et standardiser le délai d'exécution de réexamen de frottis. Il possède une unité de préparation et de coloration de lames complètement automatisée et intégrée qui permet la préparation cohérente et fiable de frottis sanguins de haute qualité. Il améliore et standardise le temps nécessaire pour préparer le frottis et applique les critères définis par le laboratoire pour préparer les frottis : Une préparation de lame réflexive [9].

Figure 7. Unité de Préparation de Lame Hématologique

15 II.2.1 Technologie : [9]

II.2.1.1 Préparation de la lame :

 Utilisent une lame d'étalement robuste et auto-nettoyante pour préparer des frottis monocouches

 Impriment directement sur la lame porte-objets des informations selon les options définies par le laboratoire qui peuvent comporter :

- Une ou plusieurs étiquettes de code à barres uni- ou bidimensionnelles

- Le nom du patient

- Le numéro de code à barres

- Le résultat spécifique à l'instrument

 Sèchent automatiquement les frottis avant coloration.  Abritent les lames dans des cassettes individuelles.

 Deux tours d'entreposage latéraux intégrés offrent la capacité d'abriter des lames de couleurs différentes afin de différencier visuellement les frottis STAT des autres frottis.

II.2.1.2 Coloration :

Les colorants de type coloration de Romanovsky comportent un mélange : D’un colorant basique ou cationique comme l’azur qui colore en bleu ou bleu violet les groupements acides des acides nucléiques, des protéines du noyau et du cytoplasme, des granulations basophiles et à un moindre degré des granulations neutrophiles. Et d’un colorant acide ou anionique comme l’éosine qui colore en rouge-orangé les groupements basiques de l’hémoglobine et des granulations éosinophiles. Le colorant de May- Grunwald est une solution

16

neutre d’éosine et de bleu de méthylène dans de l’alcool méthylique ce qui permet la fixation des éléments. Lorsqu’on utilise ce colorant isolément, les noyaux sont colorés en bleu pale, les cytoplasmes en bleu très clair ou sont incolores, les granulations secondaires des granulocytes en rouge clair pour la lignée neutrophile, en bleu foncé pour la lignée basophile et en rouge-orangé pour la lignée éosinophile. Les hématies sont colorées en beige rosé. Le colorant de Giemsa est une combinaison d’éosine et de dérivés du bleu de méthylène dont l’azure. Il colore les noyaux en violet, les cytoplasmes en bleu plus ou moins intense ou en rose selon les cellules et les granulations primaires des granulocytes en rouge-pourpre intense (granulations dites alors azurophiles). Ces deux colorants, qui donnent des résultats complémentaires, ont été associes par Pappenheimer dans une coloration panoptique. Les solutions colorantes doivent être renouvelées quotidiennement, voire plus souvent si un grand nombre de lames sont colorées. En effet, la précipitation de l’éosine par l’azur B au cours du temps décroit le pourvoir colorant, la coloration violette des noyaux devient alors bleue [10].

II.2.1.3 Mécanisme d’action de la coloration MGG[11]

Le mélange de May-Grünwald, comme les autres mélanges de Romanowsky est donc un colorant neutre, un sel résultant de la combinaison d’une base et d’un acide : le premiercomposé est une base cationique bleue : le bleu de méthylène ou l’azur B de méthylène qui sont des thiazines (composés organiques ayant un cycle contenant quatre atomes de carbone, un atome d’azote et un atome de soufre). Tous deux ont une charge électrique nominale de+1. Le deuxième composé est un acide anionique rouge : l’éosine, qui est un xanthène (composé organique tricyclique constitué d’un cycle de pyrane entouré de deux

17

cycles benzéniques). La charge électrique nominale de l’éosine B et de l’éosine Y est de -2. Au contact des cellules et en présence d’eau, le mélange de May-Grünwald va se dissocier grâce à la dilution du bleu de méthylène et/ou de l’azur B en des sous-produits basiques bleus de type azur A, azur C, violet de méthylène et thionine .Le colorant de May-Grünwald va se fixer essentiellement sur les noyaux et les acides nucléiques cytoplasmiques, donc sur l’ergastoplasme (REG) et sur les ribosomes libres des cellules à forte activité de biosynthèse protéique. En effet les dimères d’azur B, unis par des forces de van der Walls et chargés positivement sont attirés par les charges électronégatives des groupements phosphate de l’ADN et par des interactions hydrophobes avec les bases puriques (A, G) et pyrimidiques (C, T). L’éosine, quant à elle, se fixe préférentiellement sur les protéines ayant des charges positives (groupements aminés et chaînes latérales de la lysine et de l’arginine), c’est-à-dire sur les membranes et sur les cytoplasmes ainsi que sur l’hémoglobine. Les caractéristiques tinctoriales des différents composants cellulaires sont résumées dans le tableau suivant :

18

Tableau I. Affinités tinctoriales des différents constituants

cellulaires après coloration panoptique [10].

Noyau Violet

Nucléole Bleu

Corps de Jolly Violet

Cytoplasme Bleu +/- intense

Granulations primaires, corps d’Auer Pourpre / Violet-pourpre

Granulations neutrophiles Violet clair / Rose

Granulations éosinophiles Orange

Granulations basophiles Violet foncé / Noir

Corps Döhle Bleu pale

19

Tableau II. Protocole de coloration May Grunwald Giemsa avec tampon RAL pH 7.0 [12]. Etapes de

coloration Réactif Temps Remarque Colorant 1 :

Préfixation

Solution May Grunwald pour systèmes SP automatiques Colorant 1 : Fixation séchage 15 secondes Colorant 1 : Non diluée

Solution May Grunwald pour systèmes SP automatiques

5 secondes

Colorant 1 : Diluée (1 :10)

Solution May Grunwald pour systèmes SP automatiques / solution tampon pH =7.0 pour

systèmes SP automatiques 2 minutes 30 secondes Colorant 2 : Diluée (1 :25)

Solution Giemsa pour systèmes SP automatiques / solution tampon pH =7.0 pour systèmes

SP automatiques

3 minutes

Rinçage Sysmex SP-rinçage 7 minutes

Séchage de lame Réutilisation du

colorant 1

Solution May Grunwald pour systèmes SP automatiques

10 minutes

Sur dispositif de chauffage

Tampon Solution tampon pH = 7.0 pour

systèmes SP automatiques 5 temps

Rinçage Sysmex SP –rinçage

Dans le protocole standard ci-dessus le tampon RAL pH 7,0 est utilisé. L’avantage de l’utilisation du tampon RAL est de réaliser une meilleure expression de la granulation dans le cytoplasme des neutrophiles segmentés. Les globules rouges sont intensément colorés avec une expression claire de la forme biconcave des cellules [12].

20

II.3 Les critères de jugement des colorations : [3] Les critères de sélection que nous avons choisis sont:

● Coloration : 3 colorations ont été définies:

 Brillance comporte 3 niveaux :

Le gris Le gris rosé Le rouge

21

● Netteté de l’image: la clarté de l’espace interstitiel entre les hématies

22

23

III. RESULTATS :

La variation de la netteté et la forme des globules rouges selon les deux méthodes de coloration MCDH (RAL Stainer) et May-Grunwald-Giemsa (MGG) à pH7 (Sysmex SP1000) sont représenté dans les graphes suivants :

Figure 8. Graphe représentant la variation de la netteté des frottis sanguins selon les deux

méthodes de coloration : automatique et semi-automatique.

Figure 9. Graphe représentant la forme des globules rouge selon les deux méthodes

24

25

IV. DISCUSSION :

La réalisation ou la confection d'un frottis sanguin de bonne qualité ou d'un bon frottis sanguin doit suivre une procédure précise avec un minimum d'entrainement et une maitrise parfaite de la manipulation des produits sanguins. La réalisation d'un bon frottis nécessite également la maitrise des manipulations à effectuer en adéquation avec le matériel choisi [8]. La préparation du frottis se fait à partir de sang total, prélevé récemment (moins de 6 heures idéalement) soit par ponction veineuse sur tube éthylène diamine tétra-acétique (EDTA), soit directement par prélèvement capillaire si la ponction veineuse n’est pas réalisable. La qualité du matériel utilisé est un élément essentiel : lames de verre dégraissées à bord rodés et pans coupés, tubes capillaires en verre. L’opérateur prendra soin d’utiliser des gants jetables, compte tenu du risque de contact avec le sang. La technique manuelle d’étalement suit les étapes décrites ci-dessous, et doit être réalisée par un opérateur habilité: [2]

 préparer la ou les lames, posées horizontalement sur un plan dur non incliné ;

 homogénéiser le sang dans le tube par retournements successifs (insister en cas de leucopénie) ;

 déposer une goutte de sang à l’extrémité de la lame ;

 maintenir la lame posée avec la main non directrice, et présenter avec la main directrice une seconde lame inclinée de 30◦ à 45◦ devant la goutte;  mettre en contact la seconde lame avec la goutte en la tirant en arrière, puis laisser diffuser le sang le long de l’arête (bien faire attention à récupérer la totalité de la goutte) ;

26

 étaler le sang vers l’autre extrémité de la lame posée en glissant la seconde lame d’un mouvement régulier, sans appuyer exagérément, de manière que la totalité du sang soit étalée sur la lame ;

 identifier le frottis selon la procédure en vigueur dans le laboratoire, puis le laisser sécher à l’air libre sans forcer le séchage (pas d’agitation ou d’utilisation de séchoir, qui peuvent abîmer les cellules et compromettre leur identification ultérieure).

Lors de l’étalement, il convient d’adapter son geste à la viscosité du sang : [2]  sang de viscosité basse (anémie) : le mouvement doit être plus rapide

que la normale et/ou la lame tenue plus verticalement (angle supérieur à 45◦) ;

 sang de viscosité haute (polyglobulie, hyperleucocytose supérieure à 100 g/l, hypergammaglobulinémie) : le mouvement doit être plus lent et/ou la lame tenue moins verticalement (angle inférieur à 45◦).

Les analyseurs modernes peuvent être équipés d’un étaleur, qui permet la préparation automatisée des frottis de sang. L’étalement est réalisé selon le même principe que la méthode manuelle avec une adaptation des paramètres d’étalement de l’automate au taux d’hématocrite afin d’obtenir une qualité de frottis reproductible quelle que soit la viscosité du sang [2].

27

Figure 11. Adaptation de la technique d’étalement à la viscosité du sang [2].

Le frottis sanguin n’a qu’une conservation limitée et doit être coloré rapidement, sans fixation préalable. Il peut être coloré par différentes techniques : la plus couramment utilisée est celle de May-Grünwald-Giemsa, pour réalisation de la formule leucocytaire et étude morphologique des cellules, mais peuvent également être utilisées des techniques cytochimiques (mise en évidence de la myéloperoxydase dans des blastes sanguins par exemple) ou immunocytochimiques [2].

La coloration manuelle des frottis sanguins par May-Grünwald-Giemsa est réalisée selon les étapes suivantes : (MGG)

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Les frottis ou appositions doivent être séchés très rapidement (agitation à l’air, lames préchauffées à 40◦C sur platine, lampe à infrarouges, sèche-cheveux sur position « froid », hotte ventilée ...). Pour autant la dessiccation des frottis n’est pas une véritable fixation et il faut faire agir un fixateur comme le méthanol. Comme le rappelle Bessis « Lorsque les frottis sont destinés à être colorés par le MGG on utilise la fixation par le méthanol absolu » mais « en pratique la solution-mère de May-Grünwald est dissoute dans le méthanol qui sert de fixateur ». C’est pourquoi dans toute coloration de MGG le premier temps (May-Grünwald pur) est une étape de fixation et les cellules qu’on examine à l’issue de ce temps ne présentent aucune coloration. Dans la plupart des équipes, on utilise soit la méthode de Bessis (3 minutes de solution alcoolique de May-Grünwald pure versée sur les frottis/appositions afin qu’ils soient entièrement couverts), soit le méthanol absolu (un minimum de 2 minutes, le temps optimal étant de 10 à 15 minutes pour Lopez Cardozo, 10 minutes étant la durée généralement choisie par les équipes qui travaillent en récipients, que ce soit en méthode manuelle ou automatisée) .

Les deux temps de la coloration : [11]

Après le temps de fixation (3 à 5 minutes de May-Grünwald pur versé sur les frottis/appositions afin qu’ils soient entièrement couverts, ou 10 minutes de méthanol absolu en bac à coloration), on ajoute autant d’eau tamponnée qu’on aura utilisé de May-Grünwald : 2 à 3 minutes (Wright) ,3 minutes (Bessis) ou 5 minutes (Koss). Ce n’est que lorsque le May-Grünwald est dilué pour moitié avec de l’eau tamponnée qu’on obtient une coloration. Wright(1902) précise que l’application du mélange de Romanowsky (l’actuel May-Grünwald) donne aux hématies une teinte bleue, et que la coloration différentielle ne se développe

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qu’avec le rinçage à l’eau en fin de coloration (de préférence distillée), les hématies devenant «verdâtres, puis jaunâtres et finalement orangées ou rosées », la décoloration prenant 1 à 3 minutes et l’eau de rinçage résultant de la décoloration étant bleue.

Après le temps de coloration au May-Grünwald dilué on doit éliminer le colorant et, sans laver, passer les lames dans la solution de Giemsa. On doit préparer la solution de Giemsa extemporanément : Bessis préconise de préparer « 30 mL d’eau distillée dans une éprouvette avec 15 gouttes de Giemsa près de la surface : le colorant reste à la partie supérieure de l’eau sans se mélanger. Puis on verse le contenu de l’éprouvette sur les lames, frottis à la face inférieure pour éviter que des précipités ne tombent sur la surface colorée ». La durée de la coloration est de 10 à 30 minutes (Bessis) ou de 15 minutes (Koss) .Les frottis sont ensuite lavés sous un fort courant d’eau du robinet (running water : 1 à 3 minutes pour Wright, 1 à 2 minutes pour Koss), ce qui permet de développer tous les aspects de la polychromie, puis séchés.

Ces précisions appellent deux commentaires : dans la dilution de la solution-mère de Giemsa, Bessis ne conseille pas d’utiliser de l’eau tamponnée mais seulement de l’eau distillée, ce que reprennent Ganter et Jolles ainsi que Koss y compris dans l’édition de 2006, page 1616 , et colorer à l’envers, c’est le principe de fonctionnement de l’automate fermé Bayer Hématek®2000. Bessis(1972) ainsi que Lopez Cardozo (1973) recommandent de ne pas monter les lames avec des lamelles (pratique répandue dans les laboratoires de biologie polyvalente et en hématologie)