Thesis
Reference
Analyse de composés pharmaceutiques par électrophorèse capillaire couplée à des techniques de détection alternatives
SCHAPPLER, Julie
Abstract
La présente thèse présente le couplage de l'électrophorèse capillaire à différents systèmes de détection pour l'analyse de composés pharmaceutiques dans les fluides biologiques. Trois techniques de détection alternatives à la détection UV/Vis conventionnelle ont été couplées afin d'augmenter la sensibilité, la sélectivité et/ou d'étendre le domaine d'applications. Il s'agit de la spectrométrie de masse, de la fluorescence induite par laser et de l'électrochimie. La première section est constituée d'une introduction qui reporte les notions théoriques et bibliographiques essentielles concernant les différents couplages étudiés. La deuxième partie traite de l'ensemble des travaux effectués, ayant fait ou non l'objet de publications, et offre un résumé des résultats obtenus. La troisième section regroupe les différents articles rédigés en langue anglaise et publiés. Finalement, la dernière section comprend les conclusions et perpectives, ainsi que les annexes.
SCHAPPLER, Julie. Analyse de composés pharmaceutiques par électrophorèse
capillaire couplée à des techniques de détection alternatives. Thèse de doctorat : Univ.
Genève, 2008, no. Sc. 3937
URN : urn:nbn:ch:unige-6162
DOI : 10.13097/archive-ouverte/unige:616
Available at:
http://archive-ouverte.unige.ch/unige:616
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UNIVERSITÉ DE GENÈVE UNIVERSITÉ DE GENÈVE UNIVERSITÉ DE GENÈVE
UNIVERSITÉ DE GENÈVE FACULTÉ DES SCIENCES FACULTÉ DES SCIENCES FACULTÉ DES SCIENCES FACULTÉ DES SCIENCES
Section des sciences pharmaceutiques Professeur Jean-Luc VEUTHEY Laboratoire de chimie analytique pharmaceutique Docteur Serge RUDAZ
Analyse de composés pharmaceutiques Analyse de composés pharmaceutiques Analyse de composés pharmaceutiques Analyse de composés pharmaceutiques par électrophorèse capillaire couplée à des par électrophorèse capillaire couplée à des par électrophorèse capillaire couplée à des par électrophorèse capillaire couplée à des
techniques de détection alternatives techniques de détection alternatives techniques de détection alternatives techniques de détection alternatives
TH TH TH
THE E E ESE SE SE SE
présentée à la Faculté des sciences de l’Université de Genève
pour obtenir le grade de Docteur ès sciences, mention sciences pharmaceutiques
par
Julie SCHAPPLER Julie SCHAPPLER Julie SCHAPPLER Julie SCHAPPLER
de
Basel (BS)
Thèse n°
Thèse n° Thèse n°
Thèse n°3937 3937 3937 3937
Genève
2008
Atelier de Reproduction de la Section de physique
La route n’est jamais longue
La route n’est jamais longue La route n’est jamais longue
La route n’est jamais longue,,,,
lorsqu’on est bien accompagné
lorsqu’on est bien accompagné
lorsqu’on est bien accompagné
lorsqu’on est bien accompagné… … … …
Remerciements Remerciements Remerciements Remerciements
Je tiens à exprimer mes sincères remerciements à l’encontre du Professeur Jean-Luc Veuthey pour m’avoir permis d’accomplir ce travail de thèse au sein de son laboratoire. Toujours à l’écoute de nouvelles idées, il m’a donné l’opportunité de les réaliser, et ni la difficulté ni le temps n’ont été des paramètres susceptibles de réduire son enthousiasme. Merci de m’avoir donné la possibilité et les moyens d’intervenir dans de nombreux congrès, de travailler avec des stagiaires, de collaborer avec des sociétés, et d’enseigner. Je suis consciente d’avoir reçu, grâce à lui, une formation complète de grande qualité. Merci finalement de m’avoir fait confiance malgré des résultats initiaux contrastés.
Je suis également reconnaissante envers le Docteur Serge Rudaz pour sa précieuse contribution méthodologique. Les plans d’expériences, de validation et autres traitements de données m’ont en effet été d’un grand support tout au long de ce travail, et m’ont permis de considérer certains résultats avec plus de confiance.
Merci également pour ses petites phrases motivantes (cf. p.394) et toute son énergie capillaire.
Je tiens aussi à remercier le Docteur Laurent Geiser dont je suis fière d’avoir poursuivi le travail. Merci pour les longues heures de travail à mes côtés, qui m’ont permis de percer certains secrets de l’électrophorèse capillaire. Merci de m’avoir appris à nuancer et remettre en question mes résultats. J’ai également apprécié nos nombreuses discussions « conceptuelles » et sa franchise.
J’adresse finalement ma reconnaissance à tous les autres membres du LCAP qui ont contribué à la réussite de ce travail, à commencer par le Docteur Davy Guillarme avec qui la collaboration électrophorétique a été très enrichissante et productive, et qui m’a initiée aux concepts chromatographiques. J’ai aussi pris plaisir à organiser les sorties extra-professionnelles du laboratoire avec lui. Merci également au Docteur Emmanuel Varesio pour son expérience qui m’a souvent permis de résoudre de nombreux problèmes techniques. Merci finalement à Yveline Henchoz pour son concours et son esprit critique (ainsi que ses conseils musicaux et littéraires).
Ce travail a été effectué au sein d’une équipe motivée malgré certaines difficultés, grâce à l’esprit coopératif de nombreuses personnes parmi lesquelles Josiane Prat qui a le mérite d’avoir effectué la plupart des expériences… de nombreuses fois ! Je la remercie pour sa patience, sa rigueur et ses conseils avisés. Cédric Schelling, Jean- Claude Bonnet et Jean-François Mandscheff, dont l’assistance technique et la disponibilité ont permis de réaliser bien des travaux, sont également pleinement associés à ces remerciements.
Une partie de ce travail a été effectuée en collaboration avec des étudiants des sections de pharmacie et de chimie. Merci à Sylvian, Aline et Ludovic pour leur assiduité et leurs nombreuses initiatives fructueuses. J’ai beaucoup appris de nos interactions. Je suis fière qu’ils aient à leur tour entrepris une thèse au sein de la faculté des sciences. Plus particulièrement, bonne chance à Aline qui reprend le flambeau de la CE au laboratoire. J’ai également eu plaisir à encadrer des stagiaires tout au long de ce travail. Merci à Giovanni, Isabelle et Sara pour leur enthousiasme.
Des interactions privilégiées ont pu être développées au cours de ce travail avec des sociétés privées, découlant sur d’étroites collaborations. Merci à Jocelyne Tahar de Picometrics pour son soutien et sa disponibilité, ainsi qu’au Docteur Gerard Rozing d’Agilent. Merci également aux Docteurs Frédéric Reymond et Joël Rossier de DiagnoSwiss qui m’ont accueillie au sein d’une équipe expérimentée et reconnue dans le domaine des microchips et de l’électrochimie.
Pour terminer, merci à tous mes collègues du LCAP et des pavillons (Isotopes et Ansermet) pour les moments partagés en leur compagnie. Merci au Professeur Martine Collart qui fut ma mentor, ainsi qu’au bureau des questions féminines de l’université pour m’avoir permis d’accéder à des formations de qualité, et à l’agence pour la promotion de l’innovation qui m’a financée pendant deux ans.
Je tiens finalement à remercier mes proches, famille et amis, qui m’ont toujours encouragé et renouvelé leur soutien durant ces années de recherche.
Table des matières Table des matièresTable des matières
Table des matières IIII
Table des matières Table des matières Table des matières Table des matières
Avant-propos……….VII Communications scientifiques……….…X Abréviations…….………XVII
Chapitre 1 | Introduction bibliographique Chapitre 1 | Introduction bibliographique Chapitre 1 | Introduction bibliographique Chapitre 1 | Introduction bibliographique
1. Introduction……….…..1
2. Couplage CE-MS……….…...…4
2.1. Interfaces……….5
2.1.1. Interfaces avec liquide additionnel……….………….….5
2.1.2. Interfaces miniaturisées sans liquide additionnel…………...…7
2.2. Sources d’ionisation……….………...…….…….8
2.2.1. Ionisation par électrospray (ESI)………..…………9
2.2.2. Ionisation chimique à pression atmosphérique (APCI)….…...11
2.2.3. Photoionisation à pression atmosphérique (APPI)……….…11
2.3 Analyseurs de masse……….…….14
2.3.1. Analyseurs quadripôlaires……….………14
2.3.2. Analyseurs à trappe d’ions (IT)………..…16
2.3.3. Autres analyseurs……….……...17
3. Couplage CE-LIF……….……….…19
3.1. Considérations théoriques……….……19
3.1.1. Fluorescence………..……….19
3.1.2. Fluorescence induite par laser (LIF)……….……….23
3.2. Considérations techniques………....…………24
3.2.1. Lasers à gaz……….………...………26
3.2.2. Lasers à solides……….……….27
3.2.3. Lasers à semi-conducteurs……….……….28
3.3. Réactions de dérivation……….………30
Table des matières Table des matièresTable des matières
Table des matières IIIIIIII
3.3.1. Dérivation pré-capillaire……….…..…32
3.3.2. Dérivation dans le capillaire……….…32
3.3.3. Dérivation post-capillaire………..…………33
4. Couplage CE-EC……….……….34
4.1. Détection ampérométrique (AP)……….…….…..….34
4.1.1. Découplage des circuits électriques……….…………....35
4.1.2. Alignement capillaire/électrode………..…37
4.2. Détection conductimétrique (CD)………..40
5. Conclusion………...43
6. Références……….…..44
Chapitre 2 | Résumé du travail Chapitre 2 | Résumé du travail Chapitre 2 | Résumé du travail Chapitre 2 | Résumé du travail de thèse de thèse de thèse de thèse
1. Couplage CE-ESI-MS pour l’analyse de composés pharmaceutiques dans les fluides biologiques………..……..…….…521.1. Préparation d’échantillon………...…53
1.1.1. Précipitation des protéines (PP)……….………53
1.1.2. Extraction liquide-liquide (LLE)………...54
1.2. Procédure d’injection………..…55
1.3. Analyses CE-ESI-MS stéréosélectives.………55
1.4. Effet de matrice.……….……….57
1.5. Performances quantitatives……….……….59
1.5.1. Sélectivité………...….60
1.5.2. Fonction réponse………...61
1.5.3. Justesse………...…62
1.5.4. Fidélité………..…62
1.5.5. Exactitude………63
1.5.6. Linéarité………64
1.5.7. Limite de quantification (LOQ)………..….…64
1.6. Dosage de cas réels……….……...…65
2. Couplage CE-APPI-MS pour l’analyse d’agents dopants………...…67
2.1. Optimisation des paramètres APPI par plans d’expérience…………..…67
2.1.1. Optimisation univariée………..68
Table des matières Table des matièresTable des matières
Table des matières IIIIII IIIIII
2.1.2. Criblage à l’aide d’un plan factoriel fractionnaire à deux
niveaux………..70
2.1.3. Modélisation à l’aide d’un plan central composite à faces centrées……..……….71
2.2. Analyse CE-MS des agents dopants……….………..…74
2.2.1. Analyses CZE-ESI-MS……….75
2.2.2. Analyses MEEKC-ESI-MS………...76
2.2.3. Analyses MEEKC-APPI-MS………....77
3. Couplage CE-LIF 410 pour l’analyse de composés pharmaceutiques dans les fluides biologiques………….……..………...80
3.1. Dérivation pré-capillaire…..………..….81
3.1.1. Agent de dérivation………...…82
3.1.2. Dérivation en phase liquide………..…84
3.1.3. Dérivation sur support solide……….….84
3.1.4. Application à des échantillons biologiques………..86
3.1.5. Etude semi-quantitative………..….87
3.2. Dérivation dans le capillaire………..…87
3.2.1. Chromatographie électrocinétique micellaire (MEKC)……..……88
3.2.2. Dérivation dans le capillaire……….…90
3.2.3. Etude semi-quantitative………..….94
4. Couplage CE-LIF 266 pour l’analyse de composés pharmaceutiques dans les fluides biologiques…………..……..……….96
4.1. Optimisation des paramètres CZE par plan d’expériences…………..…97
4.1.1. Optimisation univariée………..97
4.1.2. Modélisation à l’aide d’un plan de Box-Behnken………98
4.2. Application à des échantillons biologiques………….………...100
4.2.1. Préparation d’échantillon………...100
4.2.2. Procédure d’injection……….… 100
4.2.3. Performances quantitatives……….……… 101
4.2.4. Dosage de cas réels………103
5. Couplage CE-UV-CCD pour la détermination des pKa de composés pharmaceutiques……….………105
Table des matières Table des matièresTable des matières
Table des matières IVIV IVIV
5.1. Principe de détermination des pKa par CZE………105
5.2. Méthode séparative rapide……….…106
5.2.1. Accélération de l’EOF……….107
5.2.2. Injection du côté court………..…108
5.3. Détection universelle………109
5.4. Analyse CZE-UV-CCD des vingt acides aminés………..…110
6. Références……….…114
Chapitre 3 | Articles scientifiques Chapitre 3 | Articles scientifiques Chapitre 3 | Articles scientifiques Chapitre 3 | Articles scientifiques
Article I Article IArticle I Article I Coupling capillary e Coupling capillary eCoupling capillary e Coupling capillary electrophoresis and chiplectrophoresis and chiplectrophoresis and chiplectrophoresis and chip----based devices with mass spectrometrybased devices with mass spectrometrybased devices with mass spectrometry based devices with mass spectrometry Separation Science and Technology 2008, 9, 477-521………..……….….121Article II Article IIArticle II Article II Enhanced method performances for conventional and chiral CE Enhanced method performances for conventional and chiral CEEnhanced method performances for conventional and chiral CE Enhanced method performances for conventional and chiral CE----ESIESIESI----MS analyses in ESI MS analyses in MS analyses in MS analyses in plasma plasmaplasma plasma Electrophoresis 2006, 27, 1537-1546………..……….186
Article III Article IIIArticle III Article III Validation of chiral CE Validation of chiral CEValidation of chiral CE Validation of chiral CE----ESIESIESIESI----MS methods for ecstasy and methadone in plasmaMS methods for ecstasy and methadone in plasmaMS methods for ecstasy and methadone in plasma MS methods for ecstasy and methadone in plasma Electrophoresis 2008, 29, 2193-2202....………..211
Article IV Article IVArticle IV Article IV Coupling capillary electrophoresis with atmospheric pressure ph Coupling capillary electrophoresis with atmospheric pressure phCoupling capillary electrophoresis with atmospheric pressure ph Coupling capillary electrophoresis with atmospheric pressure photoionization mass otoionization mass otoionization mass otoionization mass spectrometry (CE spectrometry (CEspectrometry (CE spectrometry (CE----APPIAPPIAPPIAPPI----MS) for pharmaceutical basic compoundsMS) for pharmaceutical basic compoundsMS) for pharmaceutical basic compounds : optimization of MS) for pharmaceutical basic compounds: optimization of : optimization of : optimization of operating parameters operating parametersoperating parameters operating parameters Electrophoresis 2007, 28, 3078-3087………...………….……...…234
Article V Article VArticle V Article V Microemulsion electrokinetic chromatography hyphenated to atmo Microemulsion electrokinetic chromatography hyphenated to atmoMicroemulsion electrokinetic chromatography hyphenated to atmo Microemulsion electrokinetic chromatography hyphenated to atmospheric pressure spheric pressure spheric pressure spheric pressure photoionization mass spectrometry (MEEKC photoionization mass spectrometry (MEEKCphotoionization mass spectrometry (MEEKC photoionization mass spectrometry (MEEKC----APPIAPPIAPPI----MS)APPIMS)MS)MS) Electrophoresis 2008, 29, 11-19………..……….………..…261
Article VI Article VIArticle VI Article VI Capillary electrophoresis Capillary electrophoresisCapillary electrophoresis Capillary electrophoresis----laser induced fluorescence at 266 nmlaser induced fluorescence at 266 nmlaser induced fluorescence at 266 nmlaser induced fluorescence at 266 nm : optimization, : optimization, : optimization, : optimization, validation and application to pharmace validation and application to pharmacevalidation and application to pharmace validation and application to pharmaceutical compounds analysis in biological fluidsutical compounds analysis in biological fluidsutical compounds analysis in biological fluidsutical compounds analysis in biological fluids Journal of Chromatography A 2008, DOI 10.1016/j.chroma.2008.04044..…..…286
Table des matières Table des matièresTable des matières
Table des matières VV VV
Article VII Article VIIArticle VII Article VII
Rapid determination of pK Rapid determination of pKRapid determination of pK
Rapid determination of pKaaaa values of 20 amino acids by CZE with UV and capacitively values of 20 amino acids by CZE with UV and capacitively values of 20 amino acids by CZE with UV and capacitively values of 20 amino acids by CZE with UV and capacitively coupled contactless conductivity detec
coupled contactless conductivity deteccoupled contactless conductivity detec coupled contactless conductivity detectionstionstions tions
Analytical and Bioanalytical Chemistry 2007, 389, 1869-1878……..………311
Chapitre 4 | Conclusions et perspectives Chapitre 4 | Conclusions et perspectives Chapitre 4 | Conclusions et perspectives Chapitre 4 | Conclusions et perspectives
………..332Chapitre 5 | Annexes Chapitre 5 | Annexes Chapitre 5 | Annexes Chapitre 5 | Annexes
1. Projet CTI/DiagnoSwiss : systèmes miniaturisés…..………..……3361.1. Abstract……….………..………..……….336
1.1.1. Fabrication of the electrochemical detector in a polymer microdevice…………...………338
1.1.2. Characterization of electrochemical detection by voltametry and amperometry of tested compounds………..…338
1.1.3. Coupling of capillary electrophoresis with the microfabricated device and characterization of the system………..…339
1.1.4. Development of analytical procedures in aqueous and non- aqueous media………...………..340
1.1.5. Interfacing with various mass spectrometers………..…340
1.1.6. Application of chip-MS for the analysis of small molecules, proteins and peptides………..………..………340
1.1.7. Application of the project……….…341
1.2. Timetable………..………..341
1.3. Résultats et discussion………343
1.3.1. Caractérisation des chips EC……….…343
1.3.2. Couplage CE-chip EC………...…348
1.3.3. Couplage chip CE-ESI-MS………...…353
1.4. Conclusions et perspectives………..354
2. Projet Sebia : CE multi-capillaires………356
3. Collaboration avec l’Université de Liège : étude inter-laboratoires…..……….360
Table des matières Table des matièresTable des matières
Table des matières VIVI VIVI
Article VIII Article VIIIArticle VIII Article VIII
Interlaboratory study of a NACE method for the determination of R Interlaboratory study of a NACE method for the determination of RInterlaboratory study of a NACE method for the determination of R
Interlaboratory study of a NACE method for the determination of R----timolol content timolol content timolol content timolol content in Sin Sin S
in S----timolol maleatimolol maleatimolol maleatimolol maleatetetete : assessment of uncertainty: assessment of uncertainty: assessment of uncertainty: assessment of uncertainty
Electrophoresis 2006, 27, 2386-2399……...……….………..362 4. Références..………..…..……….…391
Avant AvantAvant
Avant----propospropospropospropos VIIVII VIIVII
Avant Avant Avant
Avant----propos propos propos propos
La présente thèse s’est effectuée au sein du Laboratoire de Chimie Analytique Pharmaceutique (LCAP) sous la direction du Professeur Jean-Luc Veuthey, en collaboration avec le Docteur Serge Rudaz. Elle présente le couplage de l’électrophorèse capillaire (CE) à différents systèmes de détection pour l’analyse de composés pharmaceutiques dans les fluides biologiques. Trois techniques de détection alternatives à la détection UV/Vis conventionnelle ont été couplées à la CE afin d’augmenter la sensibilité, la sélectivité et/ou d’étendre le domaine d’applications. Il s’agit de la spectrométrie de masse (MS), de la fluorescence induite par laser (LIF) et de l’électrochimie (EC).
Cette thèse poursuit essentiellement les travaux effectués au LCAP par le Docteur Laurent Geiser qui a présenté une thèse intitulée « Développement et validation de méthodes analytiques pour l’analyse de composés pharmaceutiques par électrophorèse capillaire couplée à un spectrophotomètre UV ou à un spectromètre de masse » (thèse N°3442 de l’Université de Genève-2003). Le potentiel du couplage CE-MS en milieux aqueux et non-aqueux avait été étudié lors de cette thèse ainsi que les performances quantitatives pour l’analyse de formulations pharmaceutiques. Cette thèse s’inscrivait elle-même dans une perspective des travaux du Docteur Emmanuel Varesio (« Analyse des dérivés de l’amphétamine par électrophorèse capillaire », thèse N°3053 de l’Université de Genève-1999) qui avait notamment proposé une première application traitant du couplage CE-MS, ainsi que ceux du Docteur Lidia Avois (« Analyse phytochimique par électrophorèse capillaire.
Application aux alcaloïdes du tropane », thèse N°3176 de l’Université de Genève- 2000) exploitant la CE pour l’analyse de composés d’intérêt pharmaceutique dans des matrices complexes tels les extraits végétaux. Cette présente thèse s’inscrit également dans le sillage des travaux du Docteur Sandrine Souverain (« Extraction en ligne sur support solide pour l’analyse de composés pharmaceutiques contenus dans des matrices biologiques par chromatographie liquide–spectrométrie de masse », thèse N°3520 de l’Université de Genève-2004) qui a élaboré différentes méthodes pour l’analyse de composés pharmaceutiques dans les fluides biologiques.
Avant AvantAvant
Avant----propospropospropospropos VIIIVIII VIIIVIII
A cet effet, la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse avait été privilégiée.
La présente thèse se décompose en cinq sections. La première section (Chapitre 1) est constituée d’une introduction qui reporte les notions théoriques et bibliographiques essentielles concernant les différents couplages étudiés. La deuxième partie (Chapitre 2) traite de l’ensemble des travaux effectués, ayant fait ou non l’objet de publications, et offre un résumé des résultats obtenus. La troisième section (Chapitre 3) regroupe les différents articles rédigés en langue anglaise, publiés, en cours de publication ou soumis à publication. Finalement, la dernière section comprend les conclusions et perspectives (Chapitre 4), ainsi que les annexes (Chapitre 5). Les principaux sujets ainsi que les articles illustrant ce travail sont reportés ci-dessous.
Couplage de l’électrophorèse capillaire Couplage de l’électrophorèse capillaire Couplage de l’électrophorèse capillaire
Couplage de l’électrophorèse capillaire à la spectrométrie de masse | à la spectrométrie de masse | à la spectrométrie de masse | à la spectrométrie de masse | CE CE CE
CE----MS MS MS MS
Le premier axe abordé est le couplage CE-MS pour l’analyse de molécules d’intérêt pharmaceutique. Les fondements théoriques de ce couplage ont été publiés sous forme de chapitre de livre (article Iarticle Iarticle Iarticle I). Du point de vue pratique, une source electrospray (ESI) a d’abord été utilisée et deux méthodes CE-ESI-MS ont été développées pour l’analyse chirale de médicaments présents dans le plasma.
L’attention s’est portée sur le choix de la préparation d’échantillon et de la procédure d’injection, ainsi que l’étude des effets de matrice (article IIarticle IIarticle IIarticle II). Les performances quantitatives des deux procédures ont ensuite été déterminées et la méthode validée appliquée au dosage d’échantillons toxicologiques (article IIIarticle IIIarticle IIIarticle III). Le couplage de la CE à une source de photoionisation à pression atmosphérique (APPI) a ensuite été évalué et les paramètres de l’interfaçage optimisés à l’aide d’outils chimiométriques (article IVarticle IVarticle IVarticle IV). L’élargissement du domaine d’applications de la CE-MS à des composés moins polaires ainsi que l’utilisation d’additifs non-volatils ont finalement été réalisés avec succès pour l’analyse d’agents dopants (article Varticle Varticle V). article V
Avant AvantAvant
Avant----propospropospropospropos IXIX IXIX
Couplage de l’électrophorèse capillaire à la fluorescence induite par Couplage de l’électrophorèse capillaire à la fluorescence induite par Couplage de l’électrophorèse capillaire à la fluorescence induite par Couplage de l’électrophorèse capillaire à la fluorescence induite par laser | CE
laser | CE laser | CE laser | CE----LIF LIF LIF LIF
Un autre objectif de ce travail de thèse réside dans l’étude du couplage CE-LIF.
Puisque la plupart des composés pharmaceutiques ne sont pas naturellement fluorescents, une étape de dérivation préalable est souvent nécessaire. L’étude de différentes techniques de dérivation n’a pas systématiquement abouti à la publication d’articles. Les principaux résultats de ces travaux sont néanmoins reportés (Chapitre 2). Plusieurs lasers ont également été étudiés, notamment un laser émettant dans l’UV et permettant la détection de molécules nativement fluorescentes sans le concours d’une procédure de dérivation. Ce type de couplage est décrit dans l’article VI article VI article VI qui reporte le développement d’une méthode CE-LIF à article VI l’aide d’un plan d’expériences, la validation de la procédure optimisée et son application au dosage de médicaments dans le plasma.
Couplage de l’électrophorèse capillaire à l’ampérométrie | CE Couplage de l’électrophorèse capillaire à l’ampérométrie | CE Couplage de l’électrophorèse capillaire à l’ampérométrie | CE Couplage de l’électrophorèse capillaire à l’ampérométrie | CE----AP AP AP AP
Le sujet est abordé car le couplage de la CE avec l’ampérométrie (AP) a fait l’objet de nombreuses expériences qui ont abouti à des résultats contrastés. Une partie théorique est cependant dédiée à ce couplage et les résultats préliminaires sont reportés dans l’annexe du manuscrit (Chapitre 5).
Couplage de l’électrophorèse capillaire à la conductimétrie Couplage de l’électrophorèse capillaire à la conductimétrie Couplage de l’électrophorèse capillaire à la conductimétrie
Couplage de l’électrophorèse capillaire à la conductimétrie sans contact sans contact sans contact sans contact
| CE | CE | CE
| CE----C C CC C C C CD D D D
Le dernier axe de la présente thèse concerne le couplage de la CE avec la conductimétrie sans contact. Une méthode CE-CCD a été développée pour la détermination expérimentale de paramètres physico-chimiques, plus particulièrement de constantes de dissociation (article VIIarticle VIIarticle VII). article VII
Communi CommuniCommuni
Communications scientifiquescations scientifiquescations scientifiquescations scientifiques XX XX
Communi Communi Communi
Communications scientifiques cations scientifiques cations scientifiques cations scientifiques
Ce travail de thèse a fait l’objet d’articles publiés dans des revues scientifiques à comité de lecture ainsi que de présentations sous forme de conférences et de posters dans le cadre de congrès nationaux et internationaux.
Publicat Publicat Publicat Publications ions ions ions
IIII.... Coupling capillary electrophoresis and chipCoupling capillary electrophoresis and chip----based devices with mass Coupling capillary electrophoresis and chipCoupling capillary electrophoresis and chip based devices with mass based devices with mass based devices with mass spectrometry
spectrometryspectrometry spectrometry
J. Schappler, J.L. Veuthey, S. Rudaz
Separation Science and Technology2008, 9, 477-521
Prix du Centre de Compétence en Chimie et Toxicologie Analytiques 2007
IIIIIIII.... Enhanced meEnhanced method performances for conventional and chiral CEEnhanced meEnhanced method performances for conventional and chiral CEthod performances for conventional and chiral CEthod performances for conventional and chiral CE----ESIESIESIESI----MS MS MS MS analyses in plasma
analyses in plasmaanalyses in plasma analyses in plasma
J. Schappler, D. Guillarme, J. Prat, J.L. Veuthey, S. Rudaz Electrophoresis 2006, 27, 1537-1546
Prix de la Société Suisse des Sciences Pharmaceutiques 2006
IIIIIIIII
III.... Validation of chiral CEValidation of chiral CE----EValidation of chiral CEValidation of chiral CE EEESISISISI----MS methods for ecstasy and methadone in plasmaMS methods for ecstasy and methadone in plasmaMS methods for ecstasy and methadone in plasma MS methods for ecstasy and methadone in plasma J. Schappler, D. Guillarme, J. Prat, J.L. Veuthey, S. Rudaz
Electrophoresis 2008, 29, 2193-2202
IVIVIV
IV.... Coupling capillary electrophoresis with atmospheric pressure photoionization Coupling capillary electrophoresis with atmospheric pressure photoionization Coupling capillary electrophoresis with atmospheric pressure photoionization Coupling capillary electrophoresis with atmospheric pressure photoionization mass spectrometry (CE
mass spectrometry (CEmass spectrometry (CE
mass spectrometry (CE----APPIAPPIAPPIAPPI----MS) foMS) foMS) for pharmaceutical basic compoundsMS) for pharmaceutical basic compoundsr pharmaceutical basic compoundsr pharmaceutical basic compounds : : : : optimization of operating parameters
optimization of operating parametersoptimization of operating parameters optimization of operating parameters
J. Schappler, D. Guillarme, J. Prat, J.L. Veuthey, S. Rudaz Electrophoresis 2007, 28, 3078-3087
Communi CommuniCommuni
Communications scientifiquescations scientifiquescations scientifiquescations scientifiques XIXI XIXI
V VV
V.... Microemulsion electrokinetic chromatography hyphenated to atmospheric Microemulsion electrokinetic chromatography hyphenated to atmospheric Microemulsion electrokinetic chromatography hyphenated to atmospheric Microemulsion electrokinetic chromatography hyphenated to atmospheric pressure photoion
pressure photoionpressure photoion
pressure photoionization mass spectrometry (MEEKCization mass spectrometry (MEEKCization mass spectrometry (MEEKCization mass spectrometry (MEEKC----APPIAPPIAPPI----MS)APPI MS)MS)MS) J. Schappler, D. Guillarme, S. Rudaz, J.L. Veuthey
Electrophoresis 2008, 29, 11-19
VI VIVI
VI.... Capillary electrophoresisCapillary electrophoresis----laser induced fluorescence at 266 nmCapillary electrophoresisCapillary electrophoresislaser induced fluorescence at 266 nmlaser induced fluorescence at 266 nm : optimization, laser induced fluorescence at 266 nm: optimization, : optimization, : optimization, validation and application to pharmaceutical compoun
validation and application to pharmaceutical compounvalidation and application to pharmaceutical compoun
validation and application to pharmaceutical compounds analysis in biological ds analysis in biological ds analysis in biological ds analysis in biological fluids
fluidsfluids fluids
J. Schappler, A. Staub, J.L. Veuthey, S. Rudaz
Journal of Chromatography A 2008, DOI 10.1016/j.chroma.2008.04044
VII VIIVII
VII.... Rapid determination of pKRapid determination of pKRapid determination of pKRapid determination of pKaaaa values of 20 amino acids by CZE with UV and values of 20 amino acids by CZE with UV and values of 20 amino acids by CZE with UV and values of 20 amino acids by CZE with UV and capacitively coupled contactless conduc
capacitively coupled contactless conduccapacitively coupled contactless conduc
capacitively coupled contactless conductivity detectionstivity detectionstivity detections tivity detections
Y. Henchoz, J. Schappler, L. Geiser, J. Prat, P.A. Carrupt, J.L. Veuthey Analytical and Bioanalytical Chemistry 2007, 389, 1869-1878
VIII VIIIVIII
VIII.... Interlaboratory study of a NACE method for the determination of RInterlaboratory study of a NACE method for the determination of R----timolol Interlaboratory study of a NACE method for the determination of RInterlaboratory study of a NACE method for the determination of R timolol timolol timolol content in S
content in Scontent in S
content in S----timolol maleatetimolol maleatetimolol maleatetimolol maleate : : : : assessment of uncertaintyassessment of uncertaintyassessment of uncertaintyassessment of uncertainty
R. Djang’eing’a Marini, C. Groom, F. Doucet, J. Hawari, Y. Bitar, U. Holzgrabe, R. Gotti, J. Schappler, S. Rudaz, J.L. Veuthey, R. Mol, G. Somsen, G. De Jong, P.T.T. Ha, J. Zhang, A. Van Schepdael, J. Hoogmartens, W. Briône, A. Ceccato, B. Boulanger, D. Mangelings, Y. Vander Heyden, W. Van Ael, I. Jimidar, M.
Pedrini, A.C. Servais, M. Fillet, J. Crommen, E. Rozet, P. Hubert Electrophoresis 2006, 27, 2386-2399
Communications orales Communications orales Communications orales Communications orales
o oo
o Plastic microchipsPlastic microchips : capillary electrophoresis witPlastic microchipsPlastic microchips: capillary electrophoresis wit: capillary electrophoresis wit: capillary electrophoresis with amperometric detectionh amperometric detectionh amperometric detectionh amperometric detection J. Schappler, J. Rossier, F. Reymond, J.L. Veuthey
19ème Séminaire en Sciences Pharmaceutiques, septembre 2004, Zermatt (Suisse)
Communi CommuniCommuni
Communications scientifiquescations scientifiquescations scientifiquescations scientifiques XIIXII XIIXII
o oo
o Electrochemical Electrochemical Electrochemical Electrochemical microchips microchips microchips microchips for for for for capillary capillary capillary capillary electrophoresis electrophoresis electrophoresis electrophoresis and and and and mass mass mass mass spectrometry
spectrometryspectrometry spectrometry
J. Schappler, L.A. Leuthold, F. Reymond, J. Rossier, G. Hopfgartner, J.L.
Veuthey
Séminaire Commission pour la Technologie et l’Innovation (CTI), décembre 2004, Berne (Suisse)
o oo
o Strategies for rapid determination of drugs in biological fluids by LC and CEStrategies for rapid determination of drugs in biological fluids by LC and CE Strategies for rapid determination of drugs in biological fluids by LC and CEStrategies for rapid determination of drugs in biological fluids by LC and CE S. Souverain, J. Schappler, S. Rudaz, J.L. Veuthey
31st International Symposium on High Performance Liquid Phase Separations and Related Techniques (HPLC 2005), juin 2005, Stockholm (Suède)
o oo
o Strategies for conventional and chiral CEStrategies for conventional and chiral CE----ESIStrategies for conventional and chiral CEStrategies for conventional and chiral CEESIESI----MS analysis in plasmaESI MS analysis in plasmaMS analysis in plasmaMS analysis in plasma J. Schappler, D. Guillarme, S. Rudaz, J.L. Veuthey
20th International Symposium on Micro-Scale Bioseparations and Capillary Electrophoresis (MSB 2006), janvier 2006, Amsterdam (Hollande)
ooo
o Traitement des fluides biologiques avant analyse par LCTraitement des fluides biologiques avant analyse par LC----MS et CETraitement des fluides biologiques avant analyse par LCTraitement des fluides biologiques avant analyse par LC MS et CEMS et CEMS et CE----MSMSMSMS J. Schappler, I. Marchi, D. Guillarme, S. Rudaz, J.L. Veuthey
Forum Labo, mars 2006, Paris (France)
ooo
o Sample preparation procedures prior to LCSample preparation procedures prior to LC----MS and CESample preparation procedures prior to LCSample preparation procedures prior to LC MS and CEMS and CEMS and CE----MSMSMSMS J. Schappler, I. Marchi, D. Guillarme, S. Rudaz, J.L. Veuthey Drug Analysis (DA 2006), mai 2006, Namur (Belgique)
ooo
o Strategies Strategies for conventional and chiral CEStrategies Strategies for conventional and chiral CEfor conventional and chiral CE----ESIfor conventional and chiral CEESIESI----MS analysis in plasmaESI MS analysis in plasmaMS analysis in plasmaMS analysis in plasma J. Schappler, D. Guillarme, S. Rudaz, J.L. Veuthey
First PhD-day of EPGL, juin 2006, Archamps (France)
ooo
o Highly Highly Highly Highly sensitive sensitive sensitive sensitive detection detection detection detection techniques techniques techniques techniques hyphenated hyphenated hyphenated hyphenated with with with with capillary capillary capillary capillary electrophoresis for bioanalysis
electrophoresis for bioanalysiselectrophoresis for bioanalysis electrophoresis for bioanalysis
J. Schappler, D. Guillarme, S. Rudaz, J.L. Veuthey
15th International Symposium on Capillary Electroseparation Techniques (ITP 2006), août 2006, Paris (France)
Communi CommuniCommuni
Communications scientifiquescations scientifiquescations scientifiquescations scientifiques XIIIXIII XIIIXIII
o oo
o Analyse de composés d’intérêt pharmaceutique dans les fluides biologiques Analyse de composés d’intérêt pharmaceutique dans les fluides biologiques Analyse de composés d’intérêt pharmaceutique dans les fluides biologiques Analyse de composés d’intérêt pharmaceutique dans les fluides biologiques par CE
par CEpar CE
par CE----LIF et CELIF et CELIF et CELIF et CE----MSMSMSMS
J. Schappler, D. Guillarme, S. Rudaz, J.L. Veuthey
Journée Club IdFN de l'AfSep, décembre 2006, Paris (France)
o oo
o Capillary electrophoresisCapillary electrophoresis----mass spectrometry as a powerful tool for drugs Capillary electrophoresisCapillary electrophoresismass spectrometry as a powerful tool for drugs mass spectrometry as a powerful tool for drugs mass spectrometry as a powerful tool for drugs analysis
analysisanalysis analysis
J. Schappler, D. Guillarme, S. Rudaz, J.L. Veuthey
33rd International Symposium on High Performance Liquid Phase Separations and Related Techniques (HPLC 2007), juin 2007, Ghent (Belgique)
o oo
o Capillary electrophoresisCapillary electrophoresis----mass spectrometry in pharmaceutical analysisCapillary electrophoresisCapillary electrophoresis mass spectrometry in pharmaceutical analysismass spectrometry in pharmaceutical analysismass spectrometry in pharmaceutical analysis J. Schappler, D. Guillarme, S. Rudaz, J.L. Veuthey
9th Symposium on the Practical Applications for the Analysis of Proteins, Nucleotides and Small Molecules (CEPharm 2007), octobre 2007, Miami (US)
Communications par affiches Communications par affiches Communications par affiches Communications par affiches
ooo
o Electrophorèse capillaire couplée à la spectrométrie de masse pour le dosage Electrophorèse capillaire couplée à la spectrométrie de masse pour le dosage Electrophorèse capillaire couplée à la spectrométrie de masse pour le dosage Electrophorèse capillaire couplée à la spectrométrie de masse pour le dosage de composés p
de composés pde composés p
de composés pharmaceutiquesharmaceutiquesharmaceutiquesharmaceutiques
L. Geiser, J. Schappler, S. Rudaz, J.L. Veuthey
6ème congrès francophone de l'AfSep sur les Sciences Séparatives et les Couplages (SEP 2003), mai 2003, Lyon (France)
o oo
o Capillary electrophoresisCapillary electrophoresis–Capillary electrophoresisCapillary electrophoresis–––mass spectrometry for the analysis of a mass spectrometry for the analysis of a mass spectrometry for the analysis of a mass spectrometry for the analysis of a pharmaceu
pharmaceupharmaceu
pharmaceutical formulationtical formulationtical formulationtical formulation
L. Geiser, J. Schappler, S. Rudaz, J.L. Veuthey
Fall Meeting of the Swiss Chemical Society, septembre 2003, Lausanne (Suisse)
Communi CommuniCommuni
Communications scientifiquescations scientifiquescations scientifiquescations scientifiques XIVXIV XIVXIV
o oo
o Infinite enantiomeric resolution of tramadol and its primary metabolites in Infinite enantiomeric resolution of tramadol and its primary metabolites in Infinite enantiomeric resolution of tramadol and its primary metabolites in Infinite enantiomeric resolution of tramadol and its primary metabolites in capillary electrophoresis
capillary electrophoresiscapillary electrophoresis capillary electrophoresis
S. Rudaz, L. Geiser, J. Schappler, J. Prat, J.L. Veuthey
17th International Symposium on High Performance Capillary Electrophoresis (HPCE 2004), février 2004, Salzburg (Autriche)
ooo
o Microchips based amperometric detection for capillary electrophoresisMicrochips based amperometric detection for capillary electrophoresis Microchips based amperometric detection for capillary electrophoresisMicrochips based amperometric detection for capillary electrophoresis J. Schappler, J. Rossier, F. Reymond, J.L. Veuthey
14th International Symposium on Capillary Electroseparation Techniques (ITP 2004), septembre 2004, Rome (Italie)
o oo
o Electrochemical Electrochemical Electrochemical Electrochemical microchips microchips microchips microchips for for for for capillary capillary capillary capillary electrophoresis electrophoresis electrophoresis electrophoresis and and and and mass mass mass mass spectrometry
spectrometryspectrometry spectrometry
J. Schappler, L.A. Leuthold, J. Rossier, F. Reymond, J.F. Mandscheff, E.
Varesio, G. Hopfgartner, J.L. Veuthey
CTI MedTech Award, septembre 2005, Berne (Suisse)
ooo
o OnOn----capillary derivatization of amphetamine derivatives for capillary OnOn capillary derivatization of amphetamine derivatives for capillary capillary derivatization of amphetamine derivatives for capillary capillary derivatization of amphetamine derivatives for capillary electrophoresis hyphenated with laser
electrophoresis hyphenated with laserelectrophoresis hyphenated with laser
electrophoresis hyphenated with laser----induced fluoresceinduced fluoresceinduced fluoresceinduced fluorescence detectionnce detectionnce detectionnce detection J. Schappler, S. Cretton, L. Geiser, J.L. Veuthey
11th Meeting on Recent Developments in Pharmaceutical Analysis (RDPA 2005), septembre 2005, Rimini (Italie)
ooo
o Hyphenation of CE with APPIHyphenation of CE with APPI----MS for pharmaceutical applicationsHyphenation of CE with APPIHyphenation of CE with APPI MS for pharmaceutical applicationsMS for pharmaceutical applicationsMS for pharmaceutical applications D. Guillarme, J. Schappler, J. Prat, S. Rudaz, J.L.Veuthey
20th International Symposium on Micro-Scale Bioseparations and Capillary Electrophoresis (MSB 2006), janvier 2006, Amsterdam (Hollande)
ooo
o Capillary electrophoresisCapillary electrophoresis----laser induced fluorescence at 266 nmCapillary electrophoresisCapillary electrophoresislaser induced fluorescence at 266 nmlaser induced fluorescence at 266 nm : optimization, laser induced fluorescence at 266 nm: optimization, : optimization, : optimization, val
valval
validation and application to pharmaceutical compounds analysis in biological idation and application to pharmaceutical compounds analysis in biological idation and application to pharmaceutical compounds analysis in biological idation and application to pharmaceutical compounds analysis in biological fluids
fluidsfluids fluids
J. Schappler, A. Staub, S. Rudaz, J.L.Veuthey
15th International Symposium on Capillary Electroseparation Techniques (ITP 2006), août 2006, Paris (France)
Communi CommuniCommuni
Communications scientifiquescations scientifiquescations scientifiquescations scientifiques XVXV XVXV
o oo
o Capillary electrophCapillary electrophoresisCapillary electrophCapillary electrophoresisoresis----laser induced fluorescence at 266 nmoresislaser induced fluorescence at 266 nmlaser induced fluorescence at 266 nm : optimization, laser induced fluorescence at 266 nm: optimization, : optimization, : optimization, validation and application to pharmaceutical compounds analysis in biological validation and application to pharmaceutical compounds analysis in biological validation and application to pharmaceutical compounds analysis in biological validation and application to pharmaceutical compounds analysis in biological fluids
fluidsfluids fluids
J. Schappler, A. Staub, S. Rudaz, J.L.Veuthey
1ères rencontres scientifiques des Universités de l’Arc Alpin, novembre 2006, Archamps (France)
o oo
o Détermination rapide des pKDétermination rapide des pKDétermination rapide des pKDétermination rapide des pKaaaa de 20 acides aminés par CZE couplée à des de 20 acides aminés par CZE couplée à des de 20 acides aminés par CZE couplée à des de 20 acides aminés par CZE couplée à des détections UV et conductimétrique (C
détections UV et conductimétrique (Cdétections UV et conductimétrique (C détections UV et conductimétrique (C4444D)D)D)D)
Y. Henchoz, J. Schappler, L. Geiser, J. Prat, P.A. Carrupt, J.L. Veuthey
7ème congrès francophone de l'AfSep sur les Sciences Séparatives et les Couplages (SEP 2007), mars 2007, Grenoble (France)
ooo
o Analyse de psychostimulants dans les fluides biologiques par CZEAnalyse de psychostimulants dans les fluides biologiques par CZE----LIFAnalyse de psychostimulants dans les fluides biologiques par CZEAnalyse de psychostimulants dans les fluides biologiques par CZE LIFLIFLIF L. Gremaud, J. Schappler, C. Rohrbasser, J.L. Veuthey, S. Rudaz
7ème congrès francophone de l'AfSep sur les Sciences Séparatives et les Couplages (SEP 2007), mars 2007, Grenoble (France)
o oo
o Evaluation de différents modes de dérivation pour l’analyse par CEEvaluation de différents modes de dérivation pour l’analyse par CE----LIF de Evaluation de différents modes de dérivation pour l’analyse par CEEvaluation de différents modes de dérivation pour l’analyse par CE LIF de LIF de LIF de molécules d’intérêt pharmaceutique dans les fluides biologiques
molécules d’intérêt pharmaceutique dans les fluides biologiquesmolécules d’intérêt pharmaceutique dans les fluides biologiques molécules d’intérêt pharmaceutique dans les fluides biologiques J. Schappler, S. Rudaz, J.L.Veuthey
7ème congrès francophone de l'AfSep sur les Sciences Séparatives et les Couplages (SEP 2007), mars 2007, Grenoble (France)
ooo
o CZE and MEEKC coupled with APPICZE and MEEKC coupled with APPI----MS for pharmaceutical applicationsCZE and MEEKC coupled with APPICZE and MEEKC coupled with APPIMS for pharmaceutical applicationsMS for pharmaceutical applications MS for pharmaceutical applications J. Schappler, D. Guillarme, J. Prat, S. Rudaz, J.L. Veuthey
33rd International Symposium on High Performance Liquid Phase Separations and Related Techniques (HPLC 2007), juin 2007, Ghent (Belgique)
Prix PARC (Pfizer Analytical Research Science) 2007
Communi CommuniCommuni
Communications scientifiquescations scientifiquescations scientifiquescations scientifiques XVIXVI XVIXVI
o oo
o CECE----LIF analysis of pharmaceutical compounds in biological fluidsCECE LIF analysis of pharmaceutical compounds in biological fluidsLIF analysis of pharmaceutical compounds in biological fluidsLIF analysis of pharmaceutical compounds in biological fluids : eva: eva: eva: evaluation luation luation luation of various derivatization modes
of various derivatization modesof various derivatization modes of various derivatization modes J. Schappler, S. Rudaz, J.L.Veuthey
Fall Meeting of the Swiss Chemical Society, septembre 2007, Lausanne (Suisse)
ooo
o CZE and MEEKC coupled with APPICZE and MEEKC coupled with APPI----MS for pharmaceutical applicationsCZE and MEEKC coupled with APPICZE and MEEKC coupled with APPIMS for pharmaceutical applicationsMS for pharmaceutical applications MS for pharmaceutical applications J. Schappler, D. Guillarme, J. Prat, S. Rudaz, J.L. Veuthey
Fall Meeting of the Swiss Chemical Society, septembre 2007, Lausanne (Suisse)
Abréviations AbréviationsAbréviations
Abréviations XVIIXVII XVIIXVII
Abréviations Abréviations Abréviations Abréviations
Les abréviations utilisées au cours de ce travail et reconnues par la communauté scientifique sont répertoriées ci-dessous. La plupart d’entre elles sont exprimées avec les acronymes anglais et traduites en français.
ACN Acétonitrile
ADME Absorption, distribution, métabolisme et excrétion
AP Ampérométrie
APCI Ionisation chimique à pression atmosphérique API Ionisation à pression atmosphérique
APPI Photoionisation à pression atmosphérique
BB Box-Behnken
BGE Solution électrolytique CapV Tension d’ionisation
CBQCA 3-(4-carboxybenzoyl)-quinoline-2-carboxaldéhyde cc Contre-courant
CCD Conductimétrie sans contact CD Conductimétrie
CDs Cyclodextrines
CE Electrophorèse capillaire
CID « Collision-induced dissociation » CMC Concentration micellaire critique
CTI Commission pour la technologie et l’innovation CV Coefficient de variation
Abréviations AbréviationsAbréviations
Abréviations XVIIIXVIII XVIIIXVIII
CW « Continuous wave »
CZE Electrophorèse capillaire de zone DAD Diodes en réseau
DryF Débit du gaz de séchage
DryT Température du gaz de séchage
DS DiagnoSwiss
EC Electrochimie EK Electrocinétique
EOF Flux électro-osmotique ESI Ionisation par électrospray
FASI « Field-amplified sample injection » FASS « Field-amplified sample stacking » FI Force ionique
FLUM Fluorescamine FS Silice fondue
FT-ICR Analyseur à résonnance cyclotronique ionique à transformée de Fourier HD Hydrodynamique
HLB Copolymère hydrophile-lipophile H/N Rapport signal-sur-bruit
HS-γ-CDs Cyclodextrines γ hautement sulfatées
ICH Conférence internationale sur l’harmonisation des méthodes ICP Ionisation par plasma inductif
ID Diamètre interne IP Potentiel d’ionisation iPrOH Isopropanol
Abréviations AbréviationsAbréviations
Abréviations XIXXIX XIXXIX
ISRS Inhibiteur sélectif du recaptage de la sérotonine IT Trappe à ions
LASER « Light amplification by stimulated emission of radiation » LC Chromatographie liquide
LCAP Laboratoire de chimie analytique pharmaceutique Leff Longueur effective du capillaire
Ltot Longueur totale du capillaire LIF Fluorescence induite par laser LIT Trappe à ions linéaire
LLE Extraction liquide-liquide LOD Limite de détection LOQ Limite de quantification m/z Rapport masse-sur-charge MAET N,N-diméthylaminoéthanthiol
MALDI Ionisation par désorption laser assistée par une matrice MCE Electrophorèse multi-capillaires
MEKC Chromatographie électrocinétique micellaire
MEEKC Chromatographie électrocinétique en microémulsion MM Masse molaire
MS Spectrométrie de masse
MS/MS Spectrométrie de masse en mode tandem
N Efficacité
NACE Electrophorèse capillaire en milieu non-aqueux NDA Naphtalène 2,3-dicarboxaldéhyde
NebuP Pression du gaz de nébulisation
Abréviations AbréviationsAbréviations
Abréviations XXXX XXXX
PFT Technique du remplissage partiel PMT Photomultiplicateur
PP Précipitation des protéines PT Potentiométrie
QC Contrôle de qualité QqQ Triple quadripôle
SDS Sodium dodécyl sulfate
SFSTP Société française des sciences et techniques pharmaceutiques SheaF Débit du liquide additionnel
SI Standard interne
SIM « Selected ion monitoring » SLE Extraction solide-liquide
SMV Spectrométrie de masse du vivant SPE Extraction sur phase solide
SPME Microextraction en phase solide SRM « Selected reaction monitoring » ToF Analyseur à temps de vol
UV/Vis Ultraviolet/Visible
VapoT Température de l’évaporateur ε Coefficient d’absorption molaire µapp Mobilité apparente
µeff Mobilité électrophorétique
µeof Mobilité du flux électro-osmotique φf Rendement quantique de fluorescence
Chapitre 1 Chapitre 1 Chapitre 1 Chapitre 1
Introduction bibliographique
Introduction bibliographique
Introduction bibliographique
Introduction bibliographique
Chapitre 1 Chapitre 1 Chapitre 1
Chapitre 1 | Introduction Introduction Introduction Introduction 11 11
1. 1. 1.
1. Introduction Introduction Introduction Introduction
Depuis plus de deux décennies, l’électrophorèse capillaire (CE) a confirmé son appartenance à la famille des techniques séparatives hautement résolutives. Elle regroupe de nombreux avantages, notamment en termes de simplicité, d’efficacité et de coût d’analyse. Le petit diamètre des capillaires utilisés permet notamment une consommation faible d’échantillons et de réactifs et une miniaturisation de la technologie.
La plupart des instruments aujourd’hui commercialisés sont équipés de détecteurs ultraviolet/visible (UV/Vis). Ces derniers présentent en effet une flexibilité et une simplicité d’utilisation puisque la détection a directement lieu à travers une portion transparente du capillaire. Le domaine d’applications de ces détecteurs est étendu car la plupart des molécules organiques possèdent des chromophores permettant une détection dans la zone 195-210 nm. Il faut cependant relever que certains composés ne possèdent pas de chromophores (e.g. ions inorganiques) ce qui empêche leur détection aux longueurs d’onde couramment employées sauf si une détection indirecte est utilisée. Le maximum d’absorption des molécules organiques est situé dans la région 160-180 nm, où la mesure est impossible à cause des solvants couramment utilisés en CE (i.e., eau, méthanol) qui possèdent des liaisons σ absorbant également dans cette zone1. La détection UV/Vis, bien qu’applicable à une large proportion d’analytes, ne peut donc pas être considérée comme une technique de détection universelle. De plus, la focalisation du faisceau lumineux sur l’échantillon est rendue difficile par la géométrie particulière et le faible diamètre des capillaires, induisant une perte de puissance du faisceau incident. Par conséquent, le couplage CE-UV présente des limites de détection plutôt élevées, dues à la sensibilité intrinsèque du détecteur mais aussi au faible chemin optique inhérent au diamètre interne du capillaire (25-100 µm). Cette limite du couplage reste le principal frein à l’expansion de la CE, particulièrement dans le cadre de l’analyse de matrices complexes (e.g. échantillons biologiques). Par conséquent, l’augmentation de la sensibilité des méthodes électrophorétiques est un axe de recherche primordial
