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Identification dans les sérums de mammifères de peptides (MW< 1000 DA) à activité mitogénique.
Influence de ces peptides sur les activités biologiques des IGF1 et IGF2
Mahrou Sarem
To cite this version:
Mahrou Sarem. Identification dans les sérums de mammifères de peptides (MW< 1000 DA) à activité mitogénique. Influence de ces peptides sur les activités biologiques des IGF1 et IGF2. Médecine humaine et pathologie. Université Henri Poincaré - Nancy 1, 2000. Français. �NNT : 2000NAN10306�.
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Fig. 13 : Effets d'un.ultrafiltrat et de fractions partiellement purifiées d'IGF1 et d'IGF2, sur l'incorporation de ['H]-thymidine par les lymphocytes
humains activés par la phytohémagglutinine. 50
Fig. 14 A : Purification des FCPPM par chromatographie HPLC. 53 Fig. 14 B : HPLC analytique sur Vydac C18 de la fraction active précédemment
obtenue. 53
Fig. 15 : Etude par spectrométrie de masse des pics 1 (A), 2 (B) et 3 (q obtenus
par chromatographie HPLC. 54
Fig. 16 : Représentation schématique du cycle cellulaire. 66
Fig. 17 : Dosage des protéines totales. 75
Fig. 18 : Présentation schématique des résultats obtenus par cytométrie en flux après le double marquage de l'annexine V-FITC et iodure de propidium
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Fig. 19 : Activité mitogénique d'UF de sérums d'animaux. 93 Fig. 20 : Activité mitogénique d' UF de sérums d'animaux. 95 Fig. 21: Activité mitogénique d' UF de sérums de lapin, souris et rat(exp 1) 98 Fig. 22 : Activité mitogénique d'UF de sérums de lapin, souris et rat (exp. 2). 100 Fig.23: Activité mitogénique d'UF des sérums d'animaux. Pour chaque espèce
un Anova suivi d'un test de Student Newman Keuls (distribution
normale) ou de Kruskal-WalIis suivi d'un test de Dunn ont été effectués. 102
Fig. 24: Mesure de l'activité mitogénique d'IGFl. 103
Fig. 25 : Mesure de l'activité mitogénique de IGF1 et IGF1 associé aux UF de
sérums d'animaux. 106
Fig. 26 : Mesure de l'activité mitogénique d'IGFl et IGF1 associé aux UF de
sérums de lapin, souris et rat. 108
Fig. 27 : Activité mitogénique d'IGF1 (15 ng/ ml), d'UF 10 % et IGFl associé à UF
10 %. 109
Fig. 28 : Mesure de l'activité mitogénique d'IGF2. 111 Fig. 29 : Mesure de l'activité mitogénique de IGF2 et IGF2 associé aux UF de
sérums d'animaux. 113
aa
Fig. 47: Etude de l'activité mitogénique de HWESAS associé aux IGFs, lorsque
ces composés sont ajoutés séquentiellement. 1" exp. 150 Fig. 48 : Etude de l'activité mitogénique de HWESAS associé aux IGFs, lorsque
ces composés sont ajoutés séquentiellement. 2eme exp. 151 Fig. 49 : Etude de l'activité mitogénique du peptide de 17 aa associé aux IGFs,
lorsque ces composés sont ajoutés séquentiellement. 152 Fig. 50 : Mise en évidence de la PKC par immunoblot dans des FEP traités
par les facteurs de croissance. 154
Fig. 51 : Rôle de la PKC dans l'activité mitogénique d' IGF1 et d' IGF2 en
combinaison avec HWESAS. 158
Fig.52: Rôle de l'inhibition de la PKC dans l'activité mitogénique : HWESAS, IGFI et IGFI + HWESAS, IGF2 et IGF2 + HWESAS. 161 Fig. 53 : Distribution des cellules dans les différentes phases du cycle cellulaire
dans une culture de FEP en absence de SVF (r), en présence de SVF 10 %
(1), en présence d'IGFI (15 ng/ ml), d'IGF2 (50 ng/ ml) et d'HWESAS (P) à 7
ng/ ml pendant 12 h , 24 h et 48 h . 165
Fig. 54 : Diagrammes mono et biparamétriques obtenus par cytométrie
en flux après marquage par IP et annexine V. 167
Fig. 55 : Diagrammes mono et biparamétriques obtenus par cytométrie flux après marquage par IP et annexine V.
en
Fig. 56: Pourcentage de cellules en apoptose par rapport aux cellules vivantes
168
mesuré par la méthode à l'annexine-FITC après 24 h d'incubation. 170 Fig. 57 : Diagrammes mono et biparamétriques obtenus par cytométrie en flux
après marquage par IP et annexine V. 171
Fig. 58 : Diagrammes mono et biparamétriques obtenus par cytométrie en flux
après marquage par IP et annexine V. 172
Fig. 59 : Entrée du glucose dans des FEP .. Les résultats IGFI + HWESAS est
comparé à IGFI seul. 174
Fig. 60 : Entrée du glucose dans des FEP. IGF2 + HWESAS est comparé à IGF2
seul. 176
Fig. 61 : Entrée des aa dans des FEP. Les essais (IGF1 + HWESAS) sont comparés
à IGFI seul. 177
Fig. 62: Entrée des aa dans des FEP. Les essais (IGF2 + HWESAS) sont comparés
à IGF2 seul. 178
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Tableau XIV: Effet mitogénique d'IGF2 (mesure de l'incorporation de
PH]-
thymidine dans des PEP en fonction de la concentration utilisée. 111 Tableau XV : Mesure de l'activité mitogénique d'IGF2 et d'IGF2 utilisé avec les
UF de sérums d'animaux. 112
Tableau XVI : Mesure de l'activité mitogénique des UF de lapin, souris et rat en
combinaison avec IGF2. 114
Tableau XVII : Comparaison de la puissance des UF sur l'activité mitogénique
d'IGF2. 116
Tableau XVIII: Effet mitogénique de peptides seuls, mesuré par incorporation
de [3H}thymidine dans des FEP. 122
Tableau XIX: Effet mitogénique de peptides de synthèse mesuré par
incorporation de ['H]-thymidine dans des fibroblastes de souris 3T6. 124 Tableau XX : Effet mitogénique de HWESAS mesuré par incorporation de rH}
thymidine dans des fibroblastes de souris 3T6. 125 Tableau XXI : Effet mitogénique du peptide de synthèse de 17 aa mesuré par
incorporation de [3H}thymidine dans des fibroblastes de souris 3T6. 127 Tableau XXII: Activité mitogénique de HWESAS et du peptide de 17 aa
mesurée sur des cellules hybridomes Mark 3. 128
Tableau XXIII : Activité mitogénique de HWESAS et du peptide de 17 aa
mesurée sur des cellules MCF7. 129
Tableau XXIV: Tableau récapitulatif indiquant le rapport de stimulation
maximum et la dose pour laquelle il est obtenu. 131 Tableau XXV: Activité mitogénique de peptides de synthèses testée en présence
d'IGF1 dans des FEP. 133
Tableau XXVI : Activité mitogénique d'IGF1 et d'IGF1 + peptide, mesurées sur
des cellules MCF7. 137
Tableau XXVII : Activité mitogénique de HWESAS et du peptide 17 aa,
mesurée sur des fibroblastes humains transformés. 139 Tableau XXVIll : : Activité mitogénique de peptides de synthèses testée en
présence d'IGF1 dans des FEP. 142
Tableau XXIX : Activité mitogénique d'IGF2 et d'IGF2 + peptide mesurées sur
des cellules MCF7. 146
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Tableau XXXXVI : Cinétique de phosphorylation des protéines sous l'action d'IGFl, IGF2, IGF1 + HWESAS et d'IGF2 + HWESAS. L'expérience a été
faite sur des FEP (2- expérience). 19
Tableau XXXXVIl: RS de HWESAS seul ou en combinaison avec les IGF1 ou
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5 10Fonction
Métabolisme du glucose
Métabolisme lipidique
Anabolisme protéique
Fonction rénale
Effets hormonaux
Croissance linéaire
1 - Introduction
Effet de l'IGFl
.. Captation du glucose
.. Production hépatique de glucose .. Sensibilité à l'insuline
Hypoglycémie (particulièrement lors d'administration 1 , Corps cétoniques sériques
, Acides gras libres , Triglycérides
• Synthèse protéique , Excrétion azotée
• Protéines totales
• Taux de filtration glomérulaire
• Débit rénal plasmatique , hGH
, Glucagon
.. Catécholamines
.. Chez les sujets ayant un déficit hypophysaire une insensibilité à l'hGH
Tableau II: Principales actions de l'IGF (Jones et Clemmons, 1995).
24
l - Introduction
L'effet antilipolytique ou sur l'anabolisme des protéines n'est pas retrouvé par tous les auteurs, cela peut dépendre des doses utilisées et des conditions physiologiques (Chevenne et Porquet, 1995).
1-1.6.3. IGFs, prolifération, différenciation et mort cellulaire.
Au cours du cycle cellulaire, les cellules ont besoin pour franchir la phase G1 et entrer en phase S, de facteurs de croissance, IGF1 est considéré comme un facteur de progression nécessaire à des cellules aussi diverses que les kératinocytes, les chondrocytes, les fibroblastes, les ostéoblastes, les cellules musculaires, mésangiales, rénales. Une diminution de la concentration en IGF1 ou une mutation du récepteur IGF-RI entraîne une augmentation du temps de doublement des cellules (Stewart et Rotwein, 1996). IGF1 et IGF2 augmentent la différenciation des myoblastes (Florini et Ewton, 1995). IGF1 augmente également la différenciation neuronale (pahlam et al., 1991). De plus les IGF sont aussi des facteurs antiapoptotiques pour de nombreuses cellules comme les myoblastes, les neurones, les oligodendrocytes. IGF1 peut maintenir en survie des cellules hématopoïétiques privées de leurs facteurs de croissance spécifiques, ils préviendraient l'apoptose durant le développement des follicules ovariens (Chun et al., 1994), leur action sur l'apoptose semble passer par la diminution de l'induction de Bax et l'activation de la caspase 3 (Wang et al., 1998). Les IGF peuvent aussi protéger de la mort les cellules tumorales. Le rôle des IGFs au niveau du cerveau et dans la cancérogénèse seront développés dans le chapitre suivant.
1-1.7. Essais thérapeutiques.
Dans une revue, Rosenfield et al. (1995) rapportent différents essais d'administration d'IGF1 tant chez les volontaires sains que chez des sujets
25
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