Résultats et discussion - Evaluation in vitro de l’activité antilithiasique des extraits des fe

Chapitre III Résultats et discussion

Chapitre III : Résultats et discussion

III.1. Rendement d’extraction

Dans cette étude, le rendement (l’extrait sec, obtenu après évaporation, contenant les composés phénoliques) a été déterminé par rapport à 6 g de la matière végétale (feuilles, fleurs).

Le poids de l’extrait sec a été déterminé par la différence entre le poids du ballon plein (après évaporation) et le poids du ballon vide (avant évaporation).

Les résultats de cette manipulation sont représentés dans le Tableau III.

Tableau III : Poids d’extraits secs et rendement d’extraction à partir des parties florales et foliaires de

Paronychia argantea.

Organe Poids d’extrait sec (g) Rendements (%)

Fleurs 0,83 13,83

Feuilles 0,80 13,41

Il ressort à travers l’observation des rendements d’extraction du Tableau III que les fleurs donnent le meilleur rendement d’extraction soit un pourcentage de 13,83%, alors que les feuilles donnent le rendement (13,41 %).

Les résultats rapportés par Adjadj et al.,(2016) sur Paronychia argentea concernant le rendement d’extraction par une macération méthanolique sont de 10,97%. Ces résultats sont proches à ceux obtenus dans la présente étude.

Wang et al.,(2008) rapportent dans leur étude sur des herbes chinoises que le

rendement d’extraction dépend du processus utilisé, car les constituants des cellules se libèrent par rupture des parois cellulaires vers le solvant organique, un phénomène qui s’intensifié par l’usage d’un solvant polaire (Li et al., 2012). La taille des particules végétales joue un rôle important dans l’extraction des composés phénoliques. Il est généralement admis que sous une forme broyée, la matière végétale présentera une plus grande surface de contact avec le solvant, permettant ainsi d’accélérer sa solubilité (Escribano-Bailon et Santos-

Buelga., 2003 ; Bonnaillie et al., 2012). D’après Bruneton., (1999), la variation des résultats

d’un extrait à l’autre est due principalement aux solvants d’extraction utilisés, dont les solvants polaires montrent un meilleur rendement d’extraction par rapport aux solvants moins polaires. La différence de polarité des solvants utilisés permet l’extraction d’une large gamme de métabolites secondaires (Green., 2004). Ainsi, le pH, la température, le temps d'extraction et la composition phytochimique de l'échantillon (Do et al ., 2013).

Chapitre III Résultats et discussion

III.2. Teneur en polyphénols et flavonoïdes

Parmi tous les constituants chimiques des végétaux, les composés phénoliques, s’ils n’occupent qu’une place quantitative modeste, ont de multiples propriétés qui ont de tout temps, été recherchées par les êtres humains, (Macheix et al., 2005). Les polyphénols et les flavonoïdes des plantes pourraient effectivement inhiber la formation des calculs de CaOx in

vitro et in vivo, en corrélation avec leurs propriétés diurétiques, antioxydantes, propriétés anti-

inflammatoires, antibactériennes et autres effets protecteurs (Zeng et Jiang., 2018). Pour cette raison, ils sont utilisés dans de nombreux domaines incluant, par exemple, la médecine, la nutrition, les teintures et les produits cosmétiques. À ce sujet, la détermination des composés phénoliques des feuilles et fleurs de Paronychia argentea et l’étude de leur capacité antilithiasique ont été abordées afin d’évaluer la capacité de cette plante à synthétiser ces composés et apprécier leur pouvoir antilithiasique.

Toutes les valeurs illustrées aux niveaux des figures 11 et 12 sont la moyenne de 3 répétitions pour chaque partie de la plante étudiée.

III.2.1.Teneurs en polyphénols

La figure 11 illustre les résultats des teneurs en polyphénols totaux dans les extraits éthanoliques foliaires et floraux de Paronychia argentia. Ces résultats sont exprimés en mg d’équivalent d’acide gallique par gramme de matière sèche (mg EAG/g MS) en utilisant l’équation de la régression linéaire de la courbe d’étalonnage d’acide gallique.

Après exploration de cette figure, on constate que les teneurs en polyphenols totaux au niveau de l’extrait des feuilles de Paronychia argentia se révèlent nettement proche de celles déterminées au niveau de l’extrait des fleurs, sauf que la partie foliaire présente la teneur la plus élevée estimée à 9,29±0.45 mg EAG/g MS, par contre la partie florale présente 5,92±0.14 mg EAG/g MS.

Chapitre III

Figure 11 : Variations des teneurs en polyphénols totaux au niveau des extraits éthanoliques foliaires

Les protocoles d’extractions des composés phénoliques par solvants sont très divers, le rendement de cette extraction dépend fortement de la nature du solvant, et de la méthode d’extraction, mais aussi du matériel végétal et ses composés bioactifs. Le solv

permettre une extraction maximale des polyphénols sans modifier leurs structures al., 2008).

La comparaison de nos résultats avec ceux de la littérature, montre que les teneurs en polyphénols de nos extraits sont plus

(71,39±1,13 mg/g avec des extraits éthanolique de sont supérieurs avec ceux obtenus par

méthanolique de Paronychia argonte

Plusieurs facteurs peuvent influencer la teneur en composés phénoliques. Des études récentes ont montré que les facteurs extrinsèques (tels que les facteurs géographiques et climatiques), les facteurs génétiques, mais également le degré de maturation de la

durée de stockage ont une forte influence sur le contenu en polyphénols

Pedneault et al., 2001; Fiorucci

Chapitre III Résultats et discussion

: Variations des teneurs en polyphénols totaux au niveau des extraits éthanoliques foliaires et floraux de Paronychia argentea.

permettre une extraction maximale des polyphénols sans modifier leurs structures

La comparaison de nos résultats avec ceux de la littérature, montre que les teneurs en polyphénols de nos extraits sont plus inférieurs à celle obtenue par

mg/g avec des extraits éthanolique de Herniaria hirsuta). Par contre nos résultats avec ceux obtenus par Moufida et al., (2015) (0.56±0.25 mg/g

argontea).

durée de stockage ont une forte influence sur le contenu en polyphénols

2001; Fiorucci et al., 2006).

Résultats et discussion

: Variations des teneurs en polyphénols totaux au niveau des extraits éthanoliques foliaires

La comparaison de nos résultats avec ceux de la littérature, montre que les teneurs en à celle obtenue par Ammor., (2018) ). Par contre nos résultats 0.25 mg/g avec extraits

Chapitre III

III.2.2. Teneurs en flavonoïdes

Pour le dosage des flavonoïdes, la q

permis de réaliser une courbe d’étalonnage à partir de laquelle on a calculé les teneurs en flavonoïde accumulées dans les feuilles et les fleurs.

Les résultats sont illustrés dans la

quercétine par g gramme de matière sèche (mg EQ/g extrait). fleurs de Paronychia argentea

feuilles contient une teneur en flavonoïdes plus élevée que celle de l’extrait

0,18±0.01 mg EQ/ g MS alors que l’extrait des feuilles contient une teneur en flavonoïdes égale à 0,47±0.0035 mg EQ/ g MS.

Figure 12 : Variations des teneurs en fla

flavonoïdes révèlent l’apparition de coloration jaune, qui est due à la formation d'un complexe entre le chlorure d'aluminium et les atomes d'oxygène présents sur les carbones des flavonoïdes (Zeghad., 2009).

Chapitre III Résultats et discussion

flavonoïdes

le dosage des flavonoïdes, la quercétine considérée comme contrôle positif, a permis de réaliser une courbe d’étalonnage à partir de laquelle on a calculé les teneurs en flavonoïde accumulées dans les feuilles et les fleurs.

Les résultats sont illustrés dans la figure 12 et exprimés en mg d’ uercétine par g gramme de matière sèche (mg EQ/g extrait). Les extraits des

a présentent des teneurs différentes en flavonoïdes. En effet,

contient une teneur en flavonoïdes plus élevée que celle de l’extrait

mg EQ/ g MS alors que l’extrait des feuilles contient une teneur en flavonoïdes mg EQ/ g MS.

: Variations des teneurs en flavonoïdes au niveau des extraits éthanoliques foliaires et floraux de Paronychiya argentia.

Les flavonoïdes sont des composés naturels qui interviennent non seulement dans la pigmentation des végétaux, mais aussi qui présentent des activités biologiques, telles que des

Fiorucci., 2006). En présence du chlorure d’aluminium, flavonoïdes révèlent l’apparition de coloration jaune, qui est due à la formation d'un complexe entre le chlorure d'aluminium et les atomes d'oxygène présents sur les carbones des

Résultats et discussion

considérée comme contrôle positif, a permis de réaliser une courbe d’étalonnage à partir de laquelle on a calculé les teneurs en

exprimés en mg d’équivalent de extraits des feuilles et des présentent des teneurs différentes en flavonoïdes. En effet, les contient une teneur en flavonoïdes plus élevée que celle de l’extrait florale estimée à mg EQ/ g MS alors que l’extrait des feuilles contient une teneur en flavonoïdes

vonoïdes au niveau des extraits éthanoliques foliaires et

Les flavonoïdes sont des composés naturels qui interviennent non seulement dans la pigmentation des végétaux, mais aussi qui présentent des activités biologiques, telles que des En présence du chlorure d’aluminium, les flavonoïdes révèlent l’apparition de coloration jaune, qui est due à la formation d'un complexe entre le chlorure d'aluminium et les atomes d'oxygène présents sur les carbones des

Chapitre III Résultats et discussion

Ammor., (2018) ont rapporté des teneurs largement supérieures à celles de la présente étude

avec les extraits éthanoliques de Herniaria hirsuta qui (13,93±0,12 mg/g), Moufida et al.,

(2015) ont aussi enregistré une teneur supérieure à celle de la présente étude avec les extraits

méthanoliques de Paronychiya argontia (3,24±0.03 mg/g).

Les différences de la teneur en flavonoïdes sont dues peut être aux conditions de croissance de la plante, comme le sol, le lieu géographique, conditions ambiantes pendant le développement de l’organe, degré de maturité, la moisson et les différences génétiques

(Pawlowska., 2010).

III.3. Evaluation de l’activité antilithiasique

III.3.1. En absence des extrait de la plante (contrôle négatif)

La figure 13 donne l’allure de la courbe de cristallisation oxalocalcique en absence d’inhibiteur en fonction du temps.

Figure 13 : Evolution de la cinétique de cristallisation oxalocalcique en absence des extraits de la

plante.

(Pente : 1.1069±0.321575 Do/min ; Ti: 0.012 ±0.002 min).

Le tableau IV regroupe les paramètres turbidimétriques de la cristallisation oxalocalcique.

Tableau IV : Paramètre turbidimétrique de la cristallisation oxalocalcique en absence d’inhibiteur.

Sans inhibiteur (mM) Ti (min)

Pente (Do/min) I %

Chapitre III Résultats et discussion

III.3.2. En présence des extraits de la plante III.2.3.1. Extrait des feuilles

Les figures 14 au 19 présentent les courbes de cristallisation oxalocalcique en présence d’extraits des feuilles, et le tableau V regroupent les paramètres turbidimétriques dans la présence d’extrait des feuilles :

Figure 14: Courbe de cristallisation oxalocalcique en présence d’extrait des feuilles 0.1mg/ml (Pente :

0.8205±0.2348 Do/min ; Ti : 0.027±0.003 min).

Figure 15: Courbe de cristallisation oxalocalcique en présence d’extrait des feuilles 0.2mg/ml (Pente :

Chapitre III Résultats et discussion

Figure 16: Courbe de cristallisation oxalocalcique en présence d’extrait des feuilles 0.5mg/ml (Pente :

0.6667±0.010 Do/min ; Ti : 0.0321± 0.022 min).

Figure 17: Courbe de cristallisation oxalocalcique en présence d’extrait des feuilles 1 mg/ml (Pente :

Chapitre III Résultats et discussion

Figure 18: Courbe de cristallisation oxalocalcique en présence d’extrait des feuilles 2 mg/ml (Pente :

0.627±0.037 Do/min ; Ti : 0.0896±0.036 min).

Figure 19: Courbe de cristallisation oxalocalcique en présence d’extrait des feuilles 5 mg/ml (Pente :

Chapitre III Résultats et discussion

Tableau V: Paramètre turbidimetrique de la cristallisation oxalocalcique en présence d’extrait des

feuilles.

Feuilles (mg/ml) Ti (min) Pente (Do/min) I % 0.1 0.027±0.003 0.8205±0.2348 25.87 0.2 0.028±0.0007 0.7041±0.020 36.38 0.5 0.032±0.022 0.6667±0.010 39.76 1 0.0366±0.003 0.6576±0.062 40.59 2 0.0896±0.036 0.627±0.037 43.30 5 0.188±0.067 0.5472±0.025 50.56

III.2.3.1. Extrait des Fleurs

Les figures 20 au 25 présentent les courbes de cristallisation oxalocalcique en présence d’extraits des feuilles, et le tableau IV regroupent les paramètres turbidimétriques dans la présence d’extrait des fleurs.

Figure 20: Courbe de cristallisation oxalocalcique en présence d’extrait des fleurs 0.1mg/ml

Chapitre III Résultats et discussion

Figure 21: Courbe de cristallisation oxalocalcique en présence d’extrait des fleurs 0.2mg/ml (Pente :

0.5435±0.0114 Do/min ; Ti : 0.113±0.004min).

Figure 22: Courbe de cristallisation oxalocalcique en présence d’extrait des fleurs 0.5 mg/ml (Pente :

Chapitre III Résultats et discussion

Figure 23: Courbe de cristallisation oxalocalcique en présence d’extrait des fleurs 1 mg/ml (Pente :

0.4757±0.043 Do/min ; Ti : 0.213±0.069 min).

Figure 24: Courbe de cristallisation oxalocalcique en présence d’extrait des fleurs 2 mg/ml (Pente :

Chapitre III Résultats et discussion

Figure 25: Courbe de cristallisation oxalocalcique en présence d’extrait des fleurs 5 mg/ml

(Pente : 0.3231±0.055 Do/min ; Ti : 0.486±0.24min).

Tableau VI : Paramètre turbidimetrique de la cristallisation oxalocalcique en présence d’extrait des

fleurs.

Fleurs (mg/ml) Ti (min) Pente (Do/min) I %

0.1 0.101±0.028 0.5912±0.0023 46.58 0.2 0.113±0.004 0.5435±0.0114 50.89 0.5 0.121±0.007 0.5226±0.096 52.78 1 0.213±0.069 0.4757±0.043 57.02 2 0.345±0.063 0.4047±0.029 63.43 5 0.486±0.24 0.3231±0.055 70.97

Chapitre III Résultats et discussion

III.3.3. Control positive (Acide citrique)

La figure 26 présente la courbe de cristallisation oxalocalcique en présence d’acide citrique, et le tableau VII regroupent les paramètres turbidimétriques dans la présence d’acide citrique.

Figure 26 : Courbe de cristallisation oxalocalcique en présence d’acide citrique 6 mM (Pente :

0.0337±0.0037 Do/min ; Ti : 1.14±0.02min).

Tableau VII : Paramètre turbidimetrique de la cristallisation oxalocalcique en presence d’acide

citrique

Acide citrique (mM) Ti (min) Pente I % 6 mM 1.14±0.02 0.0337±0.0037 96.95

L'activité antilithiasique in vitro des extraits a été évaluée par la méthode de turbidité (inhibition de la formation d'oxalate de calcium). Dans cette méthode l'inhibition de la formation d'oxalate de calcium a été mesurée en termes de turbidité en utilisant un spectrophotomètre (Agilent technologies cary 60 uv-vis). Plus la turbidité est faible, plus l'inhibition est forte et moins l'absorbance sera observée dans le spectrophotomètre. L'inhibition de la formation d'oxalate de calcium en présence de l'extrait a été comparée à un contrôle positif (acide citrique). L’étude a été réalisée à 37 ° C avec une agitation constante à pH 6,5. Tout d'abord, la croissance des cristaux in vitro en l'absence de tout inhibiteur a été réalisée (contrôle négative), la turbidité a été formée immédiatement après le mélange des produits chimiques. Les données obtenues ont été utilisées comme contrôle pour la comparaison de la croissance en présence d’extrait de la plante. Ensuite, l’étude a été

Chapitre III Résultats et discussion

poursuivie pour connaître l’effet des extraits des feuilles et des fleurs sur la formation des cristaux selon la procédure mentionnée dans le chapitre matériels et méthodes. L'inhibition de la formation des cristaux a été calculée par la méthode graphique en utilisant la formule mathématique (3). La concentration croissante des extraits (0.1, 0.2 ,0.5, 1, 2 et 5 mg / ml) avaient inhibé la croissance cristalline en inhibant la nucléation de l'oxalate de calcium en se désintégrant en particules plus petites. Les résultats de l'analyse de nucléation ont confirmé que l'extrait contenait des agents empêchant la nucléation.

Dans cette étude, il a été observé que la faible dose d’extrait des feuilles (0.1 mg / ml) a montré 25.87% d’inhibition, alors que la dose la plus élevé (5 mg/ml) a montré 50.56% d’inhibition (Tableau V et Figure 19), alors que l’extrait des fleurs a un pourcentage d’inhibition de 46.58% pour la dose la plus faibles (0.1 mg / ml) , les doses plus élevées (5 mg / ml) a donné une inhibition de 70.97% (Tableau VI et Figure 25).

Après exploration de ses résultats au niveau de l’extrait des feuilles et des fleurs de

Paronychia argentia on constate que la partie florale présente le pourcentage d’inhibition le

plus élevé par apport a la partie foliaire.

Ces résultats sont supérieurs aux ceux obtenus par Rajeshwari et al., (2013) sur l’extrait aqueux des feuilles et des fleurs de Convolvulus Arvensis (la forte concentration 100 mg/ ml a donné une inhibition de 92.27 % pour l’extrait des feuilles, et 90.41 % pour l’ extrait des fleurs) par contre sont inferieurs aux ceux obtenus par Sasikala et al.,(2008) avec l’extrait méthanolique des racines et des tiges de Rotula aquatica (la forte concentration 0.5 mg/ml donne 70 % pour l’extrait des racines, 50% pour l’extraits des tiges). Cette différence est due peut être aux composition phytochimiques de la plante, conditions de croissance de la plante comme le sol, la géolocalisation de la plante , conditions ambiantes pendant le développement de l’organe, degré de maturité, la récolte et les différences génétiques et le solvant d’extraction.

En Algérie, comme dans de nombreux pays moins développés, la phytothérapie est une méthode courante de soins de la santé primaires, car les produits pharmaceutiques sont chers et que la pharmacopée «populaire» offre des remèdes apparemment efficaces à de nombreuses maladies (Beghalia et al., 2008). Les résultats peuvent êtres considérés positifs car l'extrait des feuilles et des fleurs inhibe la cristallisation et empêche la formation des calculs. Cette propriété des extraits est donc avantageuse car elle empêche la formation des calculs urinaires en induisant l’excrétion des petites particules provenant du rein et réduit les risques de rétention dans les voies urinaires (Beghalia et al., 2008). L'extrait d'herbe peut contenir des substances qui inhibent la croissance des cristaux de COM, cette propriété de

Chapitre III

l'extrait de la plante peut jouer un rôle important dans la p calculs rénaux (Sasikala et al

en solution, elles seront plus facilement éliminées plante cause moins de cristaux

III.4. Etude de la cristallisation par microscope optique

Les temps des photographies

croissance pour les essais sans et avec inhibiteur, et sont rassemblés dans les

29.

Figure 27 : Photo des cristaux oxalocalcique

Chapitre III Résultats et discussion

l'extrait de la plante peut jouer un rôle important dans la prévention de la formation de al., 2013). Si l'extrait maintient les particules de CaOx di

plus facilement éliminées par les reins. L’extrait des partie plante cause moins de cristaux en solution, réduite la sursaturation et la taille des particules.

Etude de la cristallisation par microscope optique

Les temps des photographies (t=2min) correspondent respectivement au sta essais sans et avec inhibiteur, et sont rassemblés dans les

hoto des cristaux oxalocalcique en absence d’inhibiteur prise avec microscope optique (G× 40).

Résultats et discussion

révention de la formation des . Si l'extrait maintient les particules de CaOx dispersées L’extrait des parties de la sursaturation et la taille des particules.

correspondent respectivement au stade de essais sans et avec inhibiteur, et sont rassemblés dans les Figure 27,28,

Chapitre III

C D

Figure 28: Photos d’inhibition de cristallisation oxalocalcique par des concentrations différentes

d’extrait des feuilles : (A : 0.1mg/ml, B

Chapitre III Résultats et discussion

A B

C D

E F

: Photos d’inhibition de cristallisation oxalocalcique par des concentrations différentes : 0.1mg/ml, B : 0,2mg/ml, C : 0.5mg/ml, D : 1mg/ml, E

F :5mg/ml).

Résultats et discussion

: Photos d’inhibition de cristallisation oxalocalcique par des concentrations différentes : 1mg/ml, E : 2mg/ml,

Chapitre III

Figure 29 : Photos d’inhibition de cri d’extrait des fleurs : (A : 0.1mg/ml, B

Chapitre III Résultats et discussion

B C D E F : Photos d’inhibition de cristallisation oxalocalcique par des concentrations différentes : 0.1mg/ml, B : 0,2mg/ml, C /0.5mg/ml, D : 1mg/ml, E : 2mg/ml, F

Résultats et discussion

stallisation oxalocalcique par des concentrations différentes : 2mg/ml, F : 5mg/ml).

Chapitre III Résultats et discussion

Plusieurs études sont effectuées à l'aide d'un microscope optique pour valider les résultats obtenu par le modèle turbidimétrique. Dans notre travail on a suivi le nombre et la taille des cristaux oxalocalcique en cas d’absence d’inhibiteur et dans sa présence, les résultats obtenus sont compatible avec celles obtenus par Bensatal et Ouahrani., (2008).

La photographie présentée dans la figure 27 correspond à l’étape de croissance pour la cristallisation d’oxalate de calcium en absence d‘extrait, la comparaison de cette photographie avec les photos obtenus en présences des extraits (feuille, fleur) aux faibles concentrations (de 0.1mg/ml à 0.5mg/ml) montre que la diminution de nombre et de la taille des cristaux avec des faibles concentrations des extraits ne sont pas important, ce qui explique pourquoi l'inhibition augmente en fonction de la concentration en présence d’extrait en comparaison avec les photographies des concentrations (1mg/ml, 2 mg/ml, 5 mg/ml).

Le nombre et la taille des cristaux existant sur les figure 28, 29 correspond au stade de

Dans le document Evaluation in vitro de l’activité antilithiasique des extraits des feuilles et des fleurs de Paronychia argentea , plante utilisée en médecine traditionnelle en Algérie (Page 33-65)