Perspectives

Les résultats que nous avons obtenus soulèvent plusieurs questions qui pourront être adressées à la suite de ce projet.

3.1 Concernant l!accumulation des TAMs dans le micro-environnement tumoral

‚ Quel est le mécanisme de recrutement des TAMs dans les métastases ?

La grande majorité des études s!est focalisée sur la caractérisation des chimiokines impliquées dans le recrutement des macrophages dans les tumeurs primaires et ont mis en évidence le rôle de CCL2 (Qian 2011) et CXCL12 (ou SDF-1) (Du 2008). Il serait intéressant d!étudier les mécanismes impliqués dans le recrutement des macrophages dans les métastases par l!analyse du micro-environnement chimiokinique des métastases. En effet, dans le modèle MT/ret, les macrophages ne représentent pas la population majoritaire infiltrant les tumeurs primaires (données non montrées), alors qu!ils infiltrent massivement les métastases. Il est majoritairement admis que l!accumulation de progéniteurs myéloïdes immatures issus de la moelle osseuse donne naissance aux MDSCs, puis aux TAMs (Gabrilovich 2012). Cependant, il a également été mis en évidence dans un modèle spontané que la rate pourrait être un réservoir important dont sont issus les TAMs (Cortez-Retamozo 2012). Nous pourrions étudier de quel compartiment cellulaire proviennent les TAMs dans le modèle MT/ret.

‚ Quelles stratégies thérapeutiques ciblant les TAMs pourraient être mises en place ? Les TAMs semblent être une cible thérapeutique potentiellement intéressante. De plus, le fait que le modèle MT/ret récapitule bien l!histoire naturelle du mélanome en fait un bon modèle pour des essais pré-cliniques. Par exemple, nous pourrions, dans ce modèle, évaluer en détails les effets de l!utilisation des anticorps monoclonaux anti-VEGF ou anti-EGF déjà utilisés en clinique. En outre, le recrutement des TAMs pourrait être ciblé par l!utilisation d!antagonistes des récepteurs aux chimiokines CCL2 et/ou CXCL12. De plus, nous pourrions cibler les mécanismes immuno-suppresseurs des TAMs, par exemple grâce aux inhibiteurs de

3.2 Concernant l!accumulation de Tregs dans les ganglions drainants

Beaucoup de questions se posent concernant les Tregs dans les ganglions drainants :

‚ Quelle est l!origine de cette accumulation ?

Il a été démontré qu!il pourrait s!agir d!une prolifération de nTregs (cf. Chapitre C.2.2) ou d!une conversion de LT CD4+ naïfs en iTregs (cf. Chapitre C.2.3). Nous émettons également l!hypothèse d!une domiciliation préférentielle. La prolifération et la génération de novo implique une activation cellulaire. Or, nos données phénotypiques ne montrent pas d!activation plus importante des Tregs provenant des souris MT/ret que des contrôles non transgéniques (CD5, CD25, CD44, CD69, CD62L, CD103, GITR, CTLA-4, ICOS, données non montrées), nous orientant donc vers l!hypothèse d!une domiciliation préférentielle. Pour tester cette hypothèse, nous pourrions bloquer l!activité de CD62L par l!administration d!un Ac spécifique à des souris MT/ret atteintes ou à des souris contrôles. Ce traitement empêchant l!entrée des LT dans les ganglions montrerait, si l!hypothèse est exacte, que les Tregs sont séquestrés dans les ganglions drainants des souris MT/ret alors que les contrôles se vident.

‚ Quelle est leur spécificité antigénique ?

La question de la spécificité antigénique des Tregs dans le contexte tumoral n!est pas encore totalement élucidée. Dans le contexte tumoral, les Tregs peuvent être spécifiques des antigènes tumoraux (cf. chapitre C3). Elucider la question de la spécificité antigénique des Tregs des souris MT/ret pourrait également donner des indications concernant l!origine de l!accumulation des Tregs. En effet, si ces cellules s!avèrent spécifiques de néo-antigènes tumoraux, il paraitrait alors probable qu!il s!agisse d!iTregs. La spécificité antigénique pourrait être testée in vitro à partir de Tregs triés et marqués au CFSE puis mis en culture avec des DCs chargées en peptides tumoraux.

‚ Quelles sont leurs cibles dans les ganglions drainants et par quels mécanismes les inhibent-ils ?

Les Tregs sont capables d!inhiber de nombreux effecteurs du système immunitaire par des mécanismes divers. Néanmoins, dans le contexte tumoral, la majorité des mécanismes et des cibles potentielles des Tregs n!a pas été étudiée. Il serait intéressant de déterminer quels sont les effecteurs inhibés par les Tregs dans les ganglions drainants. Par exemple, les capacités de présentation antigénique et de co-stimulation des DCs, la prolifération et les fonctions

effectrices des LT et NK ou encore les capacités de sécrétion de cytokines des macrophages sont-elles affectées par les Tregs ? Nous pourrions évaluer les fonctions de ces différents effecteurs suite au blocage des fonctions des Tregs, par exemple par l!utilisation d!Ac anti-IL- 10R ou anti-TGFd, ou à leur déplétion par anti-CD25 ou le denileukin diftitox. Nos résultats suggèrent fortement que les Tregs agissent par un mécanisme dépendant de l!IL-10 (Article 2 : Figure 6). Malgré tout, nous ne pouvons affirmer complètement que c!est bien l!IL-10 produite par les Tregs qui est importante. Afin de répondre à cette question nous pourrions utiliser des Tregs déficient en IL-10. L!utilisation d!un système Cre/lox est très efficace mais semble difficile à mettre en #uvre dans le modèle MT/ret. En revanche, le transfert de Tregs provenant de donneurs IL-10KO dans des souris MT/ret CD3gKO pourrait permettre de répondre à cette question.

‚ Quel mécanisme dicte leur accumulation dans les ganglions drainants ?

L!accumulation de Tregs dans les ganglions drainants est retrouvée chez les animaux ne présentant qu!une tumeur primaire oculaire. Nous envisageons donc que ce soit la tumeur primaire qui dicte l!accumulation des Tregs. En effet, les tumeurs sont capables de sécréter des facteurs susceptibles de provoquer l!expansion ou l!induction des Tregs (cf. Chapitre C.2). Cependant, la majorité de ces facteurs agit au niveau local pour recruter ou expandre les Tregs du micro-environnement tumoral. Nous envisageons d!évaluer l!impact de ces médiateurs connus, mais également de nouveaux, à distance dans les ganglions. Nous pourrions également étudier le rôle des DCs, macrophages ou MDSCs qui pourraient provoquer l!accumulation des Tregs dans les ganglions drainants. En effet, il a été démontré que l'IL-10 produite par les macrophages de la lamina propria est nécessaire pour maintenir l'activité des Tregs et empêcher la colite auto-immune (Murai 2009). Ceci soulève la possibilité que l!IL-10 produite par les macrophages de type 2 présents dans les ganglions dans le contexte tumoral puisse favoriser l!activité des Tregs.