4-1 Dosage de la glycémie: Méthode enzymatique Principe
Dans la réaction de Trinder, le glucose est oxydé en D-gluconate par la glucose oxydase (GOD) avec la formation du peroxyde d’hydrogène. En présence de la peroxydase (POD), un mélange de phénol et de 4-aminoantipyrine (4-AA) est oxydé par le peroxyde
Réalisé et soutenu par Yvonne Gloria M. GNIMASSOU Page 14 d’hydrogène, pour donner une coloration rouge de quinonéimine proportionnelle à la concentration de glucose dans l’échantillon.
Dans quatre (04) tubes numérotés, on prélève :
cuves Réactifs (R)
Blanc Etalon Control Echantillon
R (glycémie) 1000µl 1000µl 1000 µl 1000µl
Lecture Lecture à 500 nm contre le blanc réactif
4-2 Dosage de la Calcémie
La méthode (Cromatest, Linear Chemical SSL, Barcelone, Espagne) est basée sur la variation d’absorption à la longueur d’onde du complexe formé par la liaison spécifique de l’Ortho-crésophtaléine complexon (OCC), un indicateur métallochromique avec le calcium en milieu alcalin. L’intensité du chromophore formé est proportionnelle à la concentration du calcium total de l’échantillon
Dans quatre (04) tubes numérotés, on prélève :
cuves Réactifs (R)
Blanc Etalon Control Echantillon
R1 500µl 500µl 500µl 500µl
Lecture Lecture à 570 nm contre le blanc réactif
Réalisé et soutenu par Yvonne Gloria M. GNIMASSOU Page 15 5- Outils statistiques
- La moyenne (𝒙̅) ou valeur cible (VC) Soit 𝒙̅ une variable aléatoire et 𝒏 l’effectif total
( 𝒙̅ ) =𝒙𝟏+ 𝒙𝟐… + 𝒙𝒏 𝒏
- L’écart-type ET ou σ, s’obtient à partir de la formule suivante :
𝐄𝐓 = 𝛔 = √∑(𝒙𝒊− 𝒙̅)𝟐 𝒏 − 𝟏
𝒏
𝒊=𝟎
- Coefficient de variation (CV)
Il correspond à l’écart-type de la distribution exprimé en % de la moyenne de la distribution. Il est noté CV
CV = 𝝈
𝒙
̅ 𝒙 𝟏𝟎𝟎
- Intervalle de confiance (IC) : IC = [ 𝒙̅-2𝛔 ,𝒙̅+ 𝟐𝛔]
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Réalisé et soutenu par Yvonne Gloria M. GNIMASSOU Page 17 3. RESULTATS ET COMMENTAIRES
3.1 RESULTATS
Les résultats et les calculs obtenus après les manipulations sont consignés dans les tableaux ci-dessous.
Tableau I: Valeurs cibles et intervalles de confiance définis par le fournisseur
Valeurs Glucose (g/L) Calcium (mg/L)
Valeur cible 0,96 89,0
Intervalle de confiance [0,82 –1,11] [78,3 –99,7]
Les valeurs de référence fournies par le fabricant du contrôle sont inscrites dans le tableau.
La valeur minimale est 0,82 g/L pour le glucose et 78,3 mg/L pour le calcium. Les valeurs maximales sont respectivement de 1,11 g/L et de 99,7 mg/L pour le glucose et le calcium.
Tableau II : Valeur cible et Coefficient de Variation associés au test de répétabilité
Valeurs Glucose (g/L) Calcium (mg/L)
Valeur cible 0,84 90,50
Ecart-Type 0,02 2,78
Coefficient de Variation (%) 2,38 3,07
Le coefficient de variation associé au test de répétabilité pour la glycémie et la calcémie est assez bas et nettement inférieur au seuil acceptable qui inférieur 5%.
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60 80 100 120
J1 J2 J3 J4 J5 J6 J7 J8 J9 J10 J11 J12 J13 J14 J15 J16 J17 J18 J19 J20 J21 J22 J23 J24 J25 J26 J27 J28 J29 J30
Calcium (mg/L) M-3ET M-2ET M-1ET M M+1ET M+2ET M+3ET
0,65 0,85 1,05
J1 J2 J3 J4 J5 J6 J7 J8 J9 J10 J11 J12 J13 J14 J15 J16 J17 J18 J19 J20 J21 J22 J23 J24 J25 J26 J27 J28 J29 J30
Glucose (g/L) M-3ET M-2ET M-1ET M M+1ET M+2ET M+3ET
Diagramme de Levey-Jennings illustrant les deux paramètres
Figure 3 : Diagramme de Levey-Jennings sur la glycémie
Les résultats du dosage de la glycémie excepté 2 réalisés durant les 30 jours qu’a duré le test de reproductibilité sont dans la zone Moyenne ± 2ET. Les 2 autres sont dans la zone Moyenne ± 3ET. Les résultats des patients reçus durant cette période ont été tous validés.
Figure 4 : Diagramme de Levey-Jennings sur la calcémie
Réalisé et soutenu par Yvonne Gloria M. GNIMASSOU Page 19 Tous les résultats du dosage de la calcémie durant les 30 jours qu’a duré le test de reproductibilité sont dans la zone Moyenne ± 2ET. Les résultats des patients reçus durant cette période ont été validés.
La répartition montre qu’aucun résultat de dosage du glucose ou du calcium n’est hors de la limite de 3ET.
Tableau III : Biai associé au dosage de la glycémie et la calcémie
Biais
Glycémie -0,1 Calcémie 0,2
Tableau IV: Coefficients de récupération
Coefficient de récupération
Glycémie 90%
Calcémie 100%
Les coefficients de récupération de la glycémie et de la calcémie sont respectivement de 90%
et de 100%. Aucun dosage n’a nécessité de mesures correctives durant les 30 jours qu’a duré le test de reproductibilité.
3.2 Commentaires
Au cours des travaux, les performances analytiques du spectrophotomètre utilisé au laboratoire de l’hôpital El-Fateh ont été évaluées par rapport au dosage de la glycémie et de la calcémie. L’échantillon contrôle utilisé est un contrôle certifié. L’Elitrol I est fourni par la société ELITech (France).
Les valeurs de contrôle de la glycémie sont dans la zone Moyenne ± 2ET sauf ceux du deuxième et vingt-septième jour qui se retrouvent dans l’intervalle Moyenne ± 3ET. Si les valeurs quotidiennes du sérum de contrôle sont comprises entre ± 2ET, la série du jour est déclarée valide (Sawadogo et al., 2005), donc les résultats des patients sont validés durant ces
Réalisé et soutenu par Yvonne Gloria M. GNIMASSOU Page 20 jours. L’application des règles de Westgard au graphique de la figure 3 ne révèle aucune violation de ces dernières.
Les valeurs de contrôle de la calcémie obtenues sont régulièrement réparties de part et d’autre de la moyenne et tous dans l’intervalle ± 2ET. Les résultats des patients sont donc validés durant cette période. L’application des règles de Westgard au graphique de la figure 4 révèle une violation la règle 31s (trois résultats consécutifs supérieurs à 1ET du même côté de la moyenne) du dix-huitième au vingtième jour. Les résultats indiquent alors un biais analytique qui n’est cliniquement pas significatifs (Cooper, 2010). La mesure corrective appropriée est de ré-calibrer l’appareil (Seguès, 2015).
- Précision
Les CV obtenus lors des tests de répétabilité pour les deux paramètres respectent la norme exigeant un coefficient de variation inférieur à 5% (Cissem et al., 2006). Le seuil de précision du spectrophotomètre utilisé pour le dosage de la glycémie et de la calcémie est alors acceptable.
- Justesse
Le biais obtenu pour les deux dosages indique la présence d’erreurs systématiques dans l’exécution des différents mesurages par le spectrophotomètre utilisé (Cooper, 2010). Les mesures correctives consistent à vérifier l'aspect du réactif, revoir les conditions opératoires, la nature du blanc et ré-calibrer l'appareil.
- Exactitude
De façon générale, le coefficient de récupération qui est un rapport entre la valeur du sérum contrôle obtenue sur la valeur cible attendue (fournie par le fabricant) a permis d’apprécier l’exactitude des instruments de mesure au laboratoire. Il est admis que pour qu’une méthode soit exacte, le coefficient de récupération soit compris entre 95% et 105%
(Sawadogo et al., 2005). Dans l’ensemble, les résultats obtenus présentent pour la calcémie une exactitude de mesure acceptable et pour la glycémie, la présence d’erreurs systématiques affectant l’exactitude du processus avec un coefficient de récupération inférieur à la norme.
Les actions correctives à mener consistent à vérifier la qualité des réactifs et des calibrateurs (aspect, lot de fabrication, date de péremption, stabilité…) (Sawadogo et al., 2005). Si ce n’est pas le réactif, il faut vérifier les conditions opératoires de la réaction (température …), la nature du blanc de la réaction (Seguès, 2015).
Réalisé et soutenu par Yvonne Gloria M. GNIMASSOU Page 21 L'objectif de notre étude était d’évaluer la qualité des analyses effectuées dans le laboratoire de biochimie à l’hôpital El-Fateh de Porto-Novo. Nous pouvons dire que nos résultats ont été bénéfiques pour le laboratoire car ceci leur a permis d’avoir une idée sur la fiabilité technique des résultats fournis aux patients dans le dosage de la glycémie et de la calcémie.
Il ressort de cette étude que les résultats du laboratoire ont un seuil de précision et d'exactitude acceptable pour les deux dosages en dépit de quelques erreurs systématiques décelées. L’amélioration de la qualité des résultats repose sur la mise en place d’un système d’assurance qualité au sein du laboratoire.
Le contrôle de qualité interne ou intra-Laboratoire constitue un indicateur d'évaluation permanente de la fiabilité du système analytique.1I est alors indispensable de le réaliser quotidiennement lors des séries journalières.
Nous formulons les suggestions suivantes :
- Aux biotechnologistes des laboratoires des hôpitaux et centre de santé, de réaliser quotidiennement le contrôle de qualité interne lors des séries journalières dans les laboratoires en vue de garantir la fiabilité des résultats
- Aux autorités de l’EPAC, d’améliorer les conditions d’étude théorique et pratique pour permettre aux étudiants de mieux s’adapter aux réalités du terrain.
CONCLUSION
RECOMMANDATIONS
Réalisé et soutenu par Yvonne Gloria M. GNIMASSOU Page 22 - Camara Cissem,,Djohan Y. F., Adjobi K. R., Mondea,A, Mansour A, F., Djessou P Contrôle de qualité interne dans deux laboratoires de biochimie médicale à Abidjan à propos du dosage du glucose sanguin 2006-pdf .
- Cooper Greg., 2010. Leçons de base de contrôle de qualité au laboratoire. BIO- RAD Laboratoires. http://www.qcnet.com/Portals/53/PDFs/ consulté le 12 Octobre 2016.
- Document LAB GTA 06, 2005, les contrôles de la qualité analytique en biologie médicale, section laboratoires. révision 00 – juillet 2005
- Domingo Hermione. et Godo Prisca., «Evaluation de la durée de validité du sérum contrôle interne dans le dosage de l’urée et de la créatinine à l’hôpital de zone de OUIDAH», Rapport de fin de formation ABM/EPAC/UAC, 2013
- Duchamp S., 2001. Mémoire de l’école Nationale de la santé publique. Rennes.
Consulté le 07 Octobre 2016.
- Guide Technique d’accréditation de vérification / Validation des méthodes en Biologie
- Lapointe Sergine., 2011 : Contrôle de qualité. La revue des biotechnologistes médicaux du Québéc : LABEXPERT, Vol. 1 No 4, p32
- Plan qualité pour les Laboratoires d’analyses de biologie médicales resaolab/vf-dl/05 2010
- Sawadogo M , Sakandé J, Kabré E , Caboré Rfsn, Somé I., Contrôle de qualité de neuf (9) paramètres au laboratoire de biochimie du chu yalgado ouedraogo (chu-yo) de ouagadougou pdf
- Seguès Rémi, «Application à la gestion des contrôles de qualité et à un changement de méthode de dosage », Thèse pour l’obtention du diplôme d’état de docteur en médecine, 2015.
- Système de Gestion de la Qualité au Laboratoire - Outil de formation who/hse/ihr/lyo/2009.1 Médicale, avril 2011. Révision 00, SH GTA 04 consulté le 12 Octobre 2016.