Méthodes

2.2.2.1. Elevage de Callosobruchus maculatus au laboratoire

Les souches de Callosobruchus marculatus proviennent d'élevages de masse du Laboratoire de Recherche en Biologie Appliquée (LARBA) de l’Ecole Polytechnique d’Abomey-Calavi (EPAC). Ces insectes élevés dans l’insectarium du laboratoire, ont été soumis à un régime alimentaire basé sur le niébé. L’élevage de masse s’est effectué dans des bocaux en verre à couvercle grillagé, contenant des graines de niébé préalablement stérilisées à froid à 0°C pendant deux semaines. Dans chaque bocal contenant 200g des graines, est ajouté 80 insectes de sexe indéterminé attrapés à l’aide d’un mini aspirateur. Après une semaine d’infestation, les adultes sont retirés des bocaux. Les grains infestés sont laissés en incubation jusqu’à l’émergence de nouveaux adultes. Les adultes utilisés pour les tests sont obtenus à partir de ces élevages de masse et sont âgés d’un à trois jours.

2.2.2.2-Obtention des différents tourteaux de noix de cajou

La production de tourteaux de noix de cajou a été réalisée suivant les étapes ci-après : - Le décorticage : il consiste à enlever l’amande de la coque de cajou à l’aide d’une lame à dents de scies.

- L’extraction du baume et obtention des différents tourteaux : Après le décorticage, 650 g de coques subdivisées en trois (3) lots (L1, L2 et L3 respectivement de 216, 216 et 218 g) ont été prélevées pour les phases de chauffage. Trois différents chauffages ont été effectués à l’aide d’une plaque chauffante de marque Platinium à la puissance 5 pour l’obtention des trois types de tourteaux suivant le temps de chauffage.

▪ Premier type de tourteaux : Le premier lot (L1) de 216 grammes de coques a été emballé dans un papier aluminium, puis introduit dans la casserole et chauffé sur la plaque chauffante pendant une durée de 25 min. Trois prélèvements de baume ont été effectués respectivement à 10 min, 20 min et 25 min après le début du chauffage. Les tourteaux obtenus sont composés de coques très brulées (TB).

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Réalisé par Médéssè Ménorre HOUNGUEVOU

▪ Deuxième type de tourteaux : le procédé de chauffage est le même que précédent. Ici, les 216 grammes de coques du lot L2 était chauffés pendant 15 mn. Trois prélèvements de baume ont été effectués respectivement à 5 min, 10 min et 15 min après le début du chauffage. Les tourteaux obtenus sont composés de coques moyennement brulées (MB).

▪ Troisième type de tourteaux : les 218 grammes de coques du lot L3 sont chauffés pendant 10 min suivant le même procédé que les précédents. Deux prélèvements de baume ont été effectués respectivement à 5 min et 10 min après le début du chauffage.

Les tourteaux obtenus sont composés de coques peu brulées (PB).

- Le séchage : les trois différents tourteaux ont été séchés à l’air libre pendant trois semaines.

- Le broyage : ce processus a consisté à broyer chaque type de tourteau dans un mortier afin de les réduire sous forme granuleux.

Figure 6 : Procédé d’extraction du baume de cajou (Source : Dossou et al., 2015)

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Réalisé par Médéssè Ménorre HOUNGUEVOU

A B C

Figure 7 : Tourteaux non fragilisés très brulés TB (A), moyennement brulés MB (B) et peu brulés PB (C)

2.2.2.3. Dispositif expérimental et déroulement de l’essai:

Le dispositif expérimental adopté est un Dispositif Complètement Aléatoire (DCA).

Les différents types de tourteaux de la coque de cajou (PB, MB et TB) ont été appliqués à différentes doses (0 g; 0,3 g ; 0,5 g ; et 0,7 g) sur chaque échantillon de 30 g de niébé contenu dans un bocal en verre. Ainsi, 12 traitements y compris les témoins ont été effectués. Chacun de ces traitements a été répété deux fois (Dagnelie, 2012).

Tous les bocaux ont été remués avec finesse à l’aide d’une spatule pendant 5 minutes afin de permettre une bonne homogénéisation du contenu. Chaque bocal a été ensuite infesté par 10 spécimens de Callosobruchus maculatus âgés de 1 à 3 jours.

Figure 8: Dispositif expérimental

0,5g

0,7g 0,3g

PB MB TB Témoin

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Réalisé par Médéssè Ménorre HOUNGUEVOU

- Taux de mortalité :

Pour la détermination du taux de mortalité, un tamisage a été fait afin de séparer les insectes mort des vivants. Ceci a été effectué respectivement aux 2ème, 3ème, 4ème, 5ème et 6ème jours après le traitement. A partir des données collectées, les taux de mortalité ont été calculés selon la formule suivante :

𝑇𝑎𝑢𝑥 𝑑𝑒 𝑚𝑜𝑟𝑡𝑎𝑙𝑖𝑡é =𝑛𝑜𝑚𝑏𝑟𝑒 𝑑^′𝑖𝑛𝑠𝑒𝑐𝑡𝑒𝑠 𝑚𝑜𝑟𝑡𝑠

𝑛𝑜𝑚𝑏𝑟𝑒 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑑′𝑖𝑛𝑠𝑒𝑐𝑡𝑒𝑠 × 100

Ces pourcentages ont été corrigés en utilisant la formule d'Abbott (Abbott, 1925) : 𝑀𝑐 = 𝑀𝑜 − 𝑀𝑡

100 − 𝑀𝑡× 100

Avec Mc = Mortalité corrigé ; Mo = Pourcentage de Callosobruchus maculatus morts dans les bocaux traités et Mt = Pourcentage de Callosobruchus maculatus morts dans les bocaux témoins

N.B :

- Mt< 5% : Pas nécessaire de corriger la mortalité - 5%< Mt < 20% : Corriger par la formule d’Abbott - Mt> 20% : les résultats ne sont pas valides

- Emergence des insectes :

Après avoir relevé la mortalité, tous les insectes vivants ou morts sont retirés des bocaux. On a laissé dans chaque bocal les insectes vivants pour qu’ils pondent des œufs, après 10 jours ils ont été tous retirés et les graines de niébé ont été mises en incubation jusqu’à l’émergence la première génération F1. Le nombre d’insectes émergés a été relevé dans chaque bocal. Ainsi, le pourcentage de réduction de l’émergence de cette première génération a été calculé par la formule :

𝑃𝑅 = ^{𝑁𝑐−𝑁𝑡}

𝑁𝑐 ∗ 100

PR= pourcentage de réduction de l’émergence des adultes ; Nc= nombre d’œufs ou d’insectes éclos dans les bocaux témoins et Nt= nombre d’œufs ou d’insectes ayant émergé dans les bocaux traités.

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Réalisé par Médéssè Ménorre HOUNGUEVOU

- Pourcentage de dégâts et de perte de poids :

Pour l’obtention du pourcentage de dégâts, on a eu à compter dans chaque bocal le nombre de grains endommagés et ensuite nous avons utilisé la formule suivante pour le calcul :

%𝐷 =𝑛𝑜𝑚𝑏𝑟𝑒 𝑑𝑒 𝑔𝑟𝑎𝑖𝑛𝑠 𝑒𝑛𝑑𝑜𝑚𝑎𝑔é𝑠

𝑛𝑜𝑚𝑏𝑟𝑒 𝑑𝑒 𝑔𝑟𝑎𝑖𝑛 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 × 100

Les pourcentages de perte de poids ont été calculés par la formule suivante :

%𝑃𝑒𝑟𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝑝𝑜𝑖𝑑𝑠 = ^{𝑃𝑠𝑁𝑎−𝑃𝑎𝑁𝑠}

𝑃𝑠(𝑁𝑎+𝑁𝑠) × 100 Avec Pa>1 (Adam et Schulten, 1978)

Avec Na : le nombre de grains attaqués, Ns : nombre de grains sains, Pa : le poids de grain attaqués et Ps : le poids des grains sains.

2.2.2.4. Traitement des donnés

Les différentes données collectées sont saisies dans le tableur Excel 2013. Ce tableur a été utilisé pour la transformation des données brutes. L’analyse statistique des paramètres mesurés a été faite avec le logiciel SAS (Statistical Analysis System) version 9.2 selon la procédure GLM (General Linear Models).

L’analyse de variance (ANOVA) des données relatives aux taux de mortalité des C.maculatus a été faite. Lorsque cette analyse révèle une différence significative entre les traitements, les moyennes sont séparées à l’aide du test de Student Newman–Keuls (SNK).

25 tourteaux de coque de la noix de cajou. À chaque concentration, il y a une différence hautement significative (P < 0,0001) entre le témoin et les autres traitements. Par concentration, le taux de mortalité des individus de C. maculatus varie significativement d’un traitement à un autre. Par concentration le maximum de mortalité est obtenu au 2^ème jour.

Après le 2^ème jour les taux de mortalité au niveau de chaque traitement sont plus élevés par rapport aux autres temps d’exposition mise à part le témoin qui n’a aucune mortalité. Du 4^ème au 6^ème, nous n’avons pratiquement pas observé de variation entre les traitements et le témoin, mais au 6^ème il a une variation de 30% et 0% pour les traitements MB (0,5g) et PB (0,5g) qui sont différents des autres traitements.

Toutefois, on remarque qu’après les cinq temps d’exposition (2ème, 3ème, 4ème, 5^ème, 6^ème jour) les traitements PB (0,5g), MB (0,3g), TB (0,5g) ont atteint 100% de mortalité. Les traitements restants ont des taux de mortalité se trouvant entre 95 et 75%. Ces taux de mortalité sont significativement supérieurs à celui du témoin qui est de 13.334% (P < 0.0001 ; Tableau 1).

Tableau 1 : Mortalité (moyenne en %) en pourcentage de C. maculatus en stockage sous l’effet du différent type de tourteaux de coque de noix de cajou

Temps