Etude de la qualité de l’eau
2.2.2.2.1. Méthodes d’Analyse des échantillons d’eau
L’analyse des échantillons s’est déroulée en deux étapes à savoir l’analyse physico-chimique et l’analyse bactériologique .Elle ont été faite suivant les modes opératoires habituellement utilisés par le laboratoire de la Direction Générale de l’Eau.
2.2.2.2.1.1. Les analyses physico-chimiques
Mesure du pH, de la Température, et de la Conductivité
Elles se font à l’aide d’un multi-paramètre de marque WTW 3420. Une fois allumée les électrodes du multi paramètres sont bien rincées avec l’eau à analyser avant d’être plongées dans l’échantillon. Les lectures sont faites après stabilisation de l’appareil
.
Dosage de la couleur
La couleur est l’un des caractères organoleptiques. La directive de qualité de l’OMS recommande pour l’eau de boisson une valeur de 15 Unités Couleur. Pour la mesure, on prélève10 ml de l’échantillon à analyser et 10 ml d’eau distillée comme témoin dans des cuvettes
Réalisé par Déo-Gratias C. APOVO Page 29 respectives. La lecture est faite à l’aide d’un spectrophotomètre HACH DR/2400, calibré sur le numéro 125 selon la programmation de l’appareil et à une longueur d’onde de 465 nm.
Dosage du calcium ca2+
Le dosage se fait selon le mode opératoire suivant : on prélève 50 ml de l’échantillon à analyser, on y ajoute 1 ml de KOH (hydroxyde de potassium) puis un sachet de réactif (Calver).
Ensuite on dose avec l’EDTA (Acide Diamine Tétra Acétique) 0,02 N jusqu’au virage de la solution du rose au bleu. La détermination de la concentration de calcium se fait suivant la formule ci-dessous :
[Ca2+] mg/l = VEDTA x 0,4 x 20,04.
Dosage du Magnésium Mg2+
On prélève 50 ml de l’échantillon à analyser, on y ajoute 5 gouttes d’eau oxygénée plus 5 ml d’acide chlorhydrique (HCL). On porte à ébullition pendant 15 mn puis on laisse refroidir. On ajoute ensuite 5 ml de solution tampon et 5 gouttes d’indicateur NET. On dose avec l’EDTA (Acide Ethylène Diamine Tétra-Acétique) jusqu’au virage c'est-à-dire jusqu'à ce que la solution prenne une couleur bleu. La dureté magnésienne est déterminée par la différence entre la dureté totale et la dureté calcique:
[Mg2+] mg/l = [VEDTA (Mg2+) –VEDTA (Ca2+)] x 0, 4 x12, 16 note le volume d’acide utilisé. Le taux de bicarbonate contenu dans les échantillons est calculé selon la formule ci-dessous :
[HCO3-] = V (H2SO4) x 61 avec M (HCO3-) = 61 g/mol.
Les ions chlorures Cl
-Les chlorures sont dosés par la méthode volumétrique : on prélève dans un erlenmeyer, 100 ml de l’échantillon à analyser, on y ajoute deux (02) gouttes de bichromate de potassium 10%, ainsi la couleur devient jaune. Puis on agite en utilisant un agitateur magnétique, ensuite on titre avec la solution de nitrate d’argent 0,1 N jusqu’à apparition d’une couleur rouge brique marquant la fin du dosage des chlorures. On note le volume de nitrate d’argent utilisé.
[Cl-] en mg/l= V x 35, 5
Réalisé par Déo-Gratias C. APOVO Page 30 Ver puis on agite pendant 1 mn, le second flacon sert de témoin. Après 5 minutes de réaction, on fait la lecture du témoin puis celle de l’échantillon.
Dosage des nitrites NO2-
Pour les nitrites le procédé est le même que le précédent mais à la différence que la lecture se fait sur le numéro 317 selon la programmation de l’appareil et à une longueur d’onde de 507 nm, la gélule utilisée est le Nitriver et le temps de réaction est 20 minutes.
Dosage de l’ammonium (NH4)
La lecture est faite sur le numéro 380 selon la programmation de l’appareil et à une longueur d’onde de 425 nm. On prélève 25 ml de l’échantillon d’eau à analyser et 25 ml d’eau distillée dans deux flacons différents. On y ajoute à chaque flacon un sachet du réactif de Nessler et 1 ml du réactif rochelle. Ensuite on laisse reposer pendant 1 mn. On fait d’abord la lecture du zéro avec le tube contenant de l’eau distillée puis la lecture de l’échantillon d’eau.
Dosage du fer total (Fe2+/Fe3+)
Sa lecture est faite à l’aide d’un spectrophotomètre calibré sur le numéro 265 à une longueur d’onde de 510 nm. Son dosage consiste à prélever 10 ml de l’échantillon à analyser dans deux flacons différents, on y ajouter un sachet du réactif (ferrover) et on laisse réagir pendant 3 minutes, ensuite on fait le zéro avec l’échantillon témoin et enfin on lit la concentration de fer contenu dans l’échantillon.
Dosage des sulfates SO 2
-La lecture se fait avec un spectrophotomètre calibré sur le numéro 680 à une longueur d’onde de 450 nm. On prélève 25 ml de l’échantillon d’eau à analyser. On y ajoute ensuite un sachet du réactif (Sulfaver). On homogénéise et on laisse reposer pendant 5 minutes. On lit au spectrophotomètre la concentration de sulfate contenu dans l’échantillon.
Dosage du Phosphate : PO42
-Les phosphates sont dosés à 880 nm au spectrophotomètre sur le numéro 490. On prélève :
Réalisé par Déo-Gratias C. APOVO Page 31 25 ml de l’échantillon d’eau à analyser, on y ajoute un sachet du réactif (phosvert), puis on homogénéise et on laisse reposer pendant 2 minutes, puis on lit au spectrophotomètre la concentration de phosphate contenu dans l’eau.
2.2.2.2.1.2.
Analyses bactériologiques
Dans cette étude trois types de germes ont été dénombrés. Il s’agit des coliformes totaux, de l’Escherichia coli et des streptocoques fécaux.
La réalisation est faite par les méthodes de filtration, d’ensemencement direct, et de dénombrement en utilisant les milieux de culture appropriés. Deux milieux de culture sont utilisés pour la recherche des germes indicateurs de pollution. Ce sont des milieux MAC Conkey pour les coliformes. Pour leur détermination, trois étapes ont été suivies, il s’agit de la préparation du milieu de culture, du coulage suivi de l’ensemencement, et du dénombrement.
Préparation du milieu de culture
Dans le cas des coliformes fécaux et totaux
On pèse 56.2 g de CHAPMAN TTC AGAR à l’aide de la balance électronique ; on verse le milieu de culture dans 1 L d’eau distillée contenue dans un erlenmeyer ; on porte la solution obtenue à l’ébullition sous agitation constante à l’aide d’un agitateur magnétique, jusqu'à dissolution complète sur une plaque chauffante. Après ébullition complète de la solution, on fait une répartition de 100 ml par flacon et on stérilise à l’autoclave à 121°C pendant 15 mn puis on laisse refroidir à 45°-50°C. On ajoute au moment de l’emploi, 2 à 3 ml d’une solution stérile de TTC à 1% dans les 100 ml de base fondue.
Dans le cas des streptocoques fécaux
On pèse 41,4 g de SALNETZ AGAR BASE à l’aide d’une balance électronique ; On verse le milieu pesé dans 1 L d’eau distillée contenue dans un erlenmeyer. On attend 5 mn puis on mélange la solution jusqu’à obtention d’une suspension homogène. On porte à ébullition jusqu’à dissolution complète. On ajoute 10 ml/L d’une solution filtrée stérile de TTC à 1% dans la base fondue à 50°C environ. On conserve soigneusement le flacon fermé dans un endroit frais et sec.
Réalisé par Déo-Gratias C. APOVO Page 32 Photo 2 : Boîtes de pétri 24h après l’ensemencement
Coulage et ensemencement
On coule auprès d’une flamme (pour mesure aseptique) la solution dans les boites de pétri préalablement stérilisées. On laisse refroidir pendant 24h dans le réfrigérateur. Ensuite les échantillons à ensemencer sont filtrés à travers une membrane qu’on pose dans les boîtes de pétri étiquetées selon que ce soit les boîtes de témoin, des coliformes fécaux, totaux ou des streptocoques fécaux. On crée la condition anaérobique en retournant les boîtes de pétrie. On ensemence les milieux coulés avec la membrane filtrante.
Dénombrement sur membrane filtrante
La numérotation des colonies se fait à la loupe binoculaire après incubation des boîtes de pétri pendant 24 à 48 heures. La lecture est de façon manuelle. Les coliformes fécaux apparaissent en bleu, les coliformes totaux en violet et les streptocoques fécaux apparaissent en couleur rouge à marron. L’expression des résultats se fait sous formes d’un nombre d’unités formant colonies (UFC). (RODIER et al, 2009).
Réalisé par Déo-Gratias C. APOVO Page 33 2.3 RESULTATS
2.3.1 Résultats des enquêtes