Les milieux d’identification:

2.4.2.1 Les milieux liquides (les bouillons = Broth)

▪ Bouillon au Sélénite F (S.F.B. S/C) : ¾ Elle se présente dans un carton de Sélénite Acide Sodium et provenant de l’ ¾ C’est un milieu d’enrichissement a salmonelles dans les selles, l’eau ou les p ¾ Sa formule es - Tryptone ….………...…………5 - Peptone ……….…………...………..5 - Phosphate disodique…….……...…...4 - Mannitol………...…..4 à pH : 7 +/- 0.2 N

¾ Sa préparation se fait selon le mode d’emploi suivant :

t nuisible.

nt 250 g de milieu de culture déshydraté de milieu Clark r d’ALGÉRIE.

s germes par la réaction au Rouge de Méthyle et la e l’acétylméthyl-carbinol.

ptone ……….………7

é et tenir les flacons correctement rmés.

selon le mode d’emploi suivant :

n.

0 g de milieu de culture déshydraté de milieu

Urée-IE.

s entérobactéries par la présence d’une uréase, la t la présence d’une tryptophane-désaminase.

et se compose de :

bipotassique……..…………..1

………...20

- Répartir dans des tubes en verre à raison de 5 ou 10 ml par tube. Stériliser à la vapeur pendant 30 mn. Ne pas autoclaver, car un excès de chauffage es

- 100 ml g de solution permettent de préparer 10 à 20 tubes.

▪ Milieu Clark & Lubs :

¾ Il se présente dans un flacon contena & Lubs et provenant de l’Institut Pasteu ¾ C’est un milieu d’identification de recherche d

¾ Sa formule est donnée en g/l d’eau distillée et se compose de : - Polypé

- Glucose……….. …………..5 - Phosphate de potassium…………...5 à pH : 6.9

N.B. : A conserver dans un endroit frais en absence d’humidit fe

¾ Sa préparation se fait

- Dissoudre 17 g dans 1 litre d’eau distillée. Chauffer doucement jusqu’à dissolution totale puis répartir. Stériliser à l’Autoclave à 120°C pendant 15 m

- 250 g de poudre permettent de préparer 14.7 litres de milieu.

▪ Milieu Urée-Indole :

¾ Il se présente dans un flacon contenant 25 Indole et provenant de l’Institut Pasteur d’ALGÉR

¾ C’est un milieu pour l’identification de production d’indole à partir du tryptophane e ¾ Sa formule est donnée en g/l d’eau distillée - L-Tryptophane... ……….3 - Phosphate monopotassique………..1 - Phosphate

- Chlorure de sodium………..5 - Urée…

Matériels et méthodes

- Rouge de phénol……..………..0.025 - Alcool à 95°………10 ml à pH : 6.7

N.B. : A conserver dans un endroit frais en absence d’humidité et tenir les flacons correctement rmés.

ivant :

distillée. Chauffer doucement jusqu’à dissolution totale puis

es (les géloses = Agar)

50 g de milieu de culture déshydraté de milieu de tut Pasteur d’ALGÉRIE.

es entérobactéries, basé sur l’utilisation du citrate,

et se compose de :

sique…………...1

re de sodium………..5

é et tenir les flacons correctement fermés.

¾ Sa préparation se fait selon le mode d’emploi suivant :

lée. Chauffer doucement jusqu’à dissolution totale puis fe

¾ Sa préparation se fait selon le mode d’emploi su - Dissoudre 30 g dans 1 litre d’eau

répartir. Stériliser à l’Autoclave à 121°C pendant 15 mn. - 250 g de poudre permettent de préparer 8.3 litres de milieu.

2.4.2.2 Les milieux solid

▪ Gélose Citrate de SIMMONS :

¾ Elle se présente dans un flacon contenant 2 Citrate de SIMMONS et provenant de l’Insti ¾ C’est un milieu pour la différenciation d seule source de carbone.

¾ Sa formule est donnée en g/l d’eau distillée - Sulfate de magnésium ……….0.2 - Dihydrogénophosphate d’ammonium…..1 - Phosphate dipotas - Citrate de sodium……….2 - Chloru - Bleu de Bromothymol………..0.08 - Agar………15 à pH : 6.8 +/- 0.2

N.B. : A conserver dans un endroit frais en absence d’humidit

- Dissoudre 24.2 g dans 1 litre d’eau distil

répartir. Stériliser à l’Autoclave à 121°C pendant 15 mn. - 250 g de poudre permettent de préparer 10.3 litres de milieu.

▪ Gélose de T.S.I. (Triple Sugar Iron) :

¾ Elle se présente dans un flacon contenant 250 g de milieu de culture déshydraté de milieu de ant de l’Institut Pasteur d’ALGÉRIE.

s entérobactéries par la fermentation de trois sucres ion d’H2S et de gaz.

e et se compose de :

oniacal……….0.3

lfate de sodium………...0.3

té et tenir les flacons correctement rmés.

ode d’emploi suivant :

250 g de milieu de culture déshydraté de milieu de ’ALGÉRIE.

nciation des entérobactéries. se compose de :

………...15 - Mannitol………10 Citrate de T.S.I. (Triple Sugar Iron) et proven ¾ C’est un milieu pour la différenciation de (Glucose, Lactose et Saccharose), la product ¾ Sa formule est donnée en g/l d’eau distillé - Extrait de viande ……….3 - Extrait de levure………...3 - Péptone…………...20 - Glucose………1 - Lactose………...10 - Saccharose………..10 - Citrate de fer amm

- Chlorure de sodium………..5 - Thiosu

- Rouge de phénol……..………..0.05 - Agar……….16 à pH : 7.4 +/- 0.1

N.B. : A conserver dans un endroit frais en absence d’humidi fe

¾ Sa préparation se fait selon le m

- Dissoudre 68.6 g dans 1 litre d’eau distillée. Chauffer doucement jusqu’à dissolution totale puis répartir. Stériliser à l’Autoclave à 121°C pendant 15 mn.

- 250 g de poudre permettent de préparer 3.6 litres de milieu.

▪ Gélose de Mannitol-Mobilité

¾ Elle se présente dans un flacon contenant Mannitol et provenant de l’Institut Pasteur d ¾ C’est un des milieux utilisés pour la différe ¾ Sa formule est donnée en g/l d’eau distillée et - Extrait de viande ……….3 - Péptone…

Matériels et méthodes

- Nitrate de potassium………...1 - Rouge de phénol……..………..0.05

midité et tenir les flacons correctement

¾ Sa préparation se fait selon le mode d’emploi suivant :

auffer doucement jusqu’à dissolution totale puis répartir

PI 20 E est un système d’identification des Enterobacteriaceae et autres bacilles à Gram n

s résultats obtenus, à l’aide du tableau de lecture et du tableau d’identification de la NOTICE TECHNIQUE fournit avec la galerie, ou à l’aide du

nit l’identification d’un grand nombre de profils numériques interprétation des résultats. (Anon

.4.3 Le milieu de conservation:

ctériennes (BIO-RAD) :

de conservation, conditionnée dans des tubes en verre de 2.6 ml

n 225 ml de gélose nutritif et - Agar………...4

à pH : 7.8

N.B. : A conserver dans un endroit frais en absence d’hu fermés.

- Dissoudre 33 g dans 1 litre d’eau distillée. Ch

. Stériliser à l’Autoclave à 121°C pendant 15 mn. - 250 g de poudre permettent de préparer 7.5 litres de milieu.

2.4.2.3 La galerie API 20 E (BIOMERIEUX) :

A

égatif fastidieux. Ce système se présente sous forme de coffret contenant plusieurs tests. Chaque test comprend: une galerie API 20 E comportant 20 microtubes (correspondant à 20 tests biochimiques miniaturisés) dans une boite d’incubation, munit d’une fiche de résultats et d’une notice.

L’identification d’une bactérie avec le système API 20 E consiste à réaliser 20 tests avec la galerie API 20 E, puis à interpréter le

CATALOGUE ANALYTIQUE qui four

obtenus sur API 20 E, ce qui confère une grande fiabilité à l’ yme 1, 1994 ; Anonyme 2, 2002)