Influence du microenvironnement

Bien que les MSC exercent clairement des effets immunosuppresseurs et trophiques comme vu précédemment, il existe cependant de nombreuses études qui rapportent des résultats contradictoires en ce qui concerne leur potentiel (289,290). Les MSC sont donc considérées comme des cellules présentant une certaine plasticité dans leurs fonctions immunomodulatrices. Cela peut être expliqué par la variété considérable des techniques usuelles d isolement et d expansion de ces cellules. En effet, l espèce dont elles sont issues (humaine ou murine), l origine de l organe ou tissu (tissu adipeux, moelle osseuse, cordon ombilical, etc.), le nombre utilisé, les conditions de culture sont tous des éléments qui peuvent affecter le potentiel thérapeutique des MSC. Dans cette partie, j ai pris la part de discuter les facteurs qui peuvent influencer les fonctions des MSC tels que les conditions de culture, leur activation par les ligands de TLR et surtout le rôle du microenvironnement inflammatoire.

2.5.2.1. Conditions de culture

Les conditions de culture des MSC peuvent affecter leurs propriétés. La teneur en oxygène (O2) dans les conditions normoxiques est de 21% ce qui est bien entendu plus élevé que les

concentrations retrouvées au sein des organes du corps (1-10%) (291). Pour cela, la culture des

MSC en conditions hypoxiques avec un pourcentage d O2 allant de 1 à 10% améliorent

une amélioration de l activité paracrine des MSC par une production plus élevée d IL-6 et des facteurs de croissance VEGF, HGF et bFGF (292,294). L effet de l environnement hypoxique est principalement dû à l induction du facteur de transcription HIF-1 (hypoxia-inducible factor 1) qui peut à son tour interférer dans différentes voies de signalisation et induire l expression des gènes cibles impliqués dans l angiogenèse, la prolifération et le métabolisme des MSC (295).

La culture en 3D (tridimensionnelle) est une autre stratégie pour améliorer l effet des MSC dans le but de mimer le mieux que possible les conditions physiologiques du corps (211). De plus, une culture des MSC en sphéroïdes crée un environnement hypoxique où le noyau interne est dépourvu d O2(296). Cette approche améliore la survie et la prolifération des MSC ainsi que leur

activité immunomodulatrice, pro-angiogénique et anti-fibrotique et ce, par l induction de l expression des facteurs immunomodulateurs TSG6, PGE2 et IL-6 mais aussi des facteurs impliqués dans leurs effets trophiques STC-1, CXCR4 (chimiokine impliquée dans l adhésion des MSC aux cellules endothéliales), angiogénine et VEGF, entre autres (211,297 299).

2.5.2.2. Rôles des ligands des récepteurs Toll-like

Les MSC expriment au niveau protéique différents TLR, particulièrement les TLR2, TLR3, TLR4, TLR7 et TLR9 (300). L engagement de ces TLR par leurs ligands respectifs entraine des réponses biologiques et immunomodulatrices différentes par les MSC. En effet, de façon similaire au paradigme des lymphocytes Th1/Th2 et des macrophages M1/M2, il a été montré que les MSC peuvent adopter des fonctions pro-inflammatoires ou anti-inflammatoires de type MSC1/MSC2 selon le TLR engagé (Figure 25). Waterman et al. ont montré que la liaison du LPS avec le TLR4 fait différencier les MSC vers un phénotype pro-inflammatoire avec une expression élevée d IL-6 et IL-8 et une induction de la prolifération de LT mis en co-culture avec les MSC. D une autre part, la liaison du poly(I:C) (acide polyinosinique-polycytidylique) avec le TLR3 polarise les MSC vers un phénotype anti-inflammatoire avec une expression élevée d IL-4, IDO et PGE2 et conserve leur effet immunosuppresseur sur les LT (301). Cependant, contrairement à ces résultats, une étude par Liotta et al. a montré une inhibition de l effet immunosuppresseur des MSC indépendamment du TLR3 ou 4 engagé, par l inhibition de la voie de signalisation Notch induite par Jagged-1 (302).

Ces résultats contradictoires peuvent être expliqués par des différences dans les conditions de culture entre les études, les concentrations de ligands utilisées et la durée du traitement (303). Les TLR sont donc des régulateurs importants des fonctions des MSC et mériteraient des études plus approfondies et standardisées afin de mieux comprendre l influence de leurs ligands sur le potentiel de ces cellules.

Figure 25. Mécanisme proposé pour l interaction des MSC avec les TLR3 et TLR4. L engagement du TLR4 polarise les MSC vers un phénotype pro-inflammatoire qui inhibe leur effet immunosuppressif sur les LT tandis que l engagement du TLR3 induit un phénotype anti-inflammatoire des MSC (301).

2.5.2.3. Rôle du microenvironnement inflammatoire

Les propriétés immunomodulatrices des MSC sont contrôlées par la complexité et l intensité du stimulus inflammatoire (289). Nous avons mis en évidence, dans le tableau 5 de ce manuscrit, que les MSC expriment à leur surface les récepteurs aux cytokines inflammatoires IFN- , TNF, IL-1 et IL-6 ce qui les rendent capables de percevoir et réagir différemment aux stimulus inflammatoires (197). En effet, Ren et al. ont montré que les MSC ont des effets bénéfiques anti- inflammatoires considérables sur le modèle murin de la maladie du greffon contre l hôte quand ces dernières sont injectées au cours du pic inflammatoire. Cependant, cet effet est perdu quand

un anticorps anti-IFN- est injecté après l injection des MSC WT ou encore, quand des MSC IFN R1-/-_{sont utilisées (234).}

Conformément à ces résultats, il a plus tard été montré qu en présence de hautes concentrations d IFN- et de TNF, ces deux cytokines agissent en synergie et induisent l expression des chimiokines CXCL9, CXCL10, RANTES, CCL3 qui recrutent à leur tour les cellules immunitaires (spécifiquement les lymphocytes) vers les MSC. Ils induisent également l expression des molécules ICAM-1 et VCAM-1 qui facilitent l adhésion des cellules et finalement, ils stimulent la production de grandes quantités d IDO, iNOS, PGE2 impliqués directement dans l effet immunosuppresseur et immunomodulateur des MSC. Ces conditions ont été comparables in vivo à un scénario d inflammation aigüe où l environnement pro-inflammatoire potentialise les MSC à inhiber les fonctions effectrices inflammatoires des cellules immunitaires et jouer un rôle dans la réparation tissulaire. En revanche, dans un scénario d inflammation chronique ou contrôlée, où les concentrations d IFN- et TNF sont suboptimales, ces derniers induisent l expression des chimiokines mais sont insuffisants pour induire la production des médiateurs solubles IDO et NO en grandes quantités, ce qui aurait un contre-effet : les cellules seront recrutées à proximité des MSC sans être inhibées et dans ce cas, le processus inflammatoire est aggravé (234,235,304) (Figure 26).

De plus, il est important de noter que l importance du « licensing » ou l activation des MSC vient du fait que la signalisation de l IFN- par la voie JAK-STAT1 induit l expression de l IDO, comme montré par Kim et al. (305). L activation de la voie NF- B est à son tour importante pour l expression d iNOS, ICAM-1 et VCAM-1 (306). Une étude par Dorronsoro et al. a en effet montré une inhibition de la prolifération des LT par l activation de NF- B induite par le TNF (236).

Figure 26. La plasticité du potentiel immunomodulateur des MSC. (A) En présence de concentrations élevées d IFN- et TNF, les MSC sont induites à secréter des chimiokines et des médiateurs solubles IDO, NO qui inhibent les LT. (B) Des basses concentrations d IFN- et TNF stimulent les MSC à secréter des chimiokines sans produire suffisamment d IDO et NO pour inhiber les LT ce qui aggrave le processus inflammatoire (304).

Chapitre 3. Les cellules souches mésenchymateuses en