Implication du FT dans la Sao

La Sao étant décrite comme une pathologie « atherosclerosis-like », l’hypothèse de l’implication du FT dans sa physiopathologie a été naturellement posée. Otto et coll. ont montré dès 1994 que les patients atteint de Sao présentaient un risque accru d’évènements cardiovasculaires thromboemboliques qui n’étaient apparemment pas associés à une fibrillation atriale ou à une athérosclérose concomitante (Otto, Kuusisto et al. 1994; Otto, Lind et al. 1999). La présence de FT a été rapportée pour la première fois en 2009 dans un modèle de sclérose de la valve aortique chez le lapin (Marechaux, Corseaux et al. 2009). L’antigène FT a été identifié au niveau des lésions valvulaires présentes au niveau de la face aortique avec une expression 3 fois supérieure à celle des valves contrôles. L’expression du FT était associée à une infiltration macrophagique massive. Depuis, la présence de FT a été rapportée au sein de valves aortiques de patients souffrant de Sao modérée à sévère et qui ne présentaient pas, simultanément, d’athérosclérose ou de pathologie coronaire (Natorska, Marek et al. 2009). Dans cette étude, il a été montré que la sévérité de la Sao était positivement associée avec l’expression intravalvulaire du FT. Dans ces travaux chez l’homme ou l’animal, le FT a aussi été mis en évidence par immunomarquage dans des zones dépourvues de macrophages suggérant que les VICs pourraient également produire du FT (Marechaux, Corseaux et al. 2009; Natorska, Marek et al. 2009).

Le FT serait plus particulièrement impliqué dans le processus de calcification puisque nous avons montré que les zones de calcifications présentes au sein de valves sténosées présentaient une expression importante de FT colocalisé avec l’ostéopontine, protéine impliquée dans la différenciation ostéogénique, la thrombine et la phosphatase alcaline (Breyne, Juthier et al. 2010). La thrombine générée par le FT est capable de cliver le

INTRODUCTION GENERALE 70 fragment N-terminal de l’ostéopontine qui possède des propriétés pro-calcifiantes et pro-inflammatoires et favoriserait donc la différenciation ostéogénique (Rajamannan, Subramaniam et al. 2003). De plus, au sein de valves sténosées humaines, le FT était colocalisé avec les dépôts de calcium présents dans les zones de calcification (Breyne, Juthier et al. 2010). Le FT pourrait également être impliqué dans le processus d’angiogenèse puisqu’il a été montré que la formation de nouveaux vaisseaux sanguins dans la valve sténosée était associée à l’expression de VEGF qui est significativement plus exprimé au niveau des zones de calcifications (Breyne, Juthier et al. 2010).

Enfin, la présence de fibrine a été observée au sein de valves aortiques sténosées que ce soit au niveau de la face aortique ou dans la valve (Natorska, Marek et al. 2011). Il existe, par ailleurs, une corrélation positive entre la présence de fibrine au sein de la valve sténosée et le gradient transvalvulaire de patients atteint de Sao non associée à une pathologie coronaire. De nombreuses études montrent que la régulation de la synthèse et de la dégradation de la fibrine au sein de la valve sténosée est impliquée dans la progression de la Sao. En effet, il a été montré que 69 % des cellules valvulaires issues de valves de personnes atteintes de Sao produisent un taux élevé de PAI1, d’u-PA et de t-PA (Kochtebane, Alzahrani et al. 2014). De plus, il a été montré que les patients avec une hypofibrinolyse présentaient un épaississement valvulaire plus important car ces valves contiennent une couche de fibrine plus épaisse et davantage de dépôts de calcium (Wypasek, Natorska et al. 2013) Par ailleurs, il existe une corrélation positive entre l’hypofibrinolyse et la surface valvulaire fonctionnelle.

OBJECTIFS 71

OBJECTIFS

Composante cellulaire prédominante des valves aortiques, les VICs jouent un rôle crucial dans le développement de la Sao. La culture primaire de ces cellules est, par conséquent, fréquemment utilisée afin d’élucider les mécanismes précis de leur implication dans la progression de cette pathologie. Ces cellules présentent une importante plasticité avec 4 sous-phénotypes décrits : pVICs résidents et hématopoïétiques, qVICs, aVICs et obVICs. En dépit de la connaissance de cette plasticité, la culture primaire de ces cellules a, jusqu’à présent, été caractérisé uniquement sur les caractéristiques myofibroblastiques des qVICs et aVICs. Identifiées en post-digestion, le devenir des pVICs et des obVICs en culture était inconnue.

Principal initiateur de la cascade de coagulation, le FT a été mis en évidence au sein de valves sténosées humaines conjointement avec les macrophages mais également avec les VICs. Connu pour être impliqué dans l’athéro-thrombogénicité des plaques d’athérosclérose, le FT est également connu pour sa capacité à induire différentes voies de signalisation impliquées dans différents processus également rencontrés lors du développement de la Sao : la fibrose et la formation de calcifications.

Les objectifs de notre travail étaient donc :

− d’une part, de caractériser les VICs en culture primaire sur les supports les plus fréquemment utilisés (plastique et collagène) en réalisant une étude longitudinale depuis les valves aortiques humaines contrôles et fibrocalcifiées, en post-digestion jusqu’à la culture.

− d’autre part, d’étudier l’expression constitutive du FT par les VICs issues de valves aortiques humaines contrôles et fibrocalcifiées, d’analyser sa possible induction par une cytokine inflammatoire fortement présente au sein des valves pathologiques (IL1β) et d’identifier si, en présence de son ligand naturel (FVII), le FT est impliqué dans les processus de fibrose et de calcification.

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ARTICLES

Les résultats obtenus au cours de ma thèse ont permis la réalisation de 2 manuscrits, actuellement ou prochainement, soumis à des journaux avec révision par les pairs. Le premier manuscrit intitulé « From human aortic valves to valvular interstitial cells: in vitro behavior and cell subpopulation discrimination. » est actuellement en révision dans le journal PLOS ONE et est présenté ici dans sa version soumise à l’éditeur. Le second manuscrit est une short communication destinée au journal Atherosclerosis et est présenté dans sa version prochainement soumise. Dans cette thèse, des résultats préliminaires complète cette communication et devront être confirmés avant soumission.

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I.