1.9.1 Formation
Les hydroperoxydes formés chimiquement ou enzymatiquement lors de la peroxydation lipidique in vivo sont normalement réduits en acides gras monohydroxylés par les glutathion peroxydases. En situation de stress oxydant, l’activité de ces enzymes est diminuée. Par conséquent, la durée de vie des hydroperoxydes augmente. Ces molécules instables se dégradent et donnent naissance à divers composés dont les aldéhydes. Ils peuvent franchir les membranes et gagner d’autres compartiments en agissant comme des « seconds messagers toxiques » de la peroxydation lipidique (Esterbauer et al., 1991; Esterbauer et
Zollner, 1989; Uchida et al., 1999).
La peroxydation lipidique des AGPI de la série n-3 aboutissent à la formation du 4-HHE, tandis que celle des AGPI de la série n-6 aboutissent à la formation du 4-HNE (Figure
26).
Figure 26: Les 4-hydroxyalkénals sont des produits secondaires de l’oxydation des acides gras polyinsaturés n-6 et n-3 très réactifs.
90 1.9.2 Structure
Les 4-hydroxyalkénals ont en commun une chaîne carbonée de longueur variable comportant une double liaison entre les carbones 2 et 3. Ils sont caractérisés par la présence d’un groupement aldéhydique porté sur le carbone 1 et par un groupement hydroxyle présent sur le carbone 4.
Figure 27 : Structure chimique générale des 4-hydroxyalkénals
Ils diffèrent entre eux uniquement par la longueur de leur chaîne carbonée. Le 4-HHE possède une chaîne carbonée comportant 6 carbones tandis que celle du 4-HNE en possède 9 (Figure
27). Cette structure particulière confère aux 4-hydroxyalkénals une grande réactivité chimique
envers de nombreuses molécules biologiques (ADN, protéines, glutathion, phospholipides).
1.9.3 Réactivité
Les 4-hydroxyalkénals sont des molécules très réactives qui sont capables de former des adduits covalents sur les molécules biologiques, exerçant de cette façon leurs effets biologiques et toxiques (Petersen et Doorn, 2004; Sayre et al., 2006).
Interaction avec les groupements thiols : Le glutathion réduit (GSH) est une cible majeure
des 4-hydroxyalkénals du fait de son groupement thiol (Esterbauer et al., 1991; Long et al.,
2010). En réagissant avec le GSH, le 4-HNE et le 4-HHE forment un adduit de Michael par
91 28A). Cette réaction d’addition contribue ainsi à la détoxification du 4-HNE et du 4-HHE
lorsque les concentrations en GSH sont suffisamment importantes (Bacot et al., 2007;
Guichardant et al., 1998; Long et al., 2010).
D’après Poli et al. 2008
Figure 28 : Mécanisme d’adduction par les 4-hydroxyalkénals. A. Addition de Michael entre la double liaison 2-3 du HNE et le groupement amine ou thiol d’une molécule. B. Formation d’une base de Schiff entre la fonction carbonyle du HNE et le groupement amine d’une molécule.
Interactions avec les groupements amines primaires : Les aldéhydes réagissent avec les
groupements amines présents dans les protéines, les acides nucléiques et les phospholipides aminés. La réaction entre un groupement amine et le groupement carbonyle de l’aldéhyde aboutit à la formation de bases de Schiff (Figure 28B) (Schaur, 2003).
1.9.4 Métabolisme
Il a été montré que les composés peroxydés apportés par le bol alimentaire peuvent s’accumuler dans la lumière intestinale et contribuer au développement des désordres intestinaux chroniques (Kanazawa et Ashida, 1998b). En outre, ces composés toxiques peuvent traverser la barrière intestinale et être acheminés par les chylomicrons dans la circulation sanguine (Wilson et al., 2002). De même, chez le rat, la consommation d’aldéhydes issus de l’oxydation de l’acide linoléique aboutit à une lente absorption intestinale et à l’accumulation hépatique de ces différents produits d’oxydation dont le 4-HNE
92 (Kanazawa et Ashida, 1998a). Les 4-hydroxyalkénals sont métabolisés au niveau du foie en différents métabolites. Chez l’homme, ils sont convertis en acides carboxyliques sécrétés dans les urines. Les principales enzymes impliquées dans le métabolisme du 4-HNE sont les glutathion (GSH) transférases, les aldéhydes déshydrogénases et les alcools déshydrogénases. Dans les hépatocytes et la mitochondrie, les métabolites principaux du 4-HNE seraient le GSH conjugué, l’acide carboxylique correspondant, l’acide 4-hydroxy-2-nonénoïque et l’alcool correspondant, le 1,4-dihydroxynonène (DHN). Le 4-HHE est également métabolisé par la GSH transférase en un acide moins réactif, l’acide 4-hydroxy-héxénoique (4-HHA) ou par l’aldéhyde déshydrogénase. Ces acides urinaires peuvent être mesurés par GC-MS sous forme de dérivés pentafuorobenzyl et heptafluorobenzyl esters (Guichardant et al., 2006).
1.9.5 Dosages plasmatiques et cellulaires
En situation normale, la concentration plasmatique du 4-HNE varie entre 0,2nM et 10µM (Tableau 6). Ces différences de concentration d’un auteur à l’autre s’expliquent probablement par la méthode de dosage utilisée (GCMS, LCMS…) et par la difficulté à mesurer ces composés très réactifs. Cependant, en situations pathologiques (Alzheimer, dépression…), cette concentration est multipliée par 2 ou 3 (Tableau 6). Concernant le niveau plasmatique du 4-HHE, il est 2 à 3 fois plus élevé que celui du 4-HNE (Guichardant et al.,
2006).
Tableau 6: Concentration plasmatique du 4-HNE libre
Le 4-HNE peut s’accumuler également dans les membranes cellulaires à des concentrations comprises entre 10 et 20uM en réponse à des dommages oxydatifs (Esterbauer et al., 1991;
Esterbauer et Zollner, 1989; Uchida et al., 1999). Par exemple, les LDL oxydées peuvent
93 0,19mM (Esterbauer et al., 1987). A l’heure actuelle, les concentrations physiopathologiques du 4-HHE ne sont pas connues.
1.9.6 Cytotoxicité
Les 4-hydroxyalkénals, molécules extrêmement réactives, ont une durée de vie plus longue que les radicaux libres, ce qui les rend beaucoup plus toxiques. Cette toxicité réside surtout par leur capacité à former des adduits protéiques avec d’autres molécules (cf. chapitre 1.9.3 Réactivité). Cependant, le 4-HHE est considéré comme une molécule physiologiquement moins active et moins toxique que le 4-HNE du fait de son faible caractère lipophile et de sa moindre réactivité chimique. Les études ont montré que sur certains types cellulaires (neurones (Ishimura et al., 2008), cellules épithéliales du cristallin, cellules vasculaires endothéliales (Choudhary et al., 2002), chondrocytes (Vaillancourt et al., 2008), le 4-HNE et le 4-HHE peuvent réduire la viabilité cellulaire dès 20 µM pour les cellules les plus sensibles. En effet, ces molécules sont capables d’activer les voies des caspases favorisant l’entrée en apoptose des cellules (Vaillancourt et al., 2008).
1.9.7 Signalisation cellulaire
Les 4-hydroxyalkénals ne sont pas toujours considérés comme des composés cytotoxiques. De nombreux chercheurs ont montré que le 4-HNE était plutôt un second messager dans la signalisation cellulaire plutôt qu’un produit toxique de la peroxydation lipidique. En effet, le 4-HNE semble moduler les voies de signalisation cellulaire et l’expression de certains gènes (Awasthi et al., 2005). A faibles concentrations, le 4-HNE est capable de stimuler la prolifération des lignées de cellules musculaires en activant la voie de signalisation ERK (Awasthi et al., 2003). En revanche, le 4-HNE semble exercer une activité anti-carcinogénique sur les cellules intestinales Caco-2 en inhibant l’activité de la télomérase (Pizzimenti et al., 2010). D’autres chercheurs rapportent des effets protecteurs contre le stress oxydant en réponse au 4-HNE puisqu’il active le facteur de transcription Nrf2 aboutissant à la synthèse d’ARNm de certaines enzymes anti-oxydantes (Niki, 2009). A ce jour, les effets des AGPI oxydés et de leurs produits d’oxydation sur les cellules intestinales in vitro ont très peu été étudiés jusqu’à présent. Il semblerait que les huiles oxydées créent un stress oxydant dans les cellules intestinales Caco-2, réduisant ainsi la viabilité cellulaire et induisant l’apoptose (Alghazeer et al., 2008).
94 1.9.8 Le 4-HHE et l’alimentation
Les industries agro-alimentaires sont concernées par ce risque de peroxydation lipidique de leurs produits, notamment des AGPI de la classe des omégas-3. En effet, les recommandations nutritionnelles encouragent la consommation d’omégas-3, ce qui pousse les industries à supplémenter avec de l’EPA ou du DHA les produits alimentaires tels que les œufs, les formules infantiles ou même les poissons naturellement riches en omégas-3.
Calzada et ses collègues utilisent les niveaux plasmatiques de 4-HHE comme un indicateur du taux d’oxydation du DHA supplémenté lors d’une étude clinique. Les résultats indiquent que le niveau plasmatique de 4-HHE est élevé après une supplémentation de DHA de 800mg/jour ou de 1600mg/jour. De plus, le niveau de 4-HHE comprend 0,01% de DHA plasmatique (Calzada et al., 2010). Les études de Michalski et de ses collègues indiquent que le ratio 4-HHE : AGPI n-3 est plus bas dans le lait maternel que dans les formules de lait commerciales (Michalski et al., 2008). Cependant, le ratio HHE : AGPI n-3 était plus élevé que le ratio HNE : AGPI n-6 à la fois dans le lait maternel et dans les formules de lait. Surh et al. ont également montré la présence de 4-HNE et de 4-HHE dans les formules de lait pour enfant (Surh et al., 2007). Grune et al. ont enrichi en omégas-3 des œufs de poule en supplémentant l’alimentation de ces poules avec du DHA (Grune et al., 2001). Cet enrichissement conduit malheureusement à une augmentation du 4-HHE dans les œufs. Une supplémentation en vitamine E antioxydante permet de prévenir l’apparition de 4-HHE issu de la peroxydation du DHA.
Ces études prouvent donc que l’oxydation des AGPI n-3 est présente dans les aliments que nous consommons et leur métabolisation entraîne une élévation du taux plasmatique de 4-HHE potentiellement toxique. Néanmoins, il n’existe pas assez de données aujourd’hui pour déterminer l’étendue de l’oxydation des AGPI n-3 plasmatiques modifiée par une consommation élevée en AGPI n-3, et si ces changements sont associés à des effets positifs ou négatifs sur la santé. Il est donc indispensable d’approfondir les études pour une meilleure compréhension des mécanismes de prévention d’oxydation des AGPI n-3 dans les produits alimentaires qui en sont enrichis, ainsi que les mécanismes responsables de la peroxydation lipidique in vivo des AGPI n-3 suivant leur consommation.
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