2. Matériel et méthodes 1 Stratégies de recherche
2.3. Extraction des données et synthèse
Les informations concernant les études retenues ont été extraites à l’aide d’une grille d’extraction des données réalisée à cet effet, puis elles ont été synthétisées sous forme de tableaux. Les critères d’extraction sont les suivants : le titre de l’étude, le ou les objectifs de l’étude, la taille et la nature de l’échantillon, le type d’étude, les groupes d’étude, la durée de l’étude, la méthode, les critères évalués, les résultats, les limites du protocole, la discussion et enfin la conclusion.
3. Résultats
Les recherches électroniques à partir des moteurs de recherche ont permis d’identifier pour la première indication 327 articles (voir schéma 1) et pour la deuxième indication 30 articles (voir schéma 2). Après analyse des titres et résumés de chaque article, 23 publications pour la première indication et 10 publications pour la deuxième indication ont été retenues.
L’analyse des textes complets de chaque article nous a permis d’exclure 13 articles supplémentaires pour la première indication et 5 articles pour la deuxième indication. 1 doublon (retrouvé dans les deux recherches conduites) a été éliminé. Les articles ont été séparés selon qu’ils apportaient des informations sur l’indication seule (gain osseux ou complications post- opératoire) ou des informations supplémentaires sur l’autre indication.
Ainsi, nous avons pu réaliser les schémas suivants et avons abouti à une liste finale d’articles pour la première indication et pour la deuxième indication.
PUBMED SCOPUS COCHRANE
Après lecture titres et résumés Après lecture complète des articles Après exclusion des doublons
Concernant le gain osseux Concernant le gain osseux et les complications post-op 16 articles 5 articles 2 articles
6 articles 3 articles 1 article
8 articles
5 articles 3 articles*
Schéma 2 : Schéma d’extraction des données concernant les complications post- opératoires.
*Ces trois articles sont identiques.
Les informations concernant les études sont résumées dans les tableaux suivants.
PUBMED SCOPUS COCHRANE
Résultats initiaux 12 articles 12 articles
Après lecture titres et résumés
5 articles 3 articles 2 articles
Après lecture complète des
articles
2 articles 2 articles 1 article
Après exclusion des doublons
4 articles
Concernant les complications post-op
Concernant le gain osseux et les complications post-op 6 articles
Nom de l'article
Plasma rich in growth factors (PRGF) for the promotion of bone cell proliferation and tissue regeneration (47) Objectif de
l'étude
Evaluer la migration des ostéoblastes humains (hObs) avec PRGF Echantillon N=27 donneurs humains de sang
Type d'étude
Etude expérimentale, in vitro Groupe
contrôle
n=27 échantillons de cellulose sans PRGF, recueillis et placés dans 1mL de culture favorable à la croissance Goupe
testé
n’=27 échantillons de sang avec PRGF, recueillis et placés dans 1mL de culture, favorable à la croissance. Durée du
test
48h
Méthode Recueil et culture d’ostéoblastes humains (prélevés sur des têtes fémorales lors de chirurgie de la hanche).
Prélèvement de sang sur 27 donneurs humains, centrifugation à 580g (8min) (utilisation de la fraction F2 seulement).
Mise en culture des ostéoblastes avec PRGF ou sans (cellulose oxydée utilisée comme témoin) 48h et mesure en microscopie à fluorescence.
Evaluation Evaluation quantitative, prospective du gain osseux
Résultats Les ostéoblastes humains ont plus pénétré dans le PRGF que dans la cellulose oxydée.
Discussion Probablement dus aux facteurs de croissance et aux chimiokines. Les ostéoblastes qui ont colonisé le PRGF sont plus actifs et ont une meilleure intégrité cellulaire comparés à ceux du contrôle.
Nom de
l'article PRGF promotes bone tissue regeneration by stimuling prolifération, migration and autocrine secretion in primary human osteoblasts (48) Objectif de
l'étude
Evaluer et quantifier l'effet du PRGF sur la prolifération, la migration, la chimiotaxie des ostéoblastes alvéolaires primaires humains. Echantillon N= 1 donneur humain de sang (homme de 35ans) ;
N’=3 donneurs humains d’ostéoblastes alvéolaires (1 homme et 2 femmes de 53 à 86 ans) Type d'étude Etude expérimentale, in vitro
Groupe
contrôle n=1 culture d'ostéoblastes humains sans traitement
Goupe testé n’=3 cultures d'ostéoblastes humains, une avec du plasma pauvre en plaquettes, une avec une fraction très riche en plaquettes (F3 du PRGF), une avec la fraction riche en plaquettes du PRGF F2+F3.
Sur les essais de prolifération cellulaire et ceux de la synthèse des facteurs de croissance angiogénique et des composants de la matrice extra-cellulaire, une quatrième préparation a été faite avec 0,2% de sérum de veau fœtal.
Durée du test 4 jours
Méthode Prélèvement d’ostéoblastes alvéolaires humains sur 3 donneurs humains.
Prélèvement de sang sur un donneur en bonne santé de 35 ans, centrifugation du sang à 580g (8min) pour produire du plasma pauvre en plaquettes, du plasma riche en plaquettes F2+F3 et du plasma très riche en plaquettes F3.
Etude de la prolifération ostéoblastique (concentration variable de préparation de plasma) ; Etude de la synthèse des facteurs angiogéniques et des composants de la matrice extra-cellulaire ; Etude de l’activité de la phosphatase alcaline ; Etude de la migration cellulaire ; Etude de la chimiotaxie
Evaluation Evaluation quantitative, prospective du gain osseux
Résultats Prolifération des ostéoblastes : plus importante avec toutes les fractions plasmatiques comparativement aux contrôles (0,2% de sérum de veau fœtal) La
concentration la plus efficace de PRGF est celle à 20%. (fraction F3 seule comme F2+F3). Toutes les expérimentations suivantes ont été faites avec des fractions de PRGF à 20%.
Migration des ostéoblastes : plus importantes avec les fractions F3 et F2+F3(1,7 fois plus efficace) Chimiotaxie: plus importante avec les fractions F3 et F2+F3.
Synthèse des agents angiogéniques : plus elevée avec les fractions F3 et F2+F3.
Discussion La prolifération osseuse est dépendante de la quantité de plaquettes. Les facteurs de croissance associés au PRGF favorisent la perméabilité des vaisseaux sanguins. L’absence de leucocytes dans le PRGF réduirait considérablement la quantité de molécules pro-inflammatoires.
Conclusion Les fractions PRGF F3 et F2+F3 sont capables d’augmenter la régénération osseuse (RO) en augmentant la prolifération des ostéoblastes, la migration, la chimiotaxie et la synthèse des agents angiogéniques et des composants de la matrice extra-cellulaire.
Nom de
l'article PRGF stimulates proliferation, migration and gene expression associated with bone formation in human dental follicle cells (49) Objectif de
l'étude Evaluer les effets du PRGF sur la minéralisation des cellules folliculaires dentaires humaines (hDFCs)
Echantillon N=4 donneurs de sang (2 hommes et 2 femmes d'âge moyen 29,5ans) et N’= 1 donneur de follicules dentaires de troisième molaire de 14ans Type d'étude Etude expérimentale, in vitro
Groupe
témoin n= 4 cultures cellulaires avec sérum fœtal.
Goupe testé n’= 4 cultures cellulaires avec fraction 1 PRGF, n3= 4 cultures cellulaires avec fraction 2 PRGF. Durée du test 7 jours
Méthode
Préparation du PRGF (fraction F1 et F2) par centrifugation du sang à 460g (8min)+ préparation du sérum à partir du sang des 4 donneurs. Comptage des globules blancs et des plaquettes dans le sang total+ les trois préparations précédentes.
Dosage des FdCs IGF-1, TGF, PDGF, VEGF par méthode Elisa. Mesure de la prolifération cellulaire et de la migration.
Mesure de l’expression ostéogénique des ostéoblastes. (collagène type 1, ostéomoduline,, la phosphatase alcaline, BMP-4 et BMP-2, TGF-b) Evaluation Evaluation prospective du gain osseux, quantitative
Résultats
Concentration des plaquettes: F2>sang total>F1>sérum et pas de GB dans le PRGF F1 et F2 et sérum
Concentrations de facteurs de croissance: TGF-b :plus élevé dans F2 que F1 et sérum et pour IGF-1, PDGF, VEGF :quantités similaires dans F2 et sérum et plus faibles dans F1.
Prolifération cellulaire des cellules folliculaires: plus élevée avec PRGF (concentration 10%) comparé à du sérum de veau fœtal à 10% Migration cellulaire : plus élevée avec PRGF (concentration 10%) comparé à du sérum de veau fœtal à 10% (pas de différence significative) Expression ostéogénique des ostéoblastes : toutes les molécules dosées augmentées avec PRGF comparativement au sérum de veau fœtal. Discussion
La réalisation du PRGF supprime les globules blancs de l’échantillon sanguin.
Le facteur de croissance TGF-b (important dans la cicatrisation osseuse) est augmenté dans les fractions de PRGF plus F2 que F1.
Nouveaux modèles expérimentaux sont nécessaires pour élucider toutes les fonctions biologiques du PRGF, y compris les échafaudages et la libération des facteurs de croissance.
Conclusion Facteurs solubles du PRGF augmente la prolifération, migration et expression des gènes associés à l'induction ostéogénique par des cultures de cellules folliculaires dentaires humaines en raison du taux élevé en facteurs de croissance.
Nom de l'article Plasma rich in growth factors in human extraction sockets: a radiographic and histomorphometric study on early bone deposition (50)
Objectif de l'étude Evaluer le dépôt osseux précoce dans des alvéoles d'extraction avec et sans PRGF.
Echantillon N= 28 patients dont 11 patients avec administration de PRGF et 17 patients sans administration de PRGF N’= 36 alvéoles d’extractions humaines
Type d'étude Etude cas/témoin, in vivo
Groupe témoin n= 18 alvéoles d'extractions humaines sans PRGF
Goupe testé n’= 18 alvéoles d'extractions humaines avec PRGF
Durée du test Temps 1 (T1): 4 à 6 semaines, Temps 2 (T2): 7 à 10 semaines
Méthode
Extraction atraumatique,
Prélèvement du sang, centrifugation du sang à 580g (8min) et prélèvement de la fraction au-dessus des GRs sans distinction des GBs. Détermination de la densité minérale des tissus :
-scan, reconstruction 3D avec logiciel
-Biopsie : échantillon recueilli après T1=4-6 semaines (6 sites PRGF+ 5 sites ctl) ou T2=8-10 semaines (5sites PRGF et 5 sites ctl),+ dosage vWF (marqueur endothélial), OCN (marqueur ostéoblastique de matrice osseuse) CD68 (marqueur macrophage)
Evaluation Evaluation prospective du gain osseux, quantitative, en simple aveugle (analyse des biopsies)
Résultats
Volume osseux, contenu minérale des tissus : tendance à des valeurs plus importantes à T2 mais pas de différences significatives entre le groupe PRGF et le groupe contrôle à T1 et T2
Densité minérale : pas de différence significative entre les deux groupes et identique entre T1 et T2
Cellules CD68+ : plus présentes dans le groupe PRGF à T1 et T2 (peu de changements entre T1 et T2) dans le groupe contrôle augmentation des CD68+entre T1 et T2.
Cellules vWF : plus élevé à T1 dans le groupe PRGF mais équivalent à T2 entre PRGF et contrôle.
Cellules OCN: plus faible à T2 par rapport à T1 dans les groupes PRGF et contrôle, pas de différence entre les deux groupes Limite du protocole Nombre limité de donneurs (inférieur à 100), évaluation quantitative de deux types de cellules seulement.
Discussion
Le contenu similaire en ostéocalcine est concordant avec le volume osseux et le contenu minéral dans le groupe PRGF et contrôle.
La présence plus importante de CD68 peut être expliquer par l’expression de certaines cytokines pro-inflammatoires et l’expression de molécules d’adhésion spécifique contenu dans les concentrés de plaquettes.
L’application locale de PRGF dans les alvéoles d’extractions peut promouvoir l’angiogenèse dans les premiers stades de la cicatrisation. Conclusion Le groupe traité par PRGF n’a montré aucune amélioration significative au début du dépôt osseux (4 à 8 semaines) par rapport au groupe
Nom de l'article Plasma Rich in Growth Factors: Preliminary Results of Use in the Preparation of Future Sites for Implants (40) Objectif de l'étude Evaluer l'amélioration de la régénération osseuse et la guérison des tissus mous.
Echantillon N=23 patients (20 patients avec une extraction simple dont 10 avec PRGF et 10 sans PRGF, 3 patients avec plusieurs sites d’extractions :1 site avec PRGF et tous les autres sites sans PRGF sur même patient) N'= 26 alvéoles d'extractions humaines, hommes et femmes de 35 à 55 ans
Type d'étude Etude cas/témoin, in vivo
Groupe témoin n1=10 alvéoles d'extraction humaines simples sans ajout de PRGF +3 alvéoles d’extractions humaines Goupe testé n2=10 alvéoles d'extraction humaines simples avec ajout de PRGF+ multiples sites sur 3 patients
Durée du test 10 à 16 semaines
Méthode
Prélèvement de sang, centrifugation à 160g (6min) pour produire du PRGF et prélèvement de la fraction au-dessus des GRs sans distinction des GBs, anesthésie, extraction, ajout de PRGF+ os autologue chez 5 patients sur 10, traitement antibiotique (amoxicilline 5jours), cicatrisation 10 à 16 semaines, biopsie réalisée à la semaine 10 ou à la semaine 16.
Evaluation Evaluation prospective du gain osseux, qualitative, en double aveugle (administration PRGF, analyse des biopsies)
Résultats
Groupe PRGF: Observation clinique: épithélialisation meilleure que sur les témoins. Régénération presque complète 8/10 avec PRGF; biopsie et radiographie: os compact avec trabécules organisés et morphologie normale, 2/10 partiellement régénérées (fumeurs, défauts à 3 parois).
Groupe sans PRGF: Observation clinique: situation homogène: tissu conjonctif remplit majeure partie de l'anomalie, épithélialisation normale. Biopsie et radiographie: os compact avec trabécules.
Groupe avec et sans PRGF: Observation clinique: épithélialisation plus rapide avec PRGF, Biopsie: os plus mature, travées mieux organisées avec PRGF
Limite du protocole Evaluation qualitative, subjective Discussion
Une concentration supérieure en facteur de croissance améliorerait la régénération osseuse et la réparation des tissus mous. Etude future pour la concentration idéale en facteurs de croissance (FdC). Définir les autres FdCs physiochimiques ayant un rôle dans la régénération osseuse (RO).
Nom de l'article Effect of PRGF on alveolar osteitis (51)
Objectif de l'étude Evaluer l’effet préventif du PRGF sur l'ostéite alvéolaire
Echantillon
N= 20 patients avec 2 sites au maxillaire et 2 à la mandibule
De 18 à 45 ans avec au moins un facteur de risque d'ostéite alvéolaire (antécédents de péricoronarite, d'absorption contraceptive, de tabagisme, de bruxisme ou d'ostéite alvéolaire)
N'= 80 alvéoles d'extractions
Type d'étude Essai clinique cas/témoin, in vivo
Groupe témoin n=40 alvéoles d'extraction avec un placebo
Groupe testé n’=40 alvéoles d'extraction avec PRGF
Durée du test 7 jours
Méthode
Prélèvement de sang, centrifugation à 460g (8min) pour produire du PRGF Prélèvement de la fraction au-dessus des GRs sans disctinction des GBs
Extractions bilatérales par un seul chirurgien, et mise en place du gel dans la cavité dans deux des quatre alvéoles pour chaque patient à l'aveugle,
Examen 2,3,4 jours après l'opération par autre examinateur pour détecter : ostéite alvéolaire, douleur sur échelle visuelle analogique (VAS) et guérison à 3 et 7 jours selon échelle de guérison.
Evaluation Evaluation des complications post-opératoires, qualitative, prospective
Résultats
Ostéite alvéolaire selon signes cliniques : 14 patients avec OA (dont 4 à la fois sur le site avec PRGF et sans PRGF), tous les autres sites PRGF sans OA.
Douleur : intensité au cours des 2ème, 3èmes et 4èmes jours post-opératoires significativement plus faible dans le groupe PRGF que dans le groupe témoin
Cicatrisation : significativement meilleure dans le groupe PRGF
Limite du protocole Evaluation qualitative, prospective, délai court
Discussion
L'application de PRGF peut prévenir l'OA et ses complications en raison de son effet angiogénique à long terme et d'une régénérabilité accrue. L'effet angiogénique du PRGF peut réduire ces complications chez les bruxomanes.
Conclusion L’application de PRGF dans l’alvéole a été associée à une diminution de l’ostéite alvéolaire, de la douleur, de l’inconfort, et à une guérison améliorée. Elle aiderait à prévenir la formation de l’ostéite alvéolaire, surtout chez les patients sensibles.
Nom de
l'article Clinical, radiographical, and histological outcomes of PRGF in extraction socket: a randomized controlled clinical trial (52) Objectif de
l'étude Evaluer l'effet du PRGF sur la cicatrisation des alvéoles d'extraction. Echantillon N= 60 patients (hommes et femmes de plus de 18 ans) N’= 60 alvéoles d’extractions
Type d'étude Premier essai clinique randomisé, in vivo Groupe
témoin n= 36alvéoles d'extractions avec PRGF
Goupe testé n'= 24 alvéoles d'extraction sans PRGF Durée du test Suivi 10 à 12 semaines
Méthode
Préparation du PRGF avec prélèvement de sang et centrifugation à 580g (8min) (élimination des GBs), Radiographie pré-opératoire (péri-apicale et panoramique), Antibioprophylaxie (2g amoxicilline) Extraction atraumatique,et mise en place de PRGF dans le groupe testé, sutures dans les deux groupes, Scanner CBCT à J0 puis à 10-12 semaines, Biopsie gingivale
Critère d’évaluation principal : régénération des alvéoles
Critères d’évaluation secondaire : douleur, inflammation, cicatrisation des tissus mous ( évalués à J3, J7 et J15) ; densité osseuse, complications et analyse histologique.(évalués à 10-12semaines)
Evaluation Evaluation du gain osseux et des complications post-opératoires, prospective, en double aveugle : 60 patients ayant eu 1’avulsion de molaire mandibulaire : 36 avec PRGF, 24 sans PRGF
Résultats
Régénération osseuse: plus d’alvéoles régénérées pour le groupe PRGF par rapport au groupe sans PRGF (analyse CBCT entre 10 et 12 semaines) Douleur (selon l'EVA) et inflammation: plus faibles dans le groupe PRGF que dans le groupe témoin à J3 et J7. (pas de différence à J15)
Cicatrisation des tissus mous plus élevée dans le groupe PRGF à J3, J7 et J15. Aucune complication grave dans les deux groupes
Densité osseuse plus élevée dans le groupe PRGF. Analyse histologique : épithélium kératinisé plus épais et plus d'os nouvellement formé dans le groupe PRGF.
Limite du protocole
Evaluation subjective par examinateur des tissus mous, valeurs non absolues en scanner CBCT pour mesure de la régénération osseuse contrairement à la tomodensitométrie. Population d'étude petite.
Discussion
Le PRGF pourrait être utile pour améliorer la cicatrisation, stimuler la régénération des tissus durs et mous, minimiser les complications post-opératoires. L'amélioration histologique pourrait être liée à la présence de moins d'inflammation dans la cavité d'extraction avec le PRGF et aux effets des facteurs de croissance sur l'angiogenèse, la prolifération, la migration et la différenciation des cellules tissulaires.
Autres essais cliniques avec biopsie nécessaires pour comparer les résultats cliniques et radiographiques. Conclusion Le PRGF améliore la cicatrisation de l’os et des tissus mous.
Nom de l'article Radiographic evaluation of bone regeneration after the application of PRGF in a lower third molar: a case report (53) Objectif de l'étude Evaluer l'effet des facteurs de croissance du PRGF dans la régénération osseuse et la guérison du défaut osseux.
Echantillon N= 1 patient de 42 ans N’= 1 alvéole d'extraction
Type d'étude Cas clinique, in vivo
Groupe témoin n=0
Goupe testé n’=1 alvéole d'extraction
Durée du test 50jours
Méthode
Préparation de PRGF par prélèvement de sang et centrifugation à 460g (8min), Extraction atraumatique de la troisième molaire mandibulaire,
Mise en place de PRGF, Sutures,
Radiographie panoramique post-opératoire et à J50
Evaluation Evaluation du gain osseux et des complications post-opératoires, qualitative
Résultats Douleur : modérée à J1 et plus faible à J2 (selon l'EVA),
Aucun gonflemment post-opératoire, Pas d'ostéite alvéolaire,
Signes de nouvelle formation osseuse, Réduction des poches parodontales,
radiographie : amélioration de la radio-densité osseuse
Limite du protocole Evaluation qualitative, sans comparaison avec une alvéole témoin, un seul patient
Discussion Les facteurs de croissance doivent avoir chacun un rôle clé dans les différentes étapes de la régénération : migration, prolifération, différenciation des ostéoblastes.
Avantage du PRGF : pas de problème d'immunité ou de biocompatibilité car c'est un processus autologue. Nécessité d'un essai contrôlé en double aveugle pour évaluer l'efficacité du PRGF sur la préservation des os.
Conclusion L’application de PRGF dans les défauts alvéolaires peut avoir un effet positif sur la régénération osseuse et la guérison des tissus mous, en particulier lorsque la région est compromise par une inflammation ou infection locale.
Nom de l'article The impact of PRGF on clinical and biological factors involved in healing processes after third molar extraction (54) Objectif de l'étude Evaluer l'efficacité du PRGF autologue dans le processus de guérison après une extraction molaire.
Echantillon N= 16 patients (homme et femme et 18 à 35ans) N'= 32 alvéoles d'extractions Type d'étude Etude clinique cas/témoin, in vivo
Groupe témoin n1= 16 alvéoles d'extraction sans PRGF
Goupe testé n2= 16 alvéoles d'extraction avec PRGF
Durée du test 7 jours
Méthode
Préparation de PRGF par prélèvement de sang et centrifugation à 460g (8min) Prélèvement de tissus mous en pré-opératoires et post-opératoires (J7)
Extraction bilatérale des troisièmes molaires mandibulaires par le même chirurgien, comblement du défaut sur une des deux alvéoles avec le PRGF au hasard, ttt antibiotique pendant 6 jours (amox) et anti-inflammatoire oral (nimesulide) pendant 3 jours,
Dosage par PCR des cytokines inflammatoires (IL-1B, IL-6, IL-10), TGF-b2, BMP-4, BMP-7, (PPAR)-b et collagène type I et III Mesure de la douleur (EVA)et de la tuméfaction faciale en post-opératoires de J0 à J7.
Evaluation Evaluation du gain osseux et des complications post-opératoires, quantitative, prospective
Résultats Facteurs de croissance: augmentation des cytokines inflammatoires dans les sites PRGF par rapport au contrôle. (interleukines), augmentation des TGF-b, BMP-4 et BMP-7 dans les sites traités avec le PRGF (augmentation moindre que pour les interleukines), pas de différence des PPAR-B, , augmentation du collagène type 1 et 3 entre les groupes PRGF et sans PRGF
Douleur (EVA): plus faible avec le PRGF (significatif à J7)
Tuméfaction faciale: moins importante sur les sites traités avec PRGF sauf à J7 Limite du protocole Délai court, évaluation des symptômes cliniques patients-dépendant
Discussion Le trismus, conséquence directe de la tuméfaction faciale postopératoire, pourrait réduire grâce à l'application du PRGF dans les alvéoles tout comme la douleur. Chaque patient est son propre contrôle ce qui élimine les différences de réponse individuelle au traitement par le PRGF. Les paramètres de l'inflammation ont été retrouvées à des niveaux plus élevés dans les sites PRGF. Deux explications possibles : l'IL-1b et l'IL- 6 pourraient faciliter la cicatrisation des plaies comme le démontre l'augmentation du collagène I et III. L'IL-10 et le TGF-b2 pourraient prévenir les propriétés pro-inflammatoires des IL-1b et IL-6 favorisant la guérison.
4. Discussion
Ce travail avait pour objectif de répondre à deux hypothèses : l’hypothèse principale selon laquelle le PRGF améliorerait la cicatrisation et la régénération osseuse et l’hypothèse secondaire selon laquelle des complications post-opératoires diminuées auraient été rapportées en présence de PRGF.
Dans sept publications sur huit sélectionnées, cette étude met en évidence une
amélioration de la cicatrisation et de la régénération osseuse suite à l’administration de
PRGF, au niveau clinique, histologique, radiographique ou les trois (40,47–49,52–54). Ces études sont expérimentales (47–49) in vitro ou cliniques in vivo: un cas clinique (53) des études cas/témoin (40,54) et un essai clinique randomisé (52), tous chez l’homme. Les deux derniers types d’études sont les plus fiables et nous donne une présomption scientifique plus forte. Dans les études expérimentales, l’amélioration de la cicatrisation osseuse est évaluée par mesure du nombre d’ostéoblastes en microscopie à fluorescence, dosage enzymatique des marqueurs de