Examen du sperme

Le sperme récolté après la puberté a fait l’objet des examens macroscopiques (volume, couleur et consistance) et microscopiques (mobilité massale, mobilité individuelle, concentration et produit total en spermatozoïdes).

Ajouté à cela, d’autres examens microscopiques tels que le pourcentage de spermatozoïdes mobiles, le pourcentage de spermatozoïdes vivants, le pourcentage de spermatozoïdes anormaux et le pourcentage des différentes classes d'anomalies ont été réalisés.

 Pourcentage de spermatozoïdes mobiles

L'estimation visuelle du pourcentage de spermatozoïdes mobiles est réalisée au même temps que celle de la motilité individuelle. Par conséquent, elle est effectuée dans les mêmes conditions de dilution, de température et de grossissement. Cette mesure est réalisée en déposant une goutte de semence diluée à 10 % dans une solution de chlorure de sodium à 9 ‰ entre la lame et la lamelle et en l'examinant au microscope. Le grossissement est de X 40 à X 100 et la platine chauffante est à 37°C. La dilution de la semence pour une observation correcte doit être comprise entre 60 et 200 X 106 spermatozoïdes/ml. L'observateur décide, après l'examen successif de cinq champs d'une même préparation, d'une estimation visuelle du pourcentage de spermatozoïdes mobiles (Baril et al., 1993).

 Pourcentage de spermatozoïdes vivants

La détermination du pourcentage des spermatozoïdes vivant et anormaux, ainsi les différentes anomalies (majeurs, mineurs, anomalies de la tête, de la pièce intermédiaire et de la queue), se fait par la méthode de coloration vitale, a l'aide des colorants spécifiques (éosine / nigrosine) (photo 24).

124

Photo 24: Colorants (l'éosine à gauche et nigrosine à droite) utilisés pour la coloration des spermatozoïdes.

Les lames sont nettoyées et séchées sur une plaque chauffante à 37°C, puis identifiées avec le numéro de l'agneau sur leurs parties droites et placées sur la platine chauffante du microscope (37°C). Une goutte de sperme non dilué est déposée sur la partie gauche de la lame, mélangée pendant 10 secondes avec une goutte d'une solution composée de deux colorants (l'éosine et la nigrosine) puis laissée reposer pendant quelques secondes (photo 25). Le mélange sera étalé sur la lame à l'aide de la largeur d'une lamelle en un fin film aussi fin et régulier que possible (photos 26 et 27). Cette préparation doit être séchée sur une plaque chauffante (à 37°C), puis conservée dans une boite pour lame jusqu'à la réalisation de la lecture (photo 28).

L'appréciation du pourcentage des spermatozoïdes vivants est réalisée sur les lames préalablement séchées depuis au moins 24 heures, observées sur la platine chauffante d'un microscope (pour éviter une éventuelle réhydratation), au fort grossissement X100 immergé dans une goutte d'huile à immersion. Au total, 200 spermatozoïdes sont comptés sur cinq champs différents (Kafi et al., 2004 ; Zamiri et al., 2010).

_________________________________________________Chapitre III : Performances post- pubertaires

125

Photo 25 : Préparation des frottis de semence. Photo 26: Etalement du frottis de semence (début).

Photo 27: Etalement du frottis de semence (fin). Photo 28: Conservation des frottis colorés dans une boite pour lames.

© S. BOUSSENA © S. BOUSSENA

126

Les spermatozoïdes colorés, en totalité ou en partie, en rose ou en rouge, sont considérés comme morts au moment de la coloration (photo 29). En revanche, ceux non colorés ou blancs sont considérés comme vivants au moment de la coloration. Le nombre de spermatozoïdes blancs (non franchis par l'éosine) sur un arrière plan coloré par la nigrosine (n) compté est rapporté en pourcentage (photo 30); le pourcentage de spermatozoïdes vivants (%) = n X 100/200.

Photo 29: Spermatozoïde mort (en rose). Photo 30: Spermatozoïdes vivants (en blanc).

 Pourcentage de spermatozoïdes anormaux

Le pourcentage de spermatozoïdes anormaux dans des échantillons de semence collectés à 15 jours d'intervalle est apprécié en vue de déterminer l'évolution de la qualité de la semence de la puberté jusqu'à l'âge d’un an chez les agneaux Ouled Djellal.

Il est contrôlé au même temps que le pourcentage de spermatozoïdes vivants sur cinq champs différents, au total 200 spermatozoïdes sont comptés (Sancho et al., 1998).

 Pourcentage des anomalies mineures et majeures

Selon Ott et al. (1987) et Blom (1973), les anomalies mineures englobent les anomalies qui altèrent peu la fertilité des spermatozoïdes (gouttelette cytoplasmique distale, tête sans queue, queue repliée, queue enroulée à l’extrémité, tête petite, étroite ou géante, acrosomes anormaux (détachés ou plissés) et implantation abaxiale). En revanche, les anomalies majeures concernent les spermatozoïdes avec des gouttelettes cytoplasmiques proximales, des têtes piriformes, des queues bouclées, enroulées en chignon ou autour de la tête, des déformations de la pièce intermédiaire et les spermatozoïdes ayant un mauvais développement (Posière, 2002 ; Rigal, 2008).

© S. BOUSSENA © S. BOUSSENA

_________________________________________________Chapitre III : Performances post- pubertaires

127  Pourcentage des différentes anomalies

Les spermatozoïdes anormaux sont répartis selon Baril et al., (1993) en quatre différentes classes (figure 57) :

 spermatozoïdes sans queue.

 spermatozoïdes avec une anomalie au niveau de la tête (acrosome anormal, tête petite ou étroite, tête élargie en forme de poire, etc.).

 spermatozoïdes avec une anomalie au niveau du flagelle.

 spermatozoïdes avec une anomalie de la pièce intermédiaire (gouttelette cytoplasmique proximale, gouttelette cytoplasmique distale).

Figure 57: Classification des différentes anomalies spermatiques d’après Baril et al. (1993). 2.2.3. Analyses statistiques

2.2.3.1. Variables étudiées

Les variables étudiées tout au long de la période qui suit la puberté et jusqu’à l’âge de un an sont:

 Le poids vif.

128  Le tour de poitrine.  L’état d’embonpoint (BCS)  La circonférence scrotale.  La longueur testiculaire.  Le diamètre testiculaire.

 Le diamètre de la queue de l'épididyme.

En plus des variables spermatiques étudiées à la puberté, l’étude des caractéristiques de la semence englobe aussi :

 Le pourcentage de spermatozoïdes mobiles.

 Le pourcentage de spermatozoïdes vivants.

 Le pourcentage de spermatozoïdes anormaux.

 Le pourcentage des anomalies mineures et majeures.

 Le pourcentage des différentes classes d'anomalies spermatiques (anomalies de la tête, du flagelle, de la pièce intermédiaire et tête sans queue).

 Le pourcentage des différentes anomalies.

2.2.3.2. Analyse des effets des facteurs de variation

En plus des facteurs de variation étudiés dans les deux chapitres précédents (le type de naissance, le côté testiculaire et l'âge de la mère), l'effet de la durée du jour et de l'individu sur la morphométrie testiculaire et épididymaire ainsi que sur la production spermatique après la puberté ont été étudiés.

2.2.3.3. Modèle statistique

Le model statistique employé de la puberté jusqu’à l’âge d’un an comporte :

- Les poids à différent âge, calculés par interpolation linéaire (Ricordaux et al., 1979). - Les statistiques descriptives (moyenne, écart-type, erreur type, minimum, maximum et ANOVA) (Statistica, 1999).

- Le test t de Student des échantillons appariés (SPSS Inc, Chicago, IL, USA).

- Les régressions selon des modèles linéaires et non linéaires afin de déterminer le modèle qui caractérise la croissance corporelle et testiculaire, ainsi que l'évolution des paramètres spermatiques (GraphPad, 2007).

- Le test de signification du coefficient de corrélation de Pearson et de Spearman (P<0,05) (Statistica, 1999 ; SPSS Inc, Chicago, IL, USA).

_________________________________________________Chapitre III : Performances post- pubertaires

129

3. Résultats

3.1. Performances corporelle et testiculaire après la puberté