Discussion

I.3.1. Phosphorylation sur tyrosine de la VE-cadhérine dans le système vasculaire mature

De façon intéressante, nous montrons dans cette étude l’existence d’une forme phosphorylée de la VE-cadhérine chez les souris adultes, fortement détectée dans les poumons, l’utérus, et plus faiblement dans l’ovaire, indiquant que la VE-cadhérine est effectivement un substrat de tyrosine kinases in vivo. Les poumons sont un site privilégié d’interaction entre l’endothélium et les macrophages (Brain, J.D. et al. 1999). Ceux-ci pourraient donc influencer l’endothélium pulmonaire en relarguant des cytokines inflammatoires, qui pourraient induire la phosphorylation de la VE-cadhérine, expliquant la détection de cette forme phosphorylée dans un tissu non angiogénique.

En revanche, la phosphorylation n’est pas détectable dans les autres tissus, sauf dans le cas où les souris sont traitées par le pervanadate de sodium. Après le traitement, la phosphorylation devient alors détectable dans le cœur, les reins et la rate, et elle est aussi fortement augmentée dans les poumons, alors que le traitement produit moins d’effets sur l’utérus et l’ovaire. Ces résultats suggèrent que la phosphorylation par des tyrosine kinases de la VE-cadhérine est contrebalancée dans l’endothélium quiescent de l’adulte par l’action de tyrosine phosphatases. Cette hypothèse est en accord avec les données in vitro qui montrent la perte de la phosphorylation de la VE-cadhérine quand les cellules atteignent la confluence. De plus, ces résultats concordent avec l’augmentation, dépendante de la densité cellulaire, de l’expression et de l’activité de protéines tyrosines phosphatases (PTP) associées aux jonctions intercellulaires (Gaits, F. et al. 1995; Sorby, M. et al. 1996). Enfin, la PTP VE-PTP a effectivement la capacité d’interagir avec la VE-cadhérine et de neutraliser sa phosphorylation induite par l’activation du VEGF-R2, ainsi que l’augmentation subséquente de la perméabilité (Nawroth, R. et al. 2002).

I.3.2. Phosphorylation dans les tissus angiogéniques

Nos expériences révèlent une forte augmentation de la phosphorylation sur tyrosine de la VE-cadhérine au cours de l’angiogenèse induite dans l’ovaire et l’utérus. D’une part, le

VEGF a un rôle crucial au cours de l’angiogenèse dans l’ovaire (Ferrara, N. et al. 1998), et d’autre part la préparation de l’endomètre utérin pour l’implantation requiert le processus de néovascularisation (Dor, Y. et al. 2002; Ferrara, N. et al. 1998). En outre, la stimulation de cellules endothéliales in vitro par le VEGF induit la phosphorylation sur tyrsosine de la VE- cadhérine. Ainsi, il est probable que l’augmentation du niveau de phosphorylation observé ici au cours de l’angiogenèse induite soit le résultat de l’action du VEGF. En accord avec nos résultats, d’autres auteurs ont rapporté l’augmentation du niveau de phosphorylation de la VE-cadhérine dans le cœur de souris traitées avec du VEGF (Weis, S., Shintani, S. et al. 2004).

I.3.3. Association VE-cadhérine-VEGF-R2

Une association entre la VE-cadhérine et le VEGF-R2 a été rapportée in vitro dans des cellules endothéliales, sous l’action du VEGF (Carmeliet, P. et al. 1999; Grazia Lampugnani, M. et al. 2003; Zanetti, A. et al. 2002), ou lorsque les cellules sont soumises à un flux (Shay- Salit, A. et al. 2002). Dans notre étude, nous démontrons l’existence de cette association in

vivo dans l’ovaire et l’utérus, après stimulation hormonale. Le mécanisme conduisant à cette

association n’est pas connu, toutefois il est probable que le VEGF soit impliqué dans ces interactions. De plus, l’association ne semble pas dépendre du niveau de phosphorylation de la VE-cadhérine, puisque les mêmes résultats ont pu êtres obtenus en l’absence de pervanadate de sodium.

I.3.4. Association VE-cadhérine-Src

Par des expériences de co-immunoprécipitation, nous avons pour la première fois mis en évidence l’association permanente, in vitro et in vivo, de la tyrosine kinase Src avec la VE- cadhérine, indépendamment de son niveau de phosphorylation, ou de l’état d’activation de la kinase. En outre, des expériences d’immunofluorescence en microscopie confocale révèlent qu’une quantité importante de Src se trouve aux jonctions endothéliales, où la kinase est colocalisée avec la VE-cadhérine le long de l’axe z. In vivo, nous montrons également que le niveau de phosphorylation de Src associée à la VE-cadhérine est fortement augmenté au cours de l’angiogenèse induite chez la souris. In vitro, dans les HUVECs stimulées par le VEGF, l’inhibition de Src diminue de manière dose dépendante la phosphorylation de la VE- cadhérine. Ces résultats sont en faveur d’une implication de Src dans cette phosphorylation.

L’association Src/ VEGF-R2 en réponse au VEGF a été démontré (Chou, M.T. et al. 2002). Il semble donc plausible que la VE-cadhérine, le VEGF-R2 et Src forment un seul complexe multimérique, plutôt que des complexes séparés.

In vivo, il a été rapporté que l’activité angiogénique du VEGF est dépendante de Src

(Eliceiri, B.P., Paul, R. et al. 1999), et que Src peut induire la dissociation des jonctions endothéliales (Weis, S., Cui, J. et al. 2004). In vitro, l’implication de Src dans la dissociation des jonctions endothéliales au cours de la morphogenèse capillaire induite par le collagène a été démontrée (Liu, Y. et al. 2004).

L’ensemble de ces éléments suggère que la tyrosine kinase Src joue un rôle majeur dans la déstabilisation des jonctions endothéliales et que la phosphorylation sur tyrosine de la VE- cadhérine pourrait être un événement clé dans l’ouverture de ces jonctions. Il est alors envisageable que le recrutement de Src, par le VEGF-R2, sous l’action du VEGF (Chou, M.T.

et al. 2002), permette l’activation de Src, qui pourrait finalement phosphoryler la VE-

II. Article 2 : Src kinase phosphorylates vascular