Diagnostic indirect

1-2- L’examen à l’état frais:

Se fait au microscope à fond noir. Le tréponème apparaît brillant sur fond noir, se déplaçant dans le champ entre les particules animées de mouvements browniens. Il sera identifié grâce à la forme, la taille de ses tours de spire, et aussi grâce à ses mouvements.

L’importance capitale de cette recherche, la rareté du tréponème dans certaines préparations, impose une recherche patiente, minutieuse, prolongée, plusieurs champs étant explorés, plusieurs lames préparées en cas d’échec. ^[12]

1-3- L’examen après coloration:

Dans certaines circonstances, il peut être légitime de recourir aux méthodes dites de coloration. La sérosité extraite comme précédemment est étalée sur lame et séchée aussitôt par agitation. Le meilleur procédé de mise en évidence est l’imprégnation argentique de FONTANA-TRIBONDO. La coloration de GIEMSA teinte le tréponème en rose très pâle.

Les tréponèmes sont mis en évidence par d’autres colorations : coloration de VAGO, par le bleu victoria. Ces méthodes n’ont pas la valeur de l’examen direct. ^[12]

1-4- L’immunofluorescence :

L’immunofluorescence à l’aide d’anticorps monoclonaux sur la sérosité du chancre est une alternative utile quand les microscopes à fond noir ne sont pas disponibles. ^[9]

2) Diagnostic indirect

Ils consistent à mettre en évidence dans le sérum ou le LCR des anticorps induits par l'infection tréponèmique. ^[64]

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La recherche sérologique de la syphilis doit se faire par deux réactions: - Réaction à antigène non tréponèmique (non spécifique).

- Réaction à antigène tréponèmique (spécifique). ^[9]

2-1- Tests non tréponémiques

a) Réaction de fixation du complément

BW : Bordet- Wassermann qui n'est plus utilisée. ^[65]

b) Réaction d’agglutination

 VDRL : : Venerel disease reach laboratory.

Principe: agglutination passive d’un antigène cardiolipidique d’origine animale commun aux antigènes de Treponema pallidum. Les résultats sont rendus en croix [1 à 4] en fonction de l’intensité de la réaction. Le titrage est effectué par dilution du sérum de raison 2.

Cinétique des anticorps : Le VDRL se positive avant le FTA et le TPHA, c’est la première technique à être négative après traitement : bon marqueur de suivi de l’efficacité thérapeutique. ^[3]

 RPR : Rapide plasma reagin

C'est le test cardiolipidique le plus largement disponible et le plus fréquemment utilisé.

Les principaux avantages du RPR par rapport à la VDRL sont l'utilisation d'un antigène stabilisé, l'emploi des cartes au lieu des lames et l'addition de particules de charbon à l'antigène. ^[24]

 TRUST: Toluidine red unbeated serum test

Il utilise le rouge de toluidine à la place des particules de charbon pour visualiser la réaction. ^[65]

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2-2- Tests tréponémiques

a) Test de Nelson

Ou test d’immobilisation du tréponème. Il est abandonné ; il nécessite la manipulation de tréponèmes vivants, ne se positive qu’à la fin de la phase primaire, et ne permet pas de juger de l’échec ou de l’efficacité du traitement. ^[9]

b) Réaction d’hémagglutination : TPHA (Treponema Pallidum

Hemaglutination Assay)

Principe : hémagglutination passive d’hématies sensibilisées avec un antigène extrait de Treponema pallidum, résultat obtenu en 1 – 2 heures. Dépistage à la dilution 1/80, puis titrage de raison 2 en cas de positivité.

Cinétique des anticorps : le TPHA se positive vers 3 à 4 semaines après le début de l’infection et reste le plus souvent positif chez un malade guéri. ^[3]

c) Immunofluorescence indirecte : FTA-abs Fluorescent treponeman

antibody absorbed

II se positive très vite quelques jours après I’ apparition du chancre [environ une semaine]. Le sérum du patient est dépose sur une lame recouverte de tréponèmes fixes. La présence d’ anticorps est révélée par I’ addition d’ une antiglobuline marquée avec un fluorochrome. ^[66]

Or, le FTA simple est peu spécifique, pour augmenter sa spécificité, il a été mis au point le FTA-abs ; dans un premier temps, le sérum du malade est absorbé sur un ultrasonat de tréponèmes saprophytes de Reiter, ce qui neutralise les anticorps non tréponémiques sources de faux positifs. ^[9]

Outre, on a développé Le IgM qui n'est que la technique classique du FTA-abs utilisée avec un conjugué anti-chaîne µ humaine. Le FTA-IgM est peut-être un marqueur de syphilis évolutive mais pas de syphilis récente ; ^[67] il est peu sensible et

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peu spécifique et peut être positif en cas de syphilis tertiaire et négatif en cas de syphilis récente. Son intérêt dans la syphilis congénitale n’est plus reconnu par le CDC. ^[68]

2-3- Autres techniques de sérodiagnostic

a) Enzyme immuno-assay [EIA]

Les tests EIA dont il existe de multiples formes utilisant différents antigènes tréponémiques, ont une sensibilité et spécificité excellentes et sont surtout automatisables. ^[68]

b) Tests rapides

Ils utilisent des particules de polystyrène ou de latex recouvertes d’antigènes tréponémiques recombinants et une technique d’immunochromatographie à flux latéral. Il en existe un grand nombre, de performances globalement médiocres. Ils peuvent cependant être utiles en particulier chez les femmes enceintes lorsque l’accès aux plateaux techniques est impossible. ^[69]

Un nouveau test détectant simultanément des anticorps tréponémiques et non tréponémiques semble avoir des performances meilleures. ^[70]

c) Western blot

Dans une étude comparative, la sensibilité du western blot égale 93,8 % et la spécificité 100% contre respectivement 91,7 % et 92 % avec le FTA-abs ; le test était considéré comme positif en présence d’une réaction vis-à-vis de trois parmi quatre antigènes majeurs de Treponema pallidum. ^[71]

Le fractionnement des anticorps IgM et IgG est possible. Cette technique a été appliquée au sang fœtal pour le diagnostic de la syphilis congénitale. ^[72]

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2-4- Biologie moléculaire: PCR

La PCR(polymerase chain reaction) est une technique très sensible mais ne donne pas une réponse immédiate. Le génome de Treponema pallidum étant connu, la cible d’amplification la plus utilisée est le gène de la protéine de membrane externe, plus rarement le gène de la polymérase A, ou de la polymérase I, voire la sous-unité ribosomial 16S. ^[73,74]

La PCR permet d’identifier les mutations de résistance aux antibiotiques ; c’est le cas de la résistance aux macrolides. ^[6] Aussi, elle permet une surveillance épidémiologique des sous-types de Treponema pallidum dont certains pourraient avoir un tropisme singulier pour le système nerveux. ^[75,76]

3) Diagnostic différentiel