Conclusion générale

Ce chapitre avait pour objectif de déterminer les conditions expérimentales

d’incorporation de protéines membranaires dans une bicouche lipidique supportée (SLB).

Nous avons caractérisé la production d’une SLB par une utilisation combinée de 3

techniques : QCM-D, FRAP et AFM. Cette SLB est fabriquée à partir de solutions de

liposomes de POPC de concentration 0,1 mg/mL dans un tampon PBS à pH 7,4 sur des

surfaces de SiO

2

et de verre modifiées par traitement oxydatif mais aussi sur des surfaces

de mica.

Nous nous sommes ensuite focalisés sur la production de protéines membranaires de type

« pore » par le CFPS au sein de cette SLB. La caractérisation par QCM-D a mis en évidence

une différence de comportement entre des solutions « contrôle » et celles exprimant les

protéines. En effet, grâce aux lavages des surfaces, nous avons constaté que la valeur de

fréquence de résonance du contrôle est proche de 0 Hz à la différence des protéines

d’intérêt étudiées. Tous ces éléments nous suggèrent une incorporation de ces protéines

membranaires dans la SLB. Néanmoins, ces résultats ne nous permettent pas d’affirmer

qu’elles sont bien insérées, bien conformées et donc fonctionnelles dans les bicouches

lipidiques supportées.

Nous avons ensuite étudié l’effet de la température et le temps d’incubation du CFPS sur la

production et incorporation de protéines sur une SLB. Il s’est avéré que la température

optimale est de l’ordre de 30°C et que la production de protéines se ralentit après un temps

d’expression de 16 heures. Néanmoins, le temps d’expression que nous choisissons

d’utiliser dans la suite de cette étude sera de 3 heures. En effet, après 3 heures d’expression

protéique, les mesures obtenues avec la technique de QCM-D sont suffisantes pour obtenir

des résultats exploitables et comparables. Ce temps d’expression présente de plus

l’avantage de réaliser des expériences sur une journée.

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Chapitre 2 : Incorporation de protéines

Dans le document Incorporation de protéines membranaires produites par un système d'expression protéique acellulaire dans des bicouches lipidiques planes (Page 132-135)