Picholine Lucques
HO tunesienne B3
55 Ensuite, la teneur en composants oxydables est variable, pas seulement parmi les différents variétés d’huile mais aussi dépendent le type de fabrication (vierge, vierge extra etc.).
Concernant les échantillons de l’huile de colza et tournesol, il est à noter qu’il s’agissait des huiles vieilles dont les acides gras sont probablement oxydés.
Ensuite, le contact de l’huile avec l’air est important. Au moment où on ouvre la bouteille pour l’échantillonnage, l’oxygène peut entrer et l’espace vide est augmenté, ce qui cause encore plus d’oxydations.
Pour obtenir des affirmations plus précises de cette recherche, on devrait mesurer des paramètres divers, la température et le niveau de l’ensoleillement ; ensuite on devrait répéter les essais et effectuer l’analyse avec plus d’échantillons et aux intervalles plus rapprochées pour étudier la linéarité. Une autre proposition consiste à déposer les tubes des échantillons sous une atmosphère contrôlée en oxygène. Les différences entre plusieurs huiles monovariétales pourraient être de l’intérêt.
Les résultats de cette étude nous informent sur l’importance du stockage correct des huiles, par exemple dans des bouteilles en verre marron, pour protéger les vitamines E.
56 4.3 Les résultats de l’analyse par CPG-SM
Cα-T / CDBP
Aire du pic α -tocophérol / Aire du pic DBP
B3 Picholine T1 T2
0 1,76 1,798 2,167 2,424
50 3,117 2,693 3,319 3,258
100 3,599 3,627 4,004 3,779
Cα-T / CDBP
Aire du pic α-tocophérol / Aire du pic DBP
A B1 B2 G1 T3
0 1,986 1,157 3,405 3,091 0,22
50 3,133 2,14 4,286 4,212 0,247
100 4,626 5,42 0,512
Cα-T / CDBP
Aire du pic α-tocophérol / Aire du pic DBP
G2 J1 Lucques N3 O1
0 0,183 3,071 0,603 2,415 4,208
50 0,379 5,678 1,833 3,954 6,145
100 7,115 2,702 3,655 9,833
Tableau 10: Surface des pics des extraits d’échantillons
Les graphiques suivantes montrent les droites d’étalonnage de l’α-tocophérol calculées avec les pics des concentrations de α-tocophérol ajoutées, chacun par rapport à l’étalon interne (phtalate de dibutyle - DBP). En se basant sur le fait que les réponses de l’appareillage devraient être proportionnelles aux concentrations, les droites d’étalonnage devraient être parallèles les unes aux autres. Cependant, les résultats ne sont pas en accord avec ce principe.
Il semble qu’il y ait un biais dans l’analyse. Cette étude est un essai qui mérite d’être approfondit. Néanmoins, les résultats obtenus par cette méthode sont prometteurs. Ces résultats préliminaires seront utiles pour de nouvelles recherches.
57 .
Graphique 26: Méthode d’ajouts dosés combinée à l’étalonnage interne
Graphique 27: Méthode d’ajouts dosés combinée à l’étalonnage interne
0
58 Graphique 28 : Méthode d’ajouts dosés combinée à l’étalonnage interne
Tableau 11: Comparaison des résultats en CPG et CLHP
Huile CαT (mg/ml) par CPG-MS CαT (mg/ml) par CLHP-UV
59 Les concentrations de l’-tocophérol trouvées dans les échantillons d’huiles par cette méthode sont relativement différentes de celles obtenues par CLHP. Certaines parmi elles semblent aberrantes. Il serait nécessaire de refaire l’analyse afin de vérifier ces résultats. De la même manière, il faudrait refaire l’extraction liquide/liquide pour confirmer les résultats obtenus en CLHP. Cependant, un certain nombre de résultats sont similaires, quelle que soit la méthode d’analyse utilisée.
Graphique 29: Chromatogramme A - Étalon à 0.1mg/ml d’-tocophérol ; B - Extrait d’un échantillon d’huile
20.19 21.5022.80 25.65 26.87 28.50 19.41
18.24 4.20 4.81 5.866.98 8.16 13.2014.58 16.0217.40
17.31
10.43 15.16 20.19 23.45 26.84 28.41
12.23
60 chromatogramme de l’extrait montre des pics de plusieurs autres composants qui ont été identifiés par comparaison aux spectres de masses d’une bibliothèque. Dans les graphiques suivants, les spectres en haut représentent les spectres de nos échantillons et les spectres en bas ceux de la substance proposée par la bibliothèque. Il s’agit de cette substance dont le spectre de masse se ressemble le plus à notre spectre obtenue.
A - TR : 10,43 min ; Proposition : Phtalate de Dibutyle (DBP)
B- TR : 15,71 min ; Proposition : N-Acétyle Tyramine
C - TR : 17,29 min ; Proposition : Squalène
T1-2#1892 RT: 10.43 AV: 1 SB: 251 8.71-8.93 , 9.06-9.69Head to Tail MF=941 RMF=941 Dibutyl phthalate
40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290
T1-2#3443 RT: 15.71 AV: 1 Head to Tail MF=798 RMF=817 N-Acetyltyramine
40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200
T1-2#3909 RT: 17.29 AV: 1 SB: 105 16.85-17.03 , 17.08-17.24Head to Tail MF=929 RMF=929 2,6,10,14,18,22-Tetracosahexaene, 2,6,10,15,19,23-hexamethyl-, (all-E)-40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420
61 D – TR : 19,64 min ; Proposition : α-Tocophérol
E – TR : 21,64 min ; Proposition : γ-Sitostérol
Concernant les spectres de masse des autres pics, il faut dire que la preuve de la présence de n-acétyle tyramine est un aspect particulièrement intéressant. Cette substance, produit intermédiaire du métabolisme des neurotransmetteurs tyrosine et dopamine, est, ensemble avec n-acétyle dopamine, un précurseur des quinones de sclérose.26
Squalène27: Le squalène est un lipide naturel qui appartient à la groupe des terpènoides et qui est synthétisé dans les êtres humaines ainsi que dans un grand nombre d’autres organismes. Il s’agit d’un métabolite produit au cours de la synthèse du cholestérol. Ainsi, le squalène apporté par l'alimentation peut théoriquement être transformé par l'organisme en cholestérol et donc contribuer à une élévation de la cholestérolémie.
γ-Sitostérol27: Le γ-sitostérol est le stérol principal dans l’huile d’olive. Les stérols sont des constituants essentiels des membranes cellulaires, et on les trouve aussi bien chez les animaux que dans les végétaux.
En comparaison à la CLHP couplée à l’absorption UV, la quantification de l’α-tocophérol par CPG-SM implique quelques avantages. Par exemple, la résolution entre les différents composés est supérieure et la largeur des pics est plus faible. Pour ces raisons, cette méthode
T1-2#4600 RT: 19.64 AV: 1 SB: 105 16.85-17.03 , 17.08-17.24Head to Tail MF=903 RMF=903 Vitamin E
40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440
316 330 344 358 372 387
387 414
430
430
T1-2#5134 RT: 21.46 AV: 1 SB: 295 20.84-21.41 , 21.51-21.94Head to Tail MF=891 RMF=892 γ-Sitosterol
40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440
62 permet de déterminer les surfaces des pics plus facilement. La détection par un spectromètre de masse est plus spécifique qu’au moyen d’un spectromètre UV. Cela permet également de comparer les spectres de masse des composés issus de l’échantillon à ceux d’une bibliothèque.
Nos propositions en vue d’améliorer l’analyse de l’α-tocophérol par CPG-SM sont les suivants :
Choix d’un étalon interne chimiquement proche de la substance d’intérêt
Optimiser la concentration de l’étalon interne pour obtenir une réponse du détecteur proche de celle de la substance d’intérêt recherché, tout en tenant compte du volume ajouté, des erreurs de pipetage dues à un volume trop petit. Réaliser une gamme d’étalonnage sur une plage plus petite et avec 5 points. Optimisation des paramètres chromatographiques, par exemple la température du four etc.
Changement de la méthode d’injection (split- /splitless)
63 C RESUME
L’huile d’olive est un aliment important dans le régime méditerranéen. Depuis toujours, sa consommation est attribuée à de nombreux bienfaits. Dans des études diverses, l’huile d’olive a montré une série d’effets bénéfiques sur la santé humaine qui sont liés à sa teneur en
polyphénols et sa composition d’acides gras. L’α-tocophérol, l’isoforme la plus répandue des vitamines E, est d’intérêt particulier, car il est un antioxydant très efficace. Pour cette raison, cette substance peut protéger les tissus physiologiques de dommage par radicaux libres. En outre, l’α-tocophérol peut diminuer le risque de plusieurs maladies de civilisation.
Dans notre recherche, nous avons déterminé la teneur en α-tocophérol dans des huiles d’olives d’origines différentes qui ont été produites selon des méthodes différentes. L’α-tocophérol était extrait par l’acetonitrile et analysé par CLHP-UV. Nous avons utilisé le diphényle comme phase stationnaire et l’acétonitrile comme phase mobile. Pour le dosage, nous avons choisi la méthode d’ajouts dosés. Les résultats, les concentrations d’α-tocophérol, varient de 0,1 à 0,7 mg/ml.
Ensuite, les réactions de photo-oxydation d’α-tocophérol étaient analysées dans les huiles d’olive, en exposant plusieurs échantillons à la lumière.
Finalement, nous avons essayé de transmettre la méthode développée au système de
chromatographie en phase gazeuse couplé à un spectromètre de masse. Cette méthode est à optimiser.
64 D BIBLIOGRAPHIE
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