Choix de température

Tableau K. Effet de température sur la croissance de Chrysonilia sp. (14). Température (°C) 1 0 °C 2 0 °C 3 0 °C 4 0 °C 5 0 °C Temps d’incubation (jours) 1 1,457 2,692 3,928 2 1,944 2 2,246 3,48 5,524 3,394 2,5 3 3,55 5,574 7,201 4,323 3,866 4 5,312 7,705 9 6,203 5,974 5 7,764 10,319 11,75 8,795 7,512 6 9,044 13,283 14,211 10 9,213 7 11,52 15,997 17,765 12,22 11,344 8 12,874 18,034 20,547 14,482 13,676 9 12,113 17,989 20,514 14,423 13,011 10 11,875 17,456 20,498 14,396 12,885

Annexe

99

Tableau L. Effet de température sur l’activité antibactérienne de Chrysonilia sp. (14). Température

Diamètre de la zone d’inhibition (mm) sur les bactéries test

E. coli B. subtilis. S. aureus K.pneumoniae P. mirabilis

10°C - - - - -

20°C 15mm 10mm 10mm 12mm 12mm 30°C 20mm 12mm 11mm 15mm 12mm

40°C - - - - -

50°C - - - - -

Tableau M. Effet de température sur le pH du milieu de production des substances antibactérienne par Chrysonilia sp. (14).

Température (°C) 1 0°C 2 0°C 3 0°C 4 0°C 5 0°C Temps d’incubation (jours) 1 4,93 4,96 4,95 4,89 4,91 2 4,85 4,84 4,81 4,75 4,83 3 4,77 4,77 4,72 4,69 4,76 4 4,69 4,69 4,65 4,6 4,65 5 4,6 4,58 4,55 4,51 4,58 6 4,53 4,5 4,47 4,45 4,47 7 4,45 4,43 4,39 4,33 4,33 8 4,32 4,38 4,33 4,26 4,25 9 4,24 4,31 4,23 4,18 4,17 10 4,1 4,22 4,14 4,07 4,09

Annexe

100

Annexe 8

Tableau O. Cinétique de production de substances antibactériennes par Chrysonilia sp. (14).

Annexe 9

Tableau P. Activité antibactérienne de Chrysonilia sp. (14) sur les bactéries test .

Temps D’incubation (jours) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Bactéries Test E.coli. 0 6 8 10 10 15 20 25 17 14 B.subtilis 0 0 6 8 10 12 12 15 10 8 S.aureus 0 0 6 7 9 10 10 12 7 6 K.pneumoniae 0 6 8 10 12 15 20 22 16 10 P.mirabilis 0 6 6 8 10 14 15 20 13 10 Temps d’incubation (jours) pH Biomasse (g/l) 1 4.82 2.003 2 4.75 3.631 3 4.63 5.854 4 4.5 9.702 5 4.41 13.958 6 4.33 16.47 7 4.19 18.505 8 4.07 20.033 9 4.00 20.020 10 3.94 20.000

Nom : ABDELAZIZ

Prénom : Wided

Thème : Isolement des mycètes à partir de sols sahariens producteurs de substances antibactérienne.

Résumé :

45 souches fongiques ont été isolées à partir des échantillons du sol prélevé de la région de Biskra (Sud Est Algérien) représentant 9 genres : Alternaria, Aspergillus, Botrytis, Chrysonilia, Cladosporium, Fusarium, Penicillium, Rhysopus et Trichoderma.

Le test d’activité antibactérienne des isolats sur les bactéries test : Bacillus subtilis, E. coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis et Staphylococcus aureus a révélé que, Chrysonilia sp.(14)., Aspergillus flavus(9,10,11,21) et Penicillium sp. (17, 23, 37) ont développé une activité antibactérienne très considérable. En effet, Chrysonilia sp.(14) a présenté une zone d’inhibition claire sur toutes les bactéries.

L’étude macroscopique et microscopique a montré que Chrysonilia sp.(14) se développe rapidement (40mm pendant 24h) sur milieu Czapek- Dox et PDA sous forme de filaments denses et septés développant une couleur blanche qui se transforme en couleur orange avec le temps.

Chrysonilia sp.(14) est thermo- résistante par la formation des conidies qui peuvent résister à une température avoisinant les 100°C, comme il peut se développer sur un milieu contenant 100g/L de NaCl.

La recherche d’un milieu de fermentation pour la production de substances antibactériennes par Chrysonilia sp.(14) a révélé que le milieu Czapek-Dox liquide contenant 5 g/L d’extrait de levure, 20 g/ L de saccharose et 15g/L de NaCl permet à la souche d’atteindre sa meilleure sécrétion de ces substances après 8 jours d’incubation statique.

La technique de chromatographie sur colonne et sur couche mince (gel de polyamide) à révélé la présence d’un seul spot après l’élution de l’extrait actif par un mélange chloroforme : méthanol (96 :4 V/V) laissant supposer que les métabolites secondaires de

Chrysonilia sp. (14) sécrétés dans les conditions testées est composé d’un seul type de molécule dont le Rf égale à 0.3.

Mots clés : Mycètes, Chrysonilia, sol des zones arides, Substances antibactériennes, CCM .

Laboratoire de recherche : Laboratoire de Génie Microbiologique et Applications,

Département des Sciences de la Nature et de la Vie. Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie. Université Mentouri de Constantine.

Membres de jury :

Présidente : Mme MERAIHI Z. Prof. Univ. Mentouri, Constantine Rapporteur : Mr. KACEM CHAOUCHE N. M.C. Univ. Mentouri, Constantine Examinateurs : Mr. LAROUS L. Prof. Univ. Ferhat Abbas, Sétif Mr. DEHIMAT L. M.C. Univ. Mentouri, Constantine

Sommaire

1-Introduction…

2-Revue bibliographique

2.2- Conditions de culture des mycètes………....4

• Macroéléments………..4

• Micro-éléments……….5 2.3- Ascomycètes et Chrysonilia……….5 2..3- Chrysonilia……….…..6

2.4-Sol……….…7

2..4.1-Généralité sur le sol………..7 2.4.2-Cractéristiques du sol aride ………..8 2.4.2.1- Zones arides en Algérie………...10 2.4.3-Sol et les mycètes………10

2.5- Milieux extrême et le monde vivant……….………..12

2.5.1-Tolérance des mycètes aux milieux extrême………..………….………...12 2.3.2-Tolérance des mycètes Salinité ………...14 2.3.2.2- Tolérance des mycètes à la Température……….16 2.3.2.3- Tolérance des mycètes à la Sécheresse…..….……….16

2.6-Métabolites secondaires……….………..17

2.6.1-Mycotoxines………18 2.6.2-Antibiotiques………...20 2.6.3-Mecanismes d’action des substances antibactériennes………...……….21

2.7- Méthodes de séparation et identification des métabolites secondaires…………..….21

3-Matériels et Méthodes

3.2.1-Donnée climatique………..………24 3.2.2-Etude pédologique………..……….25

3.3-Etude mycologique………25

3.3.1-Isolement des mycètes……….25 3.3.2-Purification des mycètes………..26 3.3.3-Identification des isolats………..26 3.3.4-Selection des souches productrices antibactérienne………27

3.4.-Etude de l’isolat sélectionnée………..27

3.4.1-Choix du milieu de développement et étude macroscopique et microscopique…...…27 3.4.2-Tolérance à la salinité………...………...28 3.4.3-Tolérance à la température élevée……… ………..28

3.5-Facteurs influençant la production des substances antibactériennes pat l’isolat ….28

3.5.1-Choix de source de carbone……….28 3.5.2-Choix de source d’azote………..29

1. Biomasse………..30

2. pH……….30

3. Activité antibactérienne………30 3.5.3-Choix de pH………....30 3.5.4-Choix de Température de développement …….……….30 3.5.5-Choix des concentrations des sources de carbone et d’azote ……….31

3.6-Cénitique de production des substances antibactériennes par l’isolat………..32 3.7-Extraction et séparation de substances antibactériennes………..32

3.7.1-Préparation de l’échantillon……….32 3.7.2- Extraction ……….……..32 3.7.3-Fractionnement sur colonne………..…...33 3.7.4-Séparation sur Chromatographie sur couche mince………33

4-Résultats………35

4.1- Etude climatologique et pédologique des sites………...35

4.1.1-Etude climatologique……….35 4.12-Etude pédologique……….………..36

4.2-Etude mycologique………37

4.2.1-Isolement et identification des mycètes………...37 4.2.2-Sélection des souches productrices des substances antibactérienne ……….…39

4.3-Etude de la souche sélectionnée………...………44

4.3.1-Choix du milieu de développement et étude macroscopique………..44 4.3.2-Etude microscopique………...………46 4.3.3-Tolérance à la salinité………..48 4.3.4-Tlérance à la température………49

4.4-Facteurs influençant la production des substances antibactérienne par Chrysonilia sp.(14)………...………49

4.4.1- Choix de source de carbone……….………...49 4.4.2- Choix de source d’azote………..52 4.4.3.- choix de pH………..…….55 4.4.4- Choix de Température de développement………...……….57 4.4.5- Choix des concentrations de source de carbone et d’azote………..59

4.5-Cinétique de production des substances antibactériennes par Chrysonilia sp. (14)………60 4.6-Extraction et séparation des métabolites secondaires de Chrysonilia sp.(14)……...62

5-Discussion………..……….65

6-Conclusion générale et perspectives ………...73

7-Summary………75

8-ﺺﺨﻠﻤﻟا………...76

9-Référence………89

10-Annexe………...90

-Remerciement-

Ce travail a été effectué au sein du laboratoire de génie microbiologique et applications. Laboratoire de mycologie appliquée. Université Mentouri Constantine, sous la direction de Monsieur le maître de conférence KACEM-CHAOUCHE. N. Sa compétence scientifique, sa gentillesse et ses précieux conseils m’ont permis de le mener à bien, qu’il veuille bien trouver ici ma profonde reconnaissance.

Je remercie également madame le professeur Z.MERAIHI, d’avoir bien voulu accepter de présider ce jury, qu’elle ici le témoignage de ma gratitude

Mes plus vifs remerciements vont à monsieur le maître de conférence L. DEHIMAT d’avoir voulu accepter de participer à ce jury. Je suis particulièrement heureuse de bénéficier de ses critiques et je lui exprime ma profonde considération.

Je suis également très honorée de la présence de ce jury de monsieur L.LAROUS Professeur à l’université de Sétif.

Mes remerciements s’adresse également à Madame KACEM-CHAOUCHE Akila pour son aide, son soutien, sa sympathie et ses encouragements.

Je tiens remercies très vivement le Monsieur Y. BENHYZIA et sa femme HAYATE pour ses encouragement amicaux, sa sympathie et ses service rendu.

Je remercie mon amie BOUZIANE Zahira qui ma beaucoup aidé dans mes démarche au sein de laboratoire et Monsieur A. ZIADA pour son aide et les services rendu.

Mes remerciements vont également à tous mes amis, mes camarades de promotion et à toutes les personnes qui ont attribué à la réalisation de ce mémoire.

Je ne pourrai terminer ces remerciements sans y associer ma famille pour leur soutien moral et physique, sans eux je n’aurais pu entreprendre mes études et ma recherche.

République Algérienne Démocratique et Populaire