CD226 est nécessaire à la transduction du signal TCR des LT CD8 +

CD8

CD226 contient dans sa partie cytoplasmique deux sites putatifs de phosphorylation impliqués dans la transduction du signal issu de son engagement, la sérine 329 ( S329 chez l’Homme, S326 chez la souris) et la tyrosine 322 (Y322 chez l’Homme, Y319 chez la souris)(A. Shibuya, Lanier, and Phillips 1998). Bien qu’il ait été démontré que la phosphorylation de la sérine 329 par la PKC soit impliqué dans la liaison de CD226 à ses ligands exprimés par les cellules cibles (A. Shibuya, Lanier, and Phillips 1998), son rôle dans la transduction d’un signal activateur reste encore controversé (A. Shibuya, Lanier, and Phillips 1998; Z. Zhang et al. 2015). Conformément aux travaux initiaux ayant indiqué que la stimulation de CD226 conduit à la phosphorylation d’une tyrosine cytoplasmique (A. Shibuya et al. 1996), il a été démontré que la tyrosine cytoplasmique Y322 du motif consensus ITT-like YVNY est nécessaire à l’activation des fonctions cytolytiques des cellules NK dont CD226 est engagé (Z. Zhang et al. 2015). La tyrosine et l’asparagine du motif ITT-like YVNY sont deux acides aminés majeurs qui constituent un site d’ancrage de la sous-unité SH2 de la protéine adaptatrice Grb2. Grb2 recrute par la suite les protéines PI3K, Vav-1 et la PLC-γ impliquées dans l’activation de Erk et d’Akt ainsi que dans l’augmentation du flux calcique intracellulaire (Z. Zhang et al. 2015). Une étude plus récente a par ailleurs confirmé que la costimulation de CD226 amplifie la transduction du signal TCR via l’association entre CD226 et Vav-1 au sein de LT CD4+ activés (Gaud et al. 2018).

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Au vu de nos résultats qui indiquent que les LTEM CD8+ CD226- ont un défaut de phosphorylation de Erk et d’Akt ainsi qu’un faible signal calcique en réponse à la stimulation du TCR, CD226 semble donc jouer un rôle majeur dans l’optimisation de la transduction du signal TCR. Par ailleurs, la similitude du domaine cytoplasmique de CD226 et de celui de CD28 YMNM tend à confirmer que les protéines impliquées dans leurs voies de signalisation sont identiques. Ainsi, on suggère fortement qu’au sein des LT CD8+ _{activés par le TCR, CD226 costimule le signal TCR} en augmentant l’activation de la PLC-γ et de la PI3K à l’origine de l’activation des facteurs de transcription NFAT et NFκB. De façon similaire à CD28, on peut donc imaginer que CD226 diminue le seuil d’activation du TCR en régulant positivement la voie de signalisation de l’IL-2, à la fois en augmentant l’expression de CD25 et en augmentant la production d’IL-2. Cette hypothèse semble être confortée par nos résultats qui indiquent que les LTEM CD8+ CD226- activés ont un défaut d’expression de

CD25 ( résultats non montrés) et qu’ils sécrètent très peu d’IL-2 à l’origine de leur faible prolifération. Tandis que CD28 est nécessaire à l’activation et l’expansion clonale des LT CD8+ _{naïfs (Acuto and Michel}

2003), CD226 pourrait représenter le récepteur coactivateur majeur des LT CD8+ _{effecteurs nécessaire à}

leur activation par le TCR.

Les transductions de lymphocytes T avec des lentivirus codant pour la forme sauvage ou des formes mutées de CD226 ( Y322F et S329F) réalisées au laboratoire nous permettront de caractériser davantage les rôles respectifs de la sérine 329 et de la tyrosine 322 de CD226 dans le signal TCR et les fonctions effectrices des LT. Par ailleurs, elles nous permettront d’évaluer par immunoprécipitation les différents partenaires protéiques de CD226 et si la sérine 329 et de la tyrosine 322 sont impliqués dans ces interactions.

De nombreux travaux ont indiqué que le signal TCR est amplifié et maintenu via la formation de microclusters membranaires comprenant de nombreuses protéines impliquées dans la transduction du signal dont ZAP-70, LAT et SLP-76 (Sherman et al. 2011). Il a notamment été observé que SLP-76 initialement situé en périphérie des microclusters de TCR s’associe à LAT via un mécanisme de polymérisation dynamique de l’actine afin de former des nanostructures nécessaires à l’activation des lymphocytes T par le TCR (Sherman et al. 2011). L’inhibition de la formation de ces nanostructures est en effet corrélée à une motilité réduite de SLP-76 et à une hyporéponse à la stimulation du TCR, conduisant à une diminution du flux calcique intracellulaire et à un défaut d’activation de NFAT (Bunnell et al. 2006; Sherman et al. 2011).

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Au vu du rôle majeur du cytosquelette d’actine dans la formation d’une synapse immunologique mature (Dustin and Cooper 2000) et de son association avec CD226 au sein des LT stimulés par le TCR (Ralston et al. 2004), on peut suggérer que CD226 est une protéine adaptatrice impliquée dans la réorganisation spatiale des molécules de signalisation au niveau de la synapse des LT CD8+_{. Des travaux ont notamment suggéré que les protéines WASP et Nck liant le cytosquelette} d’actine et SLP-76 en périphérie de la synapse jouent un rôle majeur dans les réactions de polymérisation-dépolymérisation de l’actine impliquées dans la relocalisation des protéines de la voie de signalisation du TCR (Barda-Saad et al. 2005). La localisation de LFA-1 en périphérie de la synapse immunologique (Grakoui et al. 1999) et son association avec CD226 dans les LT activés (K. Shibuya et al. 1999) tend à suggérer que de façon similaire à WASP, CD226 est impliqué dans le recrutement des protéines de signalisation situées en périphérique via la polymérisation de l’actine au niveau des microclusters de TCR plus centraux.

Ces hypothèses sont en accord avec une étude plus récente qui indique que des structures riches en intégrine situées en périphérie des microclusters de TCR sont nécessaires aux fonctions effectrices des lymphocytes T stimulés par le TCR (Hashimoto-Tane et al. 2016). Le défaut de phosphorylation de ZAP-70, LAT et SLP-76 au sein des LT CD8+ _CD226- _{activés par le} TCR pourrait donc indiquer que CD226 recrute ces protéines au niveau du TCR afin de favoriser leur activation et transduire le signal.