Un an auparavant, c’est-à-dire depuis la rentrée académique 2003-2004, la première promotion d’étudiants de l’EPAC a dû effectuer sa rentrée en 1ère année préparatoire dans le Secteur Industriel, et ce malgré toutes les difficultés inhérentes à toute entreprise humaine. Elle est actuellement dirigée par le Professeur Félicien AVLESSI.
2-1-2 Cadre technique
2-1-2-1 Situation géographique
La Clinique Coopérative de Calavi est situé dans l’Arrondissement Central de la Commune de Calavi. Elle est située en bordure de la route Inter- Etat Cotonou- Bohicon à gauche en quittant Cotonou pour Bohicon à Trois cent mètres (300m) de la Mairie d’Abomey-Calavi juste avant la pharmacie Château d’Eau en face de l’agence DIAMOND BANK de Calavi.
2-1-2-2 Structure de la Clinique Coopérative de Santé de Calavi
La Clinique Coopérative de Santé de Calavi met au service de la population depuis 25ans des soins dans les domaines suivants : Médecine Générale et Spécialités Médicales Ŕ Pédiatrie- Chirurgie Générale et de Spécialités chirurgicales- Clinique de Gynécologie & d’Obstétrique- Ophtalmologie- Dermatologie- Oto Rhino Laryngologique (ORL)- Imagerie Médicale (Echographie)- Cardiologie- Psychologie- Service d’Aide Médicale à Domicile (SAMAD), un service instauré pour permettre à la Clinique d’être plus proche des usagers- Laboratoire d’Analyses Biomédicales- Pharmacie- Bloc Opératoire- Célioscopie.
Présentation du laboratoire
Le laboratoire comporte trois salles. La première qui est la plus grande sert aux prélèvements et à toutes les manipulations. La seconde quant à elle constitue la douche. La dernière est la salle de garde. Elle contient un ordinateur pour les différentes recherches ou saisies.
Fonctionnement du laboratoire
Le Laboratoire dispose de sept (07) agents : - Cinq(05) biotechnologistes
- Deux (02) aides- biotechnologistes.
Ces agents travaillent sous la coordination d’un responsable. Les techniciens réalisent les examens sur le sang, les selles, les urines, le sperme et autres. Les prélèvements de sang se font tous les jours ouvrables 24 heures/24. Les examens sont réalisés suivant différentes sections.
En Hématologie & Immuno-Hématologie
Nous avons comme examens : NFS (Numération Formule Sanguine), TE (Test d’Emmel), TS (Temps de Saignement), TC (Temps de Coagulation), GS-Rh (Groupe Sanguin-GS-Rhésus), VS (Vitesse de Sédimentation).
En Bactériologie & Parasitologie Calcémie, la Magnésémie, l’Uricémie, la Protidémie, les Triglycérides, les
Transaminases (TGO-TGP), le Cholestérol (Total et HDL), la Bilirubine, l’Ionogramme.
En Sérologie
Comme examens, nous avons : TPHA (Tréponéma Pallidum Haemaglutination Assay), CRP (Protéine C-Réactive), SDW (Sérodiagnostic de Widal et Félix), AgHBs (AntigèneHBs), VIH (Virus Immunodéficience Humain), ASLO (Anticorps anti-Streptolysine O).
En outre, il parait utile de signaler que le laboratoire fonctionne 24h/24 avec une permanence assurée de huit (08) heures à seize (16) heures par certains biotechnologistes qui s’occupent à faire tous les examens cités ; une garde de seize (16) heures à huit (08) heures par d’autres biotechnologistes.
2-2 Matériel d’étude
2-2-1 Matériel de prélèvement
Les prélèvements ont été veineux et capillaires.
Matériel commun pour les deux types de prélèvement :
Un plateau de prélèvement- Du coton hydrophile- Une pissette d’alcool iodé à 60°- Une pissette d’alcool simple à 90°- Un garrot- Une boîte de sécurité- Des gants - Un marqueur- Un stylo.
Matériel spécifique pour le prélèvement veineux :
Des aiguilles avec corps vacutainer- Des tubes à anticoagulant EDTA- Un portoir.
Matériel spécifique pour le prélèvement capillaire : Lancette stérile.
2-2-2 Matériel de coloration et observation
Microscope optique réglable de grandissement- Lames porte- objets bien dégraissées- Lamelles- Bac de coloration- Râtelier à lames- Minuterie-
Compteur- Compresse- Mindray BC-2800- Mindray BC-5200. chez les 273 malades admis dans l’hôpital de la Clinique Coopérative de Santé de Calavi.
Prélèvement
Prélèvement veineux
- Apprêté le matériel de prélèvement
- Identifier le tube de prélèvement (nom, prénoms, examen à effectuer, n° d’identification)
- Installer le patient
- Plier la manche de sa chemise (si nécessaire) - Placer le garrot au niveau de l’avant bras - Rechercher et choisir la veine à ponctionner
- Faire un tampon d’alcool iodé, puis désinfecter correctement la
partie de la peau où on désire faire la ponction
- Déposer le tampon d’alcool utilisé dans le plateau
- Sortir l’aiguille de son emballage et l’adopter au tube de prélèvement
- Retirer le couvercle de protection de l’aiguille, et le déposer sur la table de prélèvement, puis sans attendre 5s au plus, réaliser la ponction
- Recueillir la quantité de sang suffisante à l’analyse qu’on désire effectuer
- Retirer le garrot
- Placer le tampon de coton au niveau de la partie ponctionnée
- Retirer délicatement l’aiguille et appuyer fortement le tampon sur la partie ponctionnée avec le pouce de la main libre
- Demander ensuite au patient d’appuyer à son tour sur le tampon - Déposer l’aiguille sur la table de prélèvement et boucher rapidement le tube de prélèvement avec le bouchon
- Homogénéiser aussitôt le prélèvement par retournement successif jusqu’à dilution complète de l’anticoagulant
- Déposer l’échantillon dans le portoir
- Prélever un petit tampon d’alcool simple et le remplacer par le précédant tampon d’alcool iodé
- Garder ce dernier tampon jusqu’à l’arrêt du saignement - Mettre un pansement si nécessaire
- Libérer le patient
- Remettre l’aiguille dans son couvercle en le prenant par le biseau - Jeter les déchets (aiguilles, tampon…) dans la boîte de sécurité.
Prélèvement capillaire
Faire une goutte épaisse en utilisant la méthode suivante :
Après avoir installé le patient, choisir le doigt à piquer entre le 3ème et le 4ème de la main gauche ;
Désinfecter le bout du doigt avec un tampon d’alcool ;
Piquer d’un coup sec et rapide ;
Presser doucement et nettoyer les premières gouttes ;
Recueillir 2 gouttes au milieu de la lame ;
Faire l’étalement de la goutte épaisse ;
Laisser sécher la goutte épaisse. réaliserons le prélèvement capillaire afin d’en confectionner une seconde lame (Frottis et GE).
Phase Analytique
Technique
Le frottis sanguin est réalisé sur la même lame que la goutte épaisse. Pour ce faire :
- Nettoyer les lames déjà trempées dans le mélange alcool+éther
- Déposer deux(02) gouttes de sang à l’une des extrémités d’une lame, une pour le frottis sanguin et l’autre pour la goutte épaisse
- Tenir la lame d’une main entre le pouce et l’index de façon à ce qu’elle fasse un angle de 30° à 45° avec la paillasse
- Amener la lamelle au contact de la deuxième goutte de sang sans y faire pénétrer
- Laisser le sang s’étalé le long de la lame
- D’un geste franc et net, tirer la lamelle vers l’autre extrémité de la lame horizontale
- A l’aide du coin de la lamelle, effectuer un mouvement circulaire et centrifuge dans la première goutte de sang pendant environ 30 à 45 secondes pour avoir une tache arrondie de 1 à 1,5cm de diamètre
- Laisser sécher à plat à l’air
- Inscrire au crayon le numéro de l’échantillon.
2-3-3 Coloration des lames
Elle comprend plusieurs phases :
- Fixer le frottis sanguin en le trempant quelques secondes dans un bocal contenant du méthanol
- Laisser reposer pour le séchage
- Déshémoglobiniser la goutte épaisse en la trempant dans un bocal contenant d’eau de possotomé
- Laisser reposer pour son séchage tout en s’assurant à l’avance que la goutte épaisse soit bien déshémoglobinisé
- Disposer les lames confectionnées sur les baguettes du bac de coloration - Recouvrir les lames de la solution de GIEMSA dilué au1/10 soit 5mL de la
solution mère de GIEMSA pour 45mL d’eau de possotomé
- Laisser agir pendant 15 minutes - Rincer à l’eau de robinet
- Sécher
- Passer à la lecture au microscope à l’objectif 100.
2-3-4 Lecture des lames
Après coloration et séchage, nous verrons ainsi deux lames : une première lame ou la goutte épaisse est réalisée là-dessus et une seconde lame ou le frottis sanguin est réalisé. La lecture est faite à l’objectif 100X à l’aide d’une goutte d’huile à immersion. Nous passons au calcul de la densité parasitaire (DP).
COMPTAGE
Cas négatif
Compter au moins 500 globules blancs plus 100 champs ou observer toute la lame avant de la déclarer négative
Cas positif
- Compter jusqu’à 200 leucocytes si parasites ≥ 100 et calculer la densité parasitaire
- Si parasite < 100, compter jusqu’à 500 leucocytes avant de calculer la densité parasitaire
Calcul sur la Goutte épaisse
Si on a la valeur du globule blanc du patient, remplacer les 6000 par cette valeur selon l’OMS.
Cas fortement positif
- Diviser le champ en 4 et compter les parasites dans le ¼ du champ
- Compter les globules blancs dans tout le champ. Répéter la même chose dans 10 champs
- Puis calculer la densité parasitaire
Avec :
6000 : Le nombre de leucocytes par µL de sang
Y : Le nombre de plasmodies comptées
X : Le nombre de leucocytes comptés Calcul sur le Frottis Sanguin
Avec :
200 : Le nombre moyen d’hématies ou GR par champ
4000000 : Le nombre moyen d’hématies par µL de sang
Y : Le nombre d’hématies parasitées comptées
X : Le nombre de champs examinés
Phase Post-analytique - Enregistrer les résultats
- Nettoyer l’objectif à immersion (100X) avec un linge non pelucheux - Ranger le matériel et les réactifs
- Ranger les lames lues - Nettoyer la paillasse - Se laver les mains.
3-1 RESULTATS
Au cours de la période d’étude, 273 patients ont fait l’objet d’une recherche de Plasmodium dans le sang capillaire et veineux.
Figure 7 : Répartition par sexe des sujets examinés
La présente étude a impliqué 53,11% (145/273) de sujets de sexe féminin contre 46,89% (128/273) de sexe masculin ; soit un sex-ratio (M/F) de 0,88.
Les tableaux I, II, III et IV présentent respectivement la répartition des patients en fonction de l’âge et la répartition des patients en fonction du sexe.