Adressage ciblé de nanocomplexes CPP/oligonucléotide

La stratégie de transfert des acides nucléiques par les peptides présente plusieurs avantages tels que la facilité de synthèse, la faible immunogénicité, la biocompatibilité et la biodégradabilité in vivo. Pourtant le manque de spécificité d’adressage cellulaire pourrait limiter leur utilisation in vivo en raison de la toxicité qui pourrait être exercée sur certains tissus et la diminution de la biodisponibilité pour le tissu cible à cause de la dilution de l’effet des nanocomplexes dans l’ensemble des tissus et cellules qui leurs sont accessibles 271. Une solution face à ce problème consiste soit à concevoir des CPPs conjugués à des ligands qui favorisent des interactions spécifiques avec les cellules ou tissus cibles, soit à utiliser la stratégie de pro-médicament où le CPP modifié est activé par les conditions environnementales (Enzymes, pH, etc.) du tissu ciblé.

Pour avoir un ciblage très spécifique, il est possible de conjuguer l'acide nucléique ou son vecteur à un ligand comme un peptide qui reconnait sélectivement un récepteur à la surface cellulaire. Idéalement, il faut cibler un récepteur qui possède plusieurs caractéristiques : être exprimé essentiellement dans un seul tissu et à haut niveau, être rapidement et efficacement internalisé et enfin disposer de ligands de haute affinité. Pour finir, il est important que le récepteur ciblé par le CPP soit co-exprimé simultanément avec le gène intérêt en particulier si l’objectif est modifier l’épissage ou l’expression du gène.

Compte tenu du grand nombre de CPPs identifiés à ce jour ainsi que le grand nombre de cellules et de tissus à transduire, il est impossible de donner un résumé complet de tous les

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véhicules peptidiques bifonctionnels désignés jusqu’à présent. Nous allons donc citer brièvement quelques exemples intéressants de CPP R9 en conjugaison covalente avec des peptides ou un anticorps spécifiques à certains tissus pour qui les testes d’efficacité de transfert d’acide nucléique ont été effectués in vivo.

1-Dans une approche très intéressante, Kumar et al ont utilisé un peptide dérivé d’une glycoprotéine du virus de la rage (RVG, Rabies Virus Glycoprotein) qui permet une administration ciblée à travers la barrière hémato-encéphalique pour atteindre le cerveau. Ce peptide de 29 acides aminés reconnait spécifiquement le récepteur de l'acétylcholine exprimé par des cellules neuronales. Pour permettre la formation d'un nanocomplexe avec un siRNA ciblant le gène murin codant la Cu/Zn superoxyde dismutase (SOD-1), ils ont, en outre, synthétisé un peptide chimérique composé de la partie RVG et une partie CPP de type R9 (oligo-D-arginine). Ces nanocomplexes RVG-R9/siRNA ont démontré une excellente aptitude à induire l’inhibition de l’expression du gène dans le cerveau lors d'une administration systémique et par conséquent la protection des souris contre l'encéphalite virale mortelle. En plus, l'administration répétée de nanocomplexes RVG-R9/siRNA n'a pas induit des cytokines inflammatoires ou des anticorps anti-peptidiques272.

2-Dans une étude ultérieure, Kumar et al ont utilisé un anticorps spécifique anti-CD7, présent à la surface des lymphocytes T, lié à un CPP R9. Dans plusieurs études de distribution systémique effectuées dans un modèle murin humanisé d’HIV, ils ont montré comment le nanocomplexe formé avec des siRNAs ciblant différents gènes importants pour l'infection par le HIV étaient capable de contrôler la réplication virale, d’empêcher la perte des cellules T associées à l'infection par le HIV et de réprimer activement la virémie chez les souris humanisées infectées 273.

3- Gong C et al ont exploré une approche d’adressage des acides nucléiques dans les cellules neuronales. Ils ont désigné un peptide bifonctionnel RVG-R9 avec quatre résidus d’histidine en tant que spacer entre le CPP 9R et le peptide RVG. Ils ont injecté le nanocomplexe RVG- R9/pGL3 chez les souris via la veine de la queue et ont mesuré dans de nombreux tissus l’expression de pGL3 à 24h, 48 H, 72 H et 120 H après l’injection de nanocomplexes. L'expression de luciférase médiée par le nanocomplexe RVG-9R/pGL3 dans le cerveau a atteint son niveau maximum à 72 H et elle a été environ 3 fois plus élevée par rapport à celle du groupe de témoin (Plasmide pGL3 nu) 274.

4-Young-Wook Won et al 275 ont développé une méthode thérapeutique sûre pour régresser et traiter l'obésité ainsi que les syndromes métaboliques induits par l'obésité, dans un model murin, en ciblant la prohibitine qui est une protéine exprimée principalement dans la

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membrane interne de mitochondrie et le cytoplasme, mais est déplacée vers la membrane cellulaire et le noyau dans des cellules adipocytaires différenciées. Les auteurs ont couplé un peptide court appelé "Adipocyte-Targeting Sequence" avec un CPP R9 (ATS-R9) ciblant la prohibitine pour transfecter sélectivement les adipocytes matures.

Le FABP4 (Fatty-Acid-Binding Protein 4) est un chaperon clé dans l'absorption des acides gras et du stockage des lipides dans les adipocytes. Ils ont donc adressé de façon spécifique un shRNA inhibant l’expression de FABP4 via le peptide bifonctionnel ATS-R9 dans les adipocytes matures. Le traitement des souris obèses avec le nanocomplexe ATS-R 9/shFABP4 a entrainé la régression du syndrome métabolique et la diminution du poids corporel (>20%).

5-Dans un autre travail effectué par Young-Wook Won et al, le polymer cystamine bisacrylamide-diaminohexane (CD) a été modifié par les peptides D-9-arginine et IMTP ciblant le myocarde ischémique. IMTP-CD-R9 peut donc se localiser au myocarde ischémique et a une efficacité de transfection améliorée due à la présence de 9R. Les auteurs ont observé une localisation élevée d’IMTP-CD-R9/pSV-Luci dans la zone ischémique du ventricule gauche d'un modèle de rat d'ischémie/reperfusion (I/R) lors d’une administration systémique 276.

6-Dans l’objectif de trouver un traitement pour les leucémies humaines, un immuno- nanoplexe composé d’un anticorps anti JL1, un épitope de domaine extracellulaire de CD43 humain qui est exprimé dans les cellules des leucémies aiguës myéloïdes et lymphoïdes mais pas dans les tissus sains a été développé par l’équipe Lee YK. Cette équipe a montré que l’immuno-nanoplexe anti-JL1-R9/siRNA cible efficacement les cellules leucémiques positives pour JL1 inoculés dans la moelle osseuse de souris 277.