Observation de spores de Gloméromycètes

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• différents échantillons de racines

• colorant : bleu coton

• lames lamelles, microscope

• pinces fines

• scalpel

• pipettes

• verres de montre

Ø prélevez une petite racine dans le cœur de la motte : les plus jeunes, coupez 1 à 2 cm Ø rincez-la à l’eau distillée

Ø placez-la quelques minutes dans le bleu coton (verre de montre) Ø rincez soigneusement (verreS de montre)

Ø montez, dans une goutte d’eau entre lame et lamelle Ø observez, choisir le grossissement pertinent

Ø (photographiez, titrez, légendez)

Ø Pour les orchidées, il faut au préalable réaliser une coupe transversale, la plus fine possible, de la racine

Le bleu coton marque le champignon mycorhizien, présent dans tout le parenchyme cortical, sans jamais entrer dans le cylindre central. On distingue (fig. 1) des arbuscules à l’intérieur de certaines cellules racinaires et des vésicules entre les cellules (souvent, une goutte lipidique dedans : c’est une struc- ture de réserve pour le champignon). On voit parfois aussi des hyphes externes, qui ne sont jamais cloisonnés. Il s’agit donc d’une endomycorhize à arbuscules.

Si les arbuscules paraissent nuageux (à la limite, une vague couleur bleue dans la cellule), c’est qu’ils sont trop lysés (détruits, abimés)

Analysez vos observations en utilisant le doc

En 3D :

Des photos :

et des vésicules entre les cellules (souvent, une goutte lipidique dedans : c’est une struc- ture de réserve pour le champignon). On voit parfois aussi des hyphes externes, qui ne sont jamais cloisonnés. Il s’agit donc d’une endomycorhize à arbuscules.

Si les arbuscules paraissent nuageux (à la limite, une vague couleur bleue dans la cellule), c’est qu’ils sont trop lysés : diminuer le temps de décoloration. Une colo- ration directe peut être essayée sur les racines très claires.

Observation de spores de Gloméromycètes

Les spores sont, avec les hyphes externes des racines, les structures qui vont per- mettre l’infection des nouvelles racines. Ces spores sont très grosses (une centaine de microns), car bourrées de réserves qui assureront une germination et une coloni- sation précoce de la racine en autonomie trophique. Elles peuvent donc être récupé- rées par tamisage, puis observées à la loupe binoculaire.

Biologie Géologie n° 4-2010 3

1. Résultat standard de la coloration d’endomycorhizes

a) vue d’ensemble ; b) détail avec arbuscules et vésicule ; c) très bonne vue de détail d’un arbuscule dans une cellule végétale, la barre mesurant 50 µm (cliché c : J. Dexheimer)