Etude de co-infections virales IDV et BCoV dans le cadre des bronchopneumonies infectieuses chez le bovin.

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Submitted on 24 Sep 2020

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Etude de co-infections virales IDV et BCoV dans le cadre des bronchopneumonies infectieuses chez le bovin.

Adrien Lion, Elias Salem, Julie Cournet, Justine Oliva, Mariette Ducatez, Gilles Meyer

To cite this version:

Adrien Lion, Elias Salem, Julie Cournet, Justine Oliva, Mariette Ducatez, et al.. Etude de co-infections virales IDV et BCoV dans le cadre des bronchopneumonies infectieuses chez le bovin.. 21. Journées Francophones de Virologie, Mar 2019, Lyon, France. 2019. �hal-02947553�

Adrien Lion ¹ , Elias Salem ¹ , Julie Cournet-Brousseau ¹ , Justine Oliva ¹ , Mariette Ducatez ¹ , Gilles Meyer ¹

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UMR1225 Interactions hôtes-agents pathogènes, École Nationale Vétérinaire de Toulouse - ENVT, Institut National de la Recherche Agronomique - INRA, Toulouse, France Contact: a.lion@envt.fr

Etude de co-infections virales IDV et BCoV dans le cadre des bronchopneumonies infectieuses chez le bovin

Introduction: La fréquence des affections respiratoires, principalement les bronchopneumonies infectieuses (BPI), et leur impact économique représentent un obstacle majeur dans l’élevage des jeunes bovins. Le plus souvent, ces affections sont multifactorielles et font intervenir d'une part des agents pathogènes (virus et bactéries), et d'autre part des facteurs liés à l'animal, à l'environnement et à la conduite d’élevage. Le virus respiratoire syncytial bovin (BRSV) et Mannheimia haemolytica sont les agents pathogènes les plus fréquemment associés à la BPI. Les prévalences de Mycoplasma bovis, de Pasteurella multocida et du coronavirus bovin (BCoV) sont également très élevées, mais leur rôle dans la BPI est plus controversé. La découverte récente du virus infuenza D (IDV) suggère que ce virus pourrait aussi participer aux BPI. Peu d’études décrivent, chez les bovins, les effets d'une association entre deux virus, comme BCoV et IDV, qui partagent pourtant le même tropisme tissulaire et cellulaire, sur les BPI. Individuellement, des infections expérimentales ont montré que IDV et BCoV induisent une symptomatologie modérée chez les veaux. Notre hypothèse est que l'apparition et la sévérité des BPI pourraient être accentuées par des co-infections virales comme IDV et BCoV. Pour répondre à cette hypothèse nous avons eu pour objectif de caractériser la réplication virale en culture cellulaire (in vitro) et organotypique (ex vivo) bovines mono ou co-infectées par IDV et BCoV.

Lobe cr ânial Lobe access oir e

Fig 1: Cinétique de réplication virale sur cellules mono et co-infectées par IDV et BCoV.

Les cellules ont été infectées par le virus D/bovine/France/5920 et/ou par le virus BCoV/Bovine/France/9822/2015 à MOI de 0,001 en présence de trypsine TPCK. Les titres viraux ont été déterminés, à partir des surnageants des cinétiques, par TCID

sur cellules ST. (A) La lecture de l’effet cytophatique (ECP) a révélé uniquement le titre viral de BCoV. (B) Un test d’hémagglutination (HA) avec hématies de poulet a confirmé le titre de BCoV et a permis de mesurer celui de IDV.

Résultats:

Fig 2 : Préparation et mise en culture de PCLS (Precision-cut lung slices) bovins.

Le poumon droit d’une vache Normande a été récupéré après autopsie de routine.

Plusieurs lavages avec du PBS contenant des antibiotiques ont été effectués.

Les lobes crânial droit et accessoire ont été solidifiés sur glace avec du milieu RPMI contenant antibiotiques et 2% d’agarose LMP.

Des inserts de tissu, d’un diamètre de 8mm, ont été découpés en fines coupes de 200 µm à l’aide d’un Krumdieck tissu slicer.

Des lavages successifs dans une étuve à 37°C avec du milieu RPIM additionné de SVF et antibiotiques ont permis d’éliminer l’agarose. Un dernier lavage a été réalisé 24h après incubation à 37°C et 5% de CO

.

Fig 3: Viabilité de PCLS bovins après 72h d’incubation.

Marquage au 7-AAD (7-Aminoactinomycin D) et mesure de la viabilité cellulaire par cytométrie en flux de PCLS issus des lobes crânial droit et accessoire.

Fig 3: Cinétique de réplication

virale sur PCLS mono et co-infectés par IDV et BCoV

Les PCLS ont été infectés pendant 120h avec 10

TCID

de virus D/bovine/France/5920 et/ou de virus BCoV/Bovine/France/9822/2015. Les titres viraux des PCLS infectés ont été déterminer par TCID

sur cellules ST.

(A) Le titre viral de BCoV a été mesuré par la lecture de l’ECP. (B) Les titres viraux de IDV et BCoV ont été révélés par un test HA avec hématies de poulet.

Conclusion:

 IDV se réplique dans les différents systèmes cellulaires et sur PCLS bovins

 BCoV se réplique uniquement sur cellules hRT18-G, ST et MDBK

 La co-infection semble favoriser la réplication de IDV à défaut de BCoV

Perspectives:

 Confirmation des charges virales par qRT-PCR

 Cinétiques avec d’autres souches virales

 Cinétiques de co-infections décalées dans le temps

Titr e (log

(T CID50/ml)) Titr e (log

(T CID50 /ml))

Temps (heures après infection)

hRT-18G

(human rectal cancer cell line)

hRT-18G

ST

(swine testicular cell line)

ST

MDBK

(Madin-Darby bovine kidney cell line)

MDBK

BT

(bovine turbinate cell line)

BT

KOP-R

(bovine esophagus cell line)

KOP-R

Titr e (log

(T CID50 /ml)) Titr e (log

(T CID50 /ml))

Jours post-infection Lobe crânial

Lobe crânial

Lobe accessoire

Lobe accessoire