(B) Etude de l’interaction entre différents mutants RCXMyT1 et mCtBP2 : Le triple mutant "8&#34

45 - - 30

- - 15

- - 0- 30

- - 15

- - 0-

0 1 2 3 4 5 6 7 8 SIP1

B

0 Gal4DBD

1 Région centrale (RC) de XMyT1

2 3 4 5 6 7 8

Motifs PGDL

S PENLS TLDL

S Positio

ns 489 632 656

Mutatio

ns PAAAS PAAAS TAAA

S Luc

mCtBP2/VP16

Gal4DBD/RCXM yT1

UA S

0 1 2 3 4 5 6 7 8

Figure 25 : Etude en test luciférase des différents mutants de la région centrale de XMyT1 fusionnés à Gal4DBD

La région centrale à XMyT1 (RCXMyT1) est fusionnée à Gal4DBD et la protéine mCtBP2 de souris est fusionnée à l’activateur transcriptionnel VP16. (A) Etude de l’activité transcriptionnelle des différents mutants de RCXMyT1 : Tous les mutants continuent à réprimer l'activité luciférase par rapport à l'activité seuil mesurée à partir du vecteur pGL3 dépourvu d’insert. Ces résultats suggèrent une éventuelle interaction entre XMyT1 et d’autre(s) corépresseur(s). (B) Etude de l’interaction entre différents mutants RCXMyT1 et mCtBP2 : Le triple mutant "8" n’est plus capable d’interagir avec mCtBP2. Le site "TLDLS" montre la plus forte affinité pour mCtBP2. Ceci s’observe par une activité luciférase moins élevée par le mutant "4" par rapport aux mutants "2" et "3". De manière convergente, la même observation se fait pour le mutant "5" par rapport aux mutants "6" et

"7".

A

Activité luciféraseActivité luciférase

0vecteur pGL3 dépourvu d’insert 1RCXMyT1 sauvage

2RCXMyT1 + mutation ponctuelle au 1er site

3RCXMyT1 + mutation ponctuelle au 2è site

4RCXMyT1 + mutation ponctuelle au 3è site

5RCXMyT1 + mutations ponctuelles aux 1^er et 2^è sites

6RCXMyT1 + mutations ponctuelles aux 2^è et 3^è sites

7RCXMyT1 + mutations ponctuelles aux 1^er et 3^è sites 8RCXMyT1 + mutations ponctuelles aux trois sites

SIP1  interagit avec mCtBP2 et sert de contrôle positif