part intérêt atteinte test latex d'untest interprétation adaptation introduite ET L'IMMUNOÉLECTROPHORÈSE TEST

LE TEST AU LATEX APPLIQUÉ

AU DIAGNOSTIC SÉROLOGIQUE DE L'AMIBIASE _: VALEUR COMPARÉE

A CELLE DE L'IMMUNOFLUORESCENCE

ET

DE L'IMMUNOÉLECTROPHORÈSE_(*)

Par ^{G. NIEL, M. GENTILINI, G. CHARMOT (**) et Mme} J. ^COUTURE (***) (****)

INTRODUCTION

L'agglutination des particules de latex sensibilisées, le plus récent

des tests sérologiques diagnostiques ^de l'amibiase, _a été introduite

en ^{1970 (3)} et particulièrement ^étudiée par ^{MORRIS, POWELL} et ^ELS-

DON-DEW en Afrique ^du Sud (4-5).

Les servitudes techniques ^{de la double} diffusion en ^gélose, mise au point et ^utilisée par ^ces auteurs ^{depuis 1961,} son adaptation

difficile aux ^{enquêtes de masse et son} interprétation parfois délicate, justifiaient la recherche d'un test ^{rapide, simple et néanmoins témoin}

fidèle de l'invasion ^{amibienne. Le} test _au latex répond partiellement

à _ces critères. ^{Selon MORRIS et al. il} est apte _à révéler une atteinte tissulaire _{— non} exclusivement hépatique _— ^évolutive _{ou non,} présente _ou ^passée, caractère ^qui marque ^{d'emblée son} intérêt _et

ses limites. ^A l'occasion de _sa récente ^diffusion aux ^{U. S. A,} et _en Afrique du _{Sud, sous} une ^forme commercialisée, _nous croyons utile d'inventorier _ses possibilités, dans ^le cadre de notre expérience, confrontées à celles de l'immunofluorescence et ^de l'immunoélec- trophorèse.

MATÉRIEL ET MÉTHODES

Sérums. — ¹⁶² sérums ont ^{été examinés} parallèlement _en latex et _en immunofluorescence, et 72 d entre eux également ^en immuno- électrophorèse. ^Ils provenaient pour une large part ^de notre _recru-

(*) Travail du laboratoire Central ^de Parasitologie (Professeur Agrégé ^{M. GEN-}

TILINI). C. H. U. Pitié-Salpêtrière, ^83, Boulevard de l'Hôpital, ^{75-Paris (13e).}

(**) Ancien Professeur ^{du Service de} Santé des Armées, attaché à l'Hôpital Claude-Bernard et ^à l'Hôpital Pasteur ^(Paris).

(***) Nous remercions tout particulièrement ^Mlles _DE WAEGENEER, M. VATEL

et ^{Mme B. LECLERC} pour leur ^aide technique.

(****) Séance du ₁₄ juin _1972.

tement hospitalier. Certains _nous furent adressés par nos corres-

pondants _en Afrique de l'Ouest (*).

Ils comprennent ^{(tableau I)} :

74 amibiases hépatiques _confirmées

avant

_ou ^après

traitement

_;

36 amibiases coliques dysentériques _{ou non ;}

52 sérums témoins provenant d'affections diverses _: hydatidoses, distomatoses, hépatites virales, bilharzioses, filarioses.

TABLEAU 1

Répartition des 162 sérums ^étudiés.

Nombre

T_ Latex Latex

Renseignements6

,

^{de serums IE}

^-

^{IE + IF}

^-

^{IF + (—)}

( ,

^{+ ).}

Amibiase hépatique avant trai-

tement _{47 o 29 o 47 5 42}

Amibiases hépatiques_après trai-

tement _{27 o 24 o 27 11} 16

Amibiases dysentériques

...

^{21 0 12 0 21 12 9}

Amibiases coliques non dysenté- riques et colopathies post-ami-

biennes _{15 1 2 6 9 11 4}

Affections non amibiennes 52 3 ¹ 48 _{4 47 5}

Total

...

^{162 4 68 54 108 86 76}

ANTIGÈNES _{ET MÉTHODES}

Pour

^le _{test au} latex, les réactifs utilisés proviennent de trois _sources.

— d'une

part,

nous devons ^à l'amabilité des Docteurs POWELL et

Mc FADZEAN plusieurs échantillons, _{sous forme} précommercialisée, d'antigènes de culture axénique d'origine sud-africaine.

d autre

part,

nous avons bénéficié ^de lots récemment _commer-

cialisés aux ^{U. S. A.} d'antigènes de même type et préparés ^selon

les auteurs sud-africains (—) (**).

De présentation comparable, les nécessaires comportent

l'anti-

gène lyophilisé et ^la suspension de latex à mélanger extemporanément

ainsi que ^des témoins négatif et positif. Chacun d'eux _{nous a permis}

de réaliser douze _à quatorze tests qualitatifs.

— Enfin ^ce travail _a également utilisé un antigène personnel

(*) Nous remercions tout particulièrement le Professeur Agrégé M. BOUVRY

(Abidjan), les Docteurs ROUSSILHON (Yaoundé) et ^ALBERT (Bobo-Dioulasso).

(**) _« Seramœba_» laboratoires Ames, département des laboratoires Miles (51, rue Cardinet, Paris) auxquelsnous adressons nos remerciements.

dont _nous donnons ci-après ^les caractéristiques, une suspension ^de

latex ^0,81 _[1. ^(Difco) _{et un tampon} glycocolle.

Ces sérums ont ^{été examinés} pour ^1/3 d'entre eux avec chacun ^des lots d'antigène. ^A partir d'une solution mère comportant 2 mg. 5/ml.

d'antigène brut, titrée ^{selon BENEX (*) (I), la réaction} _est ^effectuée par ^{mélange à} parties ^{égales de} sérum inactivé, et ^de latex sensi- bilisé _sous agitation pendant ₅ minutes.

Pour l'immunoélectrophorèse

(I. E.).

_{— Nous} avons utilisé notre antigène ^(**) développé _en culture monoxénique (clostridium welchii)

sur ^milieu diphasique ^EGG-LOCKE et préparé par congélations et décongélations successives, centrifugé, dialysé et lyophilisé.

Il comporte environ ^{5 X 106} amibes par milligramme et _sa ^solu- tion mère _: pour l'immunoélectrophorèse_; environ _{500 X 106} ^amibes par ^{millilitre (40 mg. de} protéine/ml.) _et pour ^le latex _{12 X} 106

amibes/ml. (i _{mg. de} protéine/ml.).

La migration électrophorétique _est effectuée en ^gel d'agarose

à 0,90 0/0 _en tampon véronal sodique pH 8,2 Fi _0,1 sous une DDP ^de

22 volts pendant ₂ heures.

Pour l'immunofluorescence

(I.

F.) _{— La même} ^souche est traitée

selon la technique ^{de GOLDMAN (2),} conservée sur lame ^à _— ^20° et

soumise _à la méthode indirecte ^classique. L'antiglobuline fluorescente de lapin est préparée par nos soins, et ^diluée _en ^{présence de TWEEN 80} et ^{de bleu} Evans. L'équipement optique, sur ^{LABORLUX LEITZ,} comporte une lampe ^{HBO 200,} un ^{filtre BG 12-4 mm.} et un ^con- denseur à fond ^noir.

Les sérums sont étudiés _en dilutions de raison ₃ à partir de 1/50.

RÉSULTATS

47 amibiases hépatiques avant traitement ^ont été examinées parallèlement _en latex _{et en} immunofluorescencedont _{29 en} immuno- électrophorèse. Toutes sont positives _en immunofluorescence ^de 1/150 _à 1/8.000. ₄₂ d'entre elles montrent _un titre supérieur _{ou égal}

à 450. ⁵ sont ^négatives _en latex dont ^deux présentent ^des titres

élevés en immunofluorescence _{— de 3} à ₁₃ arcs sont _{révélés en} immunoélectrophorèse (tableau II).

S'y ajoutent ₂₇ amibiases hépatiques après traitement, _toutes

examinées, à distance variable de celui-ci, en immunofluorescence

(*) Nous sommes reconnaissants à ^{Mlle BENEX} d'avoir bien voulu _{nous con-} seiller.

(**) Souche N 68 due à l'amabilité du Docteur ^{Mc FADZEAN.}

TABLEAU II

Répartition des sérums positifs.

I. — ⁴⁷ amibiases hépatiques avant taitement

I. F. titres _{150 300 450 900 1.350 2.700 4.000} ^8.000 Total

Latex positif

....4066

^{13 5 7 1 42}

Latex

négatif. 012 0

^{1 1 o o 5}

1. E. — nombre d'arcs

moyen ^(*)

....

^{5,2 5 4,8 4,7 6 6,5 29}

II. _{— 21} amibiases dysentériques

I. F. Titres _{o 50 100 150 300 450 1.350 2.700} Total Latex_Latex positif.

_négatif. ....0004 ₀₇₀ 2

^{11 o2 21 o1 129}

I. _{E. —} nombre d'arcs

moyen

(*)....

^{1 4,4}

6 4

^{6 5 12}

III. _{— 15} amibiases coliques non dysentériqueset colopathies post-amibiennes

Latex positif

....1100

^{2 o o o 4}

Latex négatif._{I. E. — nombre}

533

_d'arcs

0

^{0 0 0 0 il}

moyen

(*)....

^{o 5 3}

(*) I. E. _: immunoélectrophorèse.

et

titrant

^de _{50 à 2.700 — 24}

d'entre

^elles, contrôlées _en immuno- électrophorèse ont montré ^de 3 à ₉ arcs. ¹⁶ sont positives _en

latex

(tableau I).

Les 36 amibiases coliques _ou colopathies post-amibiennes, toutes étudiées _en immunofluorescence, _se répartissent _en deux groupes (tableau II).

— ²¹ sujets

présentant

un syndrome dysentérique aigu _ou subaigu

titrant

^de ₅₀ à 2.700 en immunofluorescence, dont ₉ sont positifs

en latex (42,8 0/0). Les ₁₂ sérums examinés _en immunoélectropho- rèse ont montré ^de l à ₇ arcs.

— ¹⁵ amibiases coliques et colopathies post-amibiennes dont

4 positives _en latex et ⁶ _en immunofluorescence.

Les ₅₂ témoins comportent 13 hydatidoses, ₃ distomatoses, ₁₀ ^bil- harzioses, ₁₀ hépatites virales et divers sérums d'abcès hépatiques non amibiens, d'hépatomégalies _non fébriles, de filarioses toxoplas- moses, infections pleuropulmonaires, etc...

49 sont ^négatifs en immunofluorescence _— 5 dont ₂ ^d'origine africaine,

titrant

50 en immunofluorescence, sont positifs en latex.

COMMENTAIRES

Ces résultats appellent ^les commentaires suivants _:

1° Nous nous sommes limités _au test qualitatif. Bien qu utilisable dans une gamme ^de titres jusqu'à 64, la technique quantitative _nous

semble inadaptée aux buts ^{de ce} test, _sa reproductibilité _se montre

en défaut _{et sa} signification discutable. ^Bien que ^les résultats ^des deux types d'antigènes soient proches, ^le produit de cultures mixtes

a fait _preuve d'une moindre sensibilité traduite _{par une} ^apparition

plus lente ^des agglutinations. L'antigène ^de culture axénique lui doit être préféré.

2° La plupart ^des amibiases hépatiques ^(89,3 0/0) sont ^{positives à}

des degrés divers. ^Il existe _une certaine concordance entre ^l'agglu- tination exprimée _en et ^le titre ^{de l} 'immunofluorescence. Cepen-

dant, ^les dissociations _ne sont pas rares.

-

^{D'une part, les 5} sérums négatifs présentent ^des titres ^notables, dont _{2 élevés, en} immunofluorescence, et 3 fortes réponses _en immuno- électrophorèse (tableau II).

D'autre part, _pour ⁵ immunofluorescences ^de titre faible, difficilement interprétables, _{3 se} voient ^confirmées par ^l agglutination et 2 par l'immunoélectrophorèse.

A considérer ^les sérologies dissociées, la valeur diagnostique ^des couples (IF-IE) et (IF-latex) est comparable.

30 Le comportement ^du test _au ^{latex dans les} amibiases dysenté- riques aiguës _ou subaiguës, comme celui ^de l'immunofluorescence,

est variable, _{et leur} confrontation ^parfois déroutante. ^Une _gamme très ^{large de} positivités est observée en immunofluorescence. ^Elle inclut ^des titres _{élevés —} ^{chez l'africain} essentiellement — confirmés

par l'immunoélectrophorèse et interprétés ^comme traduisant ^le

degré de l'atteinte tissulaire.

Il existe un pourcentage plus faible ^de latex

+,

^{dans le} groupe

des amibiases non dysentériques, dysentéries anciennes, porteurs

de kystes _ou ^{de formes} minuta, colopathies post-amibiennes. ^Il

faut _{y noter,} ^{la présence de quelques} positivités ^{isolées. L} _'immuno-

fluorescence s'y montre plus sensible.

40 L'étude ^de ₅₂ témoins est insuffisante pour apprécier ^{la spéci-}

ficité de _ce test. Elle révèle néanmoins ₅ positivités anormales, _sans correspondance _en immunofluorescence, dont deux très franches dans une hydatidose et _une encéphalite toxoplasmique.

— Notées _en présence ^de l'antigène d'origine axénique _{elles ne peu-}

vent

^être attribuées aux contaminations par ^{la flore} microbienne et justifient _une enquête plus complète, notamment _{au cours} ^{de néo-}

plasies, et ^de syndromes infectieux. Elles conduisent _à critiquer

la signification des positivités même associées à une immunofluores- cence positive. Le

titre

^de _cette dernière nous semble

d'autant

plus

important

à préciser.

5° Evolution post-thérapeutique (tableau III).

TABLEAU

III

Test au ^{latex : Evolution après} traitement.

Immuno- Immuno-

N° Renseignements électrophorèse fluorescence Latex

Arcs Titres

3125 Abcès amibien du foie _{3 150} +

id. 6 jours après début du traitement. _{4 1-350} + + +

id. ₁₅ jours après début du traitement. _{5 2.700} + +

3303 Abcès amibien du foie 6 + + +

id. fin du traitement 6 1-350 + + +

3651 Abcès amibien du foie _{12 150} + + +

id. ₁₀ jours _après traitementmédical et

chirurgical _{10 1.350} + + +

3815 Amibiase hépatique ₁ mois après trai-

tement _{9 1-350} + + +

3439 ¹ mois 1/2 après Flagyl _{5 ï-SS0 0}

3152 ¹ mois 1/2 après Émétine

....

^{5 1-350 + + +}

3921 Abcès amibien du foie opéré ₃ mois

auparavant 5 900 + + +

3782 Amibiase hépatique ⁶ mois après trai-

tement 3 450 0

3832 Amibiase hépatique ₇ mois après trai-

tement _{4 300} ±

3021 Abcès amibien du foie 6 mois après

traitement _{2 150 0}

3534 Abcès amibien du foie ₁₀ mois après

traitement _{3 150 0}

3955 Abcès amibien du foie opéré ₁ an aupa-

ravant

...

^{2 450 + +}

Dans les amibiases viscérales, si l'agglutination n'est pas maximale d'emblée, _la thérapeutique majore les positivités parallèlement _à l'élévation des titres _en immunofluorescence. Les tests initialement

négatifs le demeurent _après

traitement.

Les positivités persistent au ^{moins 3 mois} après celui-ci. Dans notre expérience, le latex _est habituellement négatif _à

partir

du ^6e mois alors que

l'I.

^F. _{et l'}^1. E.

restent

^{positives. Dans} _{un cas} l'agglutination _{est encore présente}

I an après

traitement.

La confrontation des trois tests ^révèle notamment _{au cours} ^des amibiases hépatiques _une grande variété de tableaux sérologiques

comportant tous ^les types ^de dissociations (tableau IV). Le lien

fréquemment observé entre ^le taux ^{des anticorps} _en immunofluores- cence et ^{le degré de} l'atteinte clinique parait inconstant _pour le test

au latex. Certaines amibiases anciennes présentent _une positivité

isolée et ^des abcès confirmés _se montrent ^négatifs. Par ailleurs, sa spécificité peut ^être _en ^défaut.

TABLEAU IV

Sérologie amibienne. Réponses dissociées.

N•m „Renseignements électrophorèse fluorescence^{Immuno- Immuno-} Latex

3651 Abcès amibien du ^foie avant traitement. 12 150 + + +

3117 Abcès amibien du foie _{3 150} + + +

3125 Abcès amibien du foie _{3 150} +

3034 Abcès amibiendu foie ₅ 150/300 ±

2488 Amibiase hépatique _{2.700 0}

3038 Hépatomégaliedouloureuse fébrile

..

^{6 1-350 0}

3468 Amœbome au ^10e jour de traitement. _{9 1-350 0}

3121 Amibiase intestinale₃ mois auparavant. 0 50 + + +

3386 Amibiase intestinale glairo-sanglante

depuis ₃ mois _{5 150} +-H +

3407 Diarrhée fébrile depuis ₃ jours. Enta-

moeba histolytica + 5 2.700 o

Un tel comportement ^semble témoigner du caractère propre ^des anticorps étudiés. Selon BÉNEX (i), ^ceux-ci répondent essentiellement

à la première fraction éluée d'un antigène brut sur colonne ^de Sepha- dex ^G. ₂₀₀ comme ceux révélés par ^{la déviation du} complément, l'hémagglutination, la précipitation _en gel.

Relevant des taux ^{élevés de positivité} _— ^{98 0/0 dans les amibiases} hépatiques, 96 0/0 dans les dysentéries amibiennes. MORRIS et al. (4)

attribuent _{à ce} test une sensibilité et une spécificité comparables

à celle de la double diffusion. Notre expérience, _encore limitée, diffère de celle des auteurs sud-africains sur plusieurs points ^{: le} pour- centage ^{plus élevé} d'amibiases dysentériques négatives dont certaines malgré des taux ^notables d'anticorps _en immunofluorescence et _en immunoélectrophorèse, et ^les défaillances plus nombreuses dans ^les

amibiases viscérales. De plus, la longue persistance des anticorps après traitement, confirmée _en immunoélectrophorèse et _en immuno- fluorescence est inconstamment vérifiée _en latex. Pour _ces raisons, dans _nos conditions personnelles, _ce test _ne peut ^être tenu _{pour un} témoin fidèle de l'atteinte tissulaire, et _sa négativité n'a _pas valeur

d'exclusion. De même que ^les autres méthodes immunologiques,

il ne peut ^donc toujours répondre _{à la} question majeure _{posée à la} sérologie _: l'existence _{ou non} d'une

atteinte

viscérale évolutive.

Leur association

apparaît d'autant

plus justifiée.

CONCLUSIONS

Les constatations précédentes mesurent

l'intérêt

du

test

_au ^latex.

Il reste critiquable dans _sa négativité, _comme dans _sa positivité, et _ne peut ^donc aucunement constituer une méthode ^{exclusive de} diagnostic.

Sauf dans l'optique d'enquêtes de masse, son

interprétation

exige

qu'il s'inscrive dans un ensemble sérologique, l'associant _{à l'immuno-}

fluorescence _ou aux deux techniques ^{de diffusion} _en ^gel, l'immuno- électrophorèse notamment.

C'est dire qu'il requiert l'expérience et ^les _moyens ^de laboratoires

spécialisés. Le couple (immunofluorescence

quantitative

_— latex),

sous ^le contrôle de l'analyse immunoélectrophorèse

peut

^répondre

de manière satisfaisante, aux ^{besoins du clinicien. Ceci} mérite

d'être

rappelé, alors que l'évolution _{se dessine vers} la diffusion commer- cialisée de réactifs et ^de techniques simplifiés.

Dans les conditions et ^{les limites précisées, le}

test

_au

latex

_peut

être

tenu

_{pour un} ^{appoint de valeur} au diagnostic immunologique, parfois incertain, de l'amibiase _viscérale.

RÉSUMÉ

L'introduction _en pratique courante ^du

test

_au ^{latex proposé} par ^les auteurs sud-africains, justifie _sa confrontation aux ^deux techniques majeures appliquées _au diagnostic de l'amibiase, l'immuno- fluorescence et l'immunoélectrophorèse. Séduisant par sa simplicité

et _sa rapidité, il n'échappe _{pas à} certaines critiques. En dehors des

enquêtes de masse auxquelles il est particulièrement adapté, il reste indispensable de lui associer l'une des techniques précédentes.

SUMMARY

The introduction into routine practice of the latex

test

^proposed by the Sud-African authors justifies its comparison with the _two main techniques of amoebian diagnostic: immunofluorescence and immunoelectrophoresis. Its simplicity and

rapidity

make it enticing,

but it does not _escape certain ^{criticism. If} it ^is particularly adapted to _mass surveys, it should be associated in all other _cases with _one

of the preceding techniques.

BIBLIOGRAPHIE

(1) BENEX (J.). _:— Extraits antigéniques spécifiques obtenus à partir

d'Entamoeba histolytica maintenues _en culture mixte. ^I. Ann.

parasit. hum. _et camp., ^{1971, 46,} 533-544 ; II. Id., ₁₉₇₁

?

46, 545-552.

(2) ^GOLDMAN (M.). — Evaluation _{of a} fluorescent antibody test _{for ame-}

biasis using two widely differing ameba strains _as antigen. Amer.

Jal _trop. med. hyg., 1959, ^15, 694-700.

(3) MORRIS (M. N.), ^{POWELL (S.} J.) and ^{ELSDON-DEW (R.).} — ^A rapid latex _- agglutination test for invasive amœbiasis. ^S. Afric. med.

Jal, 1970, 44, 594.

(4) MORRIS (M. N.), POWELL (S. J.) and ^ELSDON-DEW (R.). — Latex agglutination test ^for invasive amœbiasis. Lancet, n° 7661, 1970,

1362-1363.

(5) MORRIS_amœbiasis(M. N.), POWELL (S. J.) and ^ELSDON-DEW (R.).

-

^Invasive

: circulating antibody ^levels by latex agglutination test. ^{S. Afric. med.} Jal, _1971, ^{45, 1206-1208.}

(6) THOMPSON(P. E.), ^{GRAEDEL (S. K.),} SCHNEIDER (C. R.), STUCKI (W. P.) and ^GORDON (R. ^M.). — Preparation ^of standardized amœba antigen from axenic cultures ^{of Entamoeba} histolytica. Bull.

0. M. S., 1968, 39, 349-365.

TECHNIQUE COPROLOGIQUE NOUVELLE

ESSENTIELLEMENT DESTINÉE ^{A LA} CONCENTRATION DES TROPHOZOÏTES _D'AMIBES

Par ^{CH. JUNOD (*)}

Les trophozoïtes ^d'amibes sont généralement détruits par ^les procédés ^{classiques de} concentration parasitaire, méthodes physico- chimiques à l'éther (TELEMANN, BAILENGER, CARLES-BARTHÉLÉMY, THÉBAULT, RITCHIE, M. I. F. C., etc.) _ou flottations ^{(méthodes de}

FAUST, WILLIS, JANECKSO-URBANYI, etc.). Il nous paraît ^{donc utile}

de faire connaître ^la technique _{que nous} ^utilisons quotidiennement depuis deux _ans pour ^la concentration des trophozoïtes ^amibiens.

Elle est probablement perfectible, ^mais _en

l'état

^{actuel elle} peut déjà rendre de notables ^services _en ^coprologie pratique.

(*) Séance du ₁₄ juin _1972.