ﺺﺨﻠﻣ
يﺮﺟأ اﺬھ ﻞﻤﻌﻟا ﻰﻠﻋ ﺎﯾﺮﯿﺘﻜﺑ ﻲﻤﺘﻨﺗ ﻰﻟإ ﺔﻠﺋﺎﻋ ﺔﯾﻮﻌﻤﻟا ‘’serratia marscesens’ ﻟاو ﺚﺤﺒ ﻦﻋ ﺔﻠﻠﺤﻤﻟا ﺎﮭﺗرﺪﻗ ﻦﯿﺘﻜﻠﻟ زﺎﻨﺘﻜﻠﻟ ﺎھزاﺮﻓﺎﺑ ، ﺑ ﺚﯿﺤ ﻦﻜﻤﯾ ﮫﻟﻼﻐﺘﺳا ﻲﻓ ﺔﺤﻓﺎﻜﻣ داﺮﺠﻟا . ﺗ ﺗ ﻢ ﺾﯾﺮﺤ جﺎﺘﻧإ ﻟا زﺎﻨﯿﺘﯿﻜ ﺑ ﺎﯾﺮﯿﺘﻜﺒﻟا فﺮط ﻦﻣ ﮭﻋرﺰ ﺎ ﻂﺳو ﻲﻓ ﯾ يﻮﺘﺤ ﻰﻠﻋ ﻦﯿﺘﯿﻜﻟا ﺪﯿﯾﻮﻠﻜﻟا ﻛ ةﺰﯿﻛﺮ ﻟ ﻼ ﻢﯾﺰﻧ و رﺪﺼﻤﻛ ﺪﯿﺣو نﻮﺑﺮﻜﻠﻟ ﮫﯿﻠﻋ ﻢﺘﯾ ﻮﻤﻨﻟ ﺒﻟا ﺎﯾﺮﯿﺘﻜ . و ﻠﯾ ﺺﺨ لﻮﻛﻮﺗوﺮﺒﻟا ﻲﺒﯾﺮﺠﺘﻟا ﻲﻓ ﻟا تاﻮﻄﺨ ﻟا ﺔﯿﺴﯿﺋﺮ ﺘﻟا ﺎﻟ ﺔﯿ : ﺪﯾﺪﺤﺗ ﻟا ةرﺪﻘ ﻟا ﺔﯿﻠﯿﻠﺤﺘ ﻦﯿﺘﻜﻠﻟ ﻰﻠﻋ .ﺪﯿﯾﻮﻠﻜﻟا ﻦﯿﺘﻜﻟا ﻰﻠﻋ يﻮﺘﺤﻤﻟا ﻂﺳﻮﻟا ، ﻦﯿﺴﺤﺘﻟاو ﻦﻣ ﺮﯿﯾﺎﻌﻣ ﱡﻨﻟا ﻮﻤ ،ﺎﮭﻨﻣ رﺎﺛآ ﺔﺿﻮﻤﺤﻟا ، ﺔﺟردو ةراﺮﺤﻟا ، ﺰﯿﻛﺮﺗو ﻦﯿﺘﻜﻟا و اﺮﯿﺧأ ﺖﻗﻮﻟا ﻻا ﺤﺗ ﻲﻠﻋ ﺎﮭﺘﯿﻟﺎﻌﻓ ﻲﻠﻋ مز ﻦﯿﺘﻜﻟا ﻞﯿﻠ ﯾ ﺎﮭﯿﻠ ﺪﯾﺪﺤﺗ طﺎﺸﻨﻟا ﯾﺰﻧﻷا ﻲﻤ ﻦﻣ زﺎﻨﯿﺘﯿﻛ ﺔﺠﺘﻨﻤﻟا رﺎﯿﻌﻤﻛ ﻟ ﺔﻌﺑﺎﺘﻤ ﺔﻠﺘﻜﻟا ﺔﯾﻮﯿﺤﻟا .ﺎھﻮﻤﻧ ﻲﻓ ﻢﺗ ﺔﯿﻘﻨﺗ ﻢﯾﺰﻧﻻا ﻦﯿﺗوﺮﺒﻟا ﺔﻄﺳاﻮﺑ تﺎﻔﻠﺳ مﻮﯿﻧﻮﻣﻷا ، ﻞﺼﻓ يﺮﺟا ﺎھﺪﻌﺑ ﺑ ﻲﻨﯿﺗوﺮﺑ ﺗﺎ ﺴ لﺎﻤﻌ ا نﻼﺣﺮﻟا ﻲﺋﺎﺑﺮﮭﻜﻟ ﻊﻣ SDS-PAGE ﺮﯾﺪﻘﺘﻟ نزﻮﻟا ﻲﺌﯾﺰﺠﻟا ﻼﻟ ﻢﯾﺰﻧ . ةﺮﺒﺘﺧا ةﻮﻗ ﻢﯾﺰﻧﻻا ﺎﮭﺣﺮط قﻮﻓ ﺪﺴﺟ داﺮﺠﻟا ﻦﯿﺘﻜﻟا ﻦﻣ ةﺮﯿﺒﻛ ﺔﺒﺴﻧ ﻲﻠﻋ يﻮﺘﺤﯾ ﮫﻧﺎﺑ ﻢﻠﻌﻟا ﻊﻣ ، و . ﺖﻧﺎﻛ ﺞﺋﺎﺘﻨﻟا ﺔﯿﻟﺎﺘﻟا : • ﻢﯿﻗ تﺎﻤﻠﻌﻤﻟا ﻞﺜﻣﻷا ﻲھ : ﺔﺟرد ﺔﺿﻮﻤﺤﻟا ، ﺰﯿﻛﺮﺗ ﻦﯿﺘﯿﻜﻟا ﺔﯾوﺮﻐﻟا ﻦﻣ 1 ٪ ﻲﻟا 6 % ، ﺔﺟردو ةراﺮﺣ ﻟ ﻮﻤﻨﻠ 30 ﺔﺟرد ،ﺔﯾﻮﺌﻣ و ةﺮﺘﻓ ﺔﻧﺎﻀﺣ ﻻ ﻞﻘﺗ ﻦﻋ 150 . ﺳ ﺔﻋﺎ . ﻲﻓ ﻞظ هﺬھ فوﺮﻈﻟا طﺎﺸﻧ ﺔﯿ ﮭظأ ﺮ ة ﻟا زﺎﻨﯿﺘﯿﻜ ﺘﯿﻟﺎﻌﻓ ﺎﮭ ﺑ ﺔﻤﯿﻘ ﻣ ﻞ U/ 0.556 ، و ﻎﻠﺑ ﻟا نزﻮ ﻲﺌﯾﺰﺠﻟا 45 ﻮﻠﯿﻛ نﻮﺘﻟاد . • و ﻦﯿﯿﻠﺗ ﻦﯿﺘﻜﻟا ﻢﯾﺰﻧﻻا ﺮﯿﺛﺎﺗ ﺖﺤﺗ داﺮﺠﻟا ﺢﻄﺳ ، ﻓ ﻲ ،مﺎﺘﺨﻟا ﻲﻠﻋ و ءﻮﺿ ﺞﺋﺎﺘﻨﻟا ﺔﻘﺑﺎﺴﻟا ، ةدﺪﺣ فوﺮﻈﻟا ﻰﻠﺜﻤﻟا جﺎﺘﻧﻹ ﻮﻤﻨﻟا و ﻢﯾﺰﻧا ﺔﯾﺮﯿﺘﻜﺒﻟا . ﻰﻘﺒﯾ نأ ﻞﻐﺘﺴﺗ هﺬھ ﺔﯿﺟﺎﺘﻧﻹا ﻰﻠﻋ قﺎﻄﻧ ﻲﻋﺎﻨﺻ و رﺎﺒﺘﺧا ﻰﻠﻋ قﺎﻄﻧ ﻊﺳاو ﻲﻓ ﺔﻏﺎﯿﺻ ﺞﺘﻨﻣ ﻤﯾ ﻦﻜ ﮫﻣاﺪﺨﺘﺳا ﺎﻤﻛ تاﺪﯿﺒﻤﻟا ﺔﯾﻮﯿﺤﻟا ﻟ ﺔﺤﻓﺎﻜﻤ داﺮﺠﻟا . ﻞﯿﻠﺤﺘﻟا ﻲﻨﯿﺠﻟا ﻠﻟ ﺎﯾﺮﯿﺘﻜﺒ ﻲﻓ لﺰﻋ ﻦﯿﺠﻟا زﺎﻨﯿﺘﯿﻛ ي و ﺟاردإ ﮫ ﻲﻓ ﺎﯾﺮﯿﺘﻜﺑ تﻼﻗﺎﻧ ﻲﺘﻟا ﻦﻜﻤﯾ ﺎﮭﻣاﺪﺨﺘﺳا ﻲﻓ أ ةﺰﮭﺟ ﺮﯿﻤﺨﺗ ةرﺪﻗ وذ ﺔﯿﻋﺎﻨﺻ . نﯾﺗﯾﻛ ﻟا دﯾوﻠﻛ ، ،ﻲﺟوﻟوﯾﺑﻟا لﻠﺣﺗﻟا زﺎﻧﺗﯾﻛﻟا ﺔﯾوﯾﺣﻟا تادﯾﺑﻣﻟا ، دارﺟﻟا ،Résumé
Ce travail a été mené sur une bactérie appartenant à la famille des Enterobacteriaceae ‘‘Serratia marcescens’’ à la recherche d’un pouvoir chitinolytique, caractère enzymatique pouvant être exploité dans la lutte contre le criquet pèlerin. L’induction de production de chitinase est faite sur milieu de culture à base de chitine colloïdale comme substrat enzymatique et comme seule source de carbone pour la croissance bactérienne. Le protocole expérimental se résume dans les principales étapes qui sont : mise en évidence du pouvoir chitinolytique sur milieu de culture gélosé à base de chitine colloïdale, optimisation des paramètres de culture à savoir les effets du pH, de la température, de la concentration en substrat et enfin du temps d’incubation le suivit de la biomasse lors des optimisations a été fait sur dosage de l’activité enzymatique de la chitinase produite. Une purification par le sulfate d’ammonium de la protéine enzymatique a été faite, ensuite une électrophorèse afin d’estimer le poids moléculaire de l’enzyme. Pour apprécié le pouvoir de chitinolyse, un test in situ de l’extrait enzymatique a été fait sur la carapace du criquet, cette dernière se comporte comme substrat chitineux pour l’enzyme. Les résultats ont été les suivant :
Les valeurs des paramètres optimisés sont : pH 6, concentration en chitine colloïdale 1%, une température de croissance à 30°C, un temps d’incubation d’au moins 150h. Dans ces conditions l’activité de la chitinase a enregistré une valeur de 0.556 U/ml, et un poids moléculaire de 45kDa.
Un ramollissement de la carapace du criquet
En conclusion et à la lumière des résultats obtenus, les conditions optimale de culture bactérienne et de production enzymatique sont connu. Il reste à exploité cette productivité à l’échelle industrielle et d’essai à grande échelle par la formulation d’un produit pouvant être utilisé dans la lutte acridienne comme biopesticides. L’analyse génétique de bactérie chitinolytique afin d’isoler le gène de chitinase et son insertion dans des bactéries vectrices exploitable dans des fermenteurs industriel.
SUMMARY
This work was carried out about a bacterium belonging to the Enterobacteriaceae family ''Serratia marcescens '' looking for a Chitinolytic activities so it can be exploiting in the fighting against the desert locust. Induction of chitinase production was done on culture medium containing colloidal chitin as a substrate and as a sole carbon source for bacterial growth. The experimental protocol is summarized in the following main steps: identification of chitinolytic activities on agar culture medium containing colloidal chitin, optimization of culture parameters for production chitinase, like the effects of pH, temperature, substrate concentration and finally, the incubation time the growth of biomass during optimization was done on determination of enzymatic activity of chitinase produced. the enzyme protein was purified by ammonium sulfate, to estimate the molecular weight of the enzyme an electrophoresed on SDS-PAGE was done . To appreciate the power of chitinolyse, in situ testing of the enzyme extract was done on the shell of the locust, the latter behaves like chitinous substrate for the enzyme. The results were the following:
• The values of the optimized parameters are: pH 6 concentration 1% to 2% of colloidal chitin,
30°C for growth temperature , the incubation time is of at least 150h. Under these conditions the activity of chitinase showed a value of 0.556 U / ml, and a molecular weight of 45 kDa.
• A softening of the cuticule shell of the Desert locust
In conclusion, in the light of the results, the optimal conditions for bacterial growth and enzyme production is known. It remains to be exploited this productivity on an industrial scale and large-scale test with the formulation of a product can be used in the locust as biopesticides. Genetic analysis of chitinolytic bacterium to isolate the chitinase gene and insertion into bacteria vector usable in industrial fermenters.
