vii
TABLE DES MATIÈRES
CHAPITRE 1 : INTRODUCTION
XIX
L
ES NOYAUX DE LA BASE1
1.1.
O
RGANISATION ANATOMIQUE DES NOYAUX DE LA BASE1
1.1.1.
O
RGANISATION FONCTIONNELLE DES NOYAUX DE LA BASE4
1.1.2.
D
YSFONCTIONNEMENTS DES NOYAUX DE LA BASE13
1.1.3.
R
ÉGULATION DE L’ACTIVITÉ STRIATALE PAR LES RÉCEPTEURS COUPLÉS AUX PROTÉINES G18
1.2.
L
ES RÉCEPTEURS COUPLÉS AUX PROTÉINESG
18
1.2.1.
L
ES PRINCIPAUXGPCR
S DU STRIATUM19
1.2.2.
D
ESCRIPTION DE LA FAMILLEGPRIN
23
1.2.3.
L
E SYSTÈME CRISPR/CAS926
1.3.
D
ÉCOUVERTE ET FONCTION DU LOCUSCRISPR
26
1.3.1.
L
E SYSTÈMECRISPR
COMME OUTIL D’
ÉDITION GÉNOMIQUE29
1.3.2.
CHAPITRE 2 : OBJECTIFS DU TRAVAIL
37
CHAPITRE 3 : MATÉRIEL ET MÉTHODES
41
M
ODÈLES MURINS TRANSGÉNIQUES ET GÉNOTYPAGE43
3.1.
L
IGNÉEA
2A-C
RE43
3.1.1.
L
IGNÉED
1-C
RE43
3.1.2.
L
IGNÉE IDTR
43
3.1.3.
L
IGNÉED
2-
EGFP
44
3.1.4.
L
IGNÉE DT
OMATO44
3.1.5.
L
IGNÉESGPRIN3
KO
45
3.1.6.
G
ÉNOTYPAGE45
3.1.7.
T
ECHNIQUES DE BIOLOGIE MOLÉCULAIRE46
3.2.
E
LECTROPHORÈSE SUR GEL D’
AGAROSE46
3.2.1.
M
INIPRÉPARATION D’ADN
PLASMIDIQUE(«
MINIPREP»)
47
viii
I
MMUNOFLUORESCENCE55
3.4.
FACS
(FLUORESCENCE-
ACTIVATED CELL SORTING)
56
3.5.
A
BLATION UNILATÉRALE DES NEURONES STP OU STN56
3.6.
G
ÉNÉRATION DE PLASMIDES D’EXPRESSION POUR LE GÈNE GPRIN357
3.7.
G
ÉNÉRATION DE SOURIS INVALIDÉES POUR LE GÈNE GPRIN359
3.8.
I
DENTIFICATION DES SITESCRISPR/C
AS9
59
3.8.1.
C
ONSTRUCTION DES VECTEURS PLASMIDIQUES61
3.8.2.
GFP
REPORTER ASSAY63
3.8.3.
D
ÉLÉTION DEGPRIN3
DANS LES CELLULESN
EURO2A
64
3.8.4.
M
ICROINJECTION DE ZYGOTES AU STADE1
CELLULE ET GÉNOTYPAGE DES ANIMAUX OBTENUS65
3.8.5.
A
NALYSE DES OFF-
TARGETS POTENTIELS65
3.8.6.
R
ÉPRESSION DE L’EXPRESSION DE GPRIN3 PAR INTERFÉRENCE ARN66
3.9.
D
ESIGN DE SHRNA
ET PLASMIDE LENTIVIRAL66
3.9.1.
P
RODUCTION ET TITRATION LENTIVIRALES68
3.9.2.
I
NJECTION STRIATALE DE LENTIVIRUS68
3.9.3.
T
ESTS COMPORTEMENTAUX69
3.10.
C
OORDINATION MOTRICE ET APPRENTISSAGE MOTEUR69
3.10.1.
A
CTIVITÉ LOCOMOTRICE SPONTANÉE ET EXPLORATION70
3.10.2.
M
ESURE DES COMPORTEMENTS«
ANXIETY-
LIKE»
70
3.10.3.
M
ESURE DES COMPORTEMENTS LIÉS À LA DÉPRESSION71
3.10.4.
C
OMPORTEMENT MOTIVATIONNEL72
3.10.5.
C
OMPORTEMENTS INDUITS PHARMACOLOGIQUEMENT73
3.10.6.
E
NREGISTREMENTS ÉLECTROPHYSIOLOGIQUES74
3.11.
P
RÉPARATION DE TRANCHES EN SURVIE75
3.11.1.
D
ISPOSITIF EXPÉRIMENTAL76
3.11.2.
A
NALYSE DES PROPRIÉTÉS MEMBRANAIRES PASSIVES ET DE L’
EXCITABILITÉ CELLULAIRE INTRINSÈQUE76
3.11.3.
A
NALYSES MORPHOLOGIQUES NEURONALES78
3.12.
F
IXATION ET RÉVÉLATION DES NEURONES PATCHÉS79
ix
C
ARACTÉRISATION DU PROFIL D’EXPRESSION DE GPRIN3 CHEZ LA SOURIS ADULTE ET DURANT4.1.
L’EMBRYOGÉNÈSE
