Note technique : obtention d'animaux triploïdes chez la truite arc-en-ciel

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Note technique : obtention d’animaux triploïdes chez la truite arc-en-ciel

B. Chevassus, Edwige Quillet, Daniel Chourrout

To cite this version:

B. Chevassus, Edwige Quillet, Daniel Chourrout. Note technique : obtention d’animaux triploïdes chez la truite arc-en-ciel. Bulletin francais de Pisciculture, 1983, 290, pp.161-164. �10.1051/kmae:1983008�.

�hal-01600613�

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Chez les S a l m o n i d é s , l'obtention d ' a n i m a u x ne présentant pas de m a t u r a t i o n sexuelle apparaît intéressante dans p l u s i e u r s cas : e n élevage intensif, elle permet d'envisager la p r o d u c t i o n d ' a n i m a u x de grande taille sans se heurter aux difficultés i n h é r e n t e s à la m a t u r a t i o n sexuelle ( r a l e n t i s s e m e n t de la croissance, m o r t a l i t é s plus élevées, d i m i n u t i o n de la qualité de la chair) ; dans le cas de p e u p l e m e n t s extensifs, elle a u t o r i s e le d é v e r s e m e n t d ' a n i m a u x dont on s o u h a i t e éviter la prolifération é v e n t u e l l e ou le c r o i s e m e n t avec les individus résidents.

Différentes méthodes ont été proposées pour aboutir à u n tel résultat (CHEVAS- SUS et al, 1 9 7 9 b ; BILLARD, 1983). L'une d'entre-elles repose sur la création d ' a n i - m a u x triploïdes (possédant trois exemplaires de chaque c h r o m o s o m e au lieu de deux chez les individus n o r m a u x diploïdes) q u i , selon p l u s i e u r s a u t e u r s , m o n t r e r a i e n t un développement e x t r ê m e m e n t réduit de la gonade, au moins chez les femelles (THOR- G A A R D et GALL, 1 9 7 9 ; LINCOLN et SCOTT, 1983). A u cours des trois dernières années, le laboratoire de Physiologie des Poissons de l'INRA a mis au point une méthode simple p e r m e t t a n t l'obtention de tels a n i m a u x triploïdes chez la t r u i t e arc-en-ciel (CHOURROUT, 1 9 8 0 ; CHOURROUT et QUILLET, 1982). Une telle méthode, combinée aux t e c h n i q u e s de p r o d u c t i o n de p o p u l a t i o n s " monosexes f e m e l l e s " (CHEVASSUS et al., 1 9 7 9 a) pourrait

donc f o u r n i r des populations c o n t e n a n t u n e très forte proportion d ' a n i m a u x stériles. Elle est basée sur l'application d ' u n choc c h a u d peu après la fécondation q u i , en i n h i b a n t la dernière étape de la méiose f e m e l l e , permet d'obtenir des individus présentant au niveau de leur noyau un stock g é n é t i q u e s u p p l é m e n t a i r e issu de leur mère, qui vient s'ajouter aux deux stocks génétiques d'origine m a t e r n e l l e et paternelle (apportés respectivement par l'ovule et le spermatozoïde) que possèdent les individus normaux diploïdes.

Nous présentons dans cette note t e c h n i q u e :

— le protocole précis permettant l'obtention d ' a n i m a u x triploïdes,

— q u e l q u e s indications sur les caractéristiques zootechniques de ces a n i m a u x , basées sur nos observations des deux dernières années.

I. P R O T O C O L E

La m é t h o d e consiste à t r e m p e r les œ u f s dans un b a i n - m a r i e à 2 6 ° ± 0 , 5 ° C pendant 2 0 m n peu après la fécondation. O n procédera de la m a n i è r e suivante :

1) Fécondation

Nous distinguerons le cas où l'on utilise la méthode sèche t r a d i t i o n n e l l e et celui o ù l'on utilise le dilueur 532 pour l ' i n s é m i n a t i o n artificielle (BILLARD, 1977). Les q u a n t i t é s de s p e r m e m e n t i o n n é e s sont celles utilisées t r a d i t i o n n e l l e m e n t e n pisciculture. L'utilisa- t i o n du d i l u e u r permet de réduire é v e n t u e l l e m e n t ces quantités (BILLARD, 1975).

NOTE TECHNIQUE : OBTENTION D'ANIMAUX TRIPLOIDES CHEZ LA TRUITE ARC-EN-CIEL

B. C H E V A S S U S *. E. QUILLET * * et D. C H O U R R O U T *

* Laboratoire de Physiologie des Poissons, I.N.R.A. - 7 8 3 5 0 J O U Y - e n - J O S A S .

* * D é p a r t e m e n t de Biologie, A q u a c u l t u r e et Pêche, C.N.E.X.O., B.P. 3 3 7 - 2 9 2 7 3 BREST CEDEX.

R É S U M É

Nous p r é s e n t o n s dans cette note le protocole d'obtention d ' a n i m a u x triploïdes par choc t h e r m i q u e chez la t r u i t e a r c - e n - c i e l , ainsi que q u e l q u e s indications sur l'intérêt et les caractéristiques zootechniques de ces a n i m a u x .

S U M M A R Y

A m e t h o d to obtain t r i p l o i d a n i m a l s in r a i n b o w t r o u t by heat shock is described.

S o m e indications on the practical interest and features of those triploids are given.

Article available at http://www.kmae-journal.org or http://dx.doi.org/10.1051/kmae:1983008

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Compte t e n u des caractéristiques du traitement (voir plus loin), il semble souhai- table de ne pas réaliser des mélanges de plus de 4 à 5 pontes (environ 2 0 0 0 0 œufs).

Avec dilueur : les ovules sont égouttés, puis mélangés au sperme. On ajoute r a p i d e m e n t le dilueur dans les proportions : 2 0 0 0 0 œufs - 5 à 10 ce de sperme •> 5 0 0 à 7 0 0 ce de d i l u e u r (quantité suffisante pour recouvrir les œufs sous environ 1 cm de liquide)

Le m é l a n g e est laissé au repos 1 0 m n puis mis dans l'eau dans les paniers d ' i n c u b a t i o n . On déclenche le minutage lors de cette mise dans l'eau. Dans le cas où les œufs sont rincés avant d'être mis en i n c u b a t i o n , le minutage doit débuter au début du rinçage.

Sans dilueur : on ajoute l'eau au mélange ovules ~ sperme. C'est alors que l'on déclenche le minutage. 10 à 1 5 mn après, les œufs sont lavés puis mis dans les paniers d ' i n c u b a t i o n .

2) Première incubation

Les œ u f s doivent rester 2 5 mn après le début du minutage dans une eau d'incuba- t i o n à environ 10° C ± 1

C.

Pour s'assurer de la q u a l i t é des o v u l e s et de la réussite du traitement, on c o n s t i - tuera dans t o u t e la mesure du possible deux petits lots témoins représentant un mélange des différentes séries de ponte et qui ne seront pas soumis au choc chaud :

— u n lot d'ovules q u i sera mis dans un incubateur sans avoir été fécondé. Ce lot ne devra présenter le l e n d e m a i n matin q u ' u n nombre d'œufs blancs extrêmement faible (moins de 5 %). Dans le cas contraire, la qualité des pontes est certainement médio- cre.

— u n lot d'ovules fécondés normalement. C'est par rapport à ce lot que le taux de réussite du t r a i t e m e n t au stade ceillé devra être jugé (voir II).

3) C h o c chaud

O n se procurera un bac de 5 0 à 1 0 0 I. pouvant recevoir directement les paniers d ' i n c u b a t i o n , afin d'éviter les transvasements au début et à la fin du choc chaud qui peuvent faire blanchir r a p i d e m e n t de n o m b r e u x œufs. Si la régulation t h e r m i q u e est assurée par une résistance, ne pas oublier q u ' i l faut environ 1 heure pour monter de 10° C à 2 6 ° C dans u n bac de 5 0 I. avec u n e résistance de 1 0 0 0 w a t t s (et donc 2 heures pour 1 0 0 I.)

Il est donc préférable de m e t t r e en route le b a i n - m a r i e et de vérifier sa stabilité t h e r m i q u e avant le début des fécondations.

D'autre part, pour un bain-marie recevant une nouvelle série de 2 0 0 0 0 œufs toutes les 10 m i n u t e s , une résistance d'au moins 1 0 0 0 watts est nécessaire pour assurer la régulation t h e r m i q u e dans un local non chauffé.

2 5 mn après le début du minutage, les paniers sont posés doucement dans le b a i n - m a r i e et agités pour équilibrer la t e m p é r a t u r e . Il semble préférable de ne pas dépasser 20 0 0 0 œ u f s par panier pour obtenir une équilibration rapide.

2 mn après le début du choc chaud, on vérifie avec un t h e r m o m è t r e plongé au m i l i e u des œufs, que la t e m p é r a t u r e a dépassé 25° C. Sinon, on continue à agiter l e n t e m e n t le panier.

Après 2 0 m n dans le b a i n - m a r i e , les paniers sont doucement remis dans les auges d ' i n c u b a t i o n et agités lentement quelques instants pour rééquilibrer la t e m p é r a t u r e .

4) Durcissement

A la sortie du choc c h a u d , les œufs ne sont pas encore durcis. Il faut donc attendre

e n c o r e au moins 3 0 m n pour pouvoir les m a n i p u l e r pour transvasement, t r a i t e m e n t au

Romeiod ou nettoyages...

II. R E N D E M E N T D E LA M É T H O D E

Si des mortalités apparaissent dès le l e n d e m a i n (œufs blancs), elles sont dues soit à des m a n i p u l a t i o n s trop brutales des œufs, soit à une mauvaise qualité des ovules.

Dans ce cas, la comparaison au lot t é m o i n " non fécondé " f o u r n i r a une indication précieuse. En pratique normale et avec des ovules de bonne qualité, aucune augmentation décelable du taux d'œufs blancs ne doit apparaître a 2 4 h.

Par contre, lors du tri au stade œillé, il faut compter une é l i m i n a t i o n d'environ 10 à 2 0 % de plus d'œufs morts ou a n o r m a u x (petits yeux, taches hémorragiques).

Cette proportion sera beaucoup plus f o r t e en cas d'erreur dans le m i n u t a g e (choc c h a u d trop précoce, ou trop tardif, trop long ou trop court) ou dans la t e m p é r a t u r e d u bain-marie (trop chaud).

Sur la base de nos observations, nous d o n n o n s ci-dessous les bornes p e r m e t - tant d'obtenir des résultats encore acceptables :

Paramètre O p t i m u m Tolérance

M i n i m u m M a x i m u m

Durée de préincubation 2 5 m n 1 5 mn 35 mn

Durée du choc chaud 2 0 m n 15 mn 25 mn

Température de choc chaud

2 6 , 5 ° C 25,5° C 2 7 ° C

Par contre, nous n'avons pas d ' i n f o r m a t i o n s précises sur les tolérances concernant la t e m p é r a t u r e de p r é i n c u b a t i o n . On essaiera donc de se rapprocher au m a x i m u m de la t e m p é r a t u r e de référence de 10° C.

Pendant l'éclosion et au cours de la résorption, une nouvelle perte d'environ 10 % est à prévoir (mortalités et a n i m a u x malformés) par rapport au t é m o i n . III. C A R A C T É R I S T I Q U E S D E S A N I M A U X T R I P L O I D E S

Nous ne d o n n e r o n s ici que q u e l q u e s indications s o m m a i r e s , les études étant encore en cours.

1) Survie et croissance en cours d'élevage

Nos données actuelles portent sur la croissance et la survie au cours des deux premières années d'élevage dans des conditions de survie bonne mais de croissance assez lente. Nous observons :

— une survie correcte des triploïdes, l'écart entre diploïdes et triploïdes étant générale- ment inférieur à 5 % sur la période de 3 mois à 1 an.

— une croissance plus lente des triploïdes, l'écart pouvant a t t e i n d r e 2 0 à 25 % e n fin de première année. L'écart semble se restreindre au cours de la deuxième a n n é e , mais reste en faveur des diploïdes au début de la période de m a t u r a t i o n sexuelle (sep- tembre).

2) Reproduction

D'après nos p r e m i è r e s observations, il apparaît que, c o m p a r a t i v e m e n t à un t é m o i n diploïde dont presque tous les a n i m a u x , mâles et femelles, sont m a t u r e s à 2 ans, les triploïdes présentent au m ê m e âge :

— des mâles dont le t e s t i c u l e est développé, conduisant à des rapports g o n a d o s o m a t i - ques ( g o n a d e / c a r c a s s e ) du m ê m e o r d r e que les diploïdes (6 à 7 %). Ces t e s t i c u l e s ne semblent cependant pas évoluer j u s q u ' à la spermiation.

— des feme Iles dont l'ovaire est g é n é r a l e m e n t extrêmement réduit (moins de 1 g r a m m e

pour des a n i m a u x d ' e n v i r o n 8 0 0 g) et ne semble pas susceptible d'évoluer u l t é r i e u -

rement.

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De ce fait, l'indice de carcasse (poids de carcasse rapporté au poids total du corps en %) des f e m e l l e s triploïdes est voisin de celui des témoins i m m a t u r e s (88 à 9 0 %) et n e t t e m e n t supérieur à celui des animaux matures (généralement inférieur à 85 %).

Des études plus précises de la c o m p o s i t i o n corporelle, n o t a m m e n t au niveau des réserves lipidiques, sont cependant nécessaires pour préciser l'intérêt de ces animaux stériles.

B I B L I O G R A P H I E

* BILLARD R., 1 9 7 5 . L'insémination artificielle de la truite Salmo galrdnenRichardson V. Effet de la d i l u t i o n et définition du rapport o p t i m u m g a m è t e s / d i l u e u r Bull.

Français Pisc., 257, 1 2 1 - 1 35.

* BILLARD R., 1 9 7 7 . Utilisation d'un système tris, glycocolle pour tamponner le dilueur d ' i n s é m i n a t i o n pour t r u i t e . Bull. Français Pisc, 264, 102-11 2.

* BILLARD R., 1 9 8 3 . Sur quelques possibilités de maîtriser la reproduction chez les poissons téléostéens. La Pisciculture Française, 67, 1 5-34.

* CHEVASSUS B., CHOURROUT D., JALABERT B., 1 9 7 9 a. Le contrôle de la reproduc- tion chez les poissons. I. Les populations " monosexes ". Bull. Français Pisc.. 274, 3 2 - 4 6 .

* CHEVASSUS B., BLANC J . M . , CHOURROUT D , 1 9 7 9 b. Le contrôle de la reproduction chez les poissons. II. Reproduction différée et stérilité. Bull. Français Pisc, 274, 1 8 - 3 1 .

* CHOURROUT D., 1 9 8 0 . T h e r m a l induction of diploid gynogenesis and triploidy in the eggs of the r a i n b o w t r o u t (Salmo gairdneri, Richardson). Reprod. Nutr. Develop., 20, 7 2 7 - 7 3 3 .

* CHOURROUT D., QUILLET E., 1982. Induced gynogenesis in the rainbow trout : sex and survival of progenies. Production of A l l . triploid populations. Theor. Appl.

Genet., 63, 2 0 1 - 2 0 5 .

LINCOLN R.F. et SCOTT A.P., 1983. Production of all. female triploid rainbow trout.

Aquaculture, 30, 3 7 3 - 3 8 0 .

THORGAARD G.H. et G A L L G.A.E., 1 9 7 9 . A d u l t triploids in a rainbow trout family.

Genetics, 93, 9 6 1 - 9 7 3 .

* Les articles peuvent être demandés au Laboratoire de Physiologie des Poissons I.N.R.A - 7 8 3 5 0

J O U Y - e n - J O S A S .