DPNI : comment ça marche?

DPNI : comment ça marche?

Dr Caroline Schluth-Bolard

Laboratoire de Cytogénétique Constitutionnelle Hospices Civils de Lyon

Lyon

13 février 2019

Lyon Neuroscienc e Resea r c h Cen t e r

Le contexte

• Trisomie 21 :

• Anomalie chromosomique la plus fréquente

• 1^ère cause de déficience intellectuelle d’origine génétique

• Dépistage pré-natal :

• Marqueurs sériques, clarté nucale, âge maternel

• Diagnostic de certitude : caryotype fœtal

• Prélèvement invasif

• 0,5-1% de fausse-couches iatrogènes

Développement de tests non invasifs

Le support : ADN fœtal circulant

• Petits fragments d’ADN fœtal circulant librement dans le sang maternel

• Origine : cellules trophoblastiques en apoptose

• Avantages

• Détectable dès 6 semaines d’aménorrhée

• Rapidement éliminé après l’accouchement

Principe des tests non invasifs

Mésenchyme extra- embryonnaire Cytotrophoblaste Syncitiotrophoblaste

• Inconvénients

• L’ADN fœtal est dilué dans l’ADN plasmatique maternel

• Fraction fœtale : 10-15 % de l’ADN plasmatique total

• Moitié du génome fœtal commun avec le génome maternel

Dennis Lo and Chiu, Nat Rev Genet, 2007

Le support : ADN fœtal circulant

La méthode : Séquençage haut-débit

• Comptage chromosomique relatif :

Sur-représentation des séquences issues du chr 21 en cas de T21

Détection trisomies 21, 13, 18

Un principe…différents tests

tous les chr

Techniques génome entier

Fermées Ouvertes

chr 21, 13, 18

Techniques ciblées

chr 21, 13, 18

Aneuploïdie Sensibilité Spécificité

Trisomie 21 99,7% 99,6%

Trisomie 13 99% 99,6%

Trisomie 18 98,2% 99,5%

Monosomie X 95,8% 98,6%

D’après Gil et al., Ultrasound Obstet Gynecol, 2017

+

-

• Pas de diagnostic de certitude : test de dépistage confirmation par caryotype fœtal si positif

• Les performances dépendent du chromosome étudié

Méta-analyse

Performances

Les limites

• Proportion d’ADN fœtal dans le plasma influencée par : - Age gestationnel

- Poids de la patiente

1. La fraction fœtale

• 0,1 à 6,1% d’échecs pour ff insuffisantes

• Fraction fœtale insuffisante: inférieure à 2-4%

(dépend de la technique utilisée)

Les limites

• Présence de deux populations cellulaires de génome différent chez le même zygote

• Sa détection dépend de la fraction de la population aneuploïde

2. Mosaïque fœtale vraie

Les limites

- Présence de 3 lots

chromosomiques haploïdes (3x23) - Caryotype à 69 chromosomes - Fausses-couches ou syndrome malformatif sévère

- Test basé sur référence interne à 2 copies

Triploïdie non détectée - Exception : test ciblé SNP

3. Les triploïdies

69,XXX

4. Liées à l’origine de l’ADN fœtal circulant

• Discordance fœto-placentaire

- ADN fœtal circulant : cellules du syncitio et cytotrophoblaste - Equivalent d’un examen direct de PVC

- Responsable de faux-positifs et de faux-négatifs

Les limites

• Aneuploïdies maternelles en mosaïque

- Constitutionnelle : monosomie X

8% des monosomies X dépistées sont maternelles (Wang et al., 2014)

- Acquise : cancer

Ex : anomalie complexe des chr 13 et 18 témoins d’une tumeur carcinoïde ovarienne maternelle (Osborne et al., 2013)

5. Liées à la présence du génome maternel

Les limites

• Grossesse monozygote :

• génome unique

• fraction fœtale

représentative des 2 fœtus

• Grossesse dizygote :

• deux génomes différents

• contribution non

équivalentes de chaque fœtus à la fraction fœtale

T21 T21

T21 N

En cas de discordance, si fraction fœtale du J_T21 <4%, résultat faussement négatif

Et les grossesses gémellaires?

Etudes de validation

Etude Population totale T21 Faux-positif

Canick ⁽²⁰¹²⁾ 24 7/7 0

Lau (2013) 12 1/1 0

Del Mar Gil (2014) 194 9/10 0

Grömminger ⁽²⁰¹⁴⁾ 27 4/4 0

Huang (2014) 197 9/9 0

Bevilacqua ⁽²⁰¹⁵⁾ 351 11/12 0

• Sensibilité 93,7%

• Spécifité 99,7%

• Taux d’échec : 4,5 à 5,6% : dépendrait du poids maternel et PMA (Bevilacqua et al., 2015)

• Ne permet pas de déterminer quel est le jumeau atteint

D’après Gil et al., Ultrasound Obstet Gynecol, 2015

805 patientes

Vanishing Twin et faux-positif

d’après Grömminger et al., J Clin Med, 2014

• Source de faux-positif

• Persistance du placenta du fœtus arrêté, pouvant encore libéré de l’ADN

• Peu de données bibliographiques

• Importance de le signaler lors de la prescription d’un DPNI

Conclusion

• Le DPNI

- Méthode de dépistage fiable et efficace, y compris pour les gémellaires

- Bien connaître les causes de faux-positifs et faux-négatifs

- Respects des indications : pas de signe

d’appel échographique

Remerciements

• Service de Génétique, Laboratoire de Cytogénétique

• Damien Sanlaville

• Marianne Till

• Nicolas Chatron

• Jessica Michel

• Marie Luino

• Christelle Angei

• Sylvie Vono

• Audrey Guillaud

• Laurence Caine

• Zainaba Ouisseee