DEDICACE
Je dédie ce travail :
A ma très chère maman, mon cher père et à mon oncle Laurent
METONGNON.
A mes chers enfants Furband et Urnedine et leur mère.
A mes frères Félix et Ghislain, à ma sœur Alice et à tous mes amis.
A Marie-dominique Moisse pour tous ses soutiens.
AVANT
–
P
ROPOS
Une partie du travail exposé ci – dessous a fait l’objet :
) trois publications
-
Gbaguidi F, Accrombessi G, Moudachirou M, Quetin-Leclercq J.HPLC quantification of two isomeric triterpenic acids isolated from Mitracarpus scaber and antimicrobial activity on Dermatophilus congolensis. J Pharm Biomed Anal. (2005) 39; 990-995.
- Fernand Gbaguidi, Giulio Muccioli, Georges Accrombessi, Mansour Moudachirou, and Joëlle Quetin-Leclercq*
Densitometric HPTLC Quantification of 2-Azaanthraquinone Isolated from Mitracarpus
saper and Antimicrobial Activity against Dermatophilus congolensis
Journal of Planar Chromatography, vol. 18. september/october 2005.
- F. Gbaguidiab , G. Accrombessib, J. Gbenoub, M. Moudachiroub*, J.Quetin- Leclercqa Identification, purification, et quantification de deux triterpènes bio-actifs par
CCMHP dans Mitracarpus scaber. Journal de la Société Ouest-Africaine de Chimie (article accepté sous presse)
Remerciements
Avant d’exposer les résultats des recherches qui ont fait l’objet de ce travail, je tiens à remercier toutes les personnes qui ont contribué à sa réalisation.
J’exprime ma profonde reconnaissance au Professeur J. Quetin-Leclercq, mon co-promoteur en Belgique, pour m’avoir donné le goût de la pharmacognosie et pour m’avoir permis de me consacrer à la recherche dans ce domaine en m’accueillant dans son laboratoire. Je tiens à lui témoigner toute ma gratitude pour son encadrement, ses conseils judicieux et sa disponibilité malgré les nombreuses tâches qui lui incombent.
Je tiens à remercier les Professeurs M. Moudachirou et G. Accrombessi, mes co-promoteurs au Bénin, qui ont suivit avec attention ce travail. C’est un grand honneur pour moi, de trouver ici l’occasion, de leur exprimer toute ma reconnaissance pour leurs rigueur et conseils
scientifiques, leur appui pédagogique et leur soutien moral.
Je remercie très sincèrement le Professeur B. Tilquin pour ses conseils et son soutien moral.
J’adresse un remerciement tout particulier au professeur P. Van Brandt qui, grâce à son implication dans la coopération universitaire au développement, a été d’un grand appui pour moi dans ce travail.
Merci à vous, membre de mon jury, d’avoir accepté de discuter et de juger ce travail.
Cette thèse en pharmacognosie, science pluridisciplinaire par excellence, n’aurait pu voir le jour sans que de nombreuses collaborations soit établies. C’est avec un plaisir particulier que je remercie :
♦ Le Professeur V. Adjakidjé pour m’avoir aidé dans l’identification de
♦ G. Mucciolli, J. .M. Tilquin et J. Poupar pour avoir réalisé les spectre RMN à 1-D et pour leur aide dans l’interprétation de ces spectres.
Je souhaite également remercier :
- l’Université Catholique de Louvain (UCL) pour m’avoir accordé une bourse pour mon DEA en Belgique et des bourses de stage au Laboratoire de Pharmacognosie de l’UCL pour mes travaux de recherches en thèse ;
- le Laboratoire de Pharmacognosie de l’Unité d’Analyse Chimique et Physico-Chimique des Médicaments (CHAM) de l’UCL pour l’accueil qui m’a toujours été réservé au cours de mes stages en Belgique.
- l’Université d’Abomey Calavi (UAC), la Faculté des Sciences de la Santés (FSS), la Faculté des Sciences et Techniques (FAST) et particulièrement le Laboratoire de Pharmacognosie et des Huiles Essentielles du Bénin.
- la Coopération Universitaire Institutionnelle Université Francophone de Belgique (CIUF), le Commissariat Général aux Relations Internationales (CGRI) et l’ Association à But non Lucratif (ASBL) du Centre Pharmaceutique de Louvain-La-Neuve pour avoir financé mes stages ;
- tous les membre de l’unité CHAM de l’Université Catholique de Louvain : Sébastien, Hélène, Mohamed, Sara, Caro pour leur collaboration, Marie-Christine pour son aide technique, Géraldine, Françoise, Marie-Yvonne, Ramazan, Jean-Paul, Véronique, Alix, Catherine, Hélène, Guy, Volodia et Marie-France pour tous les services rendus.
- toute l’équipe du Laboratoire de Pharmacognosie et des Huiles Essentielles de
l’Université d’Abomey Calavi : J. Gbénou, E. Yayi, L. Ahoussi, N. Ali, S. Kpoviéssi et M. Zinsou pour leur collaboration.
- tous ceux qui, de près ou de loin ont contribué d’une manière ou d’une autre à la bonne réalisation de cette oeuvre par leurs conseils, leur encouragement et leur affection.
! " # $ "%! & % ' ! "( % ) %* %# ! ' ! "( % ) %* %# ' + ! , + *- , + + & . / 0 + , 1 2 / 3 + 0 ) 2 /. 3 + 4 ! / / $ + 3 * " 5 6 , " ( " # % ! ! "( % ) %* %# +' , +' , + 2- 5 +, 0 "% %* % ! " * &) "7 % 8 +0 +3 + 7 " 1 ( +3 + + ! *&" % % 8 " " % 9 : +; + , * 7 * ! # ( ! & " ! % 1" & +$
+ 0 &%( %* % &) ( 8 & # * % %7 8 *9 " # < " "*: +6
, * " * * "% * , , 7 " * , , + %7 * ,+ , + - 2. . ,+ , + + ,+ , + , = ,0 0 , %*> ) * ! * " " * * "% * " " ! * * *% " * ,3 0 , ,3 0 , + / 0'
! )> %&) ( 8 ! ? < " ) % 8 $ 04
"%! & % 04
+ # % # "% ! ? & # ( &"% ! 1 & %
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
# + , 1 ; # + , + 1 2 ; # + , + " ; # + , , $ # , ! # % ( # ! % !? ( )%! ! 8 1 & % ! * & ! * % % 8 "*% 8 "&&() =! * %( " 8 6 # , (* % ! &) 8 6 ( 6 # , + ! / ? + # , , ( +0 # , 0 +0 # , + ) * ! " # ! % +0 # , + + +0 # , + + +; # , , ) * ! # ! % +$ # , , 1 2 +$ # , , + +$
# , 0 & % < " ! ( " & " **& " +6
# , 0 5 @ +6 # , 0 + 5 +6 # , 0 , - +6 # , 4 &% & * % ,' # 0 ! # % ( # ! % ! ( )%! ! 8 1 & % ! * & ! * % % 8 "*% 8 "& ) , # 0 (* % ! &) 8 , # 0 + ! / ? ,, # 0 , ( ,, # 0 0 ,, # 0 4 * 2 ,, # 0 + ) * ! " # ! % ,4 # 0 + ,4 # 0 + + ,3 # 0 , ) * ! # ! % ,3 # 0 , 1 2 ,3
4
# 0 , + ,;
# 0 0 & % < " ! ( " & " **& " ,;
# 0 0 5 @ ,; # 0 0 + 5 ,6 # , 0 , - ,6 # 0 4 &% & * % 0 # 4 # ! % ! ( )%! ! &&() =! * %( " 8 8 1 & % ! += G )" 8 % 0+ # 4 (* % ! &) 8 0+ ( 0+ # 4 + ! / ? 00 # 4 , ( 00 # 4 4 00 # 4 + ) * ! " # ! % 04 # 4 + 04 # 4 + + 03 # 4 , ) * ! # ! % 03 # 4 , 1 2 03 # 4 , + 03
# 4 0 & % < " ! ( " & " **& " 0;
# 4 0 5 += C 2 @ 0; # 4 0 + 5 0; # 4 0 , - 0$ # 4 4 &% & * % 06 # ! ! ?) ** ! $ # 4 # "%! & % 4 # + ( " * ( )%! * 4 # + ( " * ( )%! * !? < " & % 4 # + + 7&D(* 4+ # + , * * ( &"% * >* 4+ # , " * * ! *& ** % * 4, # 0 &% & * % 43
# &% & * % 7 " "* & # * 4$
? H ? ? / 2 @ ? " / / ? 2 2 5 2 / & . 5 9 2. ! +''+: $ I 2 / 2 @ H / 2 ? " ? 5 2 / ? - 5 " ? 5 ? 2 @ @ 2 / ? ? ? 5 J
!" # $% " !&& & & %" !& &" " %' !& (" ) * ) &! # % " !&
! & + %" !& ) & !& " &" " % !) , !& (" ) "! ! ) & %)
) ! & ) ! ! - # & %" !& " &" " % !)
6
.
/
.
! ! ! & ! ! ! & 2 C - 5 = 5 . " . . / / ? / ? / . 1 / J / / K 2 9* L ) /2=F ( 6$3: " 2 / ? = / M G / K2 5 N ? 2 ? / ? / ? 91 %: . O H / 5 @ ? @ / 5 I 2 ? ? 5 . @ 9 / ) 6;3 M % / 6;3: 5 G G 5 / C @ 2 B 5 / . / . / 9 6;3: * / @ 60+ ? 5 2 " ( C ( 9 64;: 5 2 2 C / / 5 / / * @ !. / / - J % & ! ! ! 2 % ) & 1 & > / / @ 5 2
1 / + J / $& +'' ' 2 H / ? ? / @ O . 7 2- . H ?2 2 ? ? / 2 ? " 9 2. ! +''+: - - . 3 P N * K ? / 2 2 / Q 2 2 C ? @ 2 N I 5 / 9%/R ! % ! 6$ M - ! 66': & 5 2 9 2. ! +''+:
, 0 ) # / 9 ' M : 5 . 9 ' S 9 : S - S S / / S S - / S S S S* 2 5 S S ( S S ( S: / ! 2 / 7 2 ! 2 -/ ? " 3* / ! 2 7 2 @ + = T -9 = : / ! 2 = ( ! 2 T / ? . / . I @ T T 664 : & , 2 ! 2 ? - 2 2 3 C- ,$ 2 ! 2 / , 2 ! 2 2 . 2 - //. ? @ . - 2 ? ! , C- 9 ) : / 2 / 2 ! 2 / ? . 2 - 9 2 / . 5 . 2 2 -/ ? +10 ! 2 / : 2 . ! 2 2 % ? ? 5 2 / ! = ! 7 E &
/ " ") !!-# ? 5 ? H -/ ' 4 @ 4 U . @ / / 4 U . @ / . ? B / / / & 9C : / V @ ? @ 3 / / 5 / &%+ @ ?2- 2 . / @ 7 = = 2 = / 2 5-1 / , J / / 9 2. +''+'
4 5 ?2- - T ? / ? 5- / / 9 5- 0$ 2 : 9 5-: # ! 9 664: / 5- 2 2 7 9 6$6: 9 66,: 5-/ T T2- /. ? 5-5- ( / =@= T 2 ( ) 2 I = 2 - ' ( 2 T2 - ' 5 T2 - / G>( T 9&$: - 2 2 60 2 - 2 / 5 2 =/ I =/ I =/ I =/ 2 = 2 = * / / @ ,; W& 0$=;+ 2 9 +0 2 : / / @ / . 2 @ / 2 / H / ? 2 @ / / / / * / / 2 - 9 2 I : ? / / 2 9 : . 2 - @ +; W& N / 2 ? 2. ' 5- . ? ?2- 2 ? / * / / ( & X
-, 1 " !-)&" ) T / O T 2 / O@ 2 5 / C K 5 - T O @ T 2- 2 @ 2 T T 2 5 . C-/ X T @ T H Y T 2 T 5 @ / ! / K T Y T 2 5 2 3 ! ! !- & 2 T . ? . Y 5 ? H ? @ 5 2 Z X2 9 6$6: ? / @ ? 2 ? ( C 9 66 : 000 H ? $4 H 5 . ? I / 5 2 T D T 5 @ ? / ? 5 . / O 2 O T 5 5 2 X - =H
; - 2 - . - / 2 -5 2 / T / 9 & * G : ? 2 . 9 2 : 9* L ) /2=F ( 6$3: 2 5 V M / 2 C 2 C C. / T 2 2 T /= / 9 ' ' : T 9 : 2 / * = 9 : 5 . 9 (' : 9 ' : ?2 2 - / 9 : 5 & B T / T2 2. = &2 C 9* L ) /2=F ( 6$3: 2 2 ? , . . / @ T 9 ' " # ' : I T 9 / = / 5 5 : // @ T 5 9 5: O T . + @ 4 / / 2 T / 2 C C T C ! / 5 / T / T @ = &2 C 9* L ) /2=F ( 6$3: 5 J [ / 9S - R S: O 2 5 &2 C / 5 ? @ [ O 9S R -S: /
= &2 C 5 ?2-/ . 2 9* L ) /2=F ( 6$3: 1 5 5 ./ 2 2 V 5 @ ? 5 O . 2 // 2 ? O . = H ? - 2. ? . ? / 5 ? / = &2 C 2 ? / @ 9 I : / @ 5 2 C 2 # ! 9 664: / / T T = 2 9* L ) /2=F ( 6$3: @ ? ? . \ - 2 ? . = &2 C . / / / / = &2 C T2 5 @ / C 5 ! 2 9 660: 2 / 2 C T - C T 4 H / 2 C H / ] T T @ T 2 4 -&! " ") !!-# . O @ 5 - . . 2 ? O . // 2 2 &2 C 2 .
6 . ? @ 9 2- . 7 7 : ? . - 2 - / / ? B & ? 5 ? ? / ? / / 9 / & T / \ = - H: / 2 +4 * T 5 . 7 T 2 / -. 9 : 5 9 ''' D : / ? 5 9 ' U/D : 2 9' +4 U/D : - 9+'' D : / 9 '' D : ? 5 9 ' U/D : - 9+'' D : 5 - ? . O / O ? 5 . 2 ? . 2 ? . . 2 / 5 2 2 . @ 5 @ +; W& / / / ? +10 9 ? : 9 : / ? @ -9 ' U/: @ - 9,' U/: / @ ?2 // @ / 2 /. 5 / 5 0 & ) * & ! # " @ 7 @ T @ - @ / 2 2 @ ? - 2 - @ - @
5 - 2 =
@= - -5 T 5 T 5 - T
2 = 2 5 C / 5 /
* + " ' 2 9 2 :
, & ) & !& ! ! ! &
, & 2 @ / . / 2 2 -5 / ? / " "" $ 9 6;4: - / . ? ? C 9 6;3 : / - $ 5 2 2 5 ? ? " 9 6;3 : 2 $ / / - C R 2 9 6$4: $ 5 @ / -- C / 2 2 . -? / 5 / 5 @ ? * )- 9 6$': C M I ? @ N / ? ? ) 9 63; 63$: )- 9 6$': ?2 5 2 = C. ? . / @ 9 6;3 : ? - C ? 2
-+ ( - 9 63 : - 2- - @ B * X 9 6$3: ) ( R 9 6$6: $ @ ? / ? C 2 2 - /. / / ?2 H - Z 1%) 9 6$4: / $ 9 66,: ? 9 / : 9 / ? / = C / . / 2 2 : 5 ? . / O $ - 5 . # "! * $ 9 6$6: & / 2- ? - ? 2 -@ ! 2 / H 2 - ( - 9 63 : 9 6;4: - 2- - - ? - . / 2 & 9 63;: 2 &% 9 636: ;4 / ;4 ''' DX/ - H 9 6;4: I 6+ ;$P 5 2 / !? . $ 9 6;6: - / 9 : ? H ( 5 %/R $ 9 6$ : 5 I . / ? @ $ $ " $ 9 6$0: H +4 - +' '' X/ +' - 9 ' / - +' / - : 5 = - * $ 9 6$4: $6P / 2
- @ ;4 ''' L/ ? $4P / R 2 9 6$4: @ / - ? 5- -- C . ( ? Z X 9 6$6: ? 5- - 9 / : - - -$ ? 2 O ? 5- - 2 O . 0. H . - -O @ ;. 6. H - N H / 2 C 5 " - $ 9 66': ? 5- - I I 2 2 2 / - . ? / ? ? ( ? H ? I 2 J ? - / 5 ?-- 9 6$+: ? 2 5 ? O 5 ?I ? ? @ ? !? -5 ? $ & 2 / 2 ? I N ? 5 2- 2 C 2 9 63$: G 9 66 : / 2- 2 C $ 2 C 5 $ %H 9 6;4: Z 9 6$': R 2 X 9 6$ : 5 ? / / 2 L / $9 66': $ 2 # G 9 66 : ? 2 2- / / $ -9 6$+: G 9 66 : 2 C ? 2
2-+, ? $ I ? 2- 2 2-/ / ? / @ $ I 2 2 C ? / 2Y 5 ? # $ I 2 $ * - 9 6$+: 2 / 2 ? . 2 2 O I ?I , ) & !& ! * ) " &% 9 6;3 : ? 5 @ . 2 ? / ? 5 ? 2 ? & / H Y I & ( 9 60 : 9 6;,: / / . 5 (I - ? 2 ? ? ( R $ 9 66,: ( C $ 9 66,: = - 2 9 6;3: 2 )- 9 6$': ? - 9 5: - / & 5= - ? //. / . 2 2 5 @ ? * 5 H@ 9 : / 9 2 @ ? / :
? ! ? / 2 5
2
! !
!&
&"
- ! #
! 2- 2 2 / 2 5 2 "" 9 +'',: & 5 ? 5 2 "" ? ? 5 9 / 0 4 3: 1 / 0 J 2 9 +'',:+4
1 / 4 J @ ? 5 $ 9 +'',:
6 &
%
/ @ " & * " & @ 9 : @ ! - ( / @ ? 7 " &? 2 4'' / . ;'' . % C M T . / & 2 = ? J - . / . 2 2 - 09=4: . / . M 9,A:0 4 $A ' ? 0=4 @ M 2. @ 2 / /- +9A6: M . +9=6: M = 2 / 9 : 5 9 +9=6: : M - @ 2 C +9=6: / / 5 ? - / 9 / 5 J & ! 6$4 M ) -R 2 663 M ( ! +''': / - - 9) ! R / +''':J G M 9 : !& M " 9* 2 2 2 : " 9*R: !& " / 9 H 2 6$6: J = 1 7 J 7 XR M = > J .X M = X J M = 2J ! / R+;
"
!& ! &#
)
!&$
)&&'
2 @ / , @ 3 / H ?@ / / / 2 / @ ? &? . / / ? 91 / ; $: % * 2 5 * / 9L 2 F 6;0 : / % 5 9 K . : / 9 # HX H. & : 1 / ; J 2
1 / $ J
, - & ) "& !&& % " &
5 . ? / 9 C : 9) ! R / +''': / . - 9L L / 66': H - 5 2- -?2 . ! 2 I . -/ ? + 5 2 -= / ,' 9 H 2 6$6: ! 2 ! & 9 H 2 M ) R / +''': (+ . 9! C F ( 60$: * . ) /
+6 / $ / - 2 9L L / J 2- 2 66' L 2 F 6;0: 2 /! ! !&" # " ) !!-# $ * & ) ' ? H 2- 2 ? / 9 : ) ) 664 ? 9 / 2- / - 4 '= 2- 5-=+)= 2 2 ^+ ,= _= - =4 '=β= != / - : ? `) a / 9 )= 2 2 ^+ ,= _ - =4 '= : 2 2 %/ 666 2 2 / %X 666 C 2 9 C^/_ =4 '= : " 2 / 2 /. * ! @ ? 5 2 2 5 7 ( 666 2- 2 ? 5 2 / +''' ? ? / 0= 2 5- 2 , 0 4= 2 5- 2 ? , 0 4= 2 5- C B X =,=%= . & ? / ? , 0 4= 2 5- C B 2 ' - 0= 2 5- 2 , 0 4= 2 5- 2 2 9 / +''': / 9X =,='= . : / - ! 9%X +'',: = / ?2 / = 5 9 X 66,: C / ? 2 5 B H ? ? B ? 9G:= =6= . B ? B ? 9GG: =6 += . B 9G:=2 5 =6= . B ? B ? B 5 ? / 5 2- 5 . 5-/
* ) ) 664 O O O O OH OH OH CH 2 O OH OH OH CH 2 HO HO I / 2-/ - 4 '= 2- 5-=+)= 2 2 ^+ ,= _= - =4 '=β=!= / -666 M %/ 666 O O O )= 2 2 ^+ ,= _ - =4 '= / 2 / %X 666 N O O C^/_ =4 '= 9+= C 2 : / * ! / +''' COOH HO HO HO / 2 ' / +''' C H3CO CH3 O 0= 2 5- 2 2 / +''' C H3CO H3CO H3CO CH3 O , 0 4= 2 5- 2 2 / +''' COOH H3CO H3CO H3CO 2 '
, , 0 4= 2 5- C B / +''' O OR OH HO O OH X =,='= 9" b 7 3="2 : -/ +''' O OR OH HO O OH OH " 9" b 7 3="2 : -/ +''' O O O . -J , & ) ! . 5 ? $ $ ! H@ . / J " 9 X +'' : , 6)&) ) . - ? . @ 4 ( / / . - 2 - 2. 4 . ? .
/ & ) ! & / !& *
) . 4 .
2-( . + ' . 2 2
-! . 0 +' 5 2 / X/ * . 4 +4 2 . 3 ,' . . $ 0' c= . - . - d 4 2 +J . +, ''' . / 2 2- B . 5 @ ./ 4 e+; , !- &
, ! & & ) ! &
- 2. . ? ? - & " " 2 9 666: - 2. 5-5-2 2 9 2 +'' : 9* 2 2 +'' : & 5 - 2. @ I ? - - 2 2 9 : . - 2. . & 5 . - 2 5-5- 2 2 9 2 2 / : & ? 2 / 5 9" 2 666: , + + & - 2. - 2. . 9-B : / 5 . 1 / 6 6 - 2. ? -- 2 2 @ ? - =& ? 5 C- - - 2. - . . B .
,, 1 / 6 J - 2. @ ? - C-Y ? . - 2 91 / 6 : & C-- 2. ? 2 . ? . ? . ? 2. % @ ' + / ? . 9Z C +'',: & H Y . ? H 2 - 2. &? 5 5 @ ? C 9 +'' : ! H Y f 2 g 2 9L 666 M * / 66;: 2- H Y @ ? . 91 2 +''': 1 / 6 J - 2. . @ + ! ) )(7=& SCoA O O O SCoA O COOH OH SCoA COOH HO OH - =& - =& )(7=& - 2 )(7=& ( ( 4= - 2 2 9( 4= : ( + ( X COOH HO OH COOH PPO OH ( 4 5- PPO - - 2 2 9 : PPO ! 2- - - 2 2 9!( : . . - 2 HO ( 2-- 2 (
2-, + 2-, = & . . J = / - 2- ,= 2 2 D- 5-5- 9!< : 2- - 2 2 2 9( : 9! R X +''+: ? /. C- - 2. 5-5- 2 2 2 C / C - 2. . B 9! R X +''+: = @ - 2. . . . 9 B : . 2 N -2 2- 9 H 2 : 9! R X +''+: / / - 2. . ( &! . 9 !( : 91 / ': ? / 2- 9 2 2 +''': Y ? / ? !( I @ ? I 9! R X +''+: 7 V 5 2 ? ? ,& . - 2.
,4 1 / ' J 9! R X +''+: - - 2 2 9 : ! 2- - - 2 2 9!( : COO -O H OP O OH OP OH OH O OH OP OH HO OH O O OH OH N N NH2 O OH HO P O P O O O OH OH OH O O OH OH N N NH2 O OH PO P O P O O O OH OH -+=&= 2- =!= - 2 =0= 2 2 9&! =( : = 5-=!=5- =4= 2 2 9!< : 0= 2 2 - - =+=&= 2- =!= - 2 =+= 2 2 0= 2 2 - - =+=&= 2- =!= - 2 !=/ - 2- =,= 2 2 &! =( X !< &! =( - 2 !< - 2 OPP OPP OH O O P O P O OH HO O OH +=&= 2- =!= 2 =+ 0= - 2 2 9( &! : ( &! - 2 hhh
2 ,
! &
&
) ! 7
& )
!
&
2 , & ! " !& . &,' / - - 2 ,*=+ ,= 5-=+ ,= . . I 9 / : H 2- 5- , 9 ? ? 5- : 1 / J + ,= 5- . - 9 F 666: . / 90''' 0' : . 9&2 R # 66 : H ? / @ ? 5- . 9 . : - 9 / : - * + 2-? 5 A -/ 91 / : . - 5 / i c - 9i b / J / c 2 : . C J 2- 5-2- / 5- / 2-- 91 / : 5 " * - J 5-= - 2 N &-,;
,6 . / / / i c - . . 9 / + : 2- 0 0 ? 5 9&2 R # 66 : + , 0 4 3 ; $ 6 ' + , 0 4 3 ; $ 6 +' + ++ +, +0 +4 +3 +; +$ +6 1 / + J / / 2- - 2. 2- / / . - - 5 -2 5 2 5 - 91 / 0 : I + ; $ 6 +' + ++ +4 +3 +; +$ +6 ,' , 0 4 3 ; $ 6 ' + , 0 4 3 ; $ 6 +' + ++ +, +0 +4 +3 +; +$ +6 ,' % ) +0 +, 1 / + J )
2 , " ) !!-# # # " )&# . ?2 9 : / - 91 / ,: 5- @ 5-9 F 666: 5 ? / ? / 9F F 664: J @ 2 = 2-& / ? 9 ,: Me Me Me Me Me Me Me CO2H HO H H H R S R R S R S S Me Me Me Me Me Me Me CO 2H HO H H H S S S S R R R R R S Me Me Me Me Me Me CO 2H HO HO HO H H H R S R R S R S S R R R R Me Me Me Me Me Me Me CO 2H HO HO H H H S S R S R R R R R S = = #= =
0 Me Me Me Me Me Me Me HO 2 C CO 2 H CO 2 H O O O O OH O OH OH OH OH H H H H H R R S S R R S S S S R S S R S R S S S #= 7 - - 2 C Me Me Me Me Me Me HO2C H2C OH H H H H S R R R R R R R R S Me Me H Me Me H Me O H H e M CO 2H e M I # = # = R 1 / + J
" ) (" )&# 8 ! (" !& )%) &" 9 : = )- / - ( ) 66$M > 2 X R ( 663M > 2 X R ( 663M # X 6$+ =) # 9 : 9 : / - - 2 C 9 #: 2 L 2 R > 66$ +'', = 2 2 5 9 : 9 : / - - 2 C 9 #: = ?2 5 2 = 5-5 -= & 2 2 2 2 2 / 2 > 66$ M F 664 F F 664 F F 660 ( 6$3M 6$$ M 7 6$$ M %2 / 2 6$$ M %2 / 2 6$3 M +'', M 6$; ( 6$3 G2 / 663 G2 / 6$0 = . 9 : / - - 2 C 9 #: 9 : # 1 & 66$ +'', 2 C-= = 9#: = * ? ? 5-5- 9 %*: - 5-/ 9&%<=+: = 2 ?2 9 : = 2 ? ! / = / ? 2 2 ? 5 * 2 66$ M ) F> +'' 7 663 / 66
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
-2- 2
00
39 ./3 8 :
2- 2 04
39 ./3 8 :
( ;
3
.
:
& ! " !&
* 5 ? ? 5 2 $ "" 2 9 +''+: 5 " I ? 5 2 $ $ 9 +'',: ? 5 / 2- 2 ? $ 5 $ & ? / ? 5 - . =/ ? 5 2 = / @ ? 5 9 : 9 : 9 : H ?@ ? / ? -$ & ? / ? ? 2- 2 - ? /2- 2
03 !& & ! (" ) & " ! && & %" !& ) &
$ //8 ' "! ! ) (* ) &! # & ! " !& . ? 2- 2 N / @ ? / / 2- 2 @ 2 9& : = ? 5 2 & A ? ? ? 2 ? 5 8 ) ) ! 8 ) )-) / & -=& 2 ?) K 9 W 3+4+D) : 2 2 @ ? . 4 H 9 2 H : @ 2 / @ 4'W& 0$) 9 2 +''+: X @ ) !& (* = 8 ") !&< 0'/ 0$ 2 = "! !&J & 5 T 5 H / / /
2- 2 0; / - & @ / . @ / 2 9 ! Q 6; : 0'/ 0$ 2 ? 2 @ @ D H ?@ 9 / 4: = 1 / 4 J 2 ? = * " !& 0!* < &? 2 ? 5 * 52 91 / 3: ? 2 / / K 2 / 5 - . 2 2 @ -& - . ? * & & 1
2- 2 0$ 2 0'/ 5 4'' ? 2 H ?@ 2 1 / 3 J 2 ? 52 , / - !" # . ? - 2 ? @ & 2 ? 5 2 2 / 2 @ ! / 5 2 5 / -/ 2- 2 - 2 @ 2 9 ,: ? / F ) /2 J a ' ( & + + + / a9) /2 66$: " / 2 & 2 * * 2
2- 2 06 / &" " % ) " % )"%# ) " !& 0( =! / 9 2 :→→→→ / =( - 9 : →→→→ H V && =1 &, →→→→ = 1 !&!> =*2 9 @ - :→→→→ / = /
& !" & =& /
"! & !" & = 2 2- 9 %) 4'WD)& +J :→→→→ /
) ) # &!&# = → j/ 9 - )0%): →→ → / 0 !&! =! T 9 (k '': 0 ) !> & = = 2 9 2- =)+*%0 4'J : → →→ → =L 9 C B P T %) E %) J : → →→ → / 9 : ) ) " &!-)&) # =7 / 9 / T :→→→→ 8 " - = 3 & = N @ =% , / 2- 2 2 & //8 ? 5 2 2 ? - 5 2 ? - 5 2 / 2 2 9&&(: & 2 ? / O 91 / ;:
2- 2 4' 1 / ; J 2 ? &&( 5 - &&( ? @ ? - &&( @ 2 / 2 1 ? - &&( ? 5 2 5 - J . B B 2 2 ? 5 5 &&( ? ? 2-2 " D 7 9 D - 2-/ - / : 1 &, 9Z / ) * 664: & C 2 2 C 9 B : ! / 9Z / ) * 664: ? @ 'P ? 2 / ? ? # 9+40 ,33 : @ ? 2 2 - ' U ? @ 4 /D 2 ? / . = ? 2- =( 2 9$'J $J+:
2- 2 4 ? 2- & . B !? 2 ? - ? -? 2 &&( = J = & * / 3' 1+40*( Xl = ) & * / 3' 1+40*( Xl = " =$ 1+40*( Xl = " = $ 1+40*( Xl = & 1 ( Xl = 3' 1+40*( Xl 9 - : = * / 9+ : ( Xl 2 J = & J . = ? 2- =( 2 9$'= $=+: 9 - . : [& J A A 9 ' = ; A : 9 *- . +: [ ? 2- A A 93= = : 9 - . ,: [ ? 2- = / = = 9 ''= = =+3: 9*- . 0: = B J [&2 = ( 2 = ' P 9$'=0'= 4: 9 - . 4: [ . = ? 2- = ! 2- 9;'=+'= ': 9 - . 3: [) 5 = ? 2- = ( 2 9 '=4=+: 9 '=4= : 9 - . ; $: [) 5 = ? 2- 9 '=4: 9 - . 6: [ C. = ? 2- = 9,3= +=4: 9 - . ': " J = 2- J J %) = 2- = 96'=4= : E 4P )+*%0 H 5 . 2 / 4 @ '4W& ! J * 9 = = : #
2- 2 4+ & J . B m = ' P J J ' )+*%0 $' ? +' ? 2 . 2 / 4 @ '4W& ! J * 9 = : & J / = # J J # 9 P %): E )+*%09 ' P %): / J . 2 / 4 @ '4W& ! J * 9 = = : # & J . B m = " ! / J * J ' $4 / 2 ' ? 0' ? * J $ / ? ,' ? * X J * =* 9 J : * J X E + ? E ' ? ! J * H V & J B = " D 7 9 D - 2- / - / : n J / 4P - 2- . / - 3'' ? 2 9 / 2 - += 2- : '' 2 @ 4' J4' n ! J F @ / # ,34 n& J B 2
2- 2 4, = " 1 &, n J 'P ? 1 &, n ! J F @ / @ # ,34 n& J B 2
4
1 " !&& & 4 1 " !&& & # = # &? 2 ? / / &? /)*&&& 9) /2 * & =& &2 / 2-:
= 2 94' =4': 2 2
@ 9 / $: ? 5 2 / =
2 5 , 4' ?
1 / $ J 2 ?
4 1 " !&& & "!!&& " 7 !& ! ) #
2 / 2 2 2
? / /
& 2 ( & ?) &
? 2 / &? . =/ 2 * / * & Y
2- 2
40 /
? !& "!!&& % " !&& & (" & !&
= 2 ' '3+ =' + 2 9 ''/ ,'' ( %) +02: + + . +' 2 = 4 / ? 5 2 4 2 = 4' 2 2 ? J =: 2 M +=: 2 = . 94'=4': M ,=: 2 2 M 0=: 2 2 = ? 2- 94' =4': M 4=: ? 2- M 3=: 2 2 = 94' =4': M ;=: M $=: = 2 94' =4': M 6=: 2 5 !!-# 5 & " ! & = 8 ) !!-# ? ( / ? & 2 9 W 2 J 0,',;M +W 2 J 00 $' b && 03,; 2 - : 2 2 C !*(G 9! 2 * / # ( X / G X 7 : 9 ] / &": / ? &
? ) !& !& % " !&
5 / 94'P=4'P: 2-
5-9!(*%: = . @ !(*% ,P
! !(*% @ I @ 2 5
2- 2 44 & 5 !(*%= 94'P= 4'P: & ? 5 +' / 9 U/D : +''''U/D '''U/D ''''U/D 4''U/D 4'''U/D +4'U/D +4''U/D +4U/D +4'U/D 3+ 4U/D 3+4U/D , U/D , 'U/D 3U/D 44U/D $U/D ;; 4U/D 0U/D ,6U/D +U/D 0 J ? 5 N
? ) !& !& ) !& (& ! #
- 9* / ,,$, $6)'6 4: ! @ +$' 30' ,+' 3' $' 0' +' @ 'U/D 2- / 2 2 / 6 ( =) / 9( =) / + 5 4 ';4: J 30 M ,+ M 3 M $ M 0 M + M M ' 4 U/D ? ) !& !@ ? ( =) / 9( =) / + 5 4 ';4: @ ,$/D @ 04W& ! 2 N 2 ? 5 9 : M . 6 9@ 04W&: ? 2 / . / N 2 @ ,;W&
2- 2
43 = & &" & ) & !& /8
? 8 &" ! " / 2 X ED= ) 9 2 2 - * H 2 = %5 : ! N / / 9& / ( 4P ! X : 2 / @ ,;W& % / ? K ? 2 ? ) & !& /8 &( 2 ? / 9 & & - * 66': 2 2- / ? ED= ';/ D N +' ? 5 ? / 0''! - 9 UD '0/ : 0 H @ ,;W& . H ? 2 ? 5 &( J & ( 2 ? @ 2 . / ? 2 / ? 5 / 94'P=4'P: 2- 5- 9!(*%: =
2- 2 4; 5 " !!*" ) [! *&" % ! * X !(*% @ ' /D @ 0W& ? - 5 5 ? 9) : F=;;0 J 2 / ( C 9( : C 2- / C 9 : @ ? @ 63= 4''' ) F=;;0 2 '' U 9!( ( 7 " : 'P \ +02 @ ,;W& 2. 2 &%+ 94 P: . +02 ? ''U ? 5 H 5 ; Y / !( ( !(*% @ X % . Y / - '' P 4' P Y / 9 &4': 4 ? 5 ? 5 H ;+2 '' U ( 9* / : 9' , /D *: . 04 @ C '' U !(*% / ? @ ? ? = @ / ? 4;' 3+' ? @ ? Y / 9 '' P : / '' / Y P = ×
2- 2 4$ [ & # / Y / / 9 o' '4 b / M o' '' b / : & ? &4' I
2- 2
46
, ) " !&
, & & * " !& ) !& " ) & " ! && * ) &! # ? 5 0' / 2 4 & @ 5 ? 5 ? 5 & 2 I ? 5 2 ( 5 * 52 " 9P: 4 6 3 $ $ 4 J 2 ? 5 &( 9 4 : 5 2 . 0 H $ &( 5 9 '''U/D : - 9 U/D : & ? / ? / ! ? ? / 2- 2 ? 5 2 5 &( . 0 H 4''U !(*% - U/D ( ''' U/D ''' U/D * 52 ''' U/D 4 J 5 2
2- 2 3' , & !" # / 2- 2 & T 2 ? 2 5 2 3 J / 2- 2 E J M EE J M = J / / 9 3: 2 ? ( X . " 9 X +'' : ?2 ? X 9 X 66,: B / %=/ - $ 9 / +''': & B / ? 2 2- 4P ( - / & / ? C 2 $ 9%X 666: 5 B 2 2 & 2 2 5 ? 2 2- 4P B K 5 @ 2 2 & @ 5 5 B B &&( 9 2 J 2 = 2 = ' P 9$'J0'J 4: J & * / 3' 1+40* ( Xl: &" " % ) B =DE E 1 B ! EE E . B EE ) E
2- 2 3 ? H = / . @ ? ! / (I / 2- 2 ? / ? B / & @ . !
, , 1 " !&& & # A # (* ) &! #
4/ ? 5 2 3' 2- = 9 A 2 4'=4': 5 2 4' 2 2 ; J 5 2 2 5 2- = 8 ? 5 9 /: 3'4 $;6 ; ? 5 A , 2 / ! !- "!!&& " 7 !& ! ) # $/ ' 4/ ? 5 2 4 2 2 ? =: 2 +=: 2 = . 94'=4': ,=: 2 2 0=: 2 2 = ? 2- 94' =4': 4=: ? 2- 3=: 2 2 A 94' =4': ;=: $=: A 2 94' =4': 6=: 2 ? . / I Y ? 5 5 2- = K 2 / = J
2- 2 3+ + , 0 4 3 ; $ 6 " +'0 4 / 4, 3 / 6 / , / 0 + / + / + ' / ,; / 43 ; / 3 4 / ; J * @ ?2 / - &&( / 1 1+ 1, J = 1 b + , 0 = 1+b 4 3 = 1,b ; $ 6 -2 2
, 2 & //8 % " !&1, % " !& != "!! #
& 91 / 6 6 : " D 7 9 D - 2- / - / : 2 / 2 2 % - . 9 2 6$$: J = *- . + = *- . , = *- . 0 - &&( H I " 91 / 6 : 2- ? Y 2 / 2 2 H I " H@ 9 / +''':
2- 2 3, 1 / 6 J &&( 1, - . 0 1 &, 1 / 6 J &&( 1, - . 0 = b 5 = 94'P 4'P 2 : ? 5 2 ! + % " !& 1, * ! "!! # (* #= # ) !& # # ) ) )&! # ! % " !& 1, * != "!! # (* #= # B8 . 0 : : 0 B B0 3B . : 0
2- 2 30 =! J 9 D 7: @ ? #=,34 / +' = J J 2 / " b ' 00 M + J " b ' 6, M , J / " b ' ;4 M 0 / " b ' 63 M 4 " b ' 6$ M 3 " ' $$ M ; 6'P " b ' 60 M $ 2 " b ' 63 M 6 / " b ' $; M ' - / " b ' 6, M 2-2 " b ' $$ M + / M , X " b ' 6; M 0 & %CD,4 M 4 " b ' 64 2 C * / / . 5 = , 2 & //8 % " !& 1 1 5 / 2- 2 ? - &&( 1 1+ # ? 2-&&( H@ . 2 % 91 / +': 1 1+ ? 9& &: I " C ^/_ = 6 '= H@ 1 / +' J &&( 1 1+ 1 1+ % %E G E E E /
2- 2 34 = J 5 2 9 'U ? @ +' /D : =1 1+9 'U ? @ +' /D : & =% J 9 'U ? @ 4 /D : = J 9 'U ? @ 4 /D : = % E J / ? ? 9 'U ? @ 4 /D / 4'P=4'P: = G J C^/_ =6 '= 9 'U ? @ ' /D : = - . J - . ' =" J 2- 4P . 2 / ? - 2 / 2 / +' 9 E : 5 I " 5 ( 5 / I " ? ? ? 2 / I "
, 2 , & ( & %" !& ! " !) &! # ! # & % " !&1 & ? 2 E ? 9,β=2- 5- = +=. =+$= B : ? 9,β=2- 5- = +=. = B : / 5 2 1 5 . . / 2- 6 +' 9 / + :
2- 2 33 HO COOH + , 0 4 3 ; $ 6 ' + , 0 4 3 ; $ 6 +' + ++ +, +0 +4 +3 +$ +; +6 ,' HO COOH , 4 3 ; $ 6 ' + , 0 4 3 ; $ 6 +' ++ +, +0 +4 +3 +$ +; +6 ,' + 0 + 1 / + J * C OOH HO HO 6 ' P % = % ) O O = = COOH HO 6 ' P % = % ) " = 1 / ++J 9L 2 7 M 6$,:
2- 2 3; & / 5 &&( / 6'P )% = %) 9L 2 7 M 6$,: ? 9 / ++: M 2 ? / @ /. 2- 6 / 2 / 2 2 / 5 2 1 5 9 : 1 91 / +, : 1 / +, J &&( ? / 5 % % % E ! J = J = J = % J = % J = % E J /
2- 2 3$ 1 / +, J &&( 1 ? % / +, ? ? & 2 @ 1 / +, E 5 " ? 1 @ ? 9 ? / I " : " ? 1 N I % 1 ? ? - . !? 2 9 &D(* 7&D(* # " "( : 5
, 4 " ) & " ! && % " !& & !)" ! & & ) &
9&( : ? 5 2 1 1+ 1,
$ ? 5 2 &( ''' U/D
1, ? 5 A 2- =
? 2 @ 5
9 4''U/D : 1 I &( +4U/D
? 5 A 2 2 &( +4'U/D 1+ 1 = % ! J = J = % J = 1 = J 1 1 = *- . ? J . A ? 2- A 2 J $'= $=+ = " J 2- 4P
2- 2
36
&( '''U/D & 2 5
2 1 &( . 0 H 4''U !(*% - U/D 5 2 ''' U/D 1 +4 U/D 1+ ''' U/D 1, " 5 = 2 2 +4' U/D 5 A 2-$ J 1 1+ 1, ? - ? ? ? 2 1 $ &&( ? B 2 9 += C^/_ =6 '= : ? 9 : ? 9 : 9 : 9 6: ? B 2 9+= C 2 : 9&( J ; 4U/D : ? %X 9%X 666: ? / 5 I &( ? ? & ? ? ? 5 & 5 5 9Z 2 +'',M *2 +''+M /2 663M " 2 660: 5 ? 1 @ ? B 2 ? ? ?
2- 2 ;' 1, ? 2 $ @ 5 9 '''U/D J @ ? 5 : I ? / 0= 2 5- 2 , 0 4= 2 5- 2 ? , 0 4= 2 5- C B . $ ' $ 9 / +''': & . ? ? 5 2 -( &( . 0H 4''U !(*% - U/D 4'U/D * ? 4U/D ;'U/D * ? 4U/D C^/_ =6 '= ; 4U/D " ? 2 / ? 2 0= 2 5- 2 ? 2 , 0 4= 2 5- 2 ? 2 , 0 4= 2 5- C B ? 2 . ? 2 6 J &( ? 5 2 $ $
2- 2 ; , 5 !& " !!*" ) 1 (* ) &! # ? / "" 9 ? 5 X : 5 2 $ 9 2. ! : - 5 5 ? 5 ? 2 $ ? ( 2 ? 9) : 2 / 9F;;0: ? 5 2 1 - 5 ? 5 - 5 1 9 ': I F;;0 & - 5 ? 5 5 ? / 9 2. +''+: & - 5 $
1 'U/D +4 U/D 4' U/D
5 2 $4 63 ; $ ,4 +;[[ , 00 ; ++[[ +0 1 T 5 2 $6 +3 6 $ ;6 4 [ 3 3 4$ 4,[[ , 44 ' J - 5 1 ? 5 2 ) 2 / ? 2 . ''P [ o' '4 [[ o' ''
2- 2
2 /!&"
!&
? ? ? 5 ? 7 V @ " ? 5 2 $ I 2 ? 5 - 5 91 :M $ 2 $ . - &&( ? 5 2 $ ? / I " ? . ? ? ? 2 $ ! B 2 9 C^/_ =6 '= : H@ $ 2 $ & I ? $ $ & ? I / ? ? - 2 / 2 2 ? 5 $ - ? 2 9"( &D(* 7&D(*: ? 5 5 "" 9 2. ! +''+: 5 $ @ ? 5 /2- 2 J $
;,
,
!
&
& %" !&
"!
! )
(*
)
&! #
)
!&
"
)
,
& ! " !&
&( 9 $: @ 2 $ / I 2 &&( @ 5 J B . . 5 @ ? 5 2 J = ? 5 ?2 5 9 : 2 2 2 B @2 / 2 &&( # & & # 9 2 /
2-2 / 2 : ( & 9 2 / 2-:
,
8
)
) !
, * " !& " )&# + ) !> " !> ! * 4/ ? 5 2 '' )+*%0 9 ) J + 4: 5 '' =2 5 9 %): @ ) 6 6 5 '' &)+&+ 2 2 2 ? 5 B 9+ 6P: 2 2 5 90; 6P: . 91 / +0:2- 2 J $
1 / +0J 2 ? 5
? %" !& (F & # &!& $"! ! ) /'
& 9 8: ? 5 B 2 / 2 2 9 = & &&( : / / . A ? 2- = 2 9$'= $=+: 2 . @ 2 / 2 9# &: / 9' '3+=' + ' 5 4 : ? 2 9 '' : 2 2 9 4' : ? 8 9 &: ? 2 2 9+ ,P: ? 5 5 C 5 2 2 5 2 )+*%0 9 ) J + 4: 5 @ ?2 5 2 2 5 91 2 . : 2 %) @ ) 6 6 2 2 2 2 9 5 B 5:
2- 2 J $ ;4 ? %" !& & ) ! . 2 5 2 / 2 @ - 9& ( ( &: 2 / 2 @ 2 2 / 2 / C @ 9 &D(* 7&D(*: , 8 / $8 # / ! !- ' ( & 9) 66$ M ) /2 66$: 2 / & I @ ? / I ? ) & ) & / ( & / / / 4 @ +4 U ? ? ) & K / + $ U 1 / +4J 2 ( & = / 5 H 9 / +3: 7 ( 2 %( &% & "
2- 2 J $ &2 ? 2 2 9 5 4 : H ( & 2 H @ D @ 90 D : -&&( / 9 J = % =( %) 9$' J $ J+: ) 5= % =( %) 9 ' J4 J+ M ' J4 J : ) 5= % 9 ' J4: J 2- : 2 / 2 2 5 = 2 . 1 / +3 J 2 ( & = 8 !& ) !& ? @ 2 + &&( 2 2 5 1 '9' P: 1+ '9' ';P: 1, '9' '$P: 1 ' '',P: 1 +9' '' P: 1 ,9' '' : ! < 3 *= . "=8 .3 $ D<4< ' 8 / ! < 3 *= . "$ D<4' 8 / E 9' ''4: != . "=8 .3 $GD< G < ' 8 /
2- 2 J $ ;; @ - . 2 &&( @ ? / " o' , * / 2 &&( I I . ? / . = ? 2- = 2 2 5 A ? 2- = 2 - 2 5 . &&( = ( p" & J & J % 9%( 30+; 4 5 ;4' : 2 J 2 * 3' ( Xl9 / J 4=+4 U(: ! 2 J D & J 0=$ D 2 ( J . A ? 2- A ( 2 9$'= $=+: ) 5 A ? 2- A ( 2 9 '=4=+: ) 5 A ? 2- 9 '=4: " J 2-, 2 / ! !- & - F "! ) 7 " ! ) 6/H8 0 / 2 / 2 2 / C @ ? / ? -? / ! !- & - F 2 / 2 2 / C 9& 7: 2 . 5 / 5 I -- ? / I I @ ? / C 5 ? - @ ?
2- 2 J $ 2 / &? @ 2 2 ? @ ? 2 & 7 2 J H ! / & 7 @ (* @ 2 ? (* V 2 N ? 2 / C / C 9 ?2 : Y ? -@ ? K ? 2 / C ? H 2 @ ? / C 5 ? 5 / C 5 I & . I @ '' / 2 9 2 / @ @ : @ / ! 7&D(* 2 / C 2 ? (* 9 / +$: [ " ! 9*(: / 2 T -. T 2 -/ T 2 T 2 2 T - - 5 I 9" 1 " % 7 66$: ? &" . / C / C . 2 / @ T T 2 D / - T T H K ./ 9 '=0 : D2 / 9 ) 660: . T T
2- 2 J $ ;6 . J J T . T 5 5 9 5 J ( ! 1 - m : 9 T 2 2 T : + J Y 5 N / , * J S S D2 / T - - T -9 5 J - m : 0 ! J . 2 / 9 5 J T @ -T @ - m : 4 / T H & &2 T 9 : ! % * 1 / +;J T T 7&=(*
[ I!& !& " ) " !&#
T /
&T @
2- 2 J $ ( 2 2 m : T T 2 B T 2 T T 2 9 ) 660: 1 / +$J 2 T & ;' # & / T 2 N T . T / - T T ;' # ;' # T '''' [" T 1 ( E = (qEE + = 1 / ? -2 / 2 " & 7& +''' 9 2 8 -: ? *+''' 9 2 8 : - . 7& (* 9 2 8 : @ 2 / 2 9! =< M 4 d ' +4 ' +4 r . : 2 C FsZ * 9 / 2 / * : ?2 / C @ + D
2- 2 J $
$
2 H 9 J D6: ? H
/ @ +4'W& / 4'W& ,+'W& 9 'W&D : .
, / 7& , 'W&
? / ;' # @ +4'W& 2
- = 9+4'=34' :
? & %" !& "!& & ? 9 ": =2-? 9 * 64 ! (*: ?i= - 9 5 - 2. : c= - 9 5 - 2. : c= 964P * / : 9 5 - 2. : 9) : / 9* / : . 9 5 - 2 : / ? @ $3P , 4 / 3 H8 0 &? 2 / 2 @ - . @ . I 7&D(* ? 2 ? ? / - . 9 & : ? I M ? @ 9 : 9 : 9 : 9 2 : ? . ? - 9 '' : 2 / K . . 5
- . &D(* ? ( "&L=) &) 3+'' ? H
"2 - ;;+4 ? &8 / *D !''+6,
2 / 2 * ) " *%" %!& +4 5 0 3 4
U &8
? &
2- 2 J $ 2 ? & . 97 # ! 66$: I N ? 2 - ? 5 / 9 '= +/: - J 7 V @ @ 2 5 / ? 9 : J + C T + ) /. T + )- /. T & − − + + = / V @ 2. ( . / & / V @ ? - / 9(*D(* (* : ? ? - / ? /!& !& ! ) ! < 2 J $4 P 9) & / : D 4 P =8
& ) & J ( X &2 & " +4'=0 4'6$, 2 * J &2 * 2 '' " = $ 4 t 1 5 2 J ' 3 D ? - J +' / ? # J + 4 # H J +'U " / #J ' + 1* "* #J ' 4 * (*J & (*J u% u & u+'' * & J # C J 044v& *2 2 7 J 04 5 / J +' ! 2 / & J 4 t#
2- 2 J $ $, & - J +''v& & - / J ,4 # J 4 # C J & , 5 ) & !& " , , 0 " 8 $08 ' I 2 , + 4 ?
& 9 &2 @ 2 : & 9 2
2 C : 2 @ . . 9( - ) # * +'' : , 5 0 " ! ) &% ! - $ ' ? " 2 ? / 9 -2- 5- 5- m : ?f / g ? 3'' = 9* 66 M " 66$: & - 5 / ? 2 ? / ? 2 . - & ? 2 / - ? - I ? 2 = 8 ) X 1 " +$3 = 5 F 7 ( ? &(1 & * &
2- 2 J $
2 5 , ) !& &" 8 -&) # ") $ 8 '
"( 2 ? / V "( @ 5 & 2 5 / / 9± 4 /: ? 2 !(*% 2 (* 9 = 2- : 9δ b ' : ? 2 =I . -&2 2 ?2- /. m ? 2 9* 66 M " 66$: ? 8 7 = < • 0 " !!&$ 3' = ? / @ = 9 / m : = 2 9δ : ? / / V @ 2 @ 5 = / 92 )C: 5
• Spectre du carbone découplé (13C).
= 9 - : = 2 9δ : ? / @ 5 . = 8 ) X ,'' @ ,'' ()C 9 ): ;4 ()C 9 ,&:
2- 2 J $ $4 = 5 F 7 ( ? &(1 & , J & " ! & &( 2 C ? 2 ?
= ) & !& F!& (& !&
2 / =2 / 9 +'',: / ,' @ ! 3 . Z W / ? 5 2 5 B ? 5 B ? @ 63W& 9 5 : @ 'U +'U . 2 / / N 0$2 ? 5 - 5 @ +$'U/D +$' 30' ,+' 3' $' 0' +'
2- 2 J $
, ,
)
"
!&
% B &( @ 2 5 9 : &( . 0 H 4''U !(*% - U/D 5 B ;4'U/D 5 2 5 ;''U/D 5 2 '''U/D J &( ? 5 B! ? 5 B &&( & # &
9 / +$: H & / I " += C 2 1 / +$ J &&( & / / 8 = 0 ! & J . ? 2- 2 9$' $ +: = ) ) J ! / = J 5 2 = J 5 B = / J &
2- 2 J $
$; , , 1 " !&& & * &#
2 2 5 ( & 9 / +3: / - &&( 91 / +6: ? - &&( . / 5 I " ?i= - c= -/ c= . & 5 . / 5 I " 1 / +6 J - &&( 2 5 //8 < = ) !& J b i= - M +b c= - M ,b M 0b & M 4b * / M 3b c= M ; b . = 0 ! & J . ? 2- 2 9$' $ +: ) ) < 2- @ 4P . 2 / 9 +: 1+ ' 1, ' 2 2 5 2 $ & 1 + 1 , 1 ' ? 5 1 ' ? + , 0 4 3 ; 1 ' 1 1 + 1 , 1+ ' 1, ' E E
2- 2 J $
1 ! . C
? 2
9 :
930' : 'U 93 0U/: +'U 9 + $U/:
- 3 4 ; %5 3 4 ; 2 2 5 1 ' ? ? 1+ ' 4 1, ' 4 1 ? ? 1 + ' 0 ' 4 1 , ' , ' 4 + J 2 2 5 , , & 6/H8 0 % " !& 1 1 1 , ? - &&( . / 5 I " ?i= - c= - / c= . 9 / ,': ! 1 + 1 , /. $ @ 1 '
2- 2 J $ $6 1 / ,' J - &&( 1 1 + 1 ' - 7*D(* ? - 9 2 : 91 / , M ,: 5 ? - &&( 1 ' 2-/ c= ? 1 + 1 , % . 1 ?i= - c= - 1 + ? I 1 '
1 / , J &2 / 1 '97&D(* A &:
+ , 0 4 3 ; 1 1 + 1 , ) !& J b i= - M +b c= - M ,b M 0b & M 4b * / M 3b c= M ;b * . = 0 ! & J . D ? 2- D 2 9$'D$D+: = ) ) < 2- @ 4P @ . H . 2 / K!& ) ! & 2-* / w= &
2- 2 J $
1 / , J &2 / 1 97&D(* A &:
RT:26.43 - 30.98 26.5 27.0 27.5 28.0 28.5 29.0 29.5 30.0 30.5 Time (min) 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 R el at iv e A bu nd an ce 27.18 27.70 26.63 26.79 27.86 28.38 27.48 28.05 28.47 28.97 28.58 29.01 29.43 29.78 29.82 30.54 30.71 NL: 4.53E6 TIC MS F1_2
1 / , J &2 / 7&D(* 1 +9 & / k+3 4 :
* . 0 ) ! & & w= / w= α=
-2- 2 J $ 6 RT:0.00 - 30.99 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 Time (min) 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 R el at iv e A bu nd an ce 0.92 1.02 17.64 26.81 26.66 27.20 1.14 18.05 1.39 29.81 17.18 28.99 15.39 25.95 10.77 13.19 3.30 4.75 5.63 8.54 19.00 23.35 NL: 5.36E7 TIC MS F_1_3 x50
1 / , J &2 / 7&D(* 1 , 9 & :
/! ! ) $ & ' $ &' 0 " 8 !)" 1 " !& 2- ; 3; OH 1 ' 1 , . +, ,3 8 C,45 1 +3 3'
HO
8 C2DD 1 ' 1 , 1 + 2-0 ) ! / w= & 8 C L52- 2 J $ / +3 $ HO 8 C2 1 ' 1 + 1 , c= +; + HO 8 C2 2 1 ' 1 + 1 , c= - +; 4 HO 8 C2 5 1 + +; $ HO 8 C2 5 1 + i= - +; 6 HO 8 C2 5 1 + 0 J * 1 ' 1 1 + 1 , 7*D(* % 1 . 1 + 2 ?i= - c= -/ c= . ?i= - c= - 2 $ 9 4:
2- 2 J $ 6, * 930' : ! . C ? 2 9 :
'U 93 0U/: +'U 9 + $U/:
- 3 4 ; %5 3 4 ; i= - ' 0 ' 3 c= - ' 0 ' 4 ' , ' 0 ? ? 2- ? ? / ? ? c= ? ? . ? ? 4 J . 2 2 5 & 91 ( 1 +''+ M * /2 +'', M Z 2 +'', / = / C +''': ?i= - c= - 9( 2 7 66,M " 2 +'' M * /2 +'', M Z 2 +'', / = / C +''': % 1 + @ ( ? @ ? ? / ? , , , %" !& "! ! ) E % " !& 1 D 1, D E ( & 1+ ' 1, ' 2 9 - . : / E 2 "( ! 5 / % E
2- 2 J $ , , 2 ) & !& " "! ! ) + / E & @ ? 2 9*(: ? / 9 ": 2 # / 9"( : ? 5 H@ "( , , 2 0 " "! ! ) / & H / #D 2 2 & @ += C 2 9* / : 5 ? +$' ,4' 91 / ,+: -0,2 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 19 0 21 4 23 8 26 2 28 6 31 0 33 4 35 8 38 2 40 6 43 0 45 4 47 8 50 2 52 6 55 0 57 4 59 8 Longueur d'onde (mn) A bs or pt io n 1 / ,+ J #D &
2- 2 J $ 64 & ,'63 ,'+, = 5 ? / &=) 2 9* 66 +0 : ,,3 +6$ = / &= 91 / ,,: I @ 3;6 = / &b% 4;6 A 0;$ = 1 / ,, J " & !&- !& ) &! ! # 0''' ' ,''' +''' 4'' ''' 04' ' 4 ' 4 +' +4 ,' ,4 0' 04 4' 44 3' 3, 4 = P ,;,; ' ,0,4 ;0 ,,+4 ,4 ,'63 +4 ,'34 ;; ,'+, ;3 +33+ ++ +,0; 3; +,,, ;6 66+ + ;,, ,; ;'$ 6+ 3;$ 6, 464 6, 4;6 '+ 43 +$ 0;$ '' 0 + '0 ,,3 '' +6$ '0 +0, 0+ +,, '$ $; 3$ ;+ ,; 0+ ;+ '0$ 6$ 603 ;4 6+, 06 $36 4; $4; 60 ;6+ ,, ;+; $; ;'+ + 3;6 ' 33, , 3,3 63 3+' '+ 06+ 0; K!& ( ! !&/=3 ) ) ! ! # !&- !&/= ! # !&- !&/C.
2- 2 J $ ? H & - & / ,0 % 3.b + + ^() E )_ E + ' + ^()_E $+ + 9 @ . ^ )0_E += C 2 & @ += C 2
1 / ,0 J* & & &
^()_E
^() E )_E
= )E
2- 2 J $ 6; , &="( 91 / ,4: )="( 91 / ,3: & &!&, 2 %X 9 3 : & += C 2 91 / ,;:
1 / ,4 J * ,&="( & &!&,
/4+ /D /, / /2 + " /5+ /L /J /G
2- 2 J $
1 / ,3 J )="( & &!&,
3 J ,& ) "( & &!&, & @
5 %X W * 9%X : * 9 5 4 x ,& 9 : x ) x ,& 9 : x ) 9 : 0; 6 06 ;+ 6 4 + = = = = , 4, 44 ,4 6 ' 0 +' 6 $ ,+ ,6 3 ,$ 03 = 4 $ 3 $+ 4+ 9' ,,: = ,+ 6 ,, ', = 3 +; 4 +; ,, $ '0 ; ,4 + ,4 ', ; $' $ ,0 6 ,0 4$ ; 6' 6 +; 0 +; ,, $ '4 ,+ 6 ,, ', = ' $ 0 $+ ,6 9' ,0: = +; + +3 +, =
2- 2 J $ 66 N+ , 0 3 ; $ 6 4 ' O O 1 / ,; J += C 2 9& &:
2- 2 J $ , , 2 ) & !& " "! ! ) / E 2 2 ? 2 / " 9 / ,$: ? @ @ ,0'' +6'' = A%) 5- - 9&2 F 2 : 1 / ,$ J " E 0''' ' ,''' +''' 4'' ''' 04' ' 6 ; 4 +' +4 ,' ,4 0' 04 4' 43 0 = P ,;,; ,3 ,3 $ ,; ,0'+ $+ +60$ 44 +6,' +6 +$;' $ +3 6 +' +,;; 3, +,03 '0 +,,$ +, , +; ++$; ;; $6$ 46 ; ' 0 36, 06 4;6 4+ 043 0' ,$3 $6 ,;$ '+ ,46 6; ,'3 +; 46 +04 '3 $$ ,0 ;' '4 03 36 +, $3 '0 $0 '6+ '' '0, 0+ ',' +$66$ , 6;0 '4 64' ' 6+, + $;3 +, $+$ 0, $'; 6 ;3+ 0; ;4+ 3$ ;', 0 3; $' 33+ +$ 3'3 03 430 +; 4,6 4' 03$ $$ &
-! !& %!&" !& =.3 " !* # &" " $/ M
2- 2 J $ ' H / E & / ,6 % 3.b 04; ^( E )_E 0,6 ,6, . . 9# ! 66$: 1 / ,6 J * & / E 04; =)+% =9)+% E )&%%): ^( E )_E
2- 2 J $ "( E 9 1 / 0,: 9 1 / 0,: 91 / 0' : 2 x b ;$ 00 ;$ &+$ & , &, 5 +4 ++ & + ? & + ? 9 # &2 66 : % / 2 & 6 &+' 5 x b 44 ,, ? ,6 0+ ? 9 # &2 66 : % / / 2 5 5 9 # &2 66 : & 2 - 2 &2 R +''0 9 / 0' : 1 / 0' J * ,&="( E ? 2 !(*% * &, &+$ &+ &+
2- 2 J $ ', HO O HO HO O HO 27.4 80.6 41.0 53.8 37.6 33.5 19.9 37.8 40.4 50.3 49.8 141.7 121.9 24.7 24.2 29.6 48.9 44.4 29.7 40.7 31.0 46.1 27.7 27.7 19.5 19.5 21.7 21.4 180.3 27.4 80.6 41.0 53.8 37.6 33.5 19.9 37.8 40.4 50.3 50.1 141.7 121.9 24.7 24.2 29.9 46.1 55.3 32.5 28.7 38.8 38.7 18.6 19.5 19.5 21.7 21.4 16.7 180.3 1 / 0' J ,&="( &2 R +''0 / - &D #D(* (*+ & / E 91 / 0 0+: 5 # 97 # ! 66$: ? -&D #D(* ? -5 . & (*+ 3.J 04; 0,6 0 ,6, 5 . 97 # ! 66$:
2- 2 J $ C:\Xcalibur\data\Fernand\Data\UA+OA_21 05/13/2005 11:07:46 AM MS + MSMS/ UV 215 nm RT:0.00 - 16.56SM :7G 0 2 4 6 8 10 12 14 16 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 550 600 650 5.23 5.93 2.10 13.31 14.60 3.86 7.17 9.26 14.51 13.20 5.25 1.97 2.91 3.66 9.36 11.05 NL: 6.58E2 A/D Card Ch. 1 A /D card UA +OA_21 NL: 5.34E6 TIC F: + c AP CI Full ms [ 200.00-490.00] M S UA +OA_21 200 250 300 350 400 450 m/z 100 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 94 0 10 20 30 40 50 60 70 80 R el at iv e A bu nd an ce 439.2 411.2 393.2 473.4 278.0 333.2 236.0 439.2 411.2 393.2 456.9 307.9 337.3 245.2 375.2 UA+OA_21#696 RT: 13.01 AV: 1 SB: 11 10.58-11.59 NL: 1.03E6 F: + c APCI Full ms [ 200.00-490.00] UA+OA_21#771 RT: 14.42 AV: 1 SB: 25 7.34-9.64 NL: 1.09E6 F: + c APCI Full ms [ 200.00-490.00]
1 / 0 J &2 / &D # 9 : &D(* 9 & J : / E
, , 0 4 9& !: C:\Xcalibur\data\Fernand\Data\UA+OA_21 05/13/2005 11:07:46 AM MS + MSMS/ UV 215 nm RT:0.00 - 16.48 SM :7G 0 2 4 6 8 10 12 14 16 20 40 60 80 100 20 40 60 80 100 20 40 60 80 100 20 40 60 80 100 13.21 2.83 14.24 8.25 4.23 6.57 10.03 11.71 15.45 13.23 14.54 1.91 4.72 5.75 7.99 9.3010.33 15.94 14.56 13.25 7.36 8.76 11.29 3.05 4.08 5.21 10.16 14.58 13.18 1.95 3.92 5.41 7.38 9.81 11.21 NL: 7.45E4 TIC F: + c APCI Full ms2 457.00@20.00 [ 125.00-460.00] M S UA+OA_21 NL: 7.58E5 TIC F: + c APCI Full ms2 439.20@20.00 [ 120.00-450.00] M S UA+OA_21 NL: 3.23E5 TIC F: + c APCI Full ms2 411.30@20.00 [ 110.00-420.00] M S UA+OA_21 NL: 2.92E5 TIC F: + c APCI Full ms2 393.40@20.00 [ 105.00-410.00] M S UA+OA_21 200 300 400 m/z 20 0 5 10 15 35 0 10 20 100 0 20 40 60 80 R el at iv e A bu nd an ce 0.9 0.0 0.2 0.4 0.6 456.2 410.4 439.2 191.2 260.9 351.3393.2 411.2 314.6 233.0 160.9 393.2 215.1 297.0 UA+OA_21#697 RT: 13.02 AV: 1 SB: 37 7.29-10.77 NL: 4.17E3 F: + c APCI Full ms2 457.00@20.00 [ 125.00-460.00] UA+OA_21#718 RT: 13.42 AV: 1 SB: 25 7.34-9.64 NL: 4.48E5 F: + c APCI Full ms2 439.20@20.00 [ 120.00-450.00] UA+OA_21#769 RT: 14.37 AV: 1 SB: 37 7.29-10.77 NL: 1.57E5 F: + c APCI Full ms2 411.30@20.00 [ 110.00-420.00] UA+OA_21#790 RT: 14.77 AV: 1 SB: 38 7.29-10.77 NL: 8.86E4 F: + c APCI Full ms2 393.40@20.00 [ 105.00-410.00] 1 / 0+ J &2 / (*+ 3.J 04; 9 : 0,6 9 : 0 9 : ,6, 9 : / E % 04; & !
2- 2 J $ '4 HO COOH + , 0 4 3 ; $ 6 ' + , 0 4 3 ; $ 6 +' + ++ +, +0 +4 +3 +$ +; +6 ,' HO COOH , 4 3 ; $ 6 ' + , 0 4 3 ; $ 6 +' ++ +, +0 +4 +3 +$ +; +6 ,' + 0 + 9 : 9 : 1 / 0, J ? 9 : ? 9 :
2- 2 J $
, 2 /!&"
!&
7 V @ 5 & J += C 2 9 8: ? 9 %: ? 9 : += C 2 ? . / $ . / J ?i= - c= -/ c= . 2- ? 5 2 / $ ? 8 ? % ? ?i c= -$2- 2 & ';
2 /!&"
!&
$ ? 2 "" 2- ! 2- 2 2 / . @ $ 2 . B 2 / B B & / 2 / B . ? " , @ 2 ? 5 2 ? ? 5 91 : ? - 2 / 2 2 5 2 . B / ? 5 2 5 A ( & ! / 5 I " += C 2 ? ? ! / I " 91,: ? 5 B 5 ? ? B 2 5 5 $ ! ? 5 B += C 2 &&(= -! ( & ? . - 7&D(* $ $ J ?i= - c= -/ c= . 2- ! I 2 5 ( & - 9*( &D(* # " "( :2- 2 & ?i= - c= -. += C 2 $ 2 / - / ?
'6
# !
7
B
.
8
.
8 B 3.
0
:
1 /
.
? 2 2 / 2 @ 2 $ 2 O 2 2 2 / 2 2 @ 2 @ . &&() 2 2 / 2 @ 2 9& ) :6)&)
)
. N" %
!&
? - ? @ ? / ? H 2 /!&
\ ? / 2 J = 2 9 2 : = 2 = 2 = 2 ?7 # + ) * ! " # ! % * H @ 2 ? ? ? ? / / ? 5 9 : # + + ) * ! # ! % * H . ? ? 5 ? 9 :
,
)%& !&
"
!&
.
? / .
# , * & 1 & * & #
? - @ . ? 5 @ - ? ? - ? / / @ - ? . 2- = 2 / ? ? 2 ! 2 2 / 2 9# F 663:
7
# , + * *
? I
? - @ ?
-? - N
# , , 1% & % ! " % * 9&% " ! & " % :
? ? - @ ? ? / 5 9 / : 9 : @ 5 ? 2 5 # , 0 ( ! ! & % ? ? - @ 5 2 I 5 5 # , 4 " & " % % " ! ( ? 5 I / 5 ? . ? 2 2 / ? . H - . - ? @ 5 ? 5 . 5
7 , # , 3 1 ! 5 ? ? 9 / : ? I 2 2 /. 9 ? : 2 I @ 5 J 9 : 9 : " J & K ? I 2 I I I 1 J & K ? I 2 ? I " J & K ? I 2 ? # , ; F * ** 9 *: H 5 ? ? - @ ? ? 9 5 J ? 2 : H / 5 / 9 - :
7 # , $ < & ! ? 5 5 ? ? ? ? -? ? ? 5 ? 5 H # , 6 ( ! 8 1 & % ? - 2 I 5 # , ' "# ! !%* 7 ? / ? ? - / 5 9 : @ ? 5 2
0
)-
)
2 2 / *1* 9* ] 2 2 : & ? - 2 / ? 5 2 ? / ?)
! J = @ @ ? M 5 ? / = 2 ? 5 = ? - ? @ ? . 9 / . m :7 4 = - 2 / 2 2 ? ? ? 2 I M 2 / 2 ' 5 +' Y ? / 4 ' / ' 2 = Y / &2 ? /
!&
) " ) ! . ? 5 2& %!&" !& ) !&
@ 5 2 / 2 9-: 5 - 95: / J > b 5 E @ ? / 2 / , ? ? / 2 & O . @ ] / -? - / H 2 - 9 'U 4U &&() +' U ?) & : 4 / - ] ? / 2 ? @ ? 5
7 9 : ? / 2 2 2 * D @ @ ? ? 9 . - m : , ) " !& ] ? @ @ ? 9 2 0 +''+: & 2 ? 5 2 2 / 2 2 * )" ) !& 9 ? 5 : / 5 9 : ? . 5 ? 2 2 / ? . Y 9 ? H : ? @ H ? -& ? ? / -? - I . ? 5 ? 5 J 5 9P: b ^9 = :D&_ '' %KJ = ? - 5 / H 5 = ? - H = & % H
7
;
,
!&
, 1!&" !& ) !&
@ 5 9 b4: H 2 9 b ,: I . ] @ H @ H I & / 2 , 1 ) ) " &# ! @ H 2 &&() & ) H 4 H @ 4 H H 2 , @ @ . 9 : . 2 2 . @ & / - f - g 5 9 : # + , + " 2 H <HX / J + 9 : 9 : 9 : 5 '' 5 '' 5 5 5 6 ,° ° ,° ° = = + + 9 : 9 : 5& & 5& & , , = = − = −
7 ! 5 9&#: ? - 9 : - H J , , # & %" !& ? /
# 2 &&() = %
6
,
)
!
&
!& ( &
) !
# & %" !&
"
!) &! #
! #
//8 3 =
& ! )
#
,
8
!&
" &#
2 / 5 5 5 . D 2 5 ? 5 , / !* " ! !- # 4 - . 2 / 2 ? - /. 5 9 - . 3: 8 ! ! ) ! 2 J &&( 1+40 9 : * / 3'1+40* '5+' * / J J 5 2 ! Y 94 U ' U:J 4 ' 2 J ! / J $' " J 2-,# 2 &&() = % 2 " " " %D" [ D ? 2-D 2 9$'D$D+ DD: 04 ' ,+ ' ,, ', + ) 5 D ? 2- D 2 9 'D4D+ DD: 04 ' ,' ' ,' , D ? 2-D 2 93'D$D+ DD: 04 ' 04 ' 04 0 ) 5 D ? 2-9 'D4 D: 04 ' + ' + 4 D ? 2- D 9$'D$D+ DD: 04 ' +0 ' +0 . " %D" [b" ? @ ? 9 +''+ 0. : 3J 2 ? 9 %: ? 9 : . @ &&( 3 &&( - . 9 - . : 5 - &&() 9* / 3'1+40* '<+' : 9 / 00: ! ?
-# 2 &&() = %
+
1 / 00 J &2 / 5 9 / @ + 4 : ? 5
, ) & !& !&- (!& "
5 5
5 ? @ +'' ? @ ++'
91 / 04:
# 2 &&() = % 1 / 04 J * % ? 5 p 2 * # % * # * # % ? 5 * # ? 5 % ? 5 % ? 5
# 2 &&() = % +, / @ 2 & ) 5 @ + 4 2 + 4 -?I 5 & ) / ? 91 / 03 :
4U/ @ 4'U/ 9 'U ' 4 /D @ 4 /D : 5 & I
? 5 / / - b +0 6 ;5 E 6 0 0+ "+b ' 660 - b +,6+ 05 E '33 "+b ' 66;4 - b +0+$5 E 6'$ ;, "+b ' 66,0 0 5000 10000 15000 0.5 1 2 3 5 concentrations ré po ns e 1 / 03 J % . @ +'' + 4 ++4 y = 2807x - 986.97 R2 = 0.9807 y = 2927.8x - 1224.2 R2 = 0.9774 y = 2820.8x - 1071.3 R2 = 0.9776 0 5000 10000 15000 0.5 1 2 3 5 concentrations ré po ns e 1 / 03 J& . @ +'' + 4 ++4 ++' ++4 + 4 ++4 ++' + 4
# 2 &&() = %
, , 8 ! "
? @ +' D
, 2 ) !& ! !& ) !&
9 b 4: % @ 4 /D 2
' 4 + , 4 /D
,
)
!&
, & %!&" !& ) !&
5 . / D / -H 2 H I / 9' 4 @ 4 /D : ; / 0; . / %
# 2 &&() = % +4 y = 2466.5x + 1718.2 R2 = 0.9567 y = 2585.4x + 1612.6 R2 = 0.9756 y = 2458.9x + 1778.6 R2 = 0.9632 y = 2589,5x + 1620,2 R2 = 0,9727 y = 2454.1x + 1798 R2 = 0.972 0 2000 4000 6000 8000 10000 12000 14000 16000 0 2 4 6 Concentrations su rf ac es Linéaire (1 er jour) Linéaire (2èm jour) Linéaire (3èm jour) Linéaire (4èm jour) Linéaire (Série5) 1 / 0; J . / y = -315.51x2 + 4212.9x + 178.25 R2 = 0.9845 y = -234.39x2 + 3882.8x + 468.55 R2 = 0.9899 y = -289.76x2 + 4062.7x + 364.31 R2 = 0.987 y = -248.25x2 + 3963.6x + 408.52 R2 = 0.9886 0 2000 4000 6000 8000 10000 12000 14000 16000 0 1 2 3 4 5 6 concentrations su rf ac es
Polynomial (1er jour)
Polynomial (2ème jour) Polynomial (3ème jour) Polynomial (4ème jour) 1 / 0; J . /
-# 2 &&() = % y = 2080.3x + 3388.6 R2 = 0.9405 y = 2048.9x + 3530.6 R2 = 0.9365 y = 2084.2x + 3398.9 R2 = 0.937 y4 = 2041.6x + 3542.8 R2 = 0.9368 y5 = 2039.5x + 3531.9 R2 = 0.9406 0 2000 4000 6000 8000 10000 12000 14000 16000 0 2 4 6 concentrations su rf ac es Linéaire (1er jour) Linéaire (2èm jour) Linéaire (3èm jour) Linéaire (4èm jour) Linéaire (5èm jour) 1 / 0; J . / % y = -386.09x2 + 4217.4x + 1504.1 R2 = 0.9981 y = -393.82x2 + 4228.7x + 1608.5 R2 = 0.9981 y = -398.23x2 + 4288.5x + 1455.2 R2 = 0.9979 y = -390.74x2 + 4204.4x + 1635.6 R2 = 0.9979 y = -377.49x2 + 4129x + 1689.4 R2 = 0.9979 0 2000 4000 6000 8000 10000 12000 14000 0 2 4 6 concentrations su rf ac es 1er jour 2 èm jour 3 èm jour 4 èm jour 5 èm jour Polynomial (1er 1 / 0; J . / - %
# 2 &&() = % +; * p & "+ - & "+ - b +033 45 E ; $ + "+b ' 643; - b =, 4 4 5+ E 0+ + 65 E ;$ +4 "+b ' 6$04 - b +4$4 05 E 3 + 3 "+b ' 6;43 - b =+,0 ,65+ E ,$$+ $5 E 03$ 44 "+b ' 6$66 - b +04$ 65 E ;;$ 3 "+b ' 63,+ - b =+$6 ;35+ E 0'3+ ;5 E ,30 , "+b ' 6$; - b +4$6 45 E 3+' + "+b ' 6;+; - b =+0$ +45+ E ,63, 35 E 0'$ 4+ "+b ' 6$$3 - b +040 5 E ;6$ "+b ' 6;+ - b =+0$ 005+ E ,$+6 ,5 E 4$4 0 "+b ' 6$6$ - b +'$' ,5 E ,,$$ 3 "+b ' 60'4 - b =,$3 '65+ E 0+ ; 05 E 4'0 "+b ' 66$ - b +'0$ 65 E ,4,' 3 "+b ' 6,34 - b =,6, $+5+ E 0++$ ;5 E 3'$ 4 "+b ' 66$ % - b +'$0 +5 E ,,6$ 6 "+b ' 6,; - b =,6$ +,5+ E 0+$$ 45 E 044 + "+b ' 66;6 - b +'0 35 E ,40+ $ "+b ' 6,3$ - b =,6' ;05+ E 0+'0 05 E 3,4 3 "+b ' 66;6 - b +',6 45 E ,4, 6 "+b ' 60'3 - b =,;; 065+ E 0 +65 E 3$6 0 "+b ' 66;6 ; J ( . / % ? 5 / 0; ; 5 -? 9 5 : / @ ' 6, % "+ - 9k@ ' 6$: ( @ ' 6, ? 5 2 . , ) " !& U/ Y 9 ' U '' U/D : 5 9 2 / @ :
# 2 &&() = %
, ,
!&
, , 1 ) ) " &# ? 2 @ 2 & 9 H : H 9 J $: * & 9 /D : &# 9P: H 9 b 4: H 9 b 4: % ' 4 + , 4 ' 4 + , 4 0 3' ' ;+ ' 34 ' 06 ' ' $6 + + ' +4 , + 04 ' ,+ ' , ' ' +; + 04 ' 4 ' 04 ' ' 4 ' '6+ 6 J & - H H 9&#: H 9 b 4: H 9 b 4: - 5 @ 4P - 9 $: , , # & %" !& ,U/ Y 9 ' U ,'' U/D : 5 9 2 / @ ' :# 2 &&() = % +6
, 2
" !&7 & *
, 2 * " !& " 7 & & 5 ? 5 = $'/ / 0'' 2 2 +0 2 . / . H +'' / 2- 2 1 1 %"% %" ? 5 . '' %) ,' 5 '' ?2 5 2 ? 5 '' 2 2 2 2 2 . 2 Y , 2 * )" ) !& ? 5 @ $'/ H , / 4 / 3 / : & ) N! ) $ -' O )" ) !& % , 6$ $ 6; $ 4 63 ; 6, $ 3 63 33 6; 6 J % ? 5 6, 6$P 9 J 6: 5 / , 2 , ) " & ) - ? 5 # 5 ? 5 91 / 04:-# 2 &&() = %
, 4 /!&"
!&
2 &&() = . / 9' 4 @ 4 /D : 9&#: H 9 b 4: H 9 b 4: ? -5 @ 4P - 5 5 @ 6$P 2 5 % 9+ 3'ED= ' '3: / 9 b 4: 90 6'ED=' : / 9 b 4: $'/ & @ ' '',+4P % @ ' ''3 +4P# 2 & ) %
,
2
)
!
&
!&
) !
# & %" !&
"
!) &! #
! #
/ 3
&2 5 # . &&() 2 2 / 2 @ 2 9& ) : 2 H @ 9! / +''+M Z / +''+M < +'' M G2 +'''M > 666: ? 2 &&() O 2 & ) @ 2 @ 5 ? *(2
8
!&
" &#
2 / 5 5 2 / !* " ! !- # . 2 5 5 5 9! / +''+M Z / +''+M < +'' M G2 +'''M > 666 : 5 ? 5 2 $ - < 2 N ) &=(* J !? 2 ! L "7 ( )+, ++' * $63 !? ( X=) 2 =3+'' / * ' +3=''3 !? H "2 - ;;+4 4'6$# 2 & ) % !? H * "L ( $,' *;'',0 &8 / *D !''+6, @ +(+$ +(,' " - # /!& !& ! ) ! < 2 J $4 P 9) & / : D 4 P =8
& ) & J ( X &2 & " +4'=0 4'6$, 2 * J &2 * 2 '' " = $ 4 t # ? H J +' U 1 5 2 J ' 3 D ? - J +' +4 / ? # J + 4 " / #J ' + 1* "* #J ' 4 * (*J & (*J u% u & u+'' * & J # C J 044v& *2 2 7 J 04 5 / J +' ! 2 / & J 4 t# & - J +''v& & - / J ,4 # J 4 # C J & 5 5 ? &&() 9 / 0$:
# 2 & ) % ,, 0 1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000 9000 0 5 10 15 20 25 30 time(min) A re a 1 / 0$J &2 / - ? 5 2 2
2 ) & !& !&- (!& "
- @ + 4 / ? @
& ) D #
2 , 8 ! "
# 9 - :
2 2 ) !& ! !& ) !&
9 b 4: % @ ' /D'' 2 I 2 ' 4 + 0 'U/D 2 4 0 ) !)" & ! ? 2 . @ - 2 ? - 9 +': %
# 2 & ) % & + , % '3P '0P 6+P +P '3P 6$P +' J % 2 . @ @ 6+P 2 & 2
# 2 & ) %
,4
2
)
!&
2 & %!&" !& ) !&
4 H 2 H / 2 H / ' 4 + 0 'U/D y = 4373.5x - 708.75 R2 = 0.9923 0 10000 20000 30000 40000 50000 0 2 4 6 8 10 12 1 / 06 J . / % y = 3849.6x - 1117.7 R2 = 0.9965 0 5000 10000 15000 20000 25000 30000 35000 40000 45000 0 2 4 6 8 10 12 1 / 06 J . /
# 2 & ) % / 06 06 5 / @ 66 5 . / 2 2 2 ) " !& 0 / H 9 +' U ' + U/D : 5 9 2 / @ :
2 ,
!&
2 , 1 ) ) " &# ? 2 @ 2 &# 9 H : H 9 J + :0 & /!&" & !& $P-H ' / O H 9 b 4: H 9 b 4: . ' 4 , 3 ' 4 , 3 + '3 ' ++ ' ++ ;6 ' 6$ + , + 4+ , ;+ + , , ,6 ;6 3 + J & - H H 9&#P: H 9 b 4: H 9 b 4: ? - 5 2 @ 0P - 9 + :
# 2 & ) % ,; 2 , # & %" !& ' / H 9 +' U ' 4 U/D : 5 9 2 / @ ' :
2 2
" !&7 & *
8
"
0"
2 2 * " !& " 7 & 2- 2 5 5 2 ? 5 5 92 5 &)+& +: ? 5 + / +' 9 + 2 : &2 / 4 / 4 2 2 J H ? 5 / 2 ? C , 2 2- 2 92- 2 1 1 %"% %" : +' U H - . & ) ? 5 2 2 / 4'# 2 & ) % 0 500 1000 1500 2000 2500 3000 15 30 45 60 75 90 105 012 135 150 165 180 Temps d'extraction su rf ac e de s pi cs
%
1 / 4' J ? 5 % ?2 5 0 5000 10000 15000 20000 15 45 75 105 135 165 I* " !& % " " AU AO 1 / 4' J ? 5 % 2 2 5 / ? 5 ? 5 . 6' ? 5 % 2 2 5 5 5 ? / 4' @ / 4' 2 2 2 5# 2 & ) % ,6 2 2 * )" ) !& ? 5 @ +/ H , 4 3 U/ : & ) N! ) $P-' ! " & -)" ) !& % , 6$ $ 6; $ 0 6; 6 6; $ 3 6; ; 6; ++ 5 % ? 5 6; 6$P 9 ++: 5 5 5 / , 2 , ) " & ) Y # *( @ % ? 5 91 / 4 :
# 2 & ) % extrait_dichloromethanoique_17 05/09/2005 11:11:35 AM MS + MSMS/ UV 215 nm RT:0.00 - 20.00SM :7G 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 550 600 1.96 2.66 5.29 13.68 12.16 8.87 6.95 3.37 2.25 13.57 12.07 8.89 17.97 NL: 6.34E2 A/D Card Ch. 1 A/D card extrait_dichloromet hano ique_17 NL: 3.41E7 TIC F: + c APCI Full ms [ 200.00-490.00] M S extrait_dichloromet hano ique_17 200 250 300 350 400 450 m/z 100 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 90 0 10 20 30 40 50 60 70 80 R el at iv e A bu nd an ce 439.3 411.3 221.2254.2 306.4 362.1 484.1 439.2 411.4 393.3 457.2 279.1 325.7 229.2 363.1 extrait_dichloromethanoique_1 7#636 RT: 11.89 AV: 1 SB: 14 9.33-10.57 NL: 1.27E6 F: + c APCI Full ms [ 200.00-490.00] extrait_dichloromethanoique_1 7#736 RT: 13.76 AV: 1 SB: 10 10.16-11.04 NL: 1.41E6 F: + c APCI Full ms [ 200.00-490.00]
1 / 4 J 2 / - & ) D # 9+ 4 : & ) D*( 9 & : ? 5
7 3.+''=06'4 @ % 9&: 9!: % % ,6, 04; & !
# 2 & ) % 0
2 4 /!&"
!&
2 & ) @ 9 #: / - 9' 4 @ 4 /D : 9&#: H 9 b 4: H 9 b 4: ? - 5 @ 0P - 5 5 @ 6$P ! ? 5 % 2 9$3 ED= ' 60: U/ 9 b 4: 9+4' ED=' : U/ 9 b 4: +/ & @ ' ''0,P % @ ' ' +4P ? & J 5 2 & ) 5 5 5 2 9 2 ? 5 : 5 5 5 2 9 ' '' P ' ''0P % : 2 &&() I 5 ? 5# 2 &&() = 8
4
!&
) !
//8 3 =
& ! )
#
# & %" !&
= F &
# &!&
4
8
!&
" &#
2 / += C 2 9 8: 4 / !* " ! !- # 0 - . 2 / 2 ? ? C 2 ? 5 2 9 +,: 2 5 - . 2 / 2 ? 8 ! ! ) ! 2 J &&( 1+40 9 : * / 3'1+40* '<+' * / J += C 2 9* / : J 5 B ! Y J 4 ' # J 4 U 2 J ! / J $' " J ! / ,# 2 &&() = 8 0, 2 " D 2- D 2 9$'D$D+ DD: ' 44 + &2 D( 2 D ' P 9$'D0'D 4 DD: ' ;' 9 N : , . D ? 2- D ! 2- 9;'D+'D' DD: ' 3+ 9 N : 0 D D 9 'D;D DD: ' $+ +,J 2 * 2 ? C 2 - &&( - . 9 - . : 5 - &&() 9* / 3'1+40* '<+' : 9 / 4+: 1 / 4+ J &2 / ? C 2
# 2 &&() = 8
4 ) & !& !&- (!& "
# &&() 91 / 4,:
5 ? + 4 ,3' 2 , '
1 / 4, J* #
4 , 8 ! "
? @ , '
4 4 ) !& ! !& ) !&
8 9* / : @ . 9 b 0: @ /D / = 9$4D4 D: ' +' +4 4' ''U/D -0,2 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 190 216 242 268 294 320 346 372 398 424 450 476 502 528 554 580 Longueur d'onde (mn) A bs or pt io n
# 2 &&() = 8
04
4
)
!&
4 & %!&" !& ) !&
D 0 H , 9 b ,: / / 40 ? 5 8 ? J / @ ' 6; 0 . / 2 2 1 / 40 J( . / % y = 884,14x - 699,14 R2 = 0,9757 - b $,0 ' 5 = 346 4 "+b ' 6;4; - b ;$3 ;+5 = 3++ "+b ' 6;4; - b ;0+ 5 = 4$3 $, "+b ' 6;4; 0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000 4500 10 20 25 50 100 9 H : 9+ . H : 9, . H : 90 . H :
# 2 &&() = 8 4 ) " !& 4 / Y 9 4 U , U/D : 9 2 / @ :
4 ,
!&
4 , 1 ) ) " &# ? 2 @ 2 &# 9 =H : =H 9 J +0:* & 9U/D : &# 9P:
H 9 b 4: =H 9 b 4: '' 4' +4 +' ' 6, , ' 6$ ;+ 46 4 34 , 0 , 46 , 0, , 63 +0 J & - =H =H 9&#: =H 9 b 4: =H 9 b 4: @ 3P -9 ': 4 , # & %" !& ,' / Y 9 4 U 3U/D : 9 2 / @ ' :
# 2 &&() = 8
0;
4 2
" !&7 & *
8
"
0"
4 2 * " !& = F & # &!& 7 &
& 5 ? 5 = 4''/ 0 ? 2 9( X: ;+ 2 / 5 4 6P 4/ 5 '' ? @ ) + 4 5 . 3' ? / '' ?2 5 2 @ ) 6 6 . 3' 5 '' 2 2 2 2 2 9 5 B : 9 + 6P: / = ) !& ! !& (* ? 5 B = . + / / = 9$4D4 D: 2- 2 1 1 %"% %" & . '''U/D 4 2 * )" ) !& ? 5 @ 4'/ H '' U/ 4'' U/ ''' U/ 8 H 9U/: / '' 6$ $ 4'' 66 4 ''' 6; 33 +4 J 8 ? 5 6; 66P 9 J +4: 5 5 /