Le prélèvement, la conservation et la greffe de tissus
Banque régionale de tissus CHRU de Montpellier
Dr Guilhem COUDERC
Les Tissus Les Tissus
LES ETAPES LES ETAPES
Le pré Le pr é lè l èvement vement
La conservation en banque La conservation en banque
La greffe La greffe
ACTIVITE TRES REGLEMENTEE ACTIVITE TRES REGLEMENTEE
Loi de Bioéthique (loi 2011-814 du 7 juillet 2011)
Consentement du donneur
Gratuité du don
Interdiction de publicité
Anonymat
Sécurité sanitaire
Réglementation
Etablissements autorisés au prélèvement sur donneur décédé
Dossier d’autorisation
Règles de bonnes pratiques de prélèvement (arrêté 97- 306 du 1er avril 1997)
Les tissus humains
Les tissus humains à à usage usage
th th é é rapeutique rapeutique
Réglementation
Banque de Tissus autorisées
Dossier d’autorisation (décret 2008-968 du 16 septembre 2008)
Règles de bonnes pratiques de conservation et de distribution (décision du 27 octobre 2010)
Chaque tissus doit en plus obtenir une autorisation spécifique correspondant au procédé de préparation, de validation et de conditionnement
Les tissus humains
Les tissus humains à à usage usage
th th é é rapeutique rapeutique
LE PRELEVEMENT
Les tissus utilisés à des fins thérapeutiques
Donneur DCD en mort encéphalique (ME) ou à cœur arrêté (PPM):
Vaisseaux : remplacement de prothèse infectée, sauvetage de membre
Valves cardiaques : indications vitales, remplacement de prothèse infectée
Peau : indications vitales traitement des grands brûlés
Os massifs et articulations: indications fonctionnelles, sauvetage de membre en cancérologie ou traumatologie
Cornées : indications fonctionnelles, récupération de l’acuité visuelle
Les tissus utilisés à des fins thérapeutiques
Donneur vivant (résidus opératoires):
Têtes fémorales et dérivés viro-inactivés:
reconstructions et comblements osseux
Volets crâniens: traitement décompressif
Membranes amniotiques: traitement des pathologies inflammatoires de la surface oculaire
Les acteurs du prélèvement
Banque de tissus Banque de tissus
Equipe de prélèvement
Equipe de prélèvement Coordination
hospitalière
Service de chirurgie Service réanimation
Donneur vivant
Donneur DCD
Rôle de l’équipe de prélèvement
• Respect des procédures et des techniques opératoires , sécurité sanitaire
• Conditionnement et documents
• Organisation du transport
Qualité du greffon
• Restauration tégumentaire
La conservation
Cryopréservation et stockage en vapeur d’azote –180°C pendant 5 à 10 ans:
Vaisseaux et valves cardiaques
Peau
Os massifs et articulations
Cryoconservation à –80°C pendant 2 à 5 ans :
Têtes fémorales
Volets crâniens
Os massifs
Membranes amniotiques
Conservation à 31°C pendant 30 j:
Cornées
La congélation
180808b
-160 -140 -120 -100 -80 -60 -40 -20 0 20
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50
Tem ps (m inutes)
Température (°C)
PROD:t (s) CUVE:t (s)
1 à 2 degrés/mn
5 degrés/mn
La greffe de corn
La greffe de corn é é e e
La corn
La corn é é e e
Coupe sagittale de l’œil, partie antérieure 1. Conjonctive
2. Cornée 3. Iris
4. Cristallin 5. Corps vitré 6. Corps ciliaire 7. Sclérotique
Cornée 1. Épithélium
2. Membrane de Bowman 3. Stroma
4. Membrane de Descemet 5. Endothélium
Indications des greffes de corn
Indications des greffes de corn é é es en es en 2013 2013
KéKératoconeratocone : 16% : 16%
DéDécompensation endothcompensation endothééliale secondaire liale secondaire pseudophaque
pseudophaque : 21%: 21%
SSééquelles de kquelles de kéératites : 14%ratites : 14%
SéSéquelles de traumatisme : 3%quelles de traumatisme : 3%
Dystrophie de Fuchs : 20%Dystrophie de Fuchs : 20%
Echec de greffe : 14%Echec de greffe : 14%
Le pr
Le pr é é l l è è vement de corn vement de corn é é e e
Donneur: Donneur:
Lors dLors d’’un prun prééllèèvement dvement d’’organes et de tissus (ME)organes et de tissus (ME)
Donneur Donneur àà cœcœur arrêtur arrêtéé (dans les 8h, dans les 18-(dans les 8h, dans les 18- 24h si r
24h si rééfrigfrigéération dans les 4h)ration dans les 4h)
Pr Pr é é l l èvement: è vement:
DDécoupage de la écoupage de la sclèsclèrere
Suspension dans le milieu de conservationSuspension dans le milieu de conservation
Restauration anatomique Restauration anatomique
Contre indications Contre indications
H H é é mopathies malignes mopathies malignes
Tumeur oculaire ou du SNC Tumeur oculaire ou du SNC
D D é é mence mence
Sé S é rologies positives rologies positives
Pathologies oculaires Pathologies oculaires
Dé D é lai entre pré lai entre pr é l l è è vement et dé vement et d é cè c è s s
Absence de pr Absence de pr é é l l è è vement sanguin vement sanguin
Les corn
Les corn é é es es
Organoculture Organoculture à à 31 31 ° ° C pendant 30 C pendant 30 jours au maximum
jours au maximum
2 é 2 évaluations de l valuations de l ’ ’ endoth endoth élium é lium
Tests s Tests s é é rologiques rologiques
Tests bacté Tests bact é riologiques riologiques
Travail en Zone d
Travail en Zone d’’AtmosphèAtmosphère Contrôlre Contrôléée e (cascade de (cascade de pression, renouvellement d
pression, renouvellement d’’air filtré…air filtré…) )
Protocole d
Protocole d’entr’entréée/sortie et de/sortie et d’’habillagehabillage Bio nettoyage sp
Bio nettoyage spéécifique et approfondicifique et approfondi Contrôle environnemental strict
Contrôle environnemental strict Surveillance du mat
Surveillance du matéériel continue, locale et driel continue, locale et dééportportééee
Crit Crit è è res de conformit res de conformit é é
Nombre de cellules >2000/mm2 Nombre de cellules >2000/mm2
Nombre de cellules mortes <2% Nombre de cellules mortes <2%
Aspect de la mosa Aspect de la mosa ï ï que que
Absence de plis bleus Absence de plis bleus
Perte cellulaire < 20% Perte cellulaire < 20%
Arbre d
Arbre d é é cisionnel cisionnel
Greffe Prélèvement
Décision de greffe
Sérologie et bactériologie conformes
Première évaluation conforme
Seconde évaluation conforme
Mise en déturgescence
Bactériologie négative
Non conformes destruction
Non conforme destruction
Non conforme destruction
Positive destruction
Causes de non conformité
Corné Corn é es é es é limin limin é é es en 2013: 40 % es en 2013: 40 %
1%
4 Autres
27%
84 Evaluation
8%
24 Sérologie + ou NF
4%
11 Bactériologie
% 2013 Nb 2013
Causes NC
Les diff
Les diff é é rents types de greffe de corn rents types de greffe de corn é é e e
K K é é ratoplastie ratoplastie transfixiante transfixiante
K K é é ratoplastie lamellaire ant ratoplastie lamellaire ant é é rieure rieure profonde: profonde:
pathologie associant alt
pathologie associant altéération du stroma avec endothration du stroma avec endothéélium et lium et membrane
membrane DescemetDescemet normaux (kénormaux (kératocônes, sratocônes, sééquelles de kquelles de kéératite, ratite, de br
de brûûlureslures…)…)
K K é é ratoplastie lamellaire post ratoplastie lamellaire post érieure: é rieure:
pathologies de l
pathologies de l’’endothendothéélium et membrane lium et membrane DescemetDescemet (dystrophie de (dystrophie de Fuchs et
Fuchs et kkéératopathiesratopathies bulleuses…bulleuses…) )
K K é é ratoplastie lamellaire ratoplastie lamellaire ant ant é é rieure profonde rieure profonde
greffe du stroma et de l
greffe du stroma et de l’épith’épithééliumlium
Melles GR, Remeijer L, Geerards AJ, Beekhuist WH Cornea 2000;19:427-432
K K é é ratoplastie lamellaire post ratoplastie lamellaire post é é rieure rieure
greffer une lame du stroma postégreffer une lame du stroma postérieur, la rieur, la membrane de
membrane de DescemetDescemet et l’et l’endothéendothéliumlium
NRC Handelsblad. Wim Kohler/Roland Blokhuizen, September 8 2001.
R R é é sultats sultats
Retour progressif de l’Retour progressif de l’AV, corticothAV, corticothérapie locale pendant 1 érapie locale pendant 1 an avec d
an avec déécroissance progressive et antibiothcroissance progressive et antibiothérapie localeérapie locale
RéRésultats jugsultats jugés entre 1 et 3 mois, mais la vision dés entre 1 et 3 mois, mais la vision dééfinitive finitive n’n’est obtenue quest obtenue qu’’apraprèès 1 an, astigmatisme s 1 an, astigmatisme
Rejets peu fréRejets peu fréquents (10 quents (10 àà 20%), gé20%), génnééralement curablesralement curables
La greffe de cornéLa greffe de cornée est une des greffes les plus simples et e est une des greffes les plus simples et dotédotée de d’’un taux de succun taux de succès important ès important
50% AV > 5/10 50% AV > 5/10
Concerne plus de 4400 greffes en 2013Concerne plus de 4400 greffes en 2013
La greffe de membrane La greffe de membrane
amniotique
amniotique
Membrane amniotique Membrane amniotique
Epithélium:
sera détruit par la congélation
Membrane basale:
favorise la migration, l’adhésion et la différenciation épithéliale
sera le support de la recolonisation
Stroma :
réservoir de facteurs de croissance
NGF en grande quantit
NGF en grande quantitéé, KGF (stroma limbique),, KGF (stroma limbique), HGF (stroma corn
HGF (stroma cornééen) avec suppression du en) signal TGFβ
Principes et indications Principes et indications
L’L’objectifobjectif est de limiter les phéest de limiter les phénomnomèènes nes inflammatoires et
inflammatoires et fibrotiquesfibrotiques pour permettre la pour permettre la rrégégéénnération de lération de l’é’épithpithélium élium àà partir des cellules partir des cellules limbiques
limbiques
Indications:Indications:
UlcUlcères chroniquesères chroniques
BrûBrûlureslures
Reconstructions conjonctivalesReconstructions conjonctivales (ptérygions, symblépharons..)
Maladies bulleusesMaladies bulleuses
Contre indications Contre indications
S S é é lection de la donneuse: lection de la donneuse:
Maladies infectieuses et groupes Maladies infectieuses et groupes àà risquerisque
Maladies de systMaladies de systèmeème
Affections néAffections néoplasiquesoplasiques
Au moment de la c Au moment de la c é é sarienne: sarienne:
Pathologie infectieuse géPathologie infectieuse génitalenitale
FièFièvre maternelle supvre maternelle supéérieure rieure àà 38°38°CC
ÉÉvvèènement mettant en jeu lnement mettant en jeu l’’enfant ou la menfant ou la mèèrere
Pr Pr é é l l è è vement vement
Sélection clinique
de la donneuse Consentement de la patiente Absence de CI médicale Dépistage des marqueurs infectieux/biologiques à J0
Absence de CI médicale au cours de la césarienne Césarienne
programmée
Conditionnement pour le transport
Prélèvement
Proc Proc é é d d é é de transformation de transformation
Transport stéTransport stérilerile
RinRinççage des membranes avec solution ATBage des membranes avec solution ATB
SéSéparation de la membrane du chorionparation de la membrane du chorion
Apposition des membranes de nitrocelluloseApposition des membranes de nitrocellulose
DDécoupage des fragmentsécoupage des fragments
Contrôle bactContrôle bactéériologique et histologiqueriologique et histologique
CongéCongélation en milieux contenant 30% de glyclation en milieux contenant 30% de glycéérolrol
Stockage Stockage –– 8080°°CC
Proc Proc é é d d é é de conservation de conservation
Réception
Séparation amnios chorion
Découpage de l’amnios
Conditionnement des fragments
Conservation à –80°C pendant 2 ans
Contrôle histologique sur fragments
Contrôle microbiologique du milieu de rinçage
et sur fragments
Contrôle microbiologique du milieu de transport
Contrôle histologique du placenta
Greffe de membrane amniotique Greffe de membrane amniotique
Sur prescription nominativeSur prescription nominative
DéDécongcongéélation lation àà temptempérature ambiante ou érature ambiante ou àà 37°37°CC
RinçRinçage au sage au séérum physiologiquerum physiologique
GreffeGreffe
Positionnement de la membrane sur la cornée receveuse
Suture par surjet monofilament 10/0
R R é é sultats sultats
Pas alternative th Pas alternative th é é rapeutique rapeutique
Effet trophique et antalgique rapide Effet trophique et antalgique rapide
Technique chirurgicale simple Technique chirurgicale simple
> 2 500 greffes en 2013 > 2 500 greffes en 2013
Les tissus prélevés sur donneurs
décédés
Les os massifs
Os massifs:
Fémur entier ou extrémité supérieure ou inférieure
Tibia, humérus
Articulation du coude
Hémi-bassin
Indications : sauvetage de membre
carcinologie
traumatologie
220 greffes en 2013
Les os massifs
Désinfection du site de prélèvement
Prélèvement par chirurgien orthopédiste
Conditionnement de l’os en poche BONE stérile
Prélèvement d’un échantillon pour contrôle
Mise en place d’une prothèse de remplacement
Les artères et les valves
Artères:
Aorte thoracique, abdominale
Bifurcation aorto-iliaque
Artère fémorale et axe ilio-fémoro-poplité
Valves cardiaques
(aortiques, mitrales, pulmonaires et tricuspides)
Indications: vitales
Prothèse infectée
Sauvetage de membre
Les artères
Désinfection du site de prélèvement
Prélèvement par le chirurgien
Mesures des dimensions de l’artère
Conditionnement du greffon dans la
solution de transport en CRYOKIT stérile
Restitution tégumentaire par le chirurgien
Les greffes d’artères en 2013
46 artères pour 25 patients, 67 ans (50-84)
Indications:
36 infections sur prothèse
10 revascularisations du MI
Type de greffons:
9 greffons aortiques
3 bifurcations aorto-iliaques
34 axes ilio-fémoro-(poplités)
620 artères greffées en 2013
La peau
Indications vitales: grand brûlé
Désinfection à la bétadine scrub puis dermique
Prélèvement du seul épiderme sur le dos et membres inférieurs
Lambeaux prélevés au dermatome (6cm X 30 cm)
Conditionnement des lambeaux dans la solution de transport en CRYOKIT stérile
Vernis chirurgical et bandage
Environ 30 m2 greffés en 2013
Avant tout prélèvement
Préparer un dossier tissus comprenant:
Fiche opérationnelle et sérologies du donneur
Fiche technique spécifique pour chacun des tissus prélevés
Fiche de transport
Préparer le matériel nécessaire:
Cryokit, liquide de transport, poche
Glacière à +4°C
Prothèse de remplacement
Transport
Spécifique du tissu
Entre +2°C et +8°C
A température ambiante pour les cornées
Dans l’emballage primaire stérile puis secondaire
Container de transport
Transporteur agréé
Prévenir la Banque de Tissus
Les greffes de têtes fémorales
Processus de prélèvement
Chirurgien Consultation
Sélection clinique Recueil consentement
Fiche opérationnelle Consentement En double exemplaires
Transporteur Transport à 4°C
TF, échantillons osseux et sanguins, documents,
étiquettes Chirurgien
IBODE Bloc opératoire
Prélèvement TF Échantillon osseux
Cryokit contenant la TF Échantillon osseux pour ctrl
bactériologique Infirmière
Service d’hospitalisation ou bloc opératoire
Prélèvement sanguin à J0 Echantillons sanguins
Arbre décisionnel
Greffe
Prélèvement
Ordonnance nominative
Sérologie J0 et bactériologie conformes
Zone non validée
Zone validée
DGV, sérologie à distance ou procédé de viro-
inactivation conforme
Zone de distribution
Non conforme destruction
Non conforme destruction
Fragments osseux viro-inactivés dérivés de tête fémorale
• Formes géométriques standardisées
• Hémi-tête
• Bloc
• Coins d’ostéotomie
• Fragments de tailles différentes….
• Trame osseuse seule
• Traitement viro-inactivant
• Moins bonne ostéo-conduction
• Conservation à température ambiante
Source: catalogue OST Développement
La distribution et
la greffe
Cornées, membranes amniotiques Vaisseaux, Valves
Peau
Os et articulation
Urgence / h
La distribution
En urgence ou programmée
La distribution
Validation des tissus
Prescription nominative
règles de d’attribution
appel à une autre banque
Conditionnement, transport
La greffe
Réception du greffon
Déconditionnement et décongélation éventuelle
Greffe
Renvoi du tissu à la banque (élimination)
Traçabilité
Documents remplis et signés à renvoyer à la banque
Double des documents à classer dans le dossier patient
Suivi, vigilance
La décongélation
Cinétique de décongélation d'une poche tém oin 30/07/2014 m =124g
-160 -150 -140 -130 -120 -110 -100 -90 -80 -70 -60 -50 -40 -30 -20 -10 0 10 20 30
14:38 14:39 14:40 14:41 14:42 14:43 14:44 14:45 14:46 14:47 14:48 14:49
t (h:m n)
T° (°C)
10 °C/mn
30 °C/mn
Bilan d’activité
Bilan 2013 (1)
Réceptionnés Distribués
Os massifs
8 6
Artères
62 46
Valves
4 8
Peau (cm2)
34 128 24 708
Cornées
318 192
Bilan 2013 (2)
Réceptionnés Distribués
T.fémorales
320 195
Frag osseux
13 12
Frag osseux VI
226+4 211+1
Volets crâniens
66 41
Mb amniotiques
161 179
Usage scientifique
Usage scientifique
Passage du cadre th
Passage du cadre th é é rapeutique au cadre rapeutique au cadre scientifique
scientifique
Cadre de la loi de bioCadre de la loi de bioééthique identiquethique identique
Notion de changement de finalitNotion de changement de finalitéé
NéNécessite une cessite une ddééclaration de conservationclaration de conservation et une autorisation et une autorisation de cession
de cession dans le cadre d’dans le cadre d’un CRB auprun CRB auprès du ministès du ministèère de la re de la recherche, de l
recherche, de l’’ARS, de l’ARS, de l’ABM ABM (dé(décret 2007cret 2007--1220 du 10 ao1220 du 10 aoûût 2007)t 2007). .
IntéIntégration des collections de la Banque de tissus gration des collections de la Banque de tissus du CHRU de Montpellier au CCBH
du CHRU de Montpellier au CCBH--MM
DéDéclaration et autorisation de cession obtenues pour claration et autorisation de cession obtenues pour les corn
les cornéées, les membranes amniotiques et la peaues, les membranes amniotiques et la peau
