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1 2 3 4 5 6 7 8 9 10-13 14 15/16 17-19

1 ZF 2 ZF 4 ZF

Exons non-codants Exons non-codants supplémentaires Exons codants Figure 33 : (A) Représentation de la structure intron/exon de Myt1-L/NZF1 chez la souris.

Ce schéma reprend la structure de la partie codante du gène. Celui-ci fait près de 145kb et comporte 19 exons. L'entièreté du gène, constitué de ses parties codantes et non-codantes, comprend 27 exons. Ce gène code pour une protéine comportant deux domaines à doigts à zinc (ZF) séparés d'environ 50kb. Un ZF supplémentaire est présent par rapport à son homologue Myt3. Celui-ci est situé au niveau du 3

ème

exon codant. Image issue du site web www.ensembl.org. (B) Schéma de la stratégie adoptée pour réaliser l’invalidation du gène Myt1-L chez la souris. Le vecteur de base (pBKSII) ayant servi à la construction du vecteur de ciblage comprend un bras 3' de 21,8 Kb et un bras 5' de 1,9 Kb permettant la recombinaison homologue. Il comprend également une cassette de sélection positive Neo (qui remplace les exons codants I, II et III) et une cassette négative DTA (fragment A de la Toxine Diphtérique) placée à l'extrémité 5' (Adachi et al., 1995). Cette dernière cassette permet d'éliminer les événements d'insertion aléatoire des vecteurs de ciblage. (C) Représentation schématique des transcrits alternatifs Myt1-L identifiés sur le site web Ensembl Genome Browser. La numérotation des exons non-codants (-5 à -1) est arbitraire. L'ATG initiateur de la traduction est en rouge. Les 11 EST identifiés forme une des ces structures décrites en b,c,d,e. (a) Transcrit sauvage Myt1-L. (b) transcrit dont le 3

ème

exon codant est manquant. (c) transcrit comportant un exon non-codant supplémentaire en amont du 1

er

exon codant. Cet exon ne comporte aucun site ATG. (d) transcrit comportant un exon non-codant supplémentaire situé entre les exons -2/-1. Cet exon comporte un site ATG suivi de plusieurs sites d'arrêt de la traduction. (e) transcrit comportant un exon non-codant supplémentaire situé

Wt Myt1-L 1 2

3

Vecteur cible

Bras 5' 1900pb

Bras 3' 21800pb Neo

1100pb DTA

1100pb

3600pb

Intron 27 kb 4

pBKSII ATG

ATG

-5 -4 -3 -2 -1 2 3 4

-4 -3 -2 -1 ATG 2 4

-5

-4 -3 -2 -1 ATG 2 3 4

-5

-4 -3 -2 -1 ATG 2 3 4

-5

-4 -3 -2 -1 ATG 2 3 4

-5 b

15kb 31kb

27kb 11kb 16kb

145kb A

B

C a

c

d

e

(2)

entre les exons -4/-3. Cet exon comporte un site ATG suivi de plusieurs sites d'arrêt de la

traduction.

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