Rapport CE A No 2112

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PREMIER MINISTRE

C O M M I S S A R I A T A L'ÉNERGIE ATOMIQUE

DETERMINATION DU VOLUME SANGUIN TOTAL CHEZ LE RAT

A L'AIDE DU CHROME 51

por

Y. BERNARD e t R. RINALDI

Rapport C E A No 2 1 1 2

1962

C E N T R E D ' E T U D E S

NUCLEAIRES DE GRENOBLE

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CEA 2112 - BERNARD Y. , RINALDI R.

DETERMINATION DU VOLUME SANGUIN TOTAL CHEZ LE RAT A L'AIDE DU CHROME 51 (1962).

Sommaire. ~ La connaissance de la masse sanguine chez le rat est indispen- sable dans de nombreuses expériences et il est essentiel de pouvoir l'évaluer après une simple pesée de l'animal. C'est dans ce but que l e s auteurs ont entrepris la détermination systématique de la masse sanguine à l'aide du chrome 51 chez des rats de poids différents. Les résultats obtenus ont montré que la masse sanguine rapportée à 100 grammes d'animal est de 5,53 millilitres, et qu'elle ne paraît pas varier avec le poids de l'animal.

CEA 2112 - BERNARD Y. , RINALDI R.

DETERMINATION OF THE TOTAL BLOOD VOLUME OF THE RAT USING CHROMIUM 51 (1962).

Summary. - In various experiments it i s important that the rat's blood volume should be known and it i s essential that it could be worked out by simply weighing the animal.

Therefore authors decided to work out systematically with chromium 51 blood volume for rats with different weights. Results have shown that blood volume for 100 g is 5,55 ml and that it does not seen to vary with the weight of animals.

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- Rapport C E . A . n° 2112 -

CENTRE D'ETUDES NUCLEAIRES DE GRENOBLE

DETERMINATION DU VOLUME SANGUIN TOTAL CHEZ LE RAT

A L'AIDE DU CHROME 51

par

Y. BERNARD et R. RINALDI

- 1962 -

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DETERMINATION DU VOLUME SANGUIN TOTAL CHEZ LE RAT

A L'AIDE DU CHROME 51

La connaissance, chez le rat, du rapport de la masse

sanguine à la masse totale de l'animal étant nécessaire pour la pour- suite d'expérimentations entreprises dans le laboratoire, nous avons été amenés à déterminer le volume sanguin de cet animal.

Dans ce but, nous avons employé une méthode semblable à celle qui utilise le chrome 51 pour l'homme ; ce radio-élément pré- sente comme avantages d'avoir une période assez longue (27, 8 jours) et d'émettre un rayonnement facilement mesurable (8 pour cent de gamma de 0, 323 MeV). La méthode consiste à injecter à chaque

animal ses propres hématies marquées au préalable par contact avec une solution radioactive de Na_CrO⁴. Après un temps suffisant per- mettant une répartition homogène des hématies marquées, on prélève chez le rat des échantillons de sang dont on compare l'activité à

l¹ activité totale injectée. De ces résultats on peut déduire la dilution effectuée et par suite calculer la masse sanguine totale de l'animal.

L'expérimentation, faite sur des rats CF Wistar mâles, a porté sur 67 animaux groupés selon leur poids et les prélèvements ont été effectués respectivement 30 minutes, 1 heure et 1 heure 30 après 1' injection.

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TECHNIQUE UTILISEE

A) Marquage des hématies chez l'animal

A l'aide d'une seringue heparinée on prélève dans la veine iliaque 1 ml de sang que l'on place dans un tube contenant 1 ml d'une solution tampon (2, 55 pour cent de citrate de sodium, 0, 80 pour cent d'acide citrique et 1,20 pour cent de dextrose). On mélange avec soin et on ajoute 25 microcuries de radio chromât e de sodium. Après 30 mn d'incubation, à la température du laboratoire, on ajoute 20 mg d'acide ascorbique dissous dans 0,2 ml de CINa afin de réduire l'excès de chromate en Cr ; on laisse en contact 5 mn.

Ayant agité avec soin on r e t i r e 1 ml du mélange à l'aide d'une seringue que l'on pèse rapidement, puis on injecte dans la

veine iliaque du r a t . On détermine à nouveau le poids de la seringue pour en déduire la masse de sang marqué injecté.

B) Préparation des étalons et des échantillons de sang marqués

Pour préparer les étalons on prélève, un millilitre de sang marqué homogénéisé que l'on place dans un tube à centrifuger t a r é . On pèse pour déterminer le poids de sang, puis on centrifuge pendant 10 minutes. On r e t i r e soigneusement le plasma que l'on remplace par un millilitre de sérum physiologique et on agite doucement pour

r e m e t t r e les hématies en suspension. Cette opération de lavage est

recommencée deux fois, mais dans la dernière opération les hématies

ainsi lavées sont placées dans un flacon jaugé de 10 ml rempli avec

de l'eau distillée. Ayant bien mélangé on fait un prélèvement de 2 ml

dont on déterminera l'activité à l'aide d'un cristal puits.

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- 3 -

Pour les échantillons de sang on prélève, suivant les lots, trente minutes ou une heure, ou une heure trente après l'injection, dans la veine de la patte opposée à celle de l'injection, le sang nécessaire pour deux échantillons et l'on opère comme pour les étalons.

La masse sanguine du rat est égale au rapport de l'activité totale injectée, déduite de l'activité des étalons, à l'activité retrouvée

par unité de volume du sang .

KESULTATS

1° Prélèvements 30 minutes après l¹ injection d'hématies marquées

Les résultats obtenus sont réunis dans le tableau I où

figure le numéro du rat, son poids, sa masse sanguine totale mesurée par la méthode décrite précédemment, et la masse sanguine rapportée à 100 grammes d'animal (rapport P).

La répartition des différentes valeurs obtenues pour le

rapport P et pour l'ensemble des animaux de ce groupe est donné par la figure 1. La valeur moyenne de ce rapport pour l'ensemble est de 5, 55.

Les résultats ont été groupés en lots dans lesquels sont rassemblés les rats de poids semblables, mais la mesure sanguine rapportée à 100 g d'animal paraît ne pas varier avec le poids du rat.

La masse volumique du sang étant très voisine de l'unité, nous confondrons pratiquement la masse sanguine exprimée en grammes avec le volume sanguin exprimé en millilitres.

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- 4 -

Groupement selon le

poids en grammes

200-250

250-300

300-350

350-400

N° du rat

12 15 28 1 2 13 16 25 4

9 14 19 20 21 24 26 31 32 33 22 23

Masse totale du rat

248 230 215 280 300 280 290 295 326 310 308 305 327 343 311 347 334 349 340 359 357

Masse sanguine

totale 13,2 14,0 10,6 19,1 23,0 12,6 13,7 15,1 23, 1 17,6 19,2 14,3 17,0 19, 5 14,2 22,6 19,1 15,6 16,6 16,1 20,7

P =

masse sanguine rapportée à 100 g

d'animal 5, 32 6, 10 4, 95 6, 82 7, 67 4, 50 4, 74 5, 12 7, 09 5, 87 6, 24 4, 93 5, 22 5, 69 4, 58 6, 51 5, 72 4,48 4, 88 4,48 5,77 Valeur moyenne de P

P

(moyenne)

5,45

5,77

5, 56

5, 12

5, 55

TABLEAU I - Prélèvements après 30 mn

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- 5 -

2° Prélèvements une heure après l'injection d'hématies marquées

Les résultats obtenus pour ce groupe sont r a s s e m b l é s dans le tableau II.

N°

du r a t 31 32 33 34

Masse totale du r a t

334 349 340 372

Masse sanguine

totale 20,7 18,1 17,4 19,2

P = masse sanguine rapportée à 100 g

d'animal 6,22 5, 18 5,12 5, 18

P

(moyenne)

5,42

TABLEAU II - Prélèvements après 1 h

3° Prélèvements une heure trente après l'injection Les résultats sont présentés dans le tableau III.

La valeur moyenne obtenue pour le rapport P est de 5, 55, La répartition des différentes valeurs trouvées est donnée par la figure 2.

On n'observe pas non plus dans ce lot de variation de la masse sanguine rapportée à 100 g (P) avec le poids du rat.

En conclusion, les résultats de nos expériences montrent que la masse sanguine du rat, rapportée à 100 g d'animal est de

5, 55 ml quel que soit le poids du rat. Une simple pesée de

l'animal permet donc d'évaluer t r è s rapidement sa masse sanguine

circulante.

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Groupement selon le poids en grammes 100-200

200-250

250-300

300-350

N° du rat

41 42 55 56 57 60 62 65 35 37 4 0 46 52 6 3 64 66 38 39 4 3 47 4 9 50 53 54 33 36 59 67

Masse totale du r a t 125 160 185 184 187 199 193 158 233 223 228 225 230 238 237 243 262 280 263 290 261 252 257 291 340 342 350 368

Masse sanguine

totale 5,9 6 , 4

9J

12,9 10,5 13,8 10,8 9,2 11,7 11,9 11,5 10,5 18,1 10,7 14,3 13,8 13,4 14,0 13.9 17,4 16,7 14,3 14,1 17,3 19,4 19,3 21,0 15,5

Valeur moyenne

P =

masse sanguine rapportée à 100 g

d1 animal 4,73 4,01 4,93 7,04 5,62 6,93 5,60 5,87 5,05 5,34 5, 06 4,68 7,86 4,49 6,03 5,60 5,14 5,02 5,31 6,03 6,40 5,67 5, 51 5,95 5,72 5,65 6,02 4,21 de P

P

[moyenne)

5,59

5,51

5,62

0, 4U

5, 55

TABLEAU III - Prélèvements après 1 h 30 mn

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- 7 -

- I

J

3,5 6,5 7,5

Rapport P

Fig. 1 - Distribution du rapport P pour des prélèvements après 30 mn

15

.S

i

¹⁰

3,5

5,5

7,5

Rapport P

Fig. 2 - Distribution du rapport P pour des prélèvements après 1 h 30 mn

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B I B L I O G R A P H I E

[ l ] EBAUCH F. G., EMEISONC.P., ROSS J . F .

The use of radioactive chromium 51 as an erythrocyte tagging agent for the determination of red ceii survival in vivo

J. of Clin. Inv., 1953, 32, p. 1260.

[ 2 ] LOVERDO

Utilisation du chrome radioactif pour la détermination du volume sanguin total

Rev. Fr. d'Et. Clin, et Biol., 1956, 1, p. 926.

[ 3 ] COHEN et STOCLET

Application au rat de la mesure du volume sanguin circulant et du volume sanguin des organes par les hématies marquées au Cr

C.R. Soc. Biol., 1960, 11, p. 2023.

Manuscrit reçu le 2 janvier 1962.

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