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Recherche de biomarqueurs salivaires du stade   de maturité sexuelle de cochettes pré‐pubères

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Academic year: 2022

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Recherche de biomarqueurs salivaires du stade   de maturité sexuelle de cochettes pré‐pubères 

Ghylène GOUDET (1), Cécile DOUET (1), Lydie Nadal‐DESBARATS (2), Nebahat KÜTÜK SÜER (2), Christophe STAUB (3),   Eric VENTURI (3), Jonathan SAVOIE (3), Stéphane FERCHAUD (4), Sylviane BOULOT (5), Armelle PRUNIER (6) 

(1) INRA, UMR PRC, 37380 Nouzilly, France 

(2) INSERM U930, UFR de médecine, 10bd Tonnellé, 37044 Tours, France  (3) INRA, UEPAO, 37380 Nouzilly, France 

(4) INRA, GENESI, Equipe porcine, Le chêne, 86600 Lusignan, France  (5) IFIP, Institut du Porc, 35650 Le Rheu, France 

(6) INRA, UMR1348 PEGASE, 35590 St Gilles, France  ghylene.goudet@tours.inra.fr 

Avec la collaboration technique de Eric ROYER 

Search for salivary biomarkers of sexual development in pre‐pubertal gilts. 

Effective methods for synchronizing estrus in gilts are crucial for strict implementation of batch management and optimum  reproductive performances. Altrenogest treatments are used on a routine basis in pig farms, but there is growing demand for  alternative non‐hormonal breeding tools. Before puberty, gilts exhibit a “waiting” period, related to ovarian development and  gonadotrophin secretions, during which external stimulation, such as boar exposure, could induce the first ovulation. As non‐

invasive tools are required to increase knowledge about the waiting period, the aim of this work is to search for specific  biomarkers of this period in saliva. Trans‐abdominal ultrasonography was carried out for 5 weeks in six 140‐day old Large White  gilts until puberty detection (week  ‐5 to week  ‐1 before puberty). We collected saliva samples as well as urinary samples for  estrone assay to detect the waiting period. Gilts were then slaughtered 7 days after puberty detection for puberty confirmation. 

The salivary metabolome was analyzed using 1H Nuclear Magnetic Resonance. Urinary estrone assays are in progress. The  concentrations of some saliva metabolites significantly increased (propionate and butyrate for example) or decreased (pyruvate  and fumarate for example) between week ‐5 and week ‐1 before puberty. The identification of other metabolites whose salivary  concentration significantly varied is in progress. These results suggest that some salivary metabolites could be biomarkers of the  pre‐pubertal stage in gilts. Salivary monitoring may help to investigate optimal time for application of boar effect and could  contribute to decreasing the number of females mated while they are pre‐pubertal. 

 

INTRODUCTION 

L’élevage porcin conventionnel se caractérise par une conduite  en  bandes  qui  présente  de  nombreux  avantages  organisationnels (surveillance des mises‐bas, ajustement de la  taille  des  portées,  gestion  des  porcelets…)  et  sanitaires  (nettoyage‐désinfection  des  locaux  entre  bandes).  Des  traitements progestatifs à l’aide d’agonistes de synthèse de la  progestérone sont administrés par une majorité d’éleveurs  pour synchroniser les cycles des cochettes de renouvellement  et les intégrer dans les bandes (Boulot et al., 2005). Les  interrogations  concernant  les  effets  possibles  des  résidus  hormonaux  sur  la  santé  humaine  et  l’environnement  conduisent  à  rechercher  des  méthodes  alternatives  de  synchronisation  dans de nombreuses espèces. Il est donc  nécessaire de développer de nouvelles pratiques d’élevage  notamment pour la synchronisation des oestrus des cochettes. 

Avant la première ovulation, les cochettes atteignent un stade  physiologique de pré‐puberté au cours duquel une stimulation 

externe peut déclencher la première ovulation. L’exposition au  verrat  (appelée  effet  mâle)  pourrait  favoriser  le  déclenchement et la synchronisation de la puberté s’il est  appliqué  pendant  cette  période  de  pré‐puberté  (Prunier,  1989). Cette pratique est très peu utilisée en élevage, car le  moment optimal et les modalités d’exposition au verrat ne  sont  pas  clairement  définis.  Notre  objectif  est  de  mieux  connaitre la phase de pré‐puberté, et notamment de trouver  des biomarqueurs de cette phase. Une meilleure connaissance  de la phase de pré‐puberté permettra d’améliorer le repérage  des femelles à stimuler et de diminuer le nombre de femelles  mises à la reproduction alors qu’elles sont impubères.   

Les concentrations d’estrone urinaire augmentent pendant la  phase de pré‐puberté (Camous et al., 1985). En conditions  d’élevage  où  les  cochettes  sont  logées  en  groupe,  des  prélèvements d’urine réguliers ne sont pas envisageables et les  dosages hormonaux classiques reposent sur des prélèvements  sanguins  trop  invasifs.  En revanche,  le  suivi  d’indicateurs  salivaires  suscite  un  intérêt  croissant  en  raison  de  son  caractère non invasif.  

2015. Journées Recherche Porcine, 47, 247-248.

247

(2)

No pha éta 1.

1.1 Ne 5 s à s san un  exa My de  al., réa dos pré rec Les jus les  vér

1.2 Des mo du  Nu tam trim Les (50 ana mu d’e 2.

No 9 c apr dét jou con pub l’ab éta d’u coc nou sem

us souhaitons ase de pré‐pu ant réalisable e

MATERIEL ET

1.  Prélèvemen

uf  cochettes  emaines, de 1 emaine ‐1 ava ns changement mâle penda aminés  par  é yLab30 Vet Go

détecter la pu  2006). De 14 alisé trois fois  ser l’estrone e élèvements de chercher des b s prélèvement

qu’aux analys cochettes on rifiant l’état de

2. Analyse des s  biomarqueu olécules de fai

métabolome  cléaire (RMN) mpon  phosph méthylsilylprop s échantillons  00MHz UltraSh

alysés  avec  ultivariée  sup estrone dans l’u

RESULTATS 

us avons pu  ochettes trois  rès centrifuga tectée par éch urs (utérus dé

nfirmée après bères à l’écho battage. Une  ait en réalité d un cycle précéd

chettes n’ont p us avons analy maine ‐5 à la se

Boulot S., Dub Boulot S., Mo porcin. Journé Camous S., Pr Martinat‐Bott around puber Prunier A., 19

s donc reche berté dans la  en élevage. 

T METHODES

nts des échant Large  Whit 140 jours d’âge ant la puberté) t de salle ni de nt l’étude. L’

échographie  ( ld sonde 3‐10  uberté (Martin 0 jours à la dé par semaine  et identifier la e salive à l’aide iomarqueurs d ts ont été ce

es. Sept jours t été abattue es ovaires et de

s échantillons  urs salivaires  ble poids mol

par Spectrosc ) du proton. 

hate  deutéré panoïque) qui  ont été analy hield, Bruker).

le  logiciel  S ervisée  et  n urine sont en c ET DISCUSSIO

collecter des  fois par sema ation. Pour six

hographie à 1 veloppé et ov  abattage. Po ographie, la pu

cochette cons dans son 2ème c dent). Les prél pas été analysé ysé un échanti

emaine ‐1 avan

broca S., Badoua orvan R., Martin ées Rech. Porcin runier A., Pelletie té F., RoyerE., Ve rty in gilts and ev 89. Influence de

rcher des bio salive, ce typ

tillons  e  ont  été  e jusqu’à la pu ). Elles étaient e nourriture et utérus et  les (échographe 

Mhz) trois foi nat‐Botté et al étection de pu des prélèvem a phase de pr e d’une salivet de cette phase ntrifugés et c  après la déte s pour confirm e l’utérus. 

ont été  rech éculaire en ré copie à Réson La salive a ét é  additionné 

sert de référe ysés à l’aide d . Les spectres IMCA  P+  (an non  supervisé

cours. 

ON 

échantillons  ine, à raison d x cochettes,  182, 189, 190,

vulation récen our deux coch uberté n’a pa sidérée pubèr cycle (présenc lèvements sali és. Pour les six llon de salive  nt la puberté. 

ard B., 2005. Ges nat‐Botté F., 200 ne, 38, 475‐482. 

er J., 1985. Plasm enturi E., Boisse valuation of a di e la présentation

omarqueurs d pe de prélèvem

utilisées  pen uberté (semain t logées ensem t sans contact  s  ovaires  ont  Esaote‐Piemed s par semaine l., 2003 ; Boulo uberté, nous av ments d’urine p ré‐puberté, et tte (Sarstedt) p

e.    

conservés à  ‐8 ection de pube mer la pubert

herchés  parmi éalisant une ét nance Magnét

té diluée dans de  TSP  (a nce.    

d’un spectrom s obtenus ont nalyse  statist ée).  Les  dos

de salive sur de 550 µl à 2,2 la puberté a  , 190, 191 et  nte), et elle a hettes considé s été confirm re à l’échogra ce de corps jau ivaires de ces  x autres coche par semaine, d  

REFERENC

stion pharmacol 06. Conditions d ma prolactin, LH eau C., Guillouet iagnosis of pube n au verrat sur l’

de la  ment 

dant   ne ‐5  mble,  avec  été  dical   afin  ot et  vons  pour   des  pour 

80°C  erté,  é en 

i  les  tude  tique  s un  acide 

mètre  t été  tique  ages 

r les   5 ml 

été  192   été  érées  ée à  phie  unes  trois  ttes,  de la 

La F l’un

F

L’an diffé les  cas  plus fum sem

pe

CON Ce t la c préc pré‐

pro vari si de

CES BIBLIOGR

logique de la rep de mise en œu H, FSH and estrog

 P., Furstoss V.,  erty. Reprod. Nu âge à la puberté

0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 1,4 1,6

Figure 1 mont ne des cochette

Figure 1 – Spec au cours d nalyse statistiq érence de con semaines ‐5 e

pour le propio s élevée en se marate dont la  maine ‐5. Plusie

Figure 2 – Evo mM+sem dan ndant la phase

signalées par NCLUSION  travail original concentration  cédant la pube

‐puberté  che

spectifs  doive iations sont bi es niveaux seu

RAPHIQUES 

production. Tech vre et intérêt d gen excretion pa Terqui M., 2003 tr. Dev., 43, 225 é des truies. INR semaine ‐5 s

re un exemple es au cours de

ctres RMN obt des semaines ‐ que a permis ncentrations p et ‐1 (P < 0,05,  onate et le but emaine ‐1 vs s

concentration eurs métabolit

olution des co ns le tube RMN e de pré‐puber r un chiffre son

l suggère que  salivaire  var erté, pourraie ez  la  coche ent être conf en spécifiques uils peuvent êt

hniporc, 28 (5), 9 du contrôle écho atterns in gilts. J 3. Determination 5‐236. 

RA Prod. Anim., 2 emaine ‐4 sem

e de spectres  s 5 semaines d

tenus sur l’une

‐5 (en bas) à ‐1 s de mettre  pour certains m

Figure 2). C’e tyrate dont la  emaine ‐5, ou  est plus faible tes restent à id

ncentrations ( N) des métabol rté des six coch nt en cours d’id

des métabolit rie  au cours 

nt être des bi tte.  Ces  pr firmés afin de s de la maturat re mis en évid

9‐12. 

ographique de  J. Anim. Sci., 60,  n by echography 2, 65‐72. 

maine ‐3 semai

RMN obtenus de suivi. 

e des cochettes 1 (en haut) 

en évidence  métabolites en est par exempl

concentration u le pyruvate e e en semaine ‐ dentifier. 

exprimées en  ites d’intérêts hettes. Les zon dentification.

tes d’intérêt, d des  5  sema omarqueurs d emiers  résul e préciser si  tion pubertair ence. 

puberté en élev 1308‐1317. 

y of uterine chan ne ‐2 semaine

 sur 

 

s  

une  ntre  e le  n est  et le  1 vs 

 

  nes 

dont  ines  de la  tats  ces  e et 

vage 

nges  e ‐1 2015. Journées Recherche Porcine, 47.

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