Développement et validation d'une méthode d'analyse de I'ibuprofinepar spectrophotométrie UV-visible et étude de I'activité antioxydantede quelques médicaments

REPUBLIQUE ALGERIENNE

_DEMOCRATIQUE

_{ET POPULAIRE}

NtrNISTERE

DE

L'ENSEIGNEMENT

_SUPERIETIR

_ET

_DE

_LA

RECHERCHE

_SCIENTIFIQUE

.TINTVERSITE

_MOHAMMED

_SEDDIK

BEN

YAHIA.JIJEL

F'ACULTE

DES

SCIENCES

EXACTES ET

INFORMATIQUE

DEPARTEMENT DE

CHIMIE

MSmoire

_firdsent6

pour

obtenir

le

dipldme

de

Master

en

chimie

Option

: Chimie pharmaceutique

Prdpard

par

14cIIc

BOULATIIA

Hassiba

M'rruNouRAI

_salima

D6veloppement

et

validation

d'une

mdthode d'analyse

de

I'ibuprofine

par

spectrophotom6trie

UV-visible

et 6tude

de

I'activit6

antioxydante

de

quelques m6dicaments

1 I_I 1 .1 .J ..f f I

"i

*F:r,'

Soutenue

le

:2710612018 devant

le

jury:

President:

Directice:

Exmrinatrice:

Mr

K.

SAHRA

M.'

N.

BOUCHAIR

M*"

S. BENSAM Univ. Jijel Univ. Jijel Univ.

Jijel

A,Ll+t,?t14,o\l

A8

REPUBLIQUE

ALGERIENNE DEMOCRATIQUE

ET POPULAIRE

MINISTERE

DE

L'ENSEIGI\EMENT

SUPERIEUR

ET

DE

LA

RECHERCHE

SCIENTIFIQUE

UNIVERSITE

MOHAMMED

SEDDIK

BEN

YAHIA.JIJEL

FACULTE

DES

SCIENCES

EXACTES

ET

INF'ORMATIQUE

DEPARTEMENT

DE

CHIMIE

M6moire

prdsent6

pour obtenir

le diplOme de

Master

en

chimie

Option

: Chimie pharmaceutique

Pr6par6

par

nal"goutAHlA

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M"rI"NouRAI

satima

Thime

D6veloppement

et

validation d'une

mdthode d'analyse

de

loibuprof$ne

par

spectrophotom6trie UV-visible

et 6tude

de

I'activitd

antioxydante

de

quelques

m6dicaments

Soutenue

le:2710612018

devant

le

jury:

hsident:

Directrice :

Exrminatrice:

Mr K.

SAHRA

M*.

N.

BOUCHAIR

M.U S. BENSAM Univ. Jijel Univ. Jijel Univ. Jijel Aan6e

Universitaire

2017/2018

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$ttt*vttt

Sstd

{assoir 6icn accrytd

{e4a*$ner

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travaif

et

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'l/os criti4ues, remar(Ws et suggestions seront {es himvenus et contrifiueront

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ffi

{oflg

fe tntre

vie tmhtersitaire.

Liste

des

abr6viations

Unites :

"C

Degr6 Celsius

mg

milligramme

1

litre

Pi

Pourcentage

d'inhibition

AC

absorbance du

cont6le

n€gatif

AT

absorbance du test effectud

nm

nanomdtre

ml

millilitre

mM

millimolaire

P

Poids

v

volume

tr

toure

min

minute

o/o

pourcentage

T"

Point de fusion

I)'ertres

Abr6viations

:

AND

Acide DdsoxYribonucleique

AINS

Anti-inflammatoires non st€roidiens

BHA

ButYlhYdroxYanisole

BI{T

ButYlhYdroxYtoludne

COX

CYclo-oxYg6nase

C-**

Concenfration ma:rimale

CCIrC@H

Acide fiichloroacetique

DPPIf

2,2- diphdnyl-l-picrylhydrazyl

DCI

Ddnomination commune internatimale

ERO

Espdces r6actives de

I'oxygine

Ea

L'e'lreut relative

Fe*

Ion ferrique

FeF

Ion

ferreux

FeCl

I

Trichlorure

de fer

Table des matiEres

Inhoduction

...-.1

Chapitre

I

: Etude

bibliographique

I. Ddfinition des anti-inflamrnaroires

AINS

_...3

I.1. Rdaction

inflammatoire...

_...3

I.2. Pharmacocindtique des

AINS

:...

...3

I.2.1.

Absorption...

_...,,...3

I.2.2.

Distribution

_...-..3

I.2.3.

Mdtabolisme...

_...,..4

I.2.4.

Elinrination...

_...4

I.3. Gen6ralitds sur les

AINS

_...,.4

IL

Idsntifrcation de

f

ibuprofdne...

_...5

Il.l.Structure

moldculaire de

f

ibuprofBne...

_...5

Il.2.Mdcanisme

d'action

_...-...6

Il3.Propridt6s

th6rapeutiques

_...6

Il4.Effets

inddsirables

...

_...6

IIL

Ideirtification de paracdtamol

...

_...6

Itr.l.Sfructure

mol6culaire

_...-.-? m.2.Mdcanisme

d'action...

_...,.8

Ill.3.Propriites

therapeutiques...

_...9

Itr.4. Effets

indisirables

_...9

IV,

Id€ntification de L'acide

ascortique

_{....,...,...9}

IV.l.

Strrcture

moldcu1aire...

_...9

fV2.

Mdcanisme

d'action

_...9

IV.3.Propri6t6s thdrapeutique

...

_{... 10}

VIII.

Evaluation

l'activitd

antioxydants

...

...--- 19

VIII.2,Mode

d'action des antioxydants

...

_...19

Vlll.3.Classification des

antioxydants...

_{... 19}

Mll.3.l.Antioxydants

naturels...,r.r

j...i..,.

_...,...

_lg

Vlll.3.l.l.Antioxydants

enzymatiques

_....-20

Vlll.3.1.2.Antioxydants _non

enzymatiques

_...20

VIII.3.1.2.1.Vitamine C

...

_...?O

Vlll.3.l.2.2.Vitamine

E...

_...20

VIIL3. 1.2.3. p-carotdne

Vlll3.2.Antioxydants

synthdtiques

...

_...2I

VIII.4.

Evaluation in

vitro

de I'activitd

antioxydant...,...

_...,..?l

VIII.4.1,

Gdndralitd

_...21

VIII.4.2.Tests de

l'activitd

antioxydante...

_...?2

VIII.4.2.1.Pidgeage duperoxyde d'hydrogene (Hzozscavenging activity)... ...?J W[I.4.2.2.Pidgeage du radical

2,2-diphenyL-picrylhydrad(DppH.).

_...22

Mtr.4.2.3.Reduction du Fer: FRAP _{(Ferric reducing antioxidant power)... ...22}

Chapitre

II

: Etude exp6rimentale A. Validation analytique par spectuophotomdtie

UV/visibIe...

_...-.23

L Matdriels et produits

chimiques

_...-23

I.l

Rectifs

et

solvants.

_...23

I 2

Appareillage...

_...23

IL

Hparation

des

solutions

_...23

ILl.

Preparation de la solution mere et des _{solutions diludes standards (pA)...,...23}

tr3.

Preparation de la solution

plac€bo

_...24

tr-3- Prdparation des solutions de la forrre _{pharmaceutique reconstitude (FpR) ...-24}

tr 4. Preparation de la solution

comprim6e

_...24

IL5. Preparation des solutions diludes du

comprimd

_..,...24

Illt.Rdalisation

du spectre

UV-visible

_...,....24

Ill?.Spdcificit6...,...

.,...?4

Ill.3.Lindarit6...,.,....

...25

III.4.Fid61it6...

...25

Ill-5-Exactitude...

...25

Itr-6.Limite de ddtection(LoD) et limite de quantificarion

(LOe)...

_...26

Ill.T.Intervale de

validit6

_...,.26

Ill.8.Stabi1it6...

...,....16

lV.

Rdsultats et

discussions...

_...-.-.2?

IV,l.Rdalisation du spectre

UV-visible

_...,...27

lV.2.Specificitd...,...

...27

fV3.Lindarit6...

...29

M.Fidd1it6....,...

...,._..3o

IV.5.Exactitude...,...

....,,...30

IV.6.Limite

de d6tection (LOD)et

limite

de

quantification(LoQ)

...31

Iv-T.Intervalle de

validit6...

_...31

Iv-8.Stabilitd des

solutions...

_...31

B- Evaluation I'activitd

antioxydante...

_...--32

I. Mat€riels etproduits

chimiques

_...---.32

Ll

Rdactifs et

solvants.

_...32

I.2

Appareillage

_...33

IL

Piegeage du radical libre DPPH

(2,2-diphdnyl-l-picrylhydrazyl)

_...33

ILlMode

opdratoire

...,...33

[l.l.Preparation

des solutions des produits

Atester

...33

Ll.2.Mise

en Guwe pratique

IIL Activit6

du pi6geage du peroxyde d'hydrogdne (H2O2scavengi

il@x

(bil

Liste

des

Ftgures

et

schtimus

l\Fo

tigure

Titre _Page

a5 01 Structrue chimique des deux

isomdres,fuFlbup6ffi

02 La structure de paracdtamol _B8

03 La structure de

l'Acide

ascor.bique ₀₉

n

04 Schdma reprdsente le domaine

_tiv-Visible

05 _{Schdma de base de la speckophotomdtrie}

_UV-VGibG

_t8

06 La Structure de la vitamine E

_2l

07 _{La strucfure de B-carotdne}

21

n

08 Pidgeage du radical libre

DppH'

09 spectre

uv

_{de la solution dtalon de}

tt@

₂₇

n

10 Spectres d'absorpfion de 1a solution

dd

40 me/l

1i

Courbes d'6talonnages de I'ibuprofdne seut et de ppR 28

t2

courte

de la lindarit6 de la solution dtalon

"t

a"li

sototion

ppn

29 t3 Variation du pouvoir.

_d'inhibition

_en

foncffi

l'acide ascorbique.

36

t4

Variation du pouvoir

d'inhibition

"o

Paracdtarnol 37

37

15 Variation du pouvoir

_{d'inhififie1 errf}

l'ibuprofbne

16 Variation du pouvoir

d'inhibition

s'

fo"m

l'acide ascorbique 38

l7

vanatron du pouvoir

d'inhibition

en fonction de la concentration de

Parac6tamol 39

18 Variation de l'absorbance en fonction

deffi

ascorbique 40

19 Variation de l'absorbance en

for"

₄₀

n

20 Variation de l'absorbance en fonction

2l

Comparaison des courbesde _{variation d}

concentration des trois mddicaments testds

Liste

des

Tubleaux

No

tableau

Titre Page

01 Propridtds physicochimiques de

f

ibuprofine 05 02 Propri6tds physicochimiques de paracdtamol _0?

03 Propri6t6s physicochimiques de L' acide ascorbique 09

04 Differents paramdfr es stati stique

t5

05 Paramdtres de lin6arit6 29

06 Paramdtres de fid6litd ₃₀

07 Paramdtres de l'exactitude 31

08 Rdsultats de la stabilit6 des solutions 32

09 Concentrations inhibitrices des produits dtudiea par le testau DPPH 38

f

/

|

.ra

Iniroduction:

fl

ne peut y avoir de soins sans m€dicamefits,'mais suftout

il

ne peut y avoir de soins de

ryalitd

sans m6dicaments de qualit6.

La

ciroulation de mddioaments de mauvaise qualit6, mal fabriqu6s ou contrefaits, repr6sente une menace permanente pour la smt6 publique. La

vigilance est donc ndcessaire car le trafic s'aggrave au cours des demidres anndes et touche plus particulidrement les pays en ddveloppement.

k

principe de

la

validation des procedures analytiques quantitatives est, aujourd'hui

largement, r6pandu dans tous les domaines d'activitd or) des mesures doivent €fre

reali#s.

Le

domaine d'application de la validatrion analytique s'6tend

i

toute procddure d'analyse utilisee dans le contrdle de la

matiire

premidre, le ddveloppement galdnique,

h

confrOle de produits phannaceutiques flnis ou en cours de fabrication. '

Les composds antioxydants font actfurellefnent

l'objet

de nombrguses 6tudes car, en plus de

leur

intdr€t dans

le

traitement de certaines pathologies,

ils

sont aussi utilis6s pour la conservation

des

aliments

dans f industrie

agroalimentaire

(par

exemple

emp€c,her

I'oxydation des lipides).

L'ibuproftne

est

un

principe

actif qui

appartient

d

la

famille de

mddicamenfs

mG

inflammatoires non stdroidiens

(AINS).

Le m€dicament a des propridt€s antalgiques,

fliti-inflammatoire et antipyr6tiques. Cette classe de mddicaments estg6ndralement la catdgorie la plus largement utilisee dans le traitement des maladies rhumatismabs et la douleur.

I.e

paracetamol est un analgdsique

qui

possdde 6galement une propri€t6 antipyrdtiqug

en vente libre, et

il

est dans toutes les pharmacies familiales.

L'acide

ascorbique

est

un

antioxydant puissant,

qui joue

plusieurs

r6les

dans

I'uganisme,

notamment grAce

i

ses propri€t€s antioxydantes.

Il

est commercialis€ sous le

nm

de lavitamine C.

lilotre etude est basee sur quatre a:res principaux:

Une 6tude

biblio$aphique

comportant quatre parties dont la premiere r6sume les

gopri6t6s des

trois

m6dicaments

6tudi6s (ibuprofene,

parac6tamol

et

side

ascorbique),

la

deuxidme partie expose les differents critdres de

la

validation des proc6dures analytiques avec toutes les d6finitions aff6rentes,

la

froisidme d6crit

la

techniques d'analyse par spectrophotomdtrie

UV-visible

et

consacrde

i

une 6tude bibliographique sur

l'activitd

antioxydante, les antioxydants

et les difffrentes leshniques d'dvaluation de

l'activitd

antioxydante.

L'expdrimentation de notre travail qui commonce

par,

la prdsentation du matdriel

et des mdthodes utilisees, puis les rdsultats et

la

discussion de la validation d'uae

mithode d'analyse de

f

ibuproftne par

UV-

visible.

Les mdthodes utilisees dans 1'6valuation de 1'activit6 antioxydante (le

pi€geap

&r

radical

libre

DPPH, le pi6geage du peroxyde d'hydrogdne et le pouvoir r€ductew

du fer

(FRAP).

Les rdsultats seront dgalement prdsent6s et discutds.

Chapitre

I

I. Df{inition

des

anti-inflammatoires

AINS

:

Les anti-inflammatoires non stdroidiens repr6sentent une des classes thdrapeutiques les

plus _{utilisdes au monde.}

_Ils

_{forment une classe de m6dicaments h6t6rogdnes du point}

de

vue

chimique' comprenant

plus d'une

ffentaine de produits appartenant

i

des familtes diffdrentes. Par contre du point de vue de leurs effets inddsirables,

ils

sont homogdnes d*ns la majoritd des cas ce qui _{permet de les regrouper sous la m6me d6finition.}

_Ils

_{ont srntout}

un mdcanisme d'action principale _: Inhibition de la synthise de la prostaglandine t11.

Ll-

Reaction

inflammatoire

:

L'inflammation

est une rdaction de l'organisme due d une

irritation

d,origine dive$e

infection" ffaumatisme mdcanique, fiarunatisme chimique, troubles m6taboliques, br6lures-C'est une rdaction du tissu conjonctif et des _{vaisseaux dans laquelle on distingue plusieurs}

phases _{successives, congestives excitatives, proliferatives etn6crotiques} I21.

L?.Pharmacocin6tique des

AINS

:

Les

AINi

_{sont les m€dicanrents hcides faibles (PI(a compris enhe 3 et 4,5) relativeinent} liposolubles I31.

I.2,1.

Absorption

:

L'absorptibn

digestive'

des

AINS

est' excellente,

'ce qui' leur

confdre

une

bome

biodisponibilite _{par voie orale et diminus l,intdr€t des formes parentdrales.}

En

gdn€ral,

_la

concenfiation

maxirnale(C.u)

_est

obtenue

en

I

d 2

_{heures ryres}

administration

_{orale sauf}

_pour

_{certaines forrnes}

_d

_libdration

_prolongee

_(Ketoprofae,

Diclofe'nac) dont

le

k*

est

d'environ

3-6 heures (temps

ou on

obtient

la

conce,nh*ion maximale)tal.

L1,2. Distrdbution :

I-es

AINS

_{ont uft faible vdlume appafent de distribution du d leur trds forte fixation aux}

alhrmines

plasmatiques.

_Ainsi

_leur

_{concentration}

_libre,

_{pharmacologrquement active,}

I.2.3. M6tabolisme :

Le

mdtabolisme des

AINS

est gdn6ralement hdpatique. Ce m6tabolisme aboutit

d

la

formation de produits inactifs. _{Cependant, cefiains mdtabolites sont douds d'une activit€}

anti-infl ammatoire tal.

L2.4.

Elimination

:

La plupart des

AINS

sont €limin€s par les reins sous fiorme active et de

m6tahlitc-

La

demi-vie plasmatique des AINS _{conditionne leur rythme} d'administration :

/

Les

AINS

d demi-vie courte (la plupart des propioniques) en 3 prises quotidiennes

/

Les AINS d demi-vie intermddiaire (12 d 18 heures) sont deux prises par

jour.

{

Les

AINS

d demi-vie longue (supdrieure d 24 heures : Pyrazol6s" Piroxicam) une

seule fois par jourlal.

L3. Gdn6ralitSs

sur

les

AINS:

Depuis

l'antiquitd

l'6corce de < Salix atba > (une plante) 6tait utilisde dens

le

but de

traiter

l'in{lammation,

elle

contient

un

glucoside,

]a

salicine

qui par

hydrolyse

likre

I'acide salicylique tsl.

De

nos jours,

'la

ohimie

organique

a

permis' de'synth6tiser des m6dicarnents

anti-inflammatoires dont la propridtd est

i

la

fois

antipyrdtique, antalgique, antlinflammatoire

et mtiagregant plaquettaire, ce qui explique leur succds t6l.

Un nombre important de ddrives anti-inflammatoire est astuellement disponible av€c d€

nurvelles formes galdniques, tels que I'acide acdtyl salicylique, Les pyrazolds (comme la

phenylbutazone), Ies indoliques (comme l'indomdtacine) et les ddrivds propioniquesn.

Les

d€rives

de

I'acide

prcpionique

_tel

que

I'Ibuprofbne, FdnoproGne, ketoprofBne,

Nryoxe,ne

et

autres, leurs propridt€s anti-inflammatoires sont supdrieures d celles de la

pheny{butazone et de I'indom6tacine. Les effets antalgiques sont par contre sup6rierm de

m€me que

leur

toldrance.

Les

douleurs mineures

d

mod6rdes dues

d

des traumatismes

sportifs A d€s

affetions

ctitan6es, osseuses

et

dentaires, Ies douleurs postopdiatoires, la

polyrthrite

rhumatoide

et

I'arthrose

rdpondent

aux

AINS.

Les

ddrivds

de

I'aside

popionique

peuvent 6galement

aider

d

soulager

les

douleurs

chez

les

cancdreux en

chapitret _

letoa.bibliographique

II.

Identification

de

l'ibuprofine

:

Ltbuprofdne est

un

anti-inflammatoire

non

st6roidien.

Il

est

indiqud,

chez I'adulte et I'enfant, dans le traitement de courte dur6e de la

fidwe

ou de douleurs telles que maux ds t8te, dtats grippaux, douleurs dentaires, courbatures et riglesdouloureuses [8].

L'ibuprofdne est disponible sous _{forme d'une poudre blanche cristallis6e. C'est un solide}

faiblement cireux avec une faible odeur et un gofft

fort

et caract6ristique. Une

fois

aval6,

I'ibrproftne

laisse une sensation brtlante dans la gorge Inl.

Tableau

0l

: Propridtes physicochimique de I'ibupr-ofene.

Nom du oroduit

Xydol-Ddnomination commune internationale

(DCr)

Ibuprofdne

Ddnomination chimiqus selon

I'UPAC

acide (R S)- 2 -[4 - _{Q-menhylpropyl)}

ph6nyll prop6noiique .

Formule brute CrcHtoOt

Composition C 7 5.69 %"

H

8.8 %" O (15.51 7o)

Poids moldculaire (c

/l)

206"2808 + 0.0123 c/mol

To de fusion(Co) 76 "C

Pk. 4,54

Solubilitd

0,043

mg.ml-l

eau d _{37 "C.}

soluble dans la plupart des solvants organiques.

Il.lstructure

moldculaire de

l'ibuprof3ne

:

I^a molecule d'ibuprofe,ne

possde un

centre

chiral au

niveau

de

groupement aside

prydnoique.

Par

consequent

deux

isomdres optiques

sont

possibles

:

_la

_forme

_{+)

&xrogyre

ou (S)"(+)-ibuprofdne et la forme (-) ldvogyre ou (RlG)-ibuprofdne pl.

Il.2.M6canisme

d'action

:

L'ibuprofdne est

un

inhibiteur non

sdlectif de

la

prostaglandine synthdse, dgalement appelde cyclo-oxygdnase

(COX).

Cette enzym.e catalyse la premidre 6tape de

la

synthdse

des mddiateurs de I'inflammation : _{prostaglandines et thromboxanes. L'ibuprofbne,}

_coilxre

de

nombreux autres

_{AINS, limite ainsi}

l'activation

de

cette

voie par un

m6canisme

d'inhibition des deux familles de cyclo-oxygdnase t101.

IL3.

Propri€t€s th€rapeutieues' : I10l

)

Antalgiques : opiac6s, non addictifs, en partie indirect: consdquence de I'effet anti-inflammatoiie

il.dEffe8

indesirables :

gencives), douleurs abdominales, voire ulc6ration du tube digestif tttt.

intra et/ou exfia-hdpatiques, rarement), c6pha1€es (maux de t€te), bourdonnemmts

d'oreille, somnolence t121.

perturbateur endocrinien [trl.

IIL

Identification

de parac6tamol:

Ie

pracetamol,

_{aussi appel6 acetaminophbne, est uir com6ios6 chimiQue utilis6 comme.}

anmlgique (antidouleur) et antipyrdtique (anti-fidwe), _{qui figure parmi les mddicaments les}

plus

communs,

utilisds et

prescrits au monde t141.

_n

_{est indiqu6 dans}

_le

traitement des

synptdmes d'intensitd faible

ii

_{moddr6e, seul ou en association avec d'autres analg$siques,}

notamment opioides, et est tres populaire car

il

a moins de contreindications que d'mbes

antalgiques et

jouit

_{d'une bonne image aupres du}

_public.

_{Son m6canisme est encore mal} connu

_;

en effeg

il

diminue la fidvre, mais pas par le _{m0me m6canisme que I'aspirine ou} I'ibuprofine qui agissent sur

I'infla:mation

_[1s1.

Etude bibliographique

Tableau 02 : Les propridtds physicochimique de paracdtamol.

m|.structure

moldculaire :

Le

pracdtmol

ne

comprenb

p*

_{de'cen'fe'chiral et}

_n'a

_{adcun sbreo-isomdre;}

_La

slnftese n'a

pas besoin d'€tre ster6oconfi6l6e

et

elle

est

plus

simple que

les

synthdws

aslm6riques d'auhes substances pharmaceutiques [tul.

,,.ry-YcHa

Nom du produit _Doliprane

Ddnomination commune internationale

(DCD

Paracdtamol

Dinomination chimique selon 1'IUpAC N-(4-hydroxyphdnyl) dthanamide

Formule brute CsHeNO2

Composition.

_c

_(63,s6)

_%H(6

_{%) N (9,27} o/o)

O Q1,17 o/o)

Poids rnoleculaires

(gil)

151,1626

*

0,0078 g/mol To de fusion

(C')

169 d 170 _"C

Pku _9,5

Solubilitd

Beaucoup plus soluble dans I'eau chalde

Soluble dans I'ac6tone, l'6thano1, le m6thanol, le dimdthylformamide, le dichlorure d'6thyldne, I'ac6tate d'6thy1e. peu

soluble dans le chloroforme, 1'6ther. Presque insoluble dans 1'6ther de p6trole, le

penturg

le benzene.

Etude bibliographique

Ill.2.M6canisme d'action

:

Le

mdcanisme

d'action

complet

du

parac6tamol _{reste inconnu,}

_un

_sidcle

_{apres sa} d6couverte tlil.Cependant,

_{il a}

_{6td ddmonfrd qu'il agit principalement au niveau du syst6me} neryeux cenfial t18l.

Selon une 6tude

en

2006,

le

paracetamol

agirait

en

inhibant au

niveau

du

systdme

nerveux

centrale

la

production de prostaglandines, impliqudes dans les processus

&

:la

douleur et de la

fidvrq

par

le

_{biais d'une action inhibiU"ice sur I'enz5nne prostaglandine}

_lt2

synthdse (PGHS),

qui

comporte notamment un site

actif

< cyclo-oxygenase

)

(ou COX),

cib,le de la majoritd des _{anti-inflammatoire non st6roidien}

_(AINS),

_{et un site < peroxydase}

*

(ou

KX),

sur lequel agirait le paracetamol tlel.

IIIS

Propri6t6s th6rapeutiques :

te

haitement _{symptomatique des douleurs aigrr€s}

_ou

_{chroniques, d'intensit6 l6gdr€ d}

mod€ree-

Il

peut €tre

utilise

seul

ou

en association ave,c d'aufies antalgiques

(co&ine,

tramadol, acide ac6tylsalicylique, ibuprofdne; {201.

IfI.4.

Effets inddsirables:

Le

paracdtamol petrt

_ddtuife

_les'cellules

_du

_{foie. Des}

_{accideuts arrivent m6me en}

I'akence de

surdosage, avec

une utilisation

normale, selon

une

dfude

publiie

le

23 novemb're 2011 dans

le British

Journal

of

Clinical

Pharmacolog, mais bien

str,

le

risque

devient trds important

_{si I'on}

ddpasse

les

doses recommanddes.

La

prise de

plus

de

4

comprimds

de

1

g

par

jour

pendant 7

jours,

peut entrainer

la

mort d'hdpatite

fulmimnte

(une destruction acceldrde et totale du foie).

D'ot

I'importance de se mdfier de ce m6dicament pourtant reputd

(

anoclin > t211.

IV.Idmtificatioh

de L,acide ascorbique :

La

vitamine

C

est

un

antioxydant puissant.

Elle

participe dans les r€actions avec la

Fl-Etude bibliographique

Tableau 03 : Propri6tds physicochimique de L'acide ascorbique.

Nom du produit Vitamine C

Ddnomination commune intemationale

(DCr)

L'acide ascorbique

Ddnomination chimique selon

I'UPAC

5-(1,2-dihydroxy6thyl)-3,4-dihydroxyfuran-2-one

Formule brute CrF{rOa

Composition

C

40,92 o/o,

H

4"58 7o, O 54,5 Yo" Poids moldculaire (g

/l)

176,1241

x

0,A072lmol

To de fusion(Co) 193"C

Pk" 4,1 'st 11,8

Solubilit6 trds soluble dans I'eau, peu soluble

dans 1'6thanol, insoluble dans

l'6thu,

benzdne, xyldne, chloroforme.

IV.l.

Structure

moldculaire :

L'acide ascorbique.est une vitamine hydrosoluble.

Il

possdde deux isomdres : l'acide

L

ascorbique et I'acide D ascorbique. Seule la forme

L

est mdtabolisde de fagon efficace chez

I'homrne, tandis que

la

fomre

D

est

spthdtisde

et utilisde chez les eucaryotes inf€rieurs champignons)

tzl.

HO

H"'

HO

Figure 03 : La structure de

l'Acide

ascorbique.

IY2'M6canishe d'action

:

L'acide

ascorbique est complitement et rapidement absorbd aprds une administation prentdrale.

La vitarnine C _{absorbde 6quilibre facilement la rdserve corporelle en vitamine. Auoune}

liaison protdique spdcifique avec l'acide ascorbique

n'a

dti

rapport€e et

il

est suggdrd que

la

vitarnine est retenue en se

liant

aux sfructures sous-celiulaires.

L'acide

ascorbique est

largement diskibud d

favers

les tissus, d'autant chez les animaux capables de synthdtiser

I'acide

ascorbique,

que

chez

ceux

ddpendant

d'une

quantitd

didtdtique addquate de

vitamine C. Elle a tendance d participer dans la cicatrisation des plaies. L'acide ascorbique absorbd est excrdtde dans I'urine. la sueur et les selles t2s1.

IV.S.Propri€tds th€rapeutique :

L'rff+t

antioxydant

de la

vitamine

g

, tzrl

)

Protection

:

caldiovasculaire,

de

certains cancers,

d'allergies

et

inflammations, asthme, _{cataractes... protection et interfdrence positive avec les aufies antioxydants} tels que la vitamine E.

muqueuses

(pulmonaires, v6sicales

et

digestives)

ainsi que

du

foie.

_{tes

nitrosamines, substances fonndes d

partir

des nitrates que nous absorbons et ssnt localement des agents cancerogdnes, la vitamine C prise en m€me temps qu'eux et

d dose suffisante permet de les neufialiser).

L'efict

antiallerglque, anti-inllammatoi'rg

antihistiminiquti

bt

antiasthmati{ue

:

traitements de l'allergie.

augmentds par I'absorption conjointe d'autres cofacteurs antioxydants tels que le cuiwe, le zinc, le sdl6nium.

L'efiet

antian6mique de la

vitamine

C,

mttabolisme.du

fer

reduire

les

doses chez

les

zujets porteurs

"d'hdmocbromatose"

(maladie cong6nitale de surcharge en fer).

(vibmine

89)

responsable de certaines andmies sachant que la ddficience en

asi&

IV.4.Effets

inddsirables et

intoxication

:

par

jour

_{(en doses divisdes),}

_la

_{suppldmentation en vitamine C}

ne prdsente aucun

danger t261.

Il

existe une _{au sujet de la possibilit6 que de hautes doses de vitamine} C augmentent le

ri

d' insuf{isance rdnal l27l-t281

.

De hautes doses de _{ine C {plus de 2 000 mg par}

jour)

peuvent occasionnsde

la

diarrhde

et

troubles

gastro-intestinaux.

_Un

_arr€t

_temporaire

_de

_Ia suppl€menhtion ou

journi:e et prendre la _{itamine C en mangeant peut atssi iider.l2sl} V.

Yalidation

analytique _{d ne m6thode de dosage :}

La validation d'une inddsirables. Fracti

de

la

mdthode (fiddlitd,

j

de

ditection

s'il y

a lieu)

assign€s. L'dtablissement

diminution du dosage remddie g€n6ralernent

i

ces e*[i:ts

la

dose quotidienne en _{plpsieurs prises reparties dans la}

de chimie _{analytique consiste d 6valuer les perforrnmces}

exacti{fude, lindarite, sensibilitd aux interferences,

limite

v6rifier si

la mdthode remplit les objectifs

qui

lui

ont €td

protocole rationnel

et

standardis6 permet de

simplifiw

et

dbptimiser le ffavail d'6val _{ion, d'uniformiser la pr6sentation des donn6es, ce qui permet}

rm

juge,nent

comparatif diff€rcnts t2el.

r6sultats obtenus

par

des 6valuateurs

ou

des laboratoires

Y.l.Principe

de la

I*'contdle

analytique indispensable pour garantir

toute sa

duree

de validiti

disnibution et

d'utilisation.

@ifications

elaborees et

mddicament-

ou

de

certains

de

ses

oonstituets

est

le

_{mddicarnent en question restera s0r et efficace pe'ndant}

o'est-d-dire pendant

_les

phases

_de

_{stockage, de}

confr6le

doit

autant que possible 6tre effecfu6 selon des

id6es

lors

de

la

mise au

point

du produit.

Ainsi,

on

auna

I'assurmce que les speci _{de qualitd sont applicables non seulement d la preparation}

phrmaceutique

_{qui a}

_{servi dtablir les caractdristiques biologiques des principes}

actig,

Etude bibliographique

V.2.

Ddfinition

et

objectif

de la

vatidation

:

V.2.l.Ddlinition:

l"a validation d'une _{mdthode analytique est l'opdration par laquelle on s,assure quc} sss

rdsultats rdpondant au probleme de manidre satisfaisante pour I'utilisateur.

Elle

s,efforce

de ditecter et

contr6ler

les

sources d'erreurs possibles li6es

d la

methode 6tudi6e

:

sa

d€finition dans les tronnes < Valider _{une mdthode consiste d ddmontrer, avec un degrd de} ccnfiance

6lev6

et

sous

tlne fotme

documentde,

que

la

mdthode _{permet d'obtetrir un} r€sultat analytique qui atteint les sp6cifications ddfinis ii l,avance r> t3u.

Y"

z.2.Objectif

:

La

validation

_{des mdthodes analytiques}

_a

_{pour principat}

_{objectif de}

_{s'assurer qu,uae}

m6thode analytique donn6e donnera des rdsultats suffisamment fiables et reproductibles, compte tenu du but de I'analyse.

Il

faut donc

ddfinir

correctement d la

fois

les corditions

dms

lesquelles

_la

_{m6thode sera}

_utilisde

_{et le but}

_{dans lequel}

_elle

_{sera employ€e. Ces}

principes

s'appliquent

_d

_toutes

_les

_mdthodes

_utilisdes

_par

_un

_fabricant

_de

_produib

pharrraceutiques, qu'elles soient ou non d6crites dans

une

_{6e. Autrement}

_dit

_:

d'€

but de la validafion _{d'une proc6dure analytique est de d6monher qu,elle correspond}

_i

llrsage pour lequel elle est pr6vue). t31l

V.3,Critires

de la

validation

:

VJ.

f .Cxritires.o

_bligafoirrir

_:

J

S@ificite

{

L:lrremit|

r'

Fid6lit6

o

Repetabilird

o

Fiddlitd int€rmediair€

r'

Exactitude

/

Limite de d6tection

(LOD)

V.3.2.Critires facultatifs

Robustesse

Stabilit6

V.3.l.Critires

obligatoires :

V3.f.l.Sp6cilicit6

:

Ia

spddificitd de la m'dthorle _{d'analyse rbnseigne sur le fait qrre la rdponse riresrrgs n'eut}

pas perfurbde

par

des espdces _{physicochimiques autres que}

_l'analyte

_considdrd.

_Si

_la mdthode de mesure est spdcifique,

il

en rdsultera que l'dtape _{prdalable de traitement de} I'echantillon sera trds al16g6e avec, en consdquence, un _{gain de temps considdrable et une}

forte diminution des causes d,ereurs [321.

V.3.l.2.Lin6aritd

:

C'est la capacitd

i

I'int€rieur

d'un

certain intervalle

i

fournir des rdsultats directrmeirt proportionnels

i

_la

_{concenfiation}

_de

_la

_substance

_i

examiner dans 1'6chantillon.

Elle

s"exprime traditionnellement

pn

lapente de la rdgression t33t.

Y.3.13,Fid€lit€

:

Elle

exprime l'dtroitesse de I'accord _{(degr6 de dispersion) enke une s6rie de mesgres} prov€nant

_de

_multiples

_prises

_d'un

_{m6me dchantillon}

homogdne dans

les

conditisns prdcises. Dans 16 pratique I'dvaluation _de

_la

_fiddlitd

_se

_fait

_par

_la

_{repdtabilitd,}

_la

_fi&lite

intermediaire et la reproductibilitd {331.

Y3.

13. l.R6pdta bitir6 :

C'est

la

d6temination'

_de

l'6cart'gpe

_relatif

_et

l'apprdcirition

.de I'intervalle

_de

cmfiace

de

la

moyenne au seuil de 95o/o de sdcuritd.

Il

s'agit de calculer d

partir

d'rm

nomb're superieur ou dgale n six (6) resultats, I'dcart

tlpe

provenant de la racine

carr&

de la moyenne des variances des r€sultats de plusieurs mesures [33r.

Etude bibliographique

V.3. 1.3.2.Fid6litd

intermddiaire

:

La

frd1litd

intermddiaire

_{est l'expression}

_de

_la rdsultats d'essais independants

sont

obtenus

pw

la

d'essais identiques dans

le

m6me

laboratoire, avec

intervalle de temps donn6l3al.

variabilitd

intra-laboratoire

_ori

_les m6me mdthode

_sur

_{des individus}

diffdrents

opdrateurs pendant rm

Les facteurs de variation types d dtudier comprennent les variations d'un

jour

_i

un

aub"'

d'un

analyste d un autre etlou

d'un

dquipement d un autre. Son protocole d"dtgde

et

le

m€'me que

celui

appliqu6

pour

_la

_{r6p6tabilit6 en effectuant d'auhes sdries d,essais qui}

intsgrent les variations [3sl.

La reproductibilitd _{n'est envisagde que dans ie cas d'dfude inter-laboratoires [3sl.}

V.3-l.4.Exactitude:

L'exactitude reprdsente

l'accord

entre

le

rdsultat

d'un

mesurage et

la

valeur

waie

du

mesurable. Cette notion est la combinaison d'une _{en'eur systdmatique, li6e d la justesse de}

la m€thodeo et d'uae corirposante aldatoite,'liee'a

_h

_{mesure'elle-m€rtre et qui d€pe66}

_&rrc

de la fiddlitd de la m6rhode F2l.

V.3,L5.Limite

de d6tecrion

(LOD)

:

C'est la plus petite quantitE d'unb substance i. examiner dani l'6chantillon pouvant 6bc

d€tectec _{mais non quantifi€e comme valeur exacte} 1331.

VJ.I.6.Limite

de

quantification(LOe)

_:

C'est la'plus petite _{quanti€ d'une substarrbe d dxamiaer dans}

_{I'ichadtillon}

pouvant €tre

dose dans

les

conditions exp6rimentales d6crites

avec une

fiddlitd

et

une

exactihrde ddfinies

Isl.

YiacFitares

faeultatifs

:

VS2l.Robustesse

:

Selon

la22e"

6dition de _{la Pharmacopde amdricaine, c'est la capacitd d,une proc6&ge}

malytique

ii

rendre

les

rdsultats valables

_en

prdsence

_{de modifications limitees}

_&s

conditions expdrimenblss t361.

La

robustesse

de

la

m6thode caractdrise

le

fait

qu'une

ldgdre modification

des

conditions expdrimentales {un ou plusieurs pararndfres) ne modifie que trds peu la riponse

mesur6e. Cette propridtd

est

bien

sffr

nds

int6ressante

si

plusieurs _{opdrateurs doivent}

intervenir pour _{rdaliser une m€rne s6rie d'analyses ou}

_{si I'on}

ne dispose que d,opdrate*rs peu experiment6s t321.

Y.3.2.2.Stabilit6 :

Un

m€dicameat est consid€r6

co$ms

pratiquement stable lorsque, _dans

_un

_{laps de}

temps ddterrnin€, ses _{propri6t€s essentielles ne changent pas ou changent au plus daos des} proportions

_toldrables;

_de

_{plus le}

_medicament

_doit

_6tre

conservd dans des conditians approprides et prescrites de tempdrafure, d'humiditd et d'exposition d

la

lumidre et qu'un

recipient convenable doit etre utilis€ t371"

YL

Mdthodes statistiques :

Tableau 04 : _{Les differents parametres statistique.}

LOD

3xs

LOQ

10xs

M$yenrsrrythiniqrrc

\tn

V

_

Li=LrI

n

Varianee

\ln

Q2

V(x)

₌

ai=r^

_-72

TL

Ecart type Ecart type a

partir

de Ia variance

s*=J@

Xf=1n;1x;

_-

_D2

X*=r

ni

Pourwtage

de R6cup6ration

PRe6=4

_ct2

*roo

Coefficient de variation C

CV=1OOx3

x

Erreur

relative(o/o)

ERo6=Wx1o0

Avec:

s

et

S* : Ecart type

n

: Nombre de donndes _{sur lesquelies s'appuient les calculs}

X : _{Moyenne arithm6tique.de n mesures;} Ci1 : Concenfration trouvde

CiZ _{: Concenfration th6orique}

V(x):

Variance

VIL

Spectrophotom6trie

_UV-visible

_:

Yll.l-lntroduction

:

Un

_{spectrophotontdbe permef de mssurer f intensite en fouction de la longuew}

d'ogds

de

la

source lumineuse. Les principales _{caract€ristiques}

_de

_{spectrophotomdtres}

_sont

_la

larg€ur de la bande spectrale et la mesure de I'absorption ou de Iar6flectance t381.

Ia

technique de _{speotrophotom6trie est basde}

_{sur la}

_{propri6t6 de}

_{la matiire;}

_et

_pt*s

particulidrement de certaines mol6cules, d'absorber certaines longueurs d'ondes du sprcfie UV-visible. Elle pennet de rdaliser des dosages grdce d la

loi

de Beer-Lambert qui

monte

une relation de proportionnalitd entre I'absorbance et la concentration.

Ceffie

methode

est

basde

sur

I'utilisation d'un

spectrophotomdtre

qui

_d€termine

I'absorption

_{d'une solution}

_pour

_{une longueur}

_{d'onde donn6e}

_{ou pour}

_{une plage}

de longueurs d'ondes judicieusement choisie [3el.

VlLl.Principe:

Lorsqu'un

faisceau

_de

lumidre

blanche

d'iatensite

I0

traverse

une

solution

d.'rm

chromophore, ce dernier absorbe _{plus que d'autres certaines longueurs d'onde (la solution}

4perait

coloree) et restitue une intensit6

I

du faisceau

inifial

t401.

L'echantillon

i

analyser est traversi par un rayonnement lumineux de longueur

d,ode

allant

de

100-800

nm.

Les

photons issus

du

rayomement transferent

aux

compos€s

anal),ses une dnergie qui _{excite les moldcules, atomes ou ions travers€s.}

_Ainsi

_{une partie dg}

Etude bibliographique

L'6tude du rayonnement _{aprds passage d travers la substance ana$s6e permet}

d,obtenir

des inforrnations sur sa nature [a1].

Le domaine du specffo

ultaviolet

utilisable en _{analyse stentend de}

_lg5

i

₄₀₀

_ng,

_alors que celui du spectro visible s,entend de 400 d g00 nm.

'^'Tttit'

.,&?;:1,*,&?-"

I

<r-,o

,

,r_:

_J

bo-.

io_,

lor:

I

t{}r

l(}4

Figure 04 : _{Schdmareprdsente le domaine}

_uv-visible.

VII.3.

Spectre

_{d'absorption UV-visible}

_:

Un

spectre

_UV-visible

_est,

_pour

_I'essentiel,

_un

_graphe

_{qui relie}

l,absorbance

_d

la

loargueur d'onde dans les r6gions visible et ultraviolette. Un _{tel specfre peut 6tre produit en}

continu

par

des

spectrophotomdtres _disposaat

_d'un

_systdme

_de

_balayage

_en

longueur d'oade-

Il

peut dgale.ment

€te

produit poiat

par

_{point, en}

_{collectant les absorbaaces d}

quelques longueur d'onde (notee ?r) t421.

Les _{longueurs d'ondes des}

_pics

_{d'absorption peuvent}

_6fie

condldes avec les types de liaisons dans une moldcule donn6e et sont _{valides pour ddterminer les groupes fonctionnels} dans une mol6cule- L'absorption

_tlV-visible

_{n'est pas, cependant, un test spdcifique pour}

tout

compos6.

La

nafure

_du

solvant,

_{le pH de}

_la

_solution,

_la

_temp6rafure,

_les

_hautes

coacentrations 6lecfrolytiques, et la prdsence _{de substances interferentes peuvent}

_influeaer

les _{spectres d'absorptioa des composds, comme}

_le

_peuvent

les variations dans

la

largeur

des fentes (largeur de _{bande effective) duspectrophotomdtre} ta3r.

VIL4. Loi

de

Beer-Lambert:

ra

loi

de Beer-rambert _{est une relation donnant la variation de l,iatensitd luminzuse en}

foncion

de

la

distance _{parcou{ue dans un}

_milieu

_{transparent cette}

_loi

stipule que

:

si uu faisceau

de

photon

_{d'intensiti initiale}

_I0

_toaverse

_une

_cuve

_de

_longueur

_I

contenant

(gaeralement

_lcm)

_{une solution de concentration C}

_(mol.L'l;,

l,intensitd I une fois la cuve Faversee aura comme valeur :

A

= s x

I

xgla0l.

Flat€rrs

gaFma filalbras X Radars-_{micro- r\/l s\I/ I AM}

I

Avec:

A:

absorbance

_{A:

Ln

_{Io/I)).

Io: intensit6 initiale et

I

intensit6 aprds la cuve sans unit6.

e : coef{ioient d'absorption en

L.mol-l-.otr.}'.

I

: longueur du trajet optique dans le liquide:largeurde la

cuve:l

cm.

C

: Concenfration du composd 6tudi6 en

mol.Ll.

VtrLs.

Appareillage:

L'appareillage est assez simple et extr6mement robuste.

Il

ne ndcessite pas d'entretien

*€qumt

d part celui de la cuve (amovible) qui doit 6tre parfaitement

prqre

et sans rayures.

Il

existe dgalement des cuves jetables pour une plus grande facilitd d'entretien.

Il

est constitud d'une lampe (source du rayonnement) dmettant dans tout le spectre

UV-visible

(lampe avec

filament de

tungstdne,

ou

d

arc au

x6non

par

exemple),

d'un

monochrnmateur et

d'un

ditecteur du rayonnement

final.

Le tout est reli6 d un ordinateur qui en permet le contrOle.

[-e monochromateur permet de sdlectionner les longueurs d'onde de travail.

Il

est bas6

sw

le principe

d'un

rdseau de diffraction permettant de sdparer les longueurs d'onde

i

la

mgnii:rc d'un prisms tall.

Ehrde bibliographique

VIII.

Evaluation

loactivit6

antiorydante

:

WII.l.Ddfinition

des antioxydants

i

Les antioxydants sont d6finis _{comme I'ensernble des'moldcules susceptibles d'inhiber}

directement d faibles doses _{la production, de limiter la propagation ou de}

_d6fuire

_les

ERO

{Espdces rdactives de I'oxygdne) t+lt.

Cxs radicaux libres proviennent _{de sources trds variees: la pollution aknosphdriqug le}

bbac,

le

rayonnement

_UV,

_les

_{radiations ionisantes,}

_le

_{m€tabolisme}

cellulaire {astivit€

mitochondriale, r€actiohs

enzymatiques

_{NADH

_oxydase,

_xanthine

_oxydase}),

I'inflammation et les _{mdtaux toxiques (chrome, cuiwe;} tasl.

La

production _{abusive des radicaux libres}

provoque des ldsions directes de molecules

biologiques

:

oxydation de

I'ADN,

des _{protdines, des lipides et des glucides, et aussi des}

ldsions _{secondaires dues}

_au

_{caractdre. cytotoxique}

_et

_{mutagdne des}

m6tabolites

lib#s

trotamment

lors de

I'oxydation des

lipides

{aal.La _{prdsehce d'antioxydants}

mainti€nt un

6quilibre physiologique

_entre

_la

_production

_et

_{l'dlimination des}

espdces oxygdn6es

activ6esta6l.

VIIL2lWoie

d'aciion

der' dntioxydante :

Les mdcanismes d'action des _{antioxydants sont divers, incluant le captage de l,oxygdae}

singulier'

la

_{ddsactivation des radicaux par}

_riaction

_{d'addition covalente, la}

rdductiou de radicaux ou de peroxydes, la _{chdlation des mdtaux de}

_tansition

taTl.Les _antiorydants

smt

a

frit

des agents de terminaison capables _{de pidger les radicaux libres,}

_ils

_{agissent en}

fornant

des produits finis _{non radicalaires} Fsl-t4el.

Vllt3.Classification

_{des antioxydante :}

Vm3-l.Antioxydants

_naturels

_I

.

Plusiqrn

substances _{peuvent agu en tant qu'antioxydants in}

_vivo.

Elles inoluent le b€ta

wot€ne,

_{I'albt'mine, I'acide urique, les cstrogdnes, les polyamines,les flavonoides,l,acide}

ascorbique,les composds _{phdnoliques, la vitamine E...etc.} ts0l.

VIII.3.

1.

l.Antioxydanfs

_{enzymatiques :}

L'un des _{systdmes de} ddfense _{antioxydants enzymatiques est constitu6}

de trds enzymes:

le

superoxyde dismutase

SOD,

la

glutathion peroxydase

_GSH-px

_et

_la

_{catalase. Ces}

enzymes ont une action compldmentaire sur la cascade radicalaire au niveau du superoxyde

et du

peroxyde

_d'hydrogdng

_{conduisant finalement}

_i

_la

formation d,eau

et

d,oxygine

mol6culaire {s11.

YIII.3. l.2.Antioxydants

_{non enzymatiques :}

contraireme{t'aux

_{enzymes aatioxydaates, la}

_pluparf

_de

ces composants

ne

sont _Fas

slutbitisds _{par l'organisme et doivent dtre apportds}

par I'alimentation. Dans cette cat6gorie

d'mtioxydants,

nous

retrouvons

les

oligodldments,

la

glutathion

_rdduit

_{(GSF{), les}

vitamines E et C et les polyph6nols ts2l.

Y[Llf.2.LVitamine

_C

_:

L'acide

ascorbique _{ou vitamine}

_C

_{est considdrd conrme le plus}

important antioxydant rlens les fluides exhacellulaires.

Elle

emp€che l'oxydation _des

_LDt

_produites

_{pm divrrs}

grsdmes g6n6rateurs _{d'espdces rdactives d'oxygdne}

@Ro). Lors de son oxydation sn

mide

dehydroascorbique, elle passe par une forme _{radicalaire intermediaire (radical asccrbyl),}

qui joue tm rdle essentiel dans _{la rdgdndration dela vitamine E oxyd€e}

_(Figure

₀₃₎ ts31.

V[LLl.2.2.Vitamine

_E:

r^a vitamine E ou

s

-tocoph€rol, _elle se

fixe

_{aux membranes et peut ainsi sequestrer les}

rdicarx

libres en

enp&hant la

_{propagation des r6actions de peroxydation lipidique}

rq-I-ors

de

I'initiation

de

la

peroxydation

_{lipidique, elle}

_{cdde son hydrogdne situd}

dans te

no)au phdirolidue _{et constitue, par ce'biais, le'seul'antioxydant liposoluble}

assrrant sette

Etude bibliographique

Figure 06: Strurcfure _{de la vitarnine E} ts?].

VIIIJ.I.2.3.Le

p-carotine

_:

I*

_{B-carotene, pr6curseur}

_de

_la

_vitamine

_A,

_est

_{appmd par}

_{l,alimentation.}

Elle

est doude de plusieurs capacitds, elle capte l'oxygdne et, avec les autres _{carotdnordes, elle a le}

pcuvoir _{de terminer les r6actions en chaine de lipoperoxydation.}

Elle protege les structure

celiulaires contre I'agression oxydante en s'opposant d la gdnotoxicitd de nombreux asents

tssl

VIII.

3.2.Antioxydanfs synthdtiques :

Dans

l'industrie

alimentaire,

.les

_{antioxydants synth6tiques,}

_tel

_gue butylhydroxyanisole

_(BHA),

_{butylhydroxytoludne}

_(BHT)

_{gallate propylde}

(pG)

et

titrabutylhydroquinone

_(TBHQ),

_sont

_largement

_utilisds

_parce

_qu'ils

sont

efftcaces moins chers que _{les antioxydants naturels} tsei.

WU.4.

Evaluation

in

vifro

de

I'activit€ antioxydante:

VIIL4.l.

G6n6ratir6:

Plusieurs' m€&odes

sont'utilis€ss

pour

la

ddtermiiration

_de

_{I'axtivit€ aatioxydate,}

nomm6es d'aprds

le

nom

de

la

substance utilisde _{comme source de radicaux libres, par}

exemple : FRAP (Ferric reducing antioxidant power),

_ORAC

_{(oxygen radical absorbance}

capacity)'

TEAC (Trolox

_{equivalent antioxidant capacity)}

_{et DppH' (2,2-}

diph6nyl-l-picrylhydrazyl) _etc toot.

le

le

et

Figure _{07: stmcture de B-carotdne} IsTl

(

''\

Etude bibliographique

VIII.4.2.Tests

_de

_I'activit6

_{antioxydante :}

VIII.4.2.

l.Pi€geage du peroxyde d'hydrogtsne (H2o2scavengingactivity) _r Le _{peroxyde d'hydrogdne peut pdndtrer dans}

_le

corps htrmain par inhalation _{de vapeur}

ou de

brouillard

et d

travers les

_{yeux ou}

_le

_{contact avec}

_la

_peau.

_Hzoz

est rapideme,ut d€compos6 en oxygdne et en eau et cela peut produirs _{des radicaux hydroxyles}

_(oH)

_qui

peuvent initier la peroxydation lipidique et causer des dommages ri

I'ADN

dans le corps.

une

_{des m6thodes les plus corlmunes pour dvaluer}

_la

capacitd du pi€geage du peroxyde d'hydrogdne est basde sur l'absorption de cette _{moldcule dans le domaine de}

_l,UV.

_comme

Ia _{concentration de Hzoz diminue par les composds pi6geurs,}

ra _{valeur d,absorbance de ce}

dernierd _{230 nm diminue 6galemsn1162l.}

vlll4.2.2.Pi€geage

_du

_radical

_{2,ldiph6nyl-r-picrylhydrazyr (DppH.)}

:

Dans _{cette analyse,}

_le

_{DPPH de}

_{couleur pourpre est r6duit}

par les

molecules

dies

anfioxydantes en hydrazine jaune p61e.

La

_{capacitd de pidgeage est g6n6ralement}

e\ratuee

dsns ds5

milieux

organiques _{en surveillant}

_la

_{diminution de l,absorbance}

d

515-52g nm jusqu'd

_ce

_{que I'absorbance demeure constante tu2l.ce}

radical possdde

_un

_{6lectron non}

ryparie sur _{un atome du pont d,azote (Figure 0g)t631.}

p

N

b

Figure 08: Pi€geage du radical libre

DppH.

yrrl4.2.3.Reduction

_{du Fer:}

FRAP

(Ferric

reducing

antioxidant

power):

cette

_{m6thode est bas6e sur}

_la

_{rdaction chimique}

de r6duction

du fer

ferrique

(Fd),

pdsent

dens

le

complexe

_Kfe(cN)o,

_en

_fer

_ferreux

_(F.t)

_de

couleur bleu

pm

les molecules dites antioxydantes- _{L'augmentation}

de l'absorbance du mdlange

riactiomel

en

fmction

de I'augmentation _de

_la

_{concenfration des dchantillons ind.ique que ces demiers} prr6seirtent _{un pouvoir r6ducteur d'ori}

une activitd antioxydafie t64r.

_-rq

+

A-H

o,N-<

\-n-NO,

* A'

Efude expdrimentale

Chapitre

II

Chapitre

II

_I

nt

rA. exp6rimentale

A. Validation

analytique

par

spectrophotomdtrie

UV/visible

:

La

validation est une dtape importante

du

cycle de

vie

d'une procddure analytique qui

permet de ddmontrer la fiabilite des rdsultats.

Dans cette partie, nous allons d6velopper les diffdrentes 6tapes d rdaliser pour valider

me

m6thode

de

dosage

de

f

ibuprofene dans

une forme

pharmaceutique

par

la

specfroscofle

ultaviolette (UV)

selon les lignes directrices de

I'ICH.

L

Matdriels

et

produits chimiques:

L1 R€attifu

et sotvants :

D

M€thylhydroxypropylcellulose

M6f,icament

Xydol@ 200 mg (Ibuprofdne 200 mg).

I

J

Appareillbge

Nous avons

utilis6le

matdriel suivant :

IL

Pr6paration

des

solutions:

ILl.

Prr6paration de la solution

mire

et des solutions dilu6es standards

(PA)

:

Nous avons pr6par6 une solution mdre du principe actif de concentration de 100 mg/l

dms

un solvant constitud d'ACN/FIzO (35165 o/ov lv).

A

partir de cette solution, nous avons

prqare

une sdrie de solutions ave,c des concenfrations allant de 10 d 100 mgA.

Etude exp6rimentale

II.2.

Prfparation

de Ia solution placdbo :

La

solution

placdbo

_est

prdparde

_d

partir

des

excipients

_du

mddicament

_dont

_nous

disposons (Lactose,

_amidon

_de

_mais,

_{M6thylhydroxypropylcellulose}

_et

_Stdr6ate

de magndsium) dans le solvant

ACN*lrO

(35/65 Vov/v). La solution est ensuite filtrde sous vide.

IL3- Prdparation

des solutions de Ia

formepharmaceutique

reconstitu6e

(FpR):

La

forme

pharmaceutique reconstitude

_de

_{concentration}

₁₀₀

_{mg| a}

_6t€

_{preparee en} ajoutant lOmg de

I'ibuproftne

(PA)

i

100m1 de _{la solution placebo. Nous avons} prepar6

parla

suite des solutions diludes de

diftrentes

concentrations (10, _{25, 4A,50, 65, et} g0 _{mgfl) d}

_partir

de Ia solution mdre de _{la forme pharmaceutique reconstitu6e de l'ibuprofene.}

II.4,

Pr6paration _de la

_{solution6chantillon {comprim6)}

_:

Nous

avons lav6 rapidement

i

l'eau

distillde 10

comprimds

de

XYDOL@

_[buprofene

200mg) de fagon d _{retirer la totalitd du colorant. Nous avons dcrase par lasuite ces comprim€s}

dans

_un

_{mortier puis laisser sdcher}

i

_l'air.

_{L'6quivaient de 20mg}

_du

comprim6

6cras6 est

introduit _{dans une} fiole jaug6e de 100

ml

dans le solvant constitu6

d'ACN/t{zo

(35/657ovfu)

afin d'obtenir une solution de concentration de _{200mgil puis nous avons}

_filn6

_{sous nide.}

II.5.

P'r6paration des so]utishs dilu6es dir

bomprin6:

A partir _{d'une solution mdre de comprimd de 200 mg/l, des}

solutions de concentrations ds

4h

60 mg/l ont 6td preparees par dilution _{dansle m6me solvant.}

IIL

Validation

:

mf-Rdalisation

du spectre

UV-visible

:

L'enregistrement du spectre d'absorption de Ia solution dtalon dilu6e d 40 mg/l a et6 realise sur rme plage de longueurs

d'onde

allant de 190 d 350 nm,

_afin

_{de s€lectionner}

_la

_longuag

donde

UV

optimale

(?t**).

L'analyse a 6td effectude en utilisant le _{solvant ACNIH2O {35/65}

s/ovlv) comme blanc.

Ill.2.Specificitd

:

I,a

_rytciftite'a

6t€ dvalude

par

l'analyse'de

la

solution

contenant

les

composants.du comprimd de I'ibuprofdne, d _{I'exception du mddicament (plac6bo).}