TD N°5
Les enzymes compatibles et les isoschizoméres (partie 2)
Exercice 01 :
Un fragment de restriction d’ADN de lapin coupé par l’enzyme Kpn mesure 5100 pb et contient le gène de la β-globine. Par hybridation après transfert avec une sonde β-globine on démontre qu’après digestion par EcoR I de ce fragment, deux sous fragments (de 2500 et de 800 pb) s’hybrident avec cette sonde, alors qu’à la suite de sa digestion par BamH I, deux autre sous fragments radioactifs (de 1900 et de 3000) pb) sont produits. Sachant qu’au niveau de l’ADN complémentaire du messager de la β-globine les deux sites BamH I et EcoR I sont distants de 76 pb.
Montrer que la comparaison des cartes de restriction des deux clones permet d’établir l’existence d’un intron dans la séquence de ce gène, et de mesurer sa longueur.
Exercice 02 :
Un plasmide résistant à la kanamycine et à l’ampicilline est coupé avec l’enzyme Pst I, enzyme coupant dans le gène de résistance à l’ampicilline. L’ADN est ligaturé avec les produits de digestion de l’ADN de Drosophile par Pst I, puis utilisé pour transformer E. coli.
a) Quel est le phénotype de la souche d’E. coli utilisé dans cette expérience ?
b) Quel antibiotique, mettrez vous dans le milieu pour vous assurer que les colonies ont un plasmide ?
c) Quels phénotypes de résistance aux antibiotiques trouvera-t-on sur la boite ?
d) Quels phénotypes auront les colonies contenant de l’ADN de Drosophile ? comment appelle-t-on ces colonies ?et comment les sélectionner ?
e) Si des colonies individuelles de la boite en (c) sont cultivées et si leur ADN est extrait, quel profil observez-vous après coupure par Pst I et coloration du gel d’électrophorèse au BET ?
