TPL3BIOPHYVEG

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Les Travaux Pratiques à l’Université Oran1-Ahmed Ben Bella

Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie

Département de Biologie

Licence L3 Biologie et physiologie végétale Semestre 5

Fiches Techniques

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T.P. N°01

 Matière: Amélioration Génétique des plantes

 Intitulé : Germination des graines (Semences)

 Protocole :

 Principe: Analyse de la vigueur des graines germées sous stress abiotiques

 Méthodologie (succincte) :

Produits chimiques Consommable/Verrerie Petits Matériels

 NaCl Sodium Chlorure

 Hypochlorite de sodium.  Boites de pétri (plastique 30mm) Boites de pétri (plastique 90mm)  Papier filtre

 Vermiculite  Alvéoles

 Pots pour plantes

 Papier filtre diamètre 100mm  Papier joseph  Papier cellophane  Distillateur  Etuve.  Stérilisateur  Congélateur à – 80°C de paillasse

T.P. N°02

 Intitulé : Extraction et dosages des protéines végétales

 Protocole :

 Principe: Ex : Extraction avec le Tampon Tris-Hcl +  Méthodologie (succincte) :

 Acide acétique glacial 99-100%

 Méthanol absolu  Ethanol absolu

 Acide Borique en poudre  Albumine du sérum bovin  Paraffine  SDS :Sodium Dodecyl Sulfate Bêta –mercaptoéthanol Mortiers + pillons Agitateur de microplaques (4 microplaques de tubes Eppendorf) (245x310)

Tube eppendorf

Pointes jaunes

Hôte a flux laminaire

Micro centrifugeuse de paillasse Microcentrifugeuse réfrigérée MICRO200R marque Hittech  PH-mètre  Spectrophotomètre à UV visibles Congélateur à –

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Glycérol  Tampons pH de calibrage 4.5, 9.0 et 7.0  Saccharose  Azote liquide  Glycine.  Acide Orthophosphorique 85%  Acide Acetique Glacial

99-100%

80°C de paillasse

T.P. N°03

 Intitulé : Electrophorèse des protéines végétales

 Protocole :

 Principe: Analyse de la diversité des protéines chez différentes variétés.

 Méthodologie (succincte) : La procédure Laemmli (1970) est utilisé pour l’analyse des

protéines par l’électrophorèse en SDS PAGE discontinu verticale (4,5 et 7,5 %). La méthode de coloration standard et la décoloration a été utilisé pour visualiser

clairement les fragments protéiques pour un scorer (scoring) des bandes : les gels sont colorés dans 0.25 % de bleu de coomassie brillant blue - R250, décolorés dans 50 % de méthanol v/v, 40 % d’acide acétique v/v et 10% d’eau distillée.

 Acrylamide  Bis – Acrylamide ( N,n'-(methylenebisacrylamide 1  Temed  Pesulfate d’amonium  Tris  EDTA

 Bleu de comassie brillant G250

 Bleu de comassie Brillant R250  Bleu De Bromophénol Marqueur de taille protéines (10 – 250 KD) Sodium Phosphate Monobasique Dihydrate Sodium Acetate Trihydrate O-dianizidine

 Gants latex de taille 6, 6.5, 7.0, 7.5 et 8.0

 Gants neoprene, powder free 7.5 -8 M  Barreaux magnétiques

 Support pour pipettes

 Micropipettes volumes variables (0-10, 10-100, 100-200 et 100-1000µl

 Micro tubes eppendorf  Pipeteurs a piston

 Portoir pour micro tubes eppendorf Plaques en verre d’électrophorèses

(18x16)

Peignes pour appareil electro

Seringue Hamilton (100 ul)

Pipette graduée de 1-2-5-10 ml

 Cuve

d’électrophorèse verticale 18x16 cm

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Hydrogen Peroxide 30%

Dithiothreitol-dl

Acide Trichloroacetique

Chloroforme

Phenyl Methyl Sulphorite

Fluoride Pmsf

Licence L3 Biologie et physiologie végétale Semestre 5

T.P. N°01

 Matière: Physiologie végétale

 Intitulé : Etude des étapes de germination

 Protocole :

 Principe: Le principe de cette expérimentation est de voir à l’aide de simples observations morphologiques comment la germination peut se décomposer chez une Monocotylédone ainsi qu’une Dicotylédone.

 Hypochlorite de sodium

 Ethanol

Graines de fève (ou Haricot) et des caryopses de blé (ou d’Orge)

 Boîte de pétri  Becher  Cristallisoir  Papier filtre  Pince fine  Etuve

 Chambre de culture (plantes)  Loupe binoculaire

T.P. N°02

 Intitulé : Etude de l’activité amylasique

 Protocole :

 Principe:

- Mise en évidence d’une activité amylasique.

- Constater la dégradation de l’amidon sous l’influence du complexe amylasique.

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 Lugol (I2 + KI)  Tampon phosphate pH 5.2 (KH2PO4 + Na2HPO4)  Ethanol  Fiole jaugée  Eprouvette graduée  Becher  Entonnoir  Mortier et pilon  Spatule  Cristallisoir  Pipette graduée  Pipette pasteur  Aspire- pipette  Verre de montre  Tube à essai  Papier filtre  Pince fine  Balance  Agitateur magnétique  Chambre de culture (plantes)  pH-mètre

T.P. N°03

 Intitulé : Etude de la pression osmotique

 Protocole :

 Principe:

- Observer le phénomène d’osmose

- Déterminer la pression osmotique  Méthodologie (succincte) :

 Saccharose  Bulbe d’oignon  Verre de montre  Lames et lamelles Fiole jaugée Eprouvette graduée Becher Spatule Cristallisoir Pipette graduée Aspire- pipette lame bistouri Pince fine  Feuilles vertes Mortier et pilon  Micropipette  Osmomètre  Microscope  Balance  Agitateur magnétique

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T.P. N°04

 Intitulé : Etude de potentiel hydrique

 Protocole :

 Principe: Déterminer le potentiel hydrique des cellules de la pomme de terre.  Méthodologie (succincte) :

 Saccharose Pomme de terre

Tubes à essai Fiole jaugée Eprouvette graduée Becher Entonnoir Spatule Cristallisoir Pipette graduée Aspire- pipette Papier millimétré Lame bistouri Balance Agitateur magnétique

T.P. N°05

 Intitulé : Etude stomates

 Protocole :

 Principe:

- Observation de lambeaux d’épiderme de feuille.

- Réaliser des empreintes stomatiques.

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 Saccharose Feuille de poireau ou de blé.

 Lames et lamelles Verre de montre

Vernis à ongle incolore

Scotch Fiole jaugée Eprouvette graduée Becher Spatule Cristallisoir Pipette graduée Pipette pasteur Aspire- pipette Verre de montre lame bistouri Pince fine Microscope Balance  Lame Micromètre  Planimètre foliaire

T.P. N°06

 Intitulé : Séparation des pigments par solubilité différentielle

 Protocole :

 Principe: Séparer les différents pigments en utilisant leur solubilité différentielle dans divers solvants organiques.

 Acétone à 80%  Méthanol à 95°  Ether de pétrole  Ether éthylique  Potasse (KOH)  Sulfate de sodium anhydre  Feuilles vertes.  Ampoule à décanter  Fiole jaugée  Eprouvette graduée  Becher  Entonnoir  Mortier et pilon  Spatule  Cristallisoir  Pipette graduée  Aspire- pipette  Balance  Agitateur magnétique

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T.P. N°07

 Intitulé : Etude de la respiration (production de dioxyde de carbone)

 Protocole :

 Principe: en évidence et dosage du dioxyde de carbone dégagé.  Méthodologie (succincte) :

 Hydroxyde de baryum  Potasse(KOH)  Acide oxalique  Phénophtaléine  Ethanol   Germination d’orge  Pompe pour aquarium  Fiole

 Tubulure

 Bouchon en caoutchouc troué  Burette Fiole jaugée Eprouvette graduée Becher Spatule Balance Agitateur magnétique

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