É VALUATION DE LA CINETIQUE DES BIOMARQUEURS PLASMATIQUES DE FONCTION ET DE LESIONS RENALES SUITE A 1 H D’ISCHEMIE RENALE

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La séquence d’I/R rénale est effectuée par le clampage des pédicules rénaux pendant 1 h correspondant à la phase d’ischémie. Après cela, les pédicules sont déclampés représentant ainsi la phase de reperfusion. En parallèle, des animaux SHAM qui retranscrivent le même mode opératoire que précédemment mais sans clampage des reins sont effectués. Ainsi, les SHAM sont des contrôles idéaux pour évaluer le rôle de l’I/R dans notre étude. De plus, d’autres rats contrôles à J0 subissent une chirurgie identique afin de prélever les reins et le sang à l’état basal (contrôles J0). Ces contrôles mettent en évidence uniquement les impacts potentiels de la chirurgie sans les effets post-opératoires. Suite à ces chirurgies, certains groupes sont mis à mort après 1 ou 3 jours de reperfusion avec un prélèvement de sang et des reins. Les analyses statistiques sont effectuées entre les groupes I/R et leur groupe SHAM attribués et aussi entre les deux groupes d’I/R. Afin d’évaluer les conséquences de l’I/R, nous avons établi une courbe de Kaplan-Meier de survie et dosé plusieurs marqueurs de lésions et de fonction rénales.

La courbe de Kaplan-Meier (figure 20A) montre l’impact négatif de l’ischémie rénale de 1 h sur la survie des rats. En effet, après 2 jours de reperfusion, le groupe de rats RCS+/+ I/R perd plus

Figure 20 : Étude des biomarqueurs plasmatiques de fonction et de lésions rénales suite à une ischémie rénale bilatérale de 1 h

Courbe de survie des rats opérés (A), Cinétique des marqueurs de la fonction rénale sur du plasma de rats RCS prélevé à J-7, J1 et J3 : créatinine (B), urée (C), ASAT (D), LDH (E), NGAL (F) et KIM-1 (G). L’analyse statistique est effectuée sur l’aire sous les courbes calculée, pour chaque marqueur, à partir des cinétiques de J0 à J3 post ischémie, et représentée sur les panneaux de droite des figures B, C, D, E, F, et G. RCS-/- SHAM (n=6), RCS-/- I/R (n=4), RCS+/+ SHAM (n=4), RCS+/+ I/R (n=6)

de 30 % de sa population. La perte pour le groupe de rats RCS-/- I/R est supérieure à 40 %. Pour les groupes SHAM, aucune perte n’est enregistrée au cours de ces 3 jours de reperfusion. La mutation du gène MerTK ne semble pas avoir d’effet significatif sur la survie des rats après une séquence d’I/R.

Pour évaluer l’effet de l’I/R sur la fonction et les lésions rénales, nous avons dosé 6 biomarqueurs sanguins : la Créatinine, l’Urée, l’ASAT, les LDH, NGAL et KIM-1. Afin d’établir une cinétique, un prélèvement de sang est effectué sur les rats à différents temps en prenant la chirurgie comme jour de référence : J-7, J1 et J3. Le point J-7 détermine la valeur seuil pour chacun des marqueurs.

Les cinétiques de la créatinine (figure 20B, panneau de gauche) et de l’urée (figure 20C, panneau de gauche) montrent un profil similaire qui se décrit par une augmentation considérable et continue de la sécrétion de ces deux marqueurs au cours des trois jours de reperfusion pour les groupes RCS I/R. Le groupe RCS+/+ I/R se démarque par une augmentation plus élevée pour la créatinine (815 µmol/l à J3) et l’urée (123,4 mmol/l à J3). Les groupes SHAM quant à eux, gardent des valeurs basales tout au long des 3 jours de reperfusion. L’analyse statistique de l’aire sous les courbes (figure 20B et C, panneau de droite) révèle une augmentation significative de la concentration plasmatique de ces marqueurs chez les groupes I/R par rapport aux groupes SHAM correspondants sauf pour l’urée dont le taux ne varie pas de façon significative entre les groupes RCS-/- I/R et RCS-/- SHAM. De plus, cette analyse ne révèle aucune différence significative de sécrétion de ces deux marqueurs entre les groupes I/R. Concernant les marqueurs ASAT (figure 20D, panneau de gauche) et LDH (figure 20E, panneau de gauche), l’étude montre une élévation de leur concentration plasmatique atteignant un pic au premier jour de la reperfusion pour les quatre groupes. L’augmentation pour les groupes I/R est beaucoup plus importante et atteint pour ASAT à J1 une moyenne de 1463 UI/l et pour LDH une moyenne de 7814 UI/l chez le groupe RCS+/+ I/R contre 427 UI/l d’ASAT et 1659 UI/l de LDH pour son groupe contrôle. Après 3 jours de reperfusion, la concentration plasmatique de ASAT et LDH reviennent quasiment à leur valeur seuil pour les 4 groupes. L’analyse statistique de l’aire sous la courbe (figure 20D et E, panneaux de droite) montre une différence significative entre les groupes RCS-/- SHAM et RCS-/- I/R contrairement aux groupes RCS+/+ I/R et RCS+/+ SHAM. Aucune différence notable n’est montrée entre les groupes I/R au cours de la reperfusion.

La cinétique de sécrétion de NGAL (figure 20F, panneau de gauche) est similaire à celles de LDH et de ASAT avec une faible diminution entre J1 et J3. Le pic de sécrétion pour les groupes RCS

-effet, seule le groupe RCS-/- I/R est significativement différent par rapport aux rats RCS-/- SHAM. La comparaison des groupes I/R entre eux ne montre aucune différence significative de sécrétion de NGAL. À l’inverse, la sécrétion de KIM-1 (figure 20G, panneau de gauche) est significativement augmentée dans le groupe RCS+/+ I/R par rapport au groupe RCS+/+ SHAM. Pour cette cinétique, nous observons d’abord une légère augmentation de sécrétion de KIM-1 entre J-7 et J1 qui passe de 0 à 0,43 ng/ml et de 0 à 2,10 ng/ml pour les groupes RCS-/- I/R et les groupes RCS+/+ I/R respectivement, puis une augmentation plus intense entre J1 et J3 qui passe de 0,43 à 5,90 ng/ml et de 2,10 à 9,27 ng/ml pour les groupes RCS-/- I/R et les groupes RCS+/+ I/R respectivement.

En conclusion, les évaluations cinétiques de ces biomarqueurs sanguins mettent en évidence les lésions cellulaires et une fonction rénale altérée lors de la séquence d’I/R. Cependant, au cours de cette séquence, aucune différence n’est observée entre les rats RCS-/- et les rats RCS+/+.